הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.

מאמר מחקר

יעילות טיפולית של לייזר אקסימר 308-ננומטר בשילוב עם מטרין בויטיליגו באמצעות מודולציה של אימונוגלובולינים בסרום וציטוקינים דלקתיים

368 צפיות

⸱

DOI:

10.3791/70371

⸱

10 במרץ 2026

 ,  ,  ,  , 
1Department of Dermatology, Xingtai People's Hospital

במאמר זה

סיכום

השימוש המשולב בלייזר אקסימר 308 ננומטר ומטרין אוראלי שיפר משמעותית את הפיגמנטציה מחדש בויטיליגו על ידי קידום התחדשות מלנוציטים והשבת איזון חיסוני. טיפול דו-מודאלי זה הפחית ציטוקינים פרו-דלקתיים, נרמל את האימונוגלובולינים, העלאת IL-10, והשיג יעילות קלינית מעולה עם בטיחות מצוינת וסבילות למטופל.

תקציר

ויטיליגו הוא הפרעת דה-פיגמנטציה אוטואימונית כרונית המאופיינת באובדן מלנוציטים תפקודיים והפעלה חיסונית חריגה. למרות ההתקדמות בפוטותרפיה, התגובות הקליניות נותרות לא עקביות, בעיקר בשל פעילות דלקתית מתמשכת וחוסר בוויסות חיסוני מספק. מחקר זה חקר את היעילות הטיפולית והמנגנונים החיסוניים של שילוב פוטותרפיית לייזר אקסימר 308-ננומטר עם מטרין אוראלי, אלקלואיד טבעי בעל תכונות אנטי-דלקתיות ורגולטוריות חיסוניות. בסך הכל 232 מטופלים עם ויטיליגו לא סגמנטלי הוקצו באופן פרוספקטיבי לקבלת טיפול מונותרפי בלייזר אקסימר או טיפול משולב למשך 12 שבועות. השיפור הקליני הוערך באמצעות מדד דירוג אזורי של ויטיליגו (VASI), ונותחו אימונוגלובולינים וציטוקינים בסרום להערכת ויסות מערכת החיסון. שני המשטרים יצרו ריפיגמנטציה משמעותית, אך הטיפול המשולב השיג ירידה בולטת יותר ב-VASI (מ-9.72 ± 3.24 בתחילת ההתחלה ל-5.76 ± 2.18 לאחר הטיפול) מאשר לייזר אקסימר בלבד (מ-9.68 ± 3.37 ל-6.63 ± 2.34, עמ' < 0.001). שיעור המטופלים שהפגינו ריפיגמנטציה מצוינת או טובה היה גבוה משמעותית במשטר המשולב (76.7%) לעומת טיפול מונותרפי (58.7%). במקביל, רמות IgG בסרום ירדו באופן ניכר (13.72 ± 2.64 גרם לליטר ל-11.85 ± 2.18 גרם לליטר, p < 0.001), בעוד שרמות IgA עלו במתינות (2.07 ± 0.68 גרם לליטר ל-2.23 ± 0.61 גרם לליטר, p = 0.041). ציטוקינים פרו-דלקתיים כולל IFN-γ ו-IL-17 ירדו משמעותית ( שניהם p < 0.001), בעוד ש-IL-10 נוגדי דלקת עלה מ-8.3 ± 3.2 ל-12.9 ± 3.5pg/mL (p < 0.001). שיפור VASI היה בקורלציה הפוכה לשינויים ב-IFN-γ (r = –0.482, p < 0.05) ו-IL-17 (r = –0.451, p < 0.001), ובאופן חיובי עם עליית IL-10 (r = 0.503, p < 0.001). ממצאים אלו מראים שמטרין משפר את יעילות לייזר אקסימר על ידי קידום התחדשות מלנוציטים והשבת שיווי המשקל החיסוני, ובכך קובע אסטרטגיית דו-מודאליות מבוססת ביומרקר לניהול מדויק ועמיד של ויטיליגו.

מבוא

ויטיליגו הוא הפרעת עור כרונית ונרכשת, המתאפיינת בהרס סלקטיבי או תפקוד לקוי של מלנוציטים אפידרמליים, מה שמוביל להתפתחות ממקולות לבנים מוגדרים היטב בגודל ותפוצה משתנים. היא משפיעה על כ-0.5%–2% מהאוכלוסייה העולמית, ללא נטייה מגדרית או גזעית, ולעיתים מופיעה לפני גיל 30. למרות שהמחלה אינה מסכנת חיים, היא מטילה נטל פסיכו-סוציאלי ורגשי משמעותי, הפוגעת משמעותית בהערכה העצמית, בתפקוד החברתי ובאיכות החיים3. הפתוגנזה של ויטיליגו נותרת רב-גורמית ולא מפורטת לחלוטין, הכוללת נטייה גנטית, לחץ חמצוני, תגובות אוטואימוניות וגורמים נוירוהומורליים4. עדויות עדכניות הדגישו במיוחד את התפקיד המרכזי של דיסרגולציה חיסונית הן בהתחלה והן בהתמדה של הרס מלנוציטים 5,6. באפידרמיס, לימפוציטים T ציטוטוקסיים אוטוריאקטיביים CD8⁺ מזהים אנטיגנים של מלנוציטים כמו טירוזינאז ו-gp100, ומשחררים פרפורין וגרנזים B כדי לגרום לאפופטוזיס7. במקביל, ציטוקינים פרו-דלקתיים, כולל אינטרפרון-γ (IFN-γ), פקטור נמק גידול-α (TNF-α), אינטרלוקין-1β (IL-1β), IL-6 ו-IL-17, מגבירים את מפל הדלקת, פוגעים בהישרדות המלנוציטים ומעכבים את נדידת תאי הפיגמנט8. חוסר האיזון בין תאי T רגולטוריים (Tregs) לתאי T אפקטורים תורם עוד יותר להפעלה חיסונית מתמשכת ולאובדן מלנוציטים9. לכן, אסטרטגיות טיפוליות שמטרתן הן לקדם התחדשות מלנוציטים והן להחזיר הומאוסטזיס חיסוני הן בעלות חשיבות קלינית רבה.

