מאמר שיטה

מודל בעלי חיים של פולפיטיס המבוסס על זן עכברים שהופרדו וניתוחו ההיסטולוגי

259 צפיות

⸱

DOI:

10.3791/69786

⸱

27 בפברואר 2026

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Operative Dentistry, Dow Dental College, Dow University of Health Sciences, 2Dow Institute of Advanced Biological and Animal Research, Dow University of Health Sciences, 3Department of Pathology, Dow International Medical College, Dow University of Health Sciences, 4Department of Oral Pathology, Dow Dental College, Dow University of Health Sciences, 5Qatar University

* These authors contributed equally

במאמר זה

סיכום

כאן אנו מציגים פרוטוקול ליצירת מודל דלקת מוכת בעכברים של NMRI (המכון למחקר רפואי ימי). בנוסף, מתוארים שלבים להכנת קליפס למשיכת לסת והכנת שקופיות להיסטולוגיה מהלסת של בעל החיים. על ידי מעקב אחר פרוטוקול סטנדרטי, ניתן להימנע מהבדלים במתודולוגיה ובתוצאות.

תקציר

עכברים של מכון המחקר הרפואי הימי (NMRI) לא דווחו בעבר על יצירת מודל דלקת למוך הדן. בפרוטוקול זה, אנו מציגים מודל בעלי חיים המשתמש בעכברי NMRI ומספקים נהלים היסטולוגיים מפורטים למודל הפולפיטיס כדי להבטיח שחזוריות. כללנו 70 עכברי NMRI שחולקו באקראי לשתי קבוצות: קבוצה A (n=35), שבה דלקת פולפיטיס נגרמה מחשיפה למוך בלבד, וקבוצה B (n=35), שקיבלה חשיפה למוך ואחריה יישום זימוזן. לאחר חשיפת העיסה של הטוחנת העליונה הימנית, בעלי חיים הוקרבו במרווחי זמן מוגדרים (0, 6, 9, 12, 24, 48 ו-72 שעות). הלסת העליונה הושגה לצורך היסטולוגיה וניתוח היסטומורפולוגי כמותי. נצפתה עלייה הדרגתית תלויה בזמן בדלקת בניתוח היסטולוגי בשתי הקבוצות. שני המודלים של בעלי החיים אפשרו חקר דלקת עד 72 שעות. הטכניקה המוצגת במאמר זה ניתנת לשחזור ותסייע לסטנדרטיזציה של המחקר ההיסטולוגי של פולפיטיס.

מבוא

מודלים שונים של בעלי חיים שימשו לחקר פולפיטיס 1,2,3,4. מתוכם, מודלים של עכברים המבוססים על C57BL/6 ו-BALB/c מדווחים בלעדית במחקר פולפיטיס 5,6,7,8. שניהם בני משפחה ויש להם דרישות מחמירות לרבייה 7,9. עכברי ה-NMRI המשמשים בפרוטוקול הנוכחי הם זן מוגדל, ומציעים יתרונות רבים על פני הזנים הפנימיים. יש לו עלויות התקנה ותחזוקה נמוכות. רבייה גבוהה, חסינות טובה יותר ותמותה נמוכה מובילים לתחלופה מוקדמת וגדולה יותר של מושבות10. לכן, זה יותר אפשרי מבחינה לוגיסטיתוכלכלית 11. יתרה מזאת, התוצאות שלנו מצביעות על כך שפרופיל המחלה של דלקת העיסה שנוצרת במודל זה דומה למודלים שדווחו קודם על עכברים קרובי משפחה 5,6,8. יתרה מזאת, עכברי NMRI יכולים לעמוד בחשיפה לעיסת זימוסן עד 72 שעות, ולפתח פרופיל מחלה שניתן לצפייה. זו חלופה ישימה לזנים אחרים שנוצרו בקרוב לחקר פולפיטיס12.

