Name: בידוד בתאי גזע רקמות השלד והשרירים Soft (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-07-05T17:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 49 s
Description: למדו לבודד תאי גזע בוגרים מרקמות שריר שלד באמצעות עיכול אנזימטי ושיטת pre-plating חוזרת. שיטה זו מאפשרת אפיון תאים באימונופלואורסצנציה וציטומטריית זרימה למחקר רפואה רגנרטיבית.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

החוקרים מעריכים מאוד של גב &#39;Haiying פאן מר איאן Bellayr לעזרה הטכנית שלהם על בידוד התא הסרטים הנוכחי מר קייל הולדן ומר יונתן לוקאס על עזרתם על עריכת שקופיות. תודה רבה על הרשימה הבאה של אנשים שהיו מעורבים בפיתוח של טכניקות preplate השתנה בשנים האחרונות: בני הזוג. בורהאן Gharaibeh, BaoHong קאו, דיזי ברידג&#39;ט, תומס ר &#39;פיין, Aiping לו, Hairong פנג, הידקי אושימה, בו זנג, Xiaodong מו, Kimimasa Tobita, רון ינקובסקי, Makato Ikezawa. אנו אסירי תודה על הסיוע הטכני של ג&#39;יימס ה &#39;Cummins, ריאן Pruchnic, יוסף Feduska, רבקה ג Schugar, Haiying פאן וג&#39;סיקה Tebbets. המחבר גם רוצה להכיר תמיכה כספית עבור עבודה זו מפני ניוון האגודה שרירים (מד&quot;א), המכון הלאומי לבריאות (NIH), משרד ההגנה (DOD), בית החולים לילדים של פיטסבורג של UPMC, המחלקה ניתוח אורתופדי, של אוניברסיטת פיטסבורג.

ככלל, הנוהל המלא preplate שונה דורש 1-2 ימים של הכנות, 1 שבוע של ביצוע הליך טכני, 2-3 ימים של הזדהות עם התא immunocytochemistry, וכן תוספת של 2-3 שבועות הרחבה בתאי גזע האוכלוסייה. הציוד הנדרש תרבות בתאי גזע הם דומה לזו של מערכות תרבות אחרים תא הכולל ספסל העליונה צנטריפוגות, CO 2 באינקובטור, זרימה למינרית רקמות ברדס תרבות הפוכה מיקרוסקופ פלואורסצנטי מצויד במצלמה דיגיטלית. בתאי גזע בודד גם ניתן לשכפל ו יכול להיות מאוחסן לטווח ארוך חנקן נוזלי עבור 1,2 הלימודים הנוכחית או בעתיד. כל ריאגנטים החומרים המשמשים לצורך הליך זה חייב להיות סטרילי לטפל בסביבה נקייה מחיידקים. שלב 1: הכנת <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מעיל רקמת קולגן תרבות צלחות צלוחיות: אני סוג קולגן שמקורם בעור עגל (0.1 גרם לליטר 1; סיגמא אולדריץ &#39;). Plasticware המעיל כולל: T-25 צלוחיות, 6 או 12 צלחות טוב, מנות (60 ו - 100 מ&quot;מ, BD פלקון) כפי שתואר קודם 1,2. נער בעדינות את plasticware כל חצי שעה, במשך 4 שעות כדי להבטיח אפילו ציפוי של הקולגן. הפתרון קולגן מוסר מכן. וגם plasticware מצופה מותר אז לייבוש למכסה המנוע רקמה תרבות עם אור UV ואת מכסה המנוע הן, כדי להבטיח סטריליות, ו סגרה בסופו של דבר או כיסו לשימוש מאוחר יותר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכנת תרבית תאים בינוניים: 400mL DMEM (DMEM, גלוקוז גבוהה; Invitrogen), 50 מ&quot;ל סרום מומת חום שור עוברית (FBS, Invitrogen), 50 מ&quot;ל סרום סוס (HS, Invitrogen), ו - 5 מ&quot;ל צ&#39;יק העובר חלץ (CEE, מדויק כימית ושות ) יהיה ואקום מסונן באמצעות הפנויה 0.22 מיקרומטר-500-ml מערכת סינון סטרילי (קורנינג). פניצילין ועיקור / פתרון