מעבר לחריגות חיסוניות מקומיות, עדויות הולכות וגדלות מצביעות על כך שוויטיליגו מייצג מצב אוטואימוני מערכתית. רמות אימונוגלובולינים שהשתנו בסרום (IgG, IgA ו-IgM) תועדו אצל מטופלים, המשקפות הפעלה כללית של תאי B וחסינות הומורלית לא תקינה 10,11. ייצור אימונוגלובולין לא מאוזן עלול להקל על יצירת נוגדנים עצמיים נגד אנטיגנים ספציפיים למלנוציטים, ולהחמיר את הנזק לרקמות. יתרה מזאת, סביבת הציטוקינים בחולי ויטיליגו מציגה לעיתים קרובות רמות IFN-γ, TNF-α, IL-6, IL-17 ו-IL-23, מה שמרמז על הפעלה חיסונית מערכתית מעבר לעור הנגע12,13. מתווכים חיסוניים אלו לא רק משמשים כמניעים פתוגניים, אלא גם קשורים לפעילות המחלה ולתגובה הטיפולית, וממקמים אותם כסמנים ביולוגיים פוטנציאליים למעקב אחר הטיפול14. לכן, התערבויות המסוגלות לשקם את האיזון החיסוני — על ידי ויסות תגובות חיסוניות תאיות ורוחניות — עשויות להציע תוצאות קליניות טובות ועמידות. למרות זמינות של סטרואידים מקומיים, מעכבי קלצינורינים, מדכאי מערכת חיסון ופוטותרפיה, יעילות הטיפול נותרה לא מספקת עבור מטופלים רבים, במיוחד עבור אלו עם מחלה נרחבת או עמידה15. כתוצאה מכך, גישות משולבות שמכוונות למנגנונים פתופיזיולוגיים מרובים זכו לפופולריות בשנים האחרונות.

פוטותרפיה היא זה זמן רב אבן יסוד בניהול ויטיליגו. מבין השיטות השונות, לייזר אקסימר 308 ננומטר (EL) הפך לאחת האפשרויות הממוקדות והיעילות ביותר לויטיליגומקומי 16,17. הוא מעביר קרינת UVB מונוכרומטית ב-308 ננומטר ישירות לנגעים דה-פיגמנט, ובכך מעודד התרבות והגירה של מלנוציטים מזקיקי שיער תוך מזעור חשיפה לרקמה הבריאה הסובבת18. בהשוואה ל-UVB צר פס קונבנציונלי, לייזר אקסימר מציע יתרונות של התחלה מהירה של ריפיגמנטציה, זמן חשיפה מצטבר קצר יותר, ופרופיל בטיחות משופר19,20. מבחינה מכנית, הקרנה במינון נמוך של 308-ננומטר מעוררת אימונומודולציה מקומית על ידי הפחתת פעילות תאי לנגרהנס באפידרמל, הגברת חדירת Treg והגברת המלנוגנזה באמצעות הגברת ויסות טירוזינאז ופקטור שעתוק הקשור למיקרופתלמיה (MITF)21. עם זאת, התגובות נשארות משתנות, ורבים מהמטופלים אינם מצליחים להשיג ריפיגמנטציה מלאה. הקרנה מופרזת או ממושכת עלולה באופן פרדוקסלי לגרום לשחרור ציטוקינים דלקתיים — כגון IL-1β, IL-6 ו-TNF-α — ולפגיעה נוספת במלנוציט22,23. לכן, בעוד שטיפול בלייזר אקסיימיר מגרה ביעילות התחדשות מלנוציטים, יעילותו עשויה להיות מוגבלת על ידי הפעלה דלקתית מקבילה (דלקתיות). הדואליות הזו מדגישה את הצורך בטיפולים משלימים המסוגלים להפחית דלקת ולשפר את הסבילות החיסונית במהלך הפוטותרפיה.

מטרין, אלקלואיד טבעי של קינוליזידין המופק מ-Sophora flavescens (קו שן), זכה לאחרונה לתשומת לב רבה כסוכן אימונומודולטיבי ואנטי-דלקתי עם רעילות נמוכה24,25. מחקרים ניסיוניים הראו כי מטרין יכולה לדכא את מסלולי האיתות NF-κB ו-JAK/STAT, להפחית את ייצור הציטוקינים הפרו-דלקתיים (כולל IFN-γ, TNF-α ו-IL-6), ולקדם ביטוי של מתווכים אנטי-דלקתיים כמוIL-10 26. במחלות הקשורות לחיסון, מטרין הראה יעילות בוויסות התמיינות Th1/Th17, שיפור תפקוד תאי T רגולטוריים ונרמול פרופילי אימונוגלובולינים27,28. יתרה מזאת, מטרין מציג אפקטים נוגדי חמצון ואנטי-אפופטוטיים שעשויות להגן על המלנוציטים מפני פגיעה הנגרמת מלחץ חמצוני. בעוד תכונות אלו הופכות את מטרין למועמד אטרקטיבי למחלות עור אוטואימוניות, מעט מחקרים בחנו את תפקידו בויטיליגו. השילוב בין מטרין לפוטותרפיה מציג גישה טיפולית חדשנית: מטרין יכול להחליש את המיקרו-סביבה הדלקתית, לייצב את ההומאוסטזיס של המלנוציטים, ולהעצים את המלנוגנזה המושרה על ידי לייזר. יתרה מזאת, הפעילות האימונוגולטורית המערכתית של מטרין עשויה להשלים את ההשפעות המקומיות של לייזר האקסימר, מה שמוביל לתועלת קלינית סינרגטית. למיטב ידיעתנו, אף מחקר קליני קודם לא חקר באופן מקיף את השימוש המשולב בלייזר אקסימר 308-ננומטר ובמטרין בויטיליגו, או העריך את הקורלציות האימונולוגיות שלו באמצעות פרופילינג ביומרקרים בסרום.