זימוזן הוא תמצית מדופן התא של Saccharomyces cerevisiae, והוא מורכב בעיקר מכיטין, מנאן, מנופרוטאנים ו-ß-glucans13. זימוזאן וקנדידה אלביקניות חולקים מבנה דופן תא דומה ומזוהים על ידי חסינות מולדת של המארח דרך לקטין מסוג C, קולטן זיהוי פתוגן, דקטין-114. דקטין-1 מתבטא בעיקר על ידי תאים דנדריטיים ומאקרופאגים. הוא מזהה ß-גלוקנים בפתוגנים פטרייתיים ומשתמש במסלול Syk/CARD9 ליצירת מתווכים דלקתיים15. לכן, Zymosan הוא חלופה ישימה לחקר השפעת החשיפה של C. albicans על מחלת העיסה במקום להשתמש באורגניזם16. דבר זה נתמך בתוצאות שפורסמו בעבר, שמראות גילוי מוקדם של תמלילי דקטין-1 בעיסת זימוזן. באופן דומה, נצפו גם דקטין-1 המבטא CD68+ve מקרופאגים12.

טכניקות היסטולוגיות שתוארו בפרסומים קודמים לעיתים קרובות אינן מספקות לחוקרים מתחילים לשחזר בביטחון. כתוצאה מכך, מתרחשים ניסוי וטעייה נרחבים, מה שמוביל לאובדן מיותר של בעלי חיים במהלך אופטימיזציה של הליכים היסטולוגיים. הפרוטוקול הנוכחי מאחד את טכניקת הכנת השקופיות והוא יושם בהצלחה גם על חולדות17. כאן מתוארים כל השלבים החיוניים של מודל הפולפיטיס בפירוט, כולל שיטה שחזורית למשיכת הלסת, השראת דלקת מוך על ידי חשיפה למוך, השראת דלקת במוך באמצעות זימוזן, וניתוח היסטולוגי לאחר מכן.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

מחקר בעלי החיים הנוכחי תוכנן בהתאם להנחיות ARRIVE. ועדת הביקורת המוסדית למחקר ואתיקה בבעלי חיים של אוניברסיטת דאו למדעי הבריאות אישרה מחקר זה על בעלי חיים (מכתב מס' AR. IRB-06/DUHS/אישור/2016/05). הפרוטוקול כלל בסך הכל 70 עכברים עם NMRI. בעלי החיים הושגו ממתקן בית החיות המרכזי של מכון דאו למחקר ביולוגי ובעלי חיים מתקדם. גודל המדגם של פרוטוקול זה מבוסס על מחקר קודם8.

1. בעלי חיים

הערה: בעלי החיים שנבחרו למחקר שקלו 26-30 גרם והוחזקו בכלובים סטנדרטיים בתנאים הבאים: טמפרטורה של ±21 מעלות צלזיוס, לחות יחסית של ±55%, ויחס אור/חושך של 12 שעות עם מים מסוננים זמינים בחינם ומזון סטנדרטי (דיאטת צ'או רגילה). הייתה מעקב קבוע לכל סימן לתוקפנות, אי נוחות או גירוי. דיקלופנק נתרן (200 מיקרוליטר תת-עורית, 25 מ"ג/מ"ל) שימש במקרה של כאב או אי נוחות. הם הורשו להסתגל לטמפרטורה במשך שבועיים לפני כל ניסוי. עשרה בעלי חיים כל אחד הוחזקו בכלובים מסומנים כראוי. לזיהוי בעל חיים, הונח סימן על זנבו.

  1. חלק את בעלי החיים (n=70) באקראי לשתי קבוצות: קבוצה A (n=35), קבוצה B (n=35).
  2. בקבוצה A, גורמים לדלקת פולפיטיס רק על ידי חשיפת העיסה (ראו שלב 4.1.1 עד שלב 4.1.9).
  3. עבור בעלי חיים מקבוצה B, יש למרוח תמיסת זימוזן על עיסה חשופה (ראו שלב 4.2.1 עד שלב 4.2.3).

2. תמיסת זימוזן

  1. עקבו אחרי שיטה שפורסמה קודם להכנת תמיסת זימוזן כפי שמתואר להלן18.
  2. השתמשו במי מלח מפוזר (PBS) להכנת תמיסה של 1 מ"ג/מ"ל מ-1 מ"ל זימוזן.
  3. אוטוקלב את התמיסה ב-121 מעלות צלזיוס למשך 15 דקות.
  4. תן לתמיסה להתקרר לטמפרטורת החדר במשך שעה.
  5. צנטריפוגה את התמיסה בטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס ו-300 x גרם למשך 10 דקות.
  6. להשליך את הסופרנטנט ולשטוף את הכדור שלוש פעמים באמצעות צנטריפוגה מחדש עם PBS קר וקר.
  7. אחסן את התמיסה בטמפרטורה של 4°C עד לשימוש נוסף.
    הערה: יש להשתמש בתמיסה בתוך 30 יום, ולאחר מכן ניתן להשליך אותה.

3. קליפס למשיכת לסת

  1. השתמש בחוט אורתודונטי נירוסטה בקוטר 0.7 מ"מ ליצירת קליפס לנסיגת לסת.
  2. קח חוט באורך 100 מ"מ ויצר לולאה בקוטר 5 מ"מ במרכזו.
  3. סובב את שני חלקי החוט 5 מ"מ מהלולאה ו-15 מ"מ בסך הכל בזווית ישרה ללא עיקולים חדים.
  4. במרחק של 25 מ"מ מהפנייה, יש ליצור חריץ ולסובב את הקצה הנותר החוצה. השתמשו באיור 1A להכוונה.

4. מודל בעלי חיים

  1. קבוצה א' (n = 35)
    1. הרדמו בעלי חיים בהזרקה תוך-פריטוניאלית של 0.1 מ"ל/20 גרם קוקטייל קטמין-זילזין (87.5 מ"ג/ק"ג קטמין + 12.5 מ"ג/ק"ג זילזין).
    2. השתמש במיקרוסקופ סטריאומיקרוסקופ ארוך עם נטייה של 10x לכל ההליכים (איור 1B). קבע את הזרוע המוטה כך שתוכל לראות ישירות את שיני הלסת העליונה של בעל החיים. (איור 1C)
    3. לחץ את הקליפ והניח את החלק החריץ בין החותכות המקסילריות והלסתית משני צידי הקליפס.
    4. לאחר שחרור הקליפ, אבטח את קצותיו בעזרת דבק (איור 1C).
    5. השתמש בפינצטה דנטלית כדי להרחיב את לחיי החיה ביד שאינה עובדת. (איור 1D,E).
      הערה: הימנע מלחץ מופרז. הפציעה מפינצטה עלולה לגרום לדימום קטלני ולמוות של בעל החיים.
    6. השתמש בבור קרביד עגול #1/4 עם ידית מסוג E במהירות איטית במיקרו-מנוע חשמלי בהגדלה של פי 10 לחצי מהעומק במרכז הטוחנת הראשונה של המקסילריה הימנית כדי ליצור חלל מסוג 1. צל העיסה עשוי להיות נראה ברגע זה (איור 1D,E).
    7. הרץ את הבור בעדינות במהירויות איטיות בתנועה סוחפת. השתמש במנוע חשמלי כדי לשלוט בסל"ד.
    8. השתמשו בפצירה אנדודונטית מסוג K מספר 15 כדי לחשוף את העיסה (איור 2B).
      הערה: השימוש בכלי ידני אנדודונטי #15 חייב להיות עדין מאוד, אחרת תתרחש חור בפרקצ', שיתברר רק לאחר הכנת שקופיות היסטולוגיות. קוטר הבור קרביד העגול #1/4 הוא 0.25 מ"מ, ופצולה מסוג #15K ברוחב 0.15 מ"מ. לכן, 0.15 מ"מ יהיה גודל החשיפה לעיסה (איור 2C).
    9. השאירו את העיסה החשופה פתוחה לצורך השראת פולפיטיס
  2. קבוצה ב' (n = 35)
    1. חזור על כל השלבים שניתנו בשלב 4.1 עם הוספת השלבים הבאים.
    2. השתמשו במיקרופיפטה (0.2-2 מיקרוליטר) כדי להניח 0.2 מיקרוליטר של תמיסת זימוזן שהוכנה מראש מעל העיסה החשופה.
      הערה: יש לנקוט זהירות בעת מתן תמיסת זימוזן. שפיכה לא מכוונת של התמיסה לחלל הפה עלולה לגרום למוות של בעל החיים. לכן, גזה משמשת לכיסוי השן כך שתמיסת זימוזן עודפת נספגת בגזה (איור 2D).
    3. השאירו את העיסה המטופלת פתוחה לצורך השראת דלקת הפולפיטיס באמצעות תמיסת זימוזן.