בהתבסס על הנימוק הזה, השענו כי שילוב של לייזר אקסימר 308-ננומטר ומטרין יניב יעילות טיפולית גבוהה יותר בהשוואה למונותרפיית לייזר אקסימר, על ידי קידום התחדשות המלנוציטים ודיכוי הפעלה חיסונית חריגה. באופן ספציפי, הנחנו כי מתן מטרין משלים ישפר את שיעורי הפיגמנטציה הקלינית, יווסת את רמות האימונוגלובולין בסרום (IgG, IgA ו-IgM) לאיזון פיזיולוגי, ויפחית ציטוקינים פרו-דלקתיים כמו IFN-γ, TNF-α ו-IL-17, תוך הגברת ציטוקינים אנטי-דלקתיים. במחקר זה, הערכנו באופן שיטתי תוצאות קליניות, פרמטרים אימונולוגיים והקשרים ביניהם אצל מטופלים עם ויטיליגו שטופלו בטיפול משולב זה. החידוש של מחקר זה טמון במיקוד המכניסטי הכפול שלו — גירוי פוטוביולוגי מקומי ומודולציה חיסונית מערכתית — ובשילוב ניתוח ביומרקרים כמותי להבהרת מנגנונים טיפוליים. על ידי הבהרת ההשפעה האימונו-רגולטורית של מטרין בשילוב עם פוטותרפיה ממוקדת, עבודתנו שואפת לספק בסיס מבוסס ראיות לפרדיגמה טיפולית חדשה בניהול ויטיליגו. בסופו של דבר, ממצאים אלו עשויים לקדם את התחום לעבר אסטרטגיות פוטותרפיה מדויקות ומונחות חיסון, שמשיגות לא רק ריפיגמנטציה אלא גם ייצוב מחלות ארוכי טווח ומניעת הישנות.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

מחקר זה נערך בהתאם לעקרונות האתיים של הצהרת הלסינקי ולתקנות המוסדיות המסדירות את המחקר האנושי. המחקר נערך בהתאם לעקרונות האתיים של הצהרת הלסינקי ואושר על ידי ועדת האתיקה של בית החולים העממי שינגטאי, המחלקה לדרמטולוגיה (מזהה אישור: 2021[029]). כל המשתתפים נתנו הסכמה מדעת בכתב לפני ההשתתפות.

בחירת מטופלים
בסך הכל נרשמו 232 מטופלים שאובחנו קלינית עם ויטיליגו במשך תקופה של 3 שנים, מינואר 2021 ועד דצמבר 2023. כל המשתתפים אובחנו עם ויטיליגו לא סגמנטלי (סוג כללי או מקומי) וסווגו כיציב או מתקדם בהתבסס על היעדר או נוכחות נגעים חדשים בתוך 3 חודשים לפני ההרשמה. משך המחלה והתפלגות הנגעים נרשמו בתחילת המחלה. קריטריוני ההרשמה כללו אנשים בגילאי 18 עד 65 עם ויטיליגו יציב או מתקדם שאובחן על ידי רופאי עור באמצעות בדיקה קלינית, תאורת מנורת ווד ודרמוסקופיה. קריטריוני ההדרה היו הריון, הנקה, הפרעות פוטואלרגיות, מחלות אוטואימוניות מערכתיות, תפקוד כבדי חמור או כליה, ושימוש מוקדם בסטרואידים מערכתיים, מדכאי חיסון או פוטותרפיה בתוך 3 חודשים. כל ההליכים בוצעו תחת פיקוח אתי מתמשך, כדי להבטיח את נוחות ובטיחות המטופל לאורך כל תקופת הטיפול.

סקירת מחקר ותהליך הטיפול
זרימת העבודה הכוללת של המחקר, הכוללת הרשמה למטופלים, הקצאת קבוצות, הערכות מעקב וניתוח סמנים ביולוגיים, מוצגת באיור 1. המשתתפים הזכאים הוקצו ביחס של 1:1 לאחת משתי קבוצות מחקר מקבילות: קבוצת מונותרפיה בלייזר אקסימר 308-ננומטר (אקסימר לייזר בלבד; n = 116) וקבוצת הטיפול המשולב (לייזר אקסימר 308-ננומטר בתוספת מטרינה אוראלית; n = 116). הקצאת הקבוצות בוצעה באמצעות רצף אקראי שנוצר במחשב, שהוכן על ידי עובד מחקר עצמאי שלא היה מעורב בהערכת התוצאות; המשימות הונחו במעטפות ממוספרות וסגורות ונפתחו לאחר ההרשמה כדי לקבוע את חלוקת הטיפול. תהליך הטיפול כלל שלושה שלבים עיקריים: (1) הערכה בסיסית ותיעוד, (2) 12 שבועות של טיפול פעיל לפי המשטר שהוקצה, ו-(3) הערכה לאחר הטיפול, הכוללת בדיקות מעבדה של אימונוגלובולינים בסרום וציטוקינים דלקתיים. כל מטופל קיבל תוכנית טיפול סטנדרטית, מרווחי מעקב זהים, ונהלי ניתוח מעבדה אחידים. תמונות קליניות וניקוד VASI בוצעו על ידי רופאי עור שהיו עיוורים להקצאת הטיפולים. כל ההליכים בוצעו במחלקת הפוטותרפיה הדרמטולוגית של בית החולים העם שינגטאי בתנאי סביבה מבוקרים (טמפרטורת החדר 22–24 מעלות צלזיוס, לחות יחסית 40%–60%).

הכנת אזור הטיפול
לפני כל טיפול בלייזר, האזורים המפוקדים ללא פיגמנט נוקו בעדינות עם מי מלח פיזיולוגיים סטריליים וייבשו עם גזה רפואית ללא סיבים. העור הנגעי נבדק כדי לוודא היעדר זיהום, אקסוריה או קרום. כאשר טופלו יותר מנגע אחד בביקור אחד, כל נגע הוכן וטופל ברצף. נגעים העולים על שדה הקרנה יחיד חולקו לשדות הקרנה סמוכים, והעור הטבעי שמסביב סותר בגיליון חסימת UV אטום לכל שדה כדי למזער חשיפה מיותרת. המטופלים הונחו להימנע מחומרים מקומיים, קוסמטיקה פוטוסנסיטיבית או בשמים במשך 24 שעות לפני הטיפול. משקפי מגן נענדו הן על ידי המטופל והן על ידי המפעיל לאורך כל ההליך.