5. הכנת דוגמאות

  1. הקריבו חמישה בעלי חיים מכל קבוצה ב-0, 6, 9, 12, 24, 48 ו-72 שעות על ידי שאיפת פחמן דו-חמצני19.
  2. השתמש בתא המתת חסד בנפח 7.25 ליטר.
  3. אל תטעין מראש את התא ב-CO2.
  4. הניחו את החיות ישירות לתוך החדר.
  5. הוסיפו 100%CO2 בקצב מילוי בין 30 ל-70% מנפח התא לדקה.
  6. שמור על קצב הזרימה שלCO2 על 5 ליטר לדקה.
  7. חמם אתה-CO 2 והשאיר אותו להתערבב עם האוויר שבתא.
  8. עקבו אחרי בעלי החיים לסימני אובדן הכרה תוך 23 דקות.
  9. עקבו אחרי בעלי החיים להפסקת הנשימה והעיניים הופכות לאפורות.
  10. שמור על זרימתCO2 לפחות דקה אחת לאחר הפסקת הנשימה.
  11. אשר את מותם של בעלי חיים לפני שאתה מוציא אותם מהחדר. ודא שאין נשימה והעיניים נראות חיוורות.
  12. הפרדו את ראשי בעלי החיים מיד לאחר המתת חסד.
  13. השתמשו בטוחנת הראשונה של הלסת העליונה הלא מטופלת בצד שמאל של החיה שהוקרבה ב-0h כאמצעי בקרה.
  14. השתמשו בפורמלין עם 10% בופר בצינורות חרוטיים של 15 מ"ל מסומנים כראוי כדי לאחסן את הלסתות העליונות למשך יומיים.

6. היסטולוגיה

  1. דקלציפיק את הלסתות הקבועות בחומצה פורמית 10% למשך 3 ימים.
    הערה: לאחר היום השלישי, בדקו אם להב ניתוחי יכול לחתוך את הלסת. אם הוא עדיין לא רך מספיק, טבלו אותו שוב בחומצה פורמית 10% ובדוק מדי יום עד שניתן לחתוך אותו עם להב ניתוח.
  2. חתוך את הלסת עם להב מספר 22. הפוך את החיתוך במקביל למישור האוקלוזלי, לאורך המישור הסגיטלית, תוך שמירה על הלהב מיד בצד החך של הבליטות החכיות של טוחנות העליונות (איור 3A).
  3. סמנו את פני השטח האוקלוזליים של כל השיניים בדיו הודו.
    הערה: סימון זה יסייע לזהות את פני השטח החסימה במהלך החתך (איור 3B).
  4. הטמיעו את הלסת המקוטעת בשעוות פרפין בתוך מעטפת תבנית פלדה אל-חלדה על ידי הנחה שטוחה על בסיס התבנית, כאשר פני השטח החתוכים פונים לבסיס.
    הערה: הטמעה בדרך זו מבטיחה שמשטח החיתוך ייכנס למיקרוטום ראשון, כיוון הדגימה נכון, ושהחתכים הסגיטליים נוצרים כפי שמוצג באיור 3E.
  5. הסר את הקסטה המשובצת המכילה את הלסת המוטמעת מהתבנית הבסיסית והניח אותה במיקרוטום.
  6. צרו חתכים סגיטליים בעובי 3 מיקרון והניחו אותם על סלייד מיקרוסקופ נקי וטעון (איור 3C).
  7. התבונן במגלגיות לא מוכתמות תחת מיקרוסקופ מורכב.
    הערה: המשיכו לעקוב אחרי החתכים החתוכים עד שהחלל יהיה נראה על פני השטח החסום. אם החתכים נוצרים נכון לאורך המישור הסגיטלי לאורך הציר הארוך של הטוחנת הראשונה של המקסילריה, ניתן לראות את כל מרחב העיסה המציג שורש אחד או שניים ותא העיסה (איור 3E). מנקודה זו ואילך, ניתן תיאורטית ליצור 50 שקופיות מחלק אחד, שכן גודל החשיפה הוא 0.15 מ"מ. (3 מיקרון = 0.003 מ"מ, 0.003 x 50 = 0.15)
  8. בצע שלבים סטנדרטיים של צביעת המטוקסילין ואאוזין עבור השקופיות הנבחרות המציגות שורש אחד או שניים, יחד עם כל תא העיסה.
  9. התבונן בגלגולים המוכתמים תחת מיקרוסקופ מורכב.
  10. בחר חמש שקופיות מיטביות בכל פרק זמן שיאפשרו תצפית על מרחב העיסה המקסימלי.

7. ניתוח סטטיסטי

  1. בצע ניתוח סטטיסטי באמצעות תוכנה סטטיסטית סטנדרטית.
    הערה: לניתוח היסטומורפולוגי כמותי, השקופיות שנצפו מכל פרק זמן דורגו לפי קריטריון שפורסם קודם (טבלה 1)8. מבחן Kruskal-Wallis H עם תיקון בונפרוני ב-p=0.0018 שימש להשוואת ציונים של מרווחי זמן שונים. מבחן Mann-Whitney U שימש ב-p ≤ 0.05 להשוואה בין קבוצות A ו-B. כל ההשוואות בוצעו באמצעות תוכנה סטטיסטית סטנדרטית.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

בפרוטוקול זה, אנו מציגים הליך מפורט שלב אחר שלב עבור שני מודלים בעלי חיים של דלקת מוך שיניים בעכברי NMRI, יחד עם שיטות היסטולוגיות מתאימות. שימוש בציוד מתאים חיוני להצלחת הפרוטוקול. בהקשר זה, המיקרומיקרוסקופ הארוך עם זרוע ארוכה עם נטייה של 10x הוא הציוד החשוב ביותר. הכנת החלל מסוג Class 1 בוצעה באמצעות מיקרו-מנוע חשמלי בכ-שליש מהמהירות המרבית שלו (35,000 סל"ד), מה שהפך את ההליך לנוח וביטל את הצורך באוויר דחוס.

איור 1

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

הפרוטוקול הנוכחי מציג לראשונה את פיתוח מודל פגיעות שיניים מסוג 3 (דלקת פולפיטיס בלתי הפיכה) בעכברי NMRI בספרות המדווחת. הוא גם מפרט את הניתוח ההיסטולוגי של דלקת העיסה הנגרמת על ידי זימוזן ומספק שיטה ניתנת לשחזור להכנת שקופיות היסטולוגיות מלסתות בעלי חיים.

בהתאם לפרוטוקול זה, יוצר מודל פגיעות שיניים מסוג 3 בעכברי NMRI. מחקרים קודמים בוצעו על חולדות, ארנבים וכלבים 1,2,3,4.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

למחברים אין ניגודי עניינים להצהיר עליהם.

תודות

המחקר היה במימון עצמי. המחברים מודים לעזרתו של מר מוחמד אדיל מהמחלקה להיסטולוגיה באוניברסיטת דאו למדעי הבריאות, בתחום ההיסטולוגיה.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
תבנית בסיסמעבדות היסטו-ליין, איטליהR4166C2:D23להטמעת הדגימה בפרפין
קרביד בר #1/4 סיבובמידווסט, וויצ'יטה פולס, טקסס389101
מיקרוסקופ מורכב Motic BA310מוטיק בע"מ, הונג קונגhttps://moticmicroscopes.com/products/ba310e
דיקלופנק נתרן 25 מ"ג/מ"לאינדוס פארמה (DYCLO)https://sahar.ph/product/dyclo-diclofenac-sodium-25-mg-ml-im-iv/200&מיקרו; L תת-עורית
ידית יד מסוג E במהירות איטית Rose201-M4בהיותה פושאן, סיןhttps://www.beingfoshan.com/en/h-pd-353.html
הטמעת קלטת מעבדות היסטו-ליין, איטליהR4004
חדר המתת חסדConductScience, אילינוי, ארה"בCS-EUTH2Aקיבולת של 7.25 ליטר, לעכברים וחולדות [עד 500 גרם]
צינורות פלקון 15 מ"לקן188271
פורמלין סיגמא-אלדריץ', סנט לואיס, מיזורי, ארצות הברית158127buffered 
חומצה פורמית  ציוד מעבדת BDH פול, אנגליה 2842810%
הומוגנייזר Omni Mixer Homogenizer, Omni International, ג'ורג'יה, ארה"בhttps://omni-inc.com/high-shear-lab-homogenizers/omni-th-0-2ml-100ml/omni-tissue-homogenizer-th
אינק הודוסיגמא-אלדריץ', סנט לואיס, מיזורי, ארצות הברית198285
קובץ אנדודונטי מסוג K מספר 15מאני, יפןhttps://www.mani.co.jp/en/product/dental_01.html
קוקטייל קטמין-זילאזיןBrookes Pharma Pvt Ltd / Mylab (Pvt.) Ltd.87.5 מ"ג/ק"ג קטמין + 12.5 מ"ג/ק"ג קזילזין
מיקרוטום HM 315 Rמיקרום, גרמניה901100
מרתון מיקרו-מנועים IIIBT-Marathon, Saeyang Microtech Co., בע"מ, קוריאהhttps://www.saeyang.com/theme/basic/sub/product/view.php?it_id=1752202111שימוש בשליש מהמהירות המרבית
מיקרופיפטה 0.2-2 ומיקרו; L גילסון, צרפתhttps://www.gilson.com/default/
pipetman-p2-0-2-2-micro-l-metal
-ejector.html?srsltid=AfmBOoobE
0iSWY_902ZHGZ7AoJ6wzN5PI
0H4V4vkxHQgK1mq7Wg2kkbS		0.2-2 ומיקרו; L 
מלח מוגן בפוספט סיגמא-אלדריץ', סנט לואיס, מיזורי, ארצות הבריתP4417
חבילת סטטיסטיקה למדעי החברהIBM, ארמונק, ניו יורקSPSS למק גרסה 23.0   
סטריאומיקרוסקופ BMK-3 LEDמייג'י טכנו, יפןhttps://meijitechno.com/product/bmk-3-led-stereo-microscope/
להב ניתוחי מס' 22להב ניתוח נוצות, חברת Feather Safety Razor בע"מ, אוסקה, יפןפייסבוק. 12
זימוסן א'סיגמא-אלדריץ', סנט לואיס, מיזורי, ארצות הבריתמספר קטגוריה Z42501 מ"ג/מ"ל מ-1 מ"ל זימוזן