הליך הקרנת לייזר אקסימר 308 ננומטר
שימשו במערכת לייזר אקסימר מונוכרומטית של 308 ננומטר קסנון-כלוריד (XeCl). כל טיפולי הלייזר בוצעו על ידי שני רופאי דרמטולוגיה מיומנים תחת פרוטוקול סטנדרטי להבטחת תפוקת אנרגיה עקבית, מרחק הקרנה ויכולת שחזור. פלט המכשיר אומת באמצעות מד כוח UV מכויל לפני כל יום טיפול, וכל המערכות עברו כיול שבועי על ידי טכנאי מוסמך כדי לשמור על שולי שגיאה מתחת ל-±5%. לפני ההקרנה הראשונה, המינון המינימלי של האריתמה (MED) לכל מטופל נקבע על ידי מתן מינונים הדרגתיים (100–400 mJ/cm 2) על אזורי בדיקה קטנים באמה הפנימית והערכת תגובת האדמיום לאחר 24 שעות; התוצאות צולמו ונרשמו בתיק המטופלים. תיעוד מייצג של MED וטבלת התאמת מינון מפגש אחר מפגש מופיעים בטבלה משלימה 1. MED הוגדר כמינון הבדיקה הנמוך ביותר שמייצר אדמומיות אחידה וברורה לאחר 24 שעות. מינון הטיפול הראשוני נקבע על 80%–90% מה-MED האישי, ושינויים במינון הבאים בוצעו לפי אלגוריתם מוגדר מראש המבוסס על תגובת אדמומיות של 24 שעות במפגש הקודם (העלאה של 10%–20% לאדמיום בהיעדר או קל, שמירה על אותו מינון לאדמומיות בינונית, והפחתה של 10%–20% במקרה של שלפוחיות או כאב משמעותי). המינון הטיפולי הראשוני נקבע על 150–250 mJ/cm2 (כ-80%–90% מה-MED האישי). כל מפגש החל בכך שהמטופל ישב בנוחות על כיסא מתכוונן. ידית הלייזר הוחזקה בניצב (90°) לעור במרחק של 10–15 ס"מ, ושדות הקרינה המעגליים או המלבניים היו מיושרים כדי לכסות לחלוטין אזורים דהפיגמנטיים עם חפיפה מינימלית. ההקרנה נמשכה 1–3 שניות לכל שדה חשיפה, בהתאם לזרימה. המינונים הוגדלו לאחר מכן ב-10%–20% בכל מפגש בהתאם לתגובת האדמניות הקודמת; אם הופיעה אדמנית בינונית, המנה הקודמת נשמרה, בעוד ששלפוחיות או כאב דרשו הפחתה של 10%–20%. המינון המרבי לא עלה על 2,000 mJ/cm2. כל מפגש כיסה את כל הנגעים הנראים ונמשך 10–20 דקות, בהתאם להיקף. הטיפולים בוצעו פעמיים בשבוע עם לפחות 72 שעות בין המפגשים במשך תקופה כוללת של 12 שבועות (24 מפגשים). לאחר ההקרנה, הונחה שכבה דקה של ג'ל סטרילי מבוסס אלוורה להקלה על אדמומיות מקומיות. המטופלים הונחו להימנע מחשיפה לשמש במשך 48 שעות ולהשתמש בקרם הגנה רחב טווח (SPF >30) לאורך כל הטיפול. נגעים שהראו >50% ריפיגמנטציה נמשכו תחת אותם פרמטרים עד שהושגה פיגמנטציה יציבה.

מתן למטרין דרך הפה
בקבוצת השילוב, תמצית מימית סטרילית של שורשי Sophora flavescens הוכנה בהתאם ל-Chinese Pharmacopoeia (מהדורת 2020)30 והותקנה לריכוז של 5 מ"ג/מ"ל עם טוהר של ≥98%, מאומת על ידי כרומטוגרפיה נוזלית בעלת ביצועים גבוהים (HPLC). התמיסה אוחסנה בטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס בבקבוקי זכוכית ענברית כדי למנוע פוטוגרדקציה. בדיקות אקראיות באצווה אישרו ריכוז אלקלואידים (5 ± 0.3 מ"ג/מ"ל) ועקרות מיקרוביאלית. כל מטופלת קיבלה את תמיסת המטרין באמצעות מתן דרך הפה במינון של 0.3 גרם (60 מ"ל) פעמיים ביום במשך 12 שבועות, בסנכרון עם לוח הטיפולים בלייזר. המינון נבחר בהתבסס על נתונים פרמקולוגיים קודמים שהראו אימונומודולציה יעילה עם פרופיל בטיחות חיובי בדרמטוזות דלקתיות כרוניות31,32. המטופלים קיבלו הוראה לקחת את התמיסה 30 דקות לאחר הארוחות כדי למזער אי נוחות במערכת העיכול ולהימנע מאלכוהול, תה חזק ואוכל חריף במהלך הטיפול כדי להפחית את העומס הכבדי. בחילה קלה או עייפות נוהלה על ידי מתן כמות קטנה של מים חמים. ההקפדה על הטיפול הוערכה באמצעות יומן תרופות ואימות החזרת בקבוק בכל ביקור מעקב. הבטיחות הוערכה בכל ביקור באמצעות בירור תסמינים מובנה ותיעוד של תופעות לוואי, כולל אי נוחות במערכת העיכול, עייפות וכל סימן המצביע על אי סבילות לכבד. לא הותרו תרופות מערכתיות נוספות, סטרואידים מקומיים או מדכאי חיסון במהלך תקופת התצפית כדי למנוע תופעות מבלבלות.