מקורות

  1. Haddad, M., Lefranc, G., Aftimos, G. Local application of IGF1 on dental pulp mechanically exposed; in vivo study on rabbit. Bull Group Int Rech Sci Stomatol Odontol. 45 (1), 12-17 (2003).
  2. Huang, J., et al. Dynamic Regulation of Delta-Opioid Receptor in Rat Trigeminal Ganglion Neurons by Lipopolysaccharide-induced Acute Pulpitis. J Endod. 41 (12), 2014-2020 (2015).
  3. Shahravan, A., Ghoddusi, J., Eslami, B., Rategar, A. F. A histopathological study of the pulp of dogs' teeth after induction of experimental pulp inflammation for different periods of time. J Microsc. 237 (2), 119-121 (2010).
  4. Siddiqui, Y. D., et al. Resolvin D2 Induces Resolution of Periapical Inflammation and Promotes Healing of Periapical Lesions in Rat Periapical Periodontitis. Front Immunol. 10, 307(2019).
  5. Mutoh, N., Tani-Ishii, N., Tsukinoki, K., Chieda, K., Watanabe, K. Expression of toll-like receptor 2 and 4 in dental pulp. J Endod. 33 (10), 1183-1186 (2007).
  6. Mutoh, N., Watabe, H., Chieda, K., Tani-Ishii, N. Expression of Toll-like receptor 2 and 4 in inflamed pulp in severe combined immunodeficiency mice. J Endod. 35 (7), 975-980 (2009).
  7. Sasaki, H., et al. Endodontic Infection-induced Inflammation Resembling Osteomyelitis of the Jaws in Toll-like Receptor 2/Interleukin 10 Double-knockout Mice. J Endod. 45 (2), 181-188 (2019).
  8. He, Y., et al. Pulpal Tissue Inflammatory Reactions after Experimental Pulpal Exposure in Mice. J Endod. 43 (1), 90-95 (2017).
  9. Patidar, A., et al. Barley beta-Glucan and Zymosan induce Dectin-1 and Toll-like receptor 2 co-localization and anti-leishmanial immune response in Leishmania donovani-infected BALB/c mice. Scand J Immunol. 92 (6), e12952(2020).
  10. Tuttle, A. H., Philip, V. M., Chesler, E. J., Mogil, J. S. Comparing phenotypic variation between inbred and outbred mice. Nat Methods. 15 (12), 994-996 (2018).
  11. Zhang, W., et al. Genome-Wide Association Mapping of Quantitative Traits in Outbred Mice. G3 Genes|Genomes|Genetics. 2 (2), 167-174 (2012).
  12. Hasan, A., et al. Expression of Toll-like receptor 2, Dectin-1, and Osteopontin in murine model of pulpitis. Clini Oral Investig. 27 (3), 1177-1192 (2023).
  13. Rogers, N. C., et al. Syk-dependent cytokine induction by Dectin-1 reveals a novel pattern recognition pathway for C-type lectins. Immun. 22 (4), 507-517 (2005).
  14. Ruiz-Herrera, J., Elorza, M. V., Valentin, E., Sentandreu, R. Molecular organization of the cell wall of Candida albicans and its relation to pathogenicity. FEMS Yeast Res. 6 (1), 14-29 (2006).
  15. Takeuchi, O., Akira, S. Pattern recognition receptors and inflammation. Cell. 140 (6), 805-820 (2010).
  16. Peters, B. M., Noverr, M. C. Candida albicans-Staphylococcus aureus Polymicrobial Peritonitis Modulates Host Innate Immunity. Infect Immun. 81 (6), 2178-2189 (2013).
  17. Niazi, F. H., et al. Dentin-Pulp Complex Response in Molars of Rats after Occlusal and Cervical Restorations with Conventional Glass Ionomer Cement and Nano-Hydroxyapatite Silica Glass Ionomer Cement. Appl Sci. 13 (5), 3156(2023).