הערכת תגובה קלינית
שינויים בפיגמנטציה הוערכו בהתחלה ובשבועות 4, 8 ו-12 על ידי שני רופאי עור מנוסים שהיו עיוורים למידע הטיפול. תמונות דיגיטליות סטנדרטיות צולמו באותן הגדרות תאורה ומצלמה (מרחק 60 ס"מ, חשיפה 1/60 שניות, ISO 200). רמת הפיגמנטציה מחדש נמדדה באמצעות מדד דירוג אזור ויטיליגו (VASI). הנגעים דורגו בנוסף לארבע קטגוריות: מצוין (≥75% ריפיגמנטציה), טוב (50%–74%), בינוני (25%–49%), עני (<25%). המטופלים השלימו גם סולם ויזואלי אנלוגי (VAS) בן 10 נקודות לשביעות רצון והקלה בתסמינים. תופעות לוואי כגון אדמומיות, צריבה, גריד, שלפוחיות והיפרפיגמנטציה תועדו בכל ביקור.

איסוף דגימות סרום
לניתוח סמנים ביולוגיים, נאסף דם היקפי בצום (5 מ"ל) מכל מטופל בתחילת השבוע ובסוף שבוע 12 באמצעות צינורות הפרדה בסרום. הדגימות הורשו לקריש למשך 30 דקות בטמפרטורת החדר וצנטריפוגה בטמפרטורה של 800 x גרם למשך 10 דקות בטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס. סרום הסופרנטנט הוצמד ל-0.5 מ"ל קריוביאלים ואוחסן בטמפרטורה של −80°C עד לניתוח. כל הדגימות עובדו בתוך שעתיים מהאיסוף כדי למזער את התדרדרות הציטוקינים.

כימות אימונוגלובולינים בסרום
ריכוזי IgG, IgA ו-IgM בסרום נקבעו באמצעות אימונונפלומטריה אוטומטית בהתאם להוראות היצרן. עקומות כיול הוכנו באמצעות דילול סדרתי של תקני ייחוס. כל בדיקה כללה סרום בקרת איכות בריכוזים גבוהים ונמוכים. המדידות בוטאו ב-g/L וחזרו על עצמן פעמיים כדי להבטיח שונות בתוך הבדיקה < 5%. הדיוק והכיול של המכשיר נבדקו מדי יום באמצעות תקני בקרה ניתנים למעקב. התוצאות נרשמו באופן אלקטרוני ונבדקו על ידי שני טכנאים עצמאיים שהיו עיוורים למידע המטופל.

מדידת ציטוקינים דלקתיים
פרופילינג ציטוקינים כלל IFN-γ, TNF-α, IL-1β, IL-6, IL-17 ו-IL-10, שנמדדו באמצעות פלטפורמת ELISA (ELISA) לבדיקת אימונוסורבנט המקושרת באנזימים עם מולטיפלקס. הכנת החומרים התבצעה לפי הפרוטוקול הסטנדרטי של היצרן. בקצרה, נוספו 100 מיקרוליטר סרום מדולל לכל באר מצופה נוגדנים ודגרו במשך שעתיים בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס. לאחר שטיפה עם תמיסת מלח עם בופר פוספט המכיל 0.05% Tween-20 (PBST), נוספו 100 מיקרוליטר של נוגדן זיהוי ביוטינילאטיבי ונדגרו למשך שעה אחת. הבארות נדגרו עם פרוקסידאז סטרפטאוידין-חזרת למשך 30 דקות, ולאחר מכן התפתחות צבע באמצעות מצע טטרמתילבנזידין (TMB) למשך 10 דקות בחושך. התגובה הופסקה עם 50 מיקרוליטר של 2 מול/ליטר חומצה גופרתית, והספיגה נמדדה ב-450 ננומטר באמצעות קורא מיקרופלט. עקומות סטנדרטיות נוצרו מדילול סדרתי של ציטוקינים רקומביננטיים, והריכוזים הוצגו כ-pg/mL. כל הדגימות נמדדו בשכפול. כדי להבטיח שחזוריות, מקדם השונות בין הבדיקות (CV) נשמר מתחת ל-10%. בארות ריקות הכילו בופר בדיקה ללא סרום, ובארות בקרה שלילית הכילו מטריצה ללא ציטוקין שעובדה באופן זהה לדגימות ושווה ערך לתקן 0pg/mL לאישור ספציפיות הבדיקה. כל הדגימות שעברו המוליזציה או ליפמיות הוצאו מהניתוח הסופי.

ניתוח סטטיסטי
הנתונים הוזנו למסד נתונים אלקטרוני ייעודי ונבדקו לדיוק על ידי שני מנהלי נתונים עצמאיים. גודל המדגם הוערך על פי גודל ההשפעה הצפוי (d = 0.5 של כהן) עם α = 0.05 ועוצמה (1–β) = 0.8, מה שהניב מינימום של 100 משתתפים בכל קבוצה. כדי לשלוט בהשוואות מרובות בין ציטוקינים, תיקון בונפרוני יושם כאשר הדבר מתאים. רגרסיה ליניארית רב-משתנית יושמה במידת הצורך כדי להתאים את הגורמים הפוטנציאליים, כולל גיל, מין, משך מחלה ואזור הנגע הבסיסי. ההתפלגות הנורמלית של משתנים רציפים אושרה באמצעות מבחן שפירו–וילק. סטטיסטיקה תיאורית הוצגה כסטיית תקן ממוצעת ± (SD) עבור נתונים מבולגנים תקינה או כחציון (טווח בין-רבעוני, IQR) עבור נתונים מוטים. שינויים לפני ואחרי הטיפול נותחו באמצעות מבחני t זוגיים, בעוד שהשוואות בין קבוצות נותחו באמצעות מבחני t במדגם עצמאי או מבחני Mann–Whitney U לפי הצורך. הנתונים הקטגוריים הושוו ל-chi-square או למבחן המדויק של פישר. הוערכו מתאמים בין רמות הציטוקינים, האימונוגלובולינים ושיפור הפיגמנטציה באמצעות מקדם המתאם של פירסון. כל הניתוחים בוצעו עם SPSS v26.0 (RRID: SCR_002865), ו-p דו-צדדי < 0.05 נחשב מובהק סטטיסטית.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

מאפיינים קליניים בסיסיים הראו פרופילים דמוגרפיים ומחלתיים דומים בין קבוצות
בסך הכל נרשמו 232 מטופלים עם ויטיליגו לא סגמנטלי והוקצו באופן שווה לקבוצת האקסימיר (n = 116) או לקבוצת הטיפול המשולב שקיבלה לייזר יחד עם מטרין אוראלי (n = 116). פרמטרים דמוגרפיים וקליניים בסיסיים, כולל גיל (35.8 ± 6.0 לעומת 35.4 ± 5.6 שנים), התפלגות מגדרית (גבר/אישה: 59/57 לעומת 59/57), משך המחלה (4.8 ± 1.0 לעומת 4.7 ± 0.8 שנים), סוג נגע (כללי לעומת מקומי), וציוני VAS...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

מחקר זה מציג גישה טיפולית משולבת המשלבת לייזר אקסימר 308 ננומטר עם מטרין אוראלי לטיפול בויטיליגו לא סגמנטלית. ההנחה המרכזית היא שמודולציה כפולה — גירוי פוטוביולוגי מקומי של מלנוציטים בשילוב עם ויסות חיסוני מערכתי — יכולה להשיג ריפיגמנטציה חזקה ומתמשכת יותר מקבוצת האקסימר. הממצאים תומכים בהשערה זו: הטיפול המשולב יצר פיגמנטציה פריפוליקולרית מוקדמת יותר, ירידה גדולה יותר ב-VASI, ושביעות רצון גבוהה יותר של המטופלים מאשר לייזר אקסימר בלבד. תוצאות אלו לוו בנרמליזציה רחבה של סמני מערכת החיסון ב...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

אין ניגודי עניינים פיננסיים שיש לחשוף.

תודות

המחברים מבקשים להודות לכל צוות המחלקה לדרמטולוגיה על עבודתם הקשה לאורך כל הפרויקט.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
מערכת לייזר XeCl Excimer 308 ננומטרSTRATA מדעי העור (XTRAC)Velocity 400 (דגם)לייזר UVB ממוקד 308 ננומטר לטיפול בנגעים בויטיליגו; אמת את הדגם באתר שלך; או התקן שווה ערך
– 80 & deg; C Ultra-Low Freezerתרמו-סיינטיפיקסדרת פורמה 900 (דגם 980)אחסון סרום לטווח ארוך
לוחות ELISA עם 96 בארות (חיבור גבוה)קורנינג קוסטאר9018אם משתמשים בציפוי פנימי או בתהליכי עבודה של סינגל-פלקס
כיסא רפואי מתכוונןמידמרקיו"ר פרוצדורה 641מיקום המטופל למרחק הקרנה עקבי
ג'ל מרגיע מבוסס אלוורה3M9236שכבה דקה לאחר הקרנה להקלה על אדמומיות; או ג'ל רפואי מקביל
בקבוק זכוכית ענבר (500 מ"ל)פישרברנד02-897-2Jאחסון מוגן באור ב-4 & מעלות דרך; C עבור תמיסת מטרין
איזון אנליטי (0.1 מ"ג)מטלר טולדוME104Eהכנה גרבימטרית ובקרת איכות
אימונונפלומטר אוטומטיסימנס הלת'ינירסמערכת BN ProSpecכמת IgG/IgA/IgM לפי יצרן' s IFU
תוויות ברקוד (Cryo-safe)ביוטכנולוגיה מגוונתCRY-1000מעקב דגימות ושרשרת אחזקה
סט נוגדנים לזיהוי ביוטינילציהMSDכלול בפאנלהתאמה לנוגדנים ללכידה
קרם הגנה רחב טווח עם SPF & ge; 30ניוטרוג'נה070501017052 (Ultra Sheer SPF 50)הגנה על צילום לאחר הסשן; נושא ייעוץ אמבולטורי
קליברים לאימונוגלובוליניםסימנס הלת'ינירסתקן חלבון N SLכיול ניתן למעקב עבור נפלומטריה
סרום בקרה (גבוה/נמוך) לבדיקות Igסימנס הלת'ינירסבקרות חלבון N/Tבקרת איכות יומית של ריצות נפלומטריות
בקבוקונים קריוגניים, 0.5 מ"לתרמו-סיינטיפיק נונק375418Serum aliquots; חוט חיצוני; ללא DNase/RNase