  18. Erdo, F., Torok, K., Aranyi, P., Szekely, J. I. A new assay for antiphlogistic activity: zymosan-induced mouse ear inflammation. Agents Actions. 39 (3-4), 137-142 (1993).
  19. Underwood, W., Raymond, A. AVMA guidelines for the euthanasia of animals. , 2020 edition, (2020).
  20. Bernardino, ÍdM., Farias, ÍdL., Cardoso, A., Xavier, A., Cavalcanti, A. Use of Animal models in Experimental Research in Dentistry in Brazil. Pesqui Bras Odontopediatria Clin Integr. 14 (1), 17-21 (2014).
  21. Alzarea, B. Selection of Animal Models in Dentistry: State of Art Review Article. J Anim Vet Adv. 13 (18), 1080-1085 (2014).
  22. Hasan, A., et al. A novel experimental model to investigate fungal involvement shows expression of Dectin-1 in periapical lesion pathogenesis. J Oral Rehab. 50 (10), 1043-1057 (2023).
  23. Song, M., et al. Development of a Direct Pulp-capping Model for the Evaluation of Pulpal Wound Healing and Reparative Dentin Formation in Mice. J Vis Exp. (119), e54973(2017).
  24. Balto, K., White, R., Mueller, R., Stashenko, P. A mouse model of inflammatory root resorption induced by pulpal infection. Oral Surg Oral Med Oral Pathol Oral Radiol Endod. 93 (4), 461-468 (2002).
  25. De Rossi, A., Rocha, L. B., Rossi, M. A. Interleukin-10, Intercellular adhesion molecule-1, and chemokine receptor 5, but not interleukin-4, attenuate the development of periapical lesions. J Endod. 34 (1), 31-38 (2008).
  26. da Silva, R. A., Ferreira, P. D., De Rossi, A., Nelson-Filho, P., Silva, L. A. Toll-like receptor 2 knockout mice showed increased periapical lesion size and osteoclast number. J Endod. 38 (6), 803-813 (2012).
  27. Kawashima, N., Stashenko, P. Expression of bone-resorptive and regulatory cytokines in murine periapical inflammation. Arch Oral Biol. 44 (1), 55-66 (1999).
  28. Balto, K., Müller, R., Carrington, D. C., Dobeck, J., Stashenko, P. Quantification of periapical bone destruction in mice by micro-computed tomography. J Dent Res. 79 (1), 35-40 (2000).
  29. Ramirez, I., et al. Is dental pulp inflammation capable of causing central inflammation, behavioral, and sensory alterations? A pre-clinical study. Arch Oral Biol. 177, 106320(2025).
  30. Li, J. G., et al. Melatonin attenuates inflammation of acute pulpitis subjected to dental pulp injury. Am J Transl Res. 7 (1), 66-78 (2015).
  31. Shi, X., Li, Z., He, Y., Jiang, Q., Yang, X. Effect of different dental burs for experimental induction of pulpitis in mice. Arch Oral Biol. 83, 252-257 (2017).
  32. Kim, S., Lee, S., Jung, H. S., Kim, S. Y., Kim, E. Development of a mouse model for pulp-dentin complex regeneration research: a preliminary study. Restor Dent Endod. 44 (2), e20(2019).
  33. Mohaved, S. B., et al. Apical periodontitis-induced mechanical allodynia: A mouse model to study infection-induced chronic pain conditions. Molecular Pain. 16, 1744806919900725(2020).
  34. Chung, M. K., Lee, J., Duraes, G., Ro, J. Y. Lipopolysaccharide-induced pulpitis up-regulates TRPV1 in trigeminal ganglia. J Dent Res. 90 (9), 1103-1107 (2011).