דרמטוסקופDermLiteDL4דרמטוסקופ ידני מקוטב לבדיקת נגעים
כרטיס קנה מידה דרמוסקופיה/צילום3Genכרטיס ייחוס בקנה מידה/צבעמבטיח עקביות צבע בין נקודות זמן
מצלמה דיגיטלית לתמונות סטנדרטיותקאנוןEOS 80Dמרחק קבוע 60 ס"מ; חשיפה 1/60 שניות; ISO 200; מומלץ להשתמש בחצובה
צנטריפוגה מקוררת בזווית קבועהאפנדורף5810 R800 פעמים; g, 10 דקות, 4 & דרגות; הפרדה בסרום C
עמודת HPLC (C18, 4.6× 250 מ"מ, 5 ומיקרו; m)אג'ילנטZORBAX Eclipse Plus C18, 959990-902הפרדה שגרתית של אלקלואידים; או שווה ערך
מערכת HPLCאג'ילנט1260 אינפיניטי II (G7111B)אימות טוהר ותקנון אצווה של מטרין
ניתוח / מדידה של תמונותImageJ (NIH)1.54 (RRID:SCR_003070)כימות אופציונלי של אזור הנגע מתמונות
גזה רפואית ללא זיכרון (סטרילית)ג'ונסון & ג'ונסון546112אזור הטיפול בייבוש לאחר הניקוי
Matrine (≥ 98%, HPLC)MedChemExpressHY-N0156הכנת תמיסה דרך הפה; בדוק את הספק המקומי ועמידה בדרישות הפרמקופיאה
קורא מיקרופלט (450 ננומטר)ביו-טק (Agilent)סינרגיה H1ספיגה ב-450 ננומטר; תיקון אורך המסלול
שטיפת מיקרופלטביו-טק (Agilent)ELx405מחזורי שטיפה אוטומטיים; מפחיתה שונות
לוח ציטוקינים אנושי מולטיפלקס (6-פלקס מותאם אישית)גילוי בקנה מידה מזו (MSD)פלטפורמת U-PLEX (K15067L)כולל IFN-γ, TNF-α, IL-1β, IL-6, IL-17A, IL-10; או שווה ערך
טאבלטים של PBSגיבקו18912-014הכנת PBS לשטיפות/מאגרים
Plate Sealer Filmsביו-ראדMSB1001מונע אידוי במהלך דגירות
משקפי UV מגן (מפעיל)יובקס (הוניוול)S0360X אולטרה-ספקט 2000הגנה על עיני המפעיל; השתמש בזוג ייעודי
משקפי UV מגנים (מטופל)יובקס (הוניוול)S0360X אולטרה-ספקט 2000משקפיים החוסמים UV לבטיחות המטופל במהלך הקרנה
צינורות הפרדת סרום (SST II Advance)BD וקוטיינר367955איסוף דם בצום בתחילת השבוע ה-12
תוכנה סטטיסטיתIBMSPSS Statistics v26.0 (RRID:SCR_002865)ניתוח נתונים ראשוני לפי פרוטוקול
סליין פיזיולוגי סטרילי (0.9%)בקסטר2B1324 (500 מ"ל)ניקוי נגעים לפני כל טיפול לייזר
פתרון עצירה (2 מיליון H2SO4)סיגמא-אלדריץ'258105עוצר את תגובת TMB
סטרפטווידין-HRPתרמו-סיינטיפיקN100תגובת גילוי; תואם ערכות
מצע TMB (ELISA)תרמו-סיינטיפיק34028התפתחות כרוגנית; 10 דקות בחושך
חצובה עם סמן מרחקמנפרוטוMKCOMPACTLT-BKשומר על מרחק קבוע בין מצלמה לנושא
Tween-20 (עבור PBST 0.05%)סיגמא-אלדריץ'P1379חומר שטח בופר שטיפה
מד רדיומטר UV / מד כוחטכנולוגיות אור בינלאומיותILT2400לאימות פלט יומי ובדיקות MED; עם גלאי SED240/NS254 או מקביל
וילון/דף אטום החוסם UVThorlabsבד BK5 Blackoutמכסים את העור הרגיל כדי למנוע חשיפה לא מכוונת; או שווה ערך
דפי ניקוד של VASI (מודפס)פנימיNA-VASI-2025טפסי ניקוד קליניים סטנדרטיים; ארכיון עם מזהה נושא
עץ' S Lamp (UV-A, 365 ננומטר)ספקטרוליןENF-260Cאבחון קליני והערכת קצה הנגע
עץ' מכסה מגן מנורהDermLiteDL הודמשפר את הניגודיות במבחן UV-A

מקורות

  1. Brunner, P. M., et al. Transcriptomic profiling of vitiligo patients shows polar immune dysregulation in involved and uninvolved skin. J Allergy Clin Immunol. 156 (4), 993-1007 (2025).
  2. Carbone, M. L., et al. Insight into immune profile associated with vitiligo onset and anti-tumoral response in melanoma patients receiving anti-PD-1 immunotherapy. Front Immunol. 14, 1197630(2023).
  3. Lerner, G., et al. Regulatory T cell dysregulation in vitiligo: A meta-analysis and systematic review of immune mechanisms and therapeutic perspectives. Int J Dermatol. 64 (12), 2247-2256 (2025).
  4. Lu, J., et al. Identification of shared biomarkers and immune infiltration signatures between vitiligo and Hashimoto's thyroiditis. Clin Cosmet Investig Dermatol. 17, 311-327 (2024).
  5. Ma, B., Wang, X. Unravelling the molecular mechanisms and immune landscape of vitiligo: A comprehensive bioinformatics study on melanogenesis-related genes. Ann Hum Biol. 52 (1), 2468692(2025).
  6. Okamura, K., Suzuki, T. Genetics and epigenetics in vitiligo. J Dermatol Sci. 117 (3), 45-51 (2025).
  7. Yang, M., Wang, H., Zhang, R. Bioinformatics analysis of oxidative stress-related genes and immune infiltration patterns in vitiligo. Clin Cosmet Investig Dermatol. 18, 475-489 (2025).
  8. Al Abadie, M. S., Chaiyabutr, C., Patel, K. X., Gawkrodger, D. J. Vitiligo and psychological stress: A hypothesis integrating the neuroendocrine and immune systems in melanocyte destruction. Int J Dermatol. 63 (7), 841-843 (2024).
  9. Hu, Y., Wang, S. B., Wang, K., He, M. J. From phenotype to molecules: Unveiling the genetic and immunological bridges between autoimmune diseases and vitiligo. Clin Cosmet Investig Dermatol. 17, 2475-2486 (2024).
  10. Jin, S., et al. The role of regulatory T cells in vitiligo and therapeutic advances: A mini-review. Inflamm Res. 73 (8), 1311-1332 (2024).
  11. Li, J., et al. The relationship between psoriasis and vitiligo: From a comprehensive study. Skin Res Technol. 30 (7), e13868(2024).
  12. Patel, R., et al. Prevalence of vitiligo among children and adolescents in the United States. Dermatology. 239 (2), 227-234 (2023).
  13. Rao, H., et al. Case report: Immune checkpoint inhibitor-related vitiligo-like depigmentation in non-melanoma advanced cancer: A report of three cases and a pooled analysis of individual patient data. Front Oncol. 12, 1099108(2022).
  14. Sun, C., Ding, H., Zhang, L., Wang, J., Su, M. Co-regulatory mechanisms and potential markers of oxidative stress-related genes in vitiligo and alopecia areata. Skin Res Technol. 30 (8), e70001(2024).
  15. Wang, X., et al. Circulating memory T cells and TCF1 (+) T cells aid in diagnosis and monitor disease activity in vitiligo. J Pharm Anal. 14 (11), 100998(2024).
  16. Wu, L., Han, T., Wang, Y., Li, S., Li, C. Epigenetic regulation in vitiligo: Mechanisms, challenges, and therapeutic opportunities. Curr Opin Immunol. 95, 102580(2025).
  17. Xie, B., Zhu, Y., Shen, Y., Xu, W., Song, X. Treatment update for vitiligo based on autoimmune inhibition and melanocyte protection. Expert Opin Ther Targets. 27 (3), 189-206 (2023).
  18. Chen, J., et al. Mif inhibition alleviates vitiligo progression by suppressing CD8 (+) T cell activation and proliferation. J Pathol. 260 (1), 84-96 (2023).
  19. Kano, S., et al. Differences in the immune microenvironment between improved and non-improved cases of vitiligo after halo nevus excision. J Dermatol Sci. 109 (3), 136-142 (2023).
  20. Liu, H., Wang, Y., Le, Q., Tong, J., Wang, H. The ifn-γ-cxcl9/CXCL10-CXCR3 axis in vitiligo: Pathological mechanism and treatment. Eur J Immunol. 54 (4), e2250281(2024).
  21. Lo, J., Hanania, H. L., Keiser, M. F., Patel, A. B. Immune checkpoint inhibitor-induced vitiligo in cancer patients: Characterization and management. Arch Dermatol Res. 315 (6), 1697-1703 (2023).
  22. Lu, L., et al. Vitiligo associated with type 2 immune inhibitors: Faers analysis and literature review. J Dermatol. 52 (6), 1008-1014 (2025).
  23. Mazzetto, R., et al. Anti-tumor immunity and vitiligo: From immune-related adverse reactions to protection from cancer. Immunotherapy. 16 (13), 841-843 (2024).
  24. Starace, M., et al. Immune checkpoint inhibitor-induced vitiligo-like depigmentation. JAMA Dermatol. 161 (2), 216-218 (2025).
  25. Xin, Y., Yuan, T., Wang, J. Circulating immune cells and vitiligo: A bidirectional two-sample mendelian randomization study. Front Immunol. 15, 1391186(2024).
  26. Yang, P., et al. Single-cell transcriptomics reveals peripheral immune responses in non-segmental vitiligo. Front Immunol. 14, 1221260(2023).
  27. Ezzedine, K., et al. Efficacy and safety of oral ritlecitinib for the treatment of active nonsegmental vitiligo: A randomized phase 2b clinical trial. J Am Acad Dermatol. 88 (2), 395-403 (2023).
  28. Gay-Mimbrera, J., et al. Comprehensive single-cell chromatin and transcriptomic profiling of peripheral immune cells in nonsegmental vitiligo. Br J Dermatol. 193 (1), 115-124 (2025).
  29. Liu, K., et al. Jak inhibitors in immune regulation and treatment of vitiligo. Cytokine Growth Factor Rev. 80, 87-96 (2024).
  30. National Pharmacopoeia Commission. Pharmacopoeia of the People’s Republic of China. Volume I, 2020 Edition, China Medical Science Press. Beijing. (2020).
  31. Huang, P., et al. Matrine regulates Th1/Th2 inflammatory responses by inhibiting the Hsp90/nf-κb signaling axis to alleviate atopic dermatitis. Kaohsiung J Med Sci. 39 (5), 501-510 (2023).
  32. Shi, H. J., et al. Oxymatrine therapy inhibited epidermal cell proliferation and apoptosis in severe plaque psoriasis. Br J Dermatol. 181 (5), 1028-1037 (2019).
  33. Seneschal, J., et al. Worldwide expert recommendations for the diagnosis and management of vitiligo: Position statement from the international vitiligo task force-part 2: Specific treatment recommendations. J Eur Acad Dermatol Venereol. 37 (11), 2185-2195 (2023).
  34. Seong, S. H., Oh, S. H. Up-and-coming drugs for the treatment of vitiligo. Ann Dermatol. 36 (4), 197-208 (2024).
  35. Upadhya, S., Andrade, M. J., Shukla, V., Rao, R., Satyamoorthy, K. Genetic and immune dysregulation in vitiligo: Insights into autoimmune mechanisms and disease pathogenesis. Autoimmun Rev. 24 (8), 103841(2025).
  36. Wang, Y., et al. Innate immune activation in vitiligo: Mechanisms and pathophysiological implications. Front Immunol. 16, 1631074(2025).
  37. Zhang, M., et al. Vitiligo: An immune disease and its emerging mesenchymal stem cell therapy paradigm. Transpl Immunol. 76, 101766(2023).
  38. Luo, L., Zhu, J., Guo, Y., Li, C. Mitophagy and immune infiltration in vitiligo: Evidence from bioinformatics analysis. Front Immunol. 14, 1164124(2023).
  39. Sant'anna-Silva, A. C. B., et al. Vitiligo auto-immune response upon oxidative stress-related mitochondrial DNA release opens up new therapeutic strategies. Clin Transl Med. 14 (8), e1810(2024).
  40. Sibbald, C. Alopecia areata: An updated review for 2023. J Cutan Med Surg. 27 (3), 241-259 (2023).
  41. Wang, L., et al. Advances in psoriasis research: Decoding immune circuits and developing novel therapies. Int J Mol Sci. 26 (18), 9233(2025).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

גלה מאמרים נוספים

טיפול בוויטיליגוטיפול במטריןמודולציה חיסוניתרגנרציה של מלנוציטיםפוטותרפיהמדד VASIאנליזה של ציטוקינים

מאמר זה פורסם

הסרטון יגיע בקרוב

צרו קשר
המליצו לספרייה

פרטיות

תנאי שימוש

מדיניות

זכויות יוצרים © 2026 MyJoVE Corporation. כל הזכויות שמורות.