  35. Tang, Y., Yu, C., Li, F., Wang, H., Ye, L. Establishment of a Murine Pulp Exposure Model with a Novel Mouth-Gag for Pulpitis Research. J Vis Exp. (200), (2023).
  36. Xiao, Z., Xu, M., Lan, L., Xu, K., Zhang, Y. R. Activation of the P2X7 receptor in the dental pulp tissue contributes to the pain in rats with acute pulpitis. Mol Pain. 18, 17448069221106844(2022).
  37. Gantner, B. N., Simmons, R. M., Canavera, S. J., Akira, S., Underhill, D. M. Collaborative induction of inflammatory responses by dectin-1 and Toll-like receptor 2. J Exp Med. 197 (9), 1107-1117 (2003).
  38. Monroe, L. L., et al. Zymosan-Induced Peritonitis: Effects on Cardiac Function, Temperature Regulation, Translocation of Bacteria, and Role of Dectin-1. Shock. 46 (6), 723-730 (2016).
  39. Olynych, T. J., Jakeman, D. L., Marshall, J. S. Fungal zymosan induces leukotriene production by human mast cells through a dectin-1-dependent mechanism. J Allergy Clin Immunol. 118 (4), 837-843 (2006).
  40. Rosenzweig, H. L., Clowers, J. S., Nunez, G., Rosenbaum, J. T., Davey, M. P. Dectin-1 and NOD2 mediate cathepsin activation in zymosan-induced arthritis in mice. Inflamm Res. 60 (7), 705-714 (2011).
  41. Chattipakorn, S. C., Sigurdsson, A., Light, A. R., Narhi, M., Maixner, W. Trigeminal c-Fos expression and behavioral responses to pulpal inflammation in ferrets. Pain. 99 (1-2), 61-69 (2002).
  42. Kawanishi, H. N., Kawashima, N., Suzuki, N., Suda, H., Takagi, M. Effects of an inducible nitric oxide synthase inhibitor on experimentally induced rat pulpitis. Eur J Oral Sci. 112 (4), 332-337 (2004).
  43. Kawashima, N., Nakano-Kawanishi, H., Suzuki, N., Takagi, M., Suda, H. Effect of NOS inhibitor on cytokine and COX2 expression in rat pulpitis. J Dent Res. 84 (8), 762-767 (2005).
  44. Li, M., et al. Histology-based profile of inflammatory mediators in experimentally induced pulpitis in a rat model: screening for possible biomarkers. Int Endod J. 54 (8), 1328-1341 (2021).
  45. Rutherford, R. B., Gu, K. Treatment of inflamed ferret dental pulps with recombinant bone morphogenetic protein-7. Eur J Oral Sci. 108 (3), 202-206 (2000).
  46. Renard, E., et al. Immune Cells and Molecular Networks in Experimentally Induced Pulpitis. J Dent Res. 95 (2), 196-205 (2015).
  47. Cleaton-Jones, P., Duggal, M., Parak, R., Williams, S., Setzer, S. Pulpitis induction in baboon primary teeth using carious dentine or Streptococcus mutans. Sadj. 59 (3), 119-122 (2004).
  48. Eba, H., et al. The anti-inflammatory effects of matrix metalloproteinase-3 on irreversible pulpitis of mature erupted teeth. PLoS One. 7 (12), e52523(2012).
  49. Fuks, A. B., Jones, P. C., Michaeli, Y., Bimstein, E. Pulp response to collagen and glutaraldehyde in pulpotomized primary teeth of baboons. Pediatr Dent. 13 (3), 142-150 (1991).
  50. Oliveira, L. A., Barbosa, S. V. The reaction of dental pulp to Escherichia coli lipopolysaccharide and Enterococcus faecalis lipoteichoic acid. Braz J Microbiol. 34 (2), 179-181 (2003).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה

בקש הרשאה

תגיות

NMRIZymosan
הסרטון יגיע בקרוב

מאמרים קשורים