סטרפטומיצין (Invitrogen) יתווספו בסופו של דבר 100 יחידות / מ&quot;ל. פתרונות מוכנים ניתן לאחסן 4 ° C למשך חודש אחד לפחות. פתרון זה משמש כדי לנתק את התאים מהבקבוק כאשר תרבויות פיצול או הכנת תאים להשתלה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חימום פתרונות בידוד תא: ריאגנטים הבא צריך להיות מחומם ל 37 מעלות לפני השימוש שלהם בבידוד בתא C: שנאגרו של האנק תמיסת מלח (HBSS, Invitrogen); 0.2% (wt / כרך) collagenase מסוג XI (Sigma אולדריץ &#39;), עם ממוצע של 3,200 יחידות העיכול קולגן לכל מ&quot;ל HBSS; Dispase 2.4 units/1mL (Invitrogen); 0.5% (wt / כרך) טריפסין (Invitrogen). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לעקר ציוד כירורגי הכנה: הליך כירורגי מחייב מכשירי ניתוח סטרילי כולל: בגדלים שונים מלקחיים, מיקרו מספריים, מספריים איריס ו / או להבי אזמל. בנוסף, 15 ו - 50 מ&quot;ל צנטריפוגות צינורות פוליפרופילן (BD פלקון); מסננת Cell (גודל הנקבוביות 70 מ &#39;) (BD פלקון); 18 -, 23 - ו 27-מד מחטים (BD PrecisionGlide), ו 10 - או 20 מ&quot;ל מזרקים סטריליים (BD). </li></ol> שלב 2: ביופסיות רקמות, בידוד ניתוק מכני 1-4 ביופסיות רקמות מבוצעות מתחת למכסה המנוע תרבות סטרילית כוללים טריים שנקטפו הגידים ואת שרירי השלד מתקבלים השרירים השוקה או soleus של hindlimb של wild-type עכברים (C57BL/6J נקבה, 4-5 שבועות של גיל או צעירים יותר, ג&#39;קסון מעבדה). כל רקמות החיבור גלוי, כלי הדם, ורקמת השומן יוסרו אז מן דגימות ביופסיה. רקמות של גיד ושריר הם זיהו אז בזהירות תחת מיקרוסקופ ביתור כירורגי כדי להסיר שאריות עור ועצמות והניח בצלחת המכילה קר (4 ° C) HBSS (בתוספת להוסיף 5% FBS). רקמות מבודדות אז הם ממוקמים בנפרד על מנות המכיל קולגן מצופה HBSS קר יהיה טחון (&lt;1x1 מ&quot;מ 3) לתוך slurry גס באמצעות מיקרו מספריים ו / או להבי אזמל. שלב 3: עיכול אנזימתי של הרקמות: הרקמה טחון אז הוא ניתק enzymatically באמצעות סדרה של צעדים 2,4,5 <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מעבירים את slurries רקמות טחון לתוך 15 מ&quot;ל צינורות נפרדים צנטריפוגות בסל&quot;ד 3500 ~ ב 4 מעלות צלזיוס למשך 5 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את supernatant, לשטוף עם HBSS וחזור על צנטריפוגה שוב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את supernatant, ולעכל אלה slurries ידי הוספת 10 מ&quot;ל של prewarmed 0.2% collagenase מסוג XI (Sigma). דגירה של 60 דקות בשעה 37 ° C תוך ברציפות מנענעת בעדינות את הצינורות. לחלופין, ללחוץ את ידו בכל 10 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צנטריפוגה ו resuspend אלה slurries ב 10 מ&quot;ל dispase (2.4 יחידות / מ&quot;ל, Gibco) פתרון. דגירה של 45 דקות בשעה 37 ° C, רעד בידיים או מתנדנד בעדינות כל 10 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צנטריפוגה מחדש להשעות אלה slurries ב 10 מ&quot;ל של תמיסת טריפסין 0.2% HBSS. דגירה תשתנה בהתאם למידה שבה תאים בודדים משתחררים הרקמות אשר יכול להתבצע על ידי התבוננות ההשעיה תחת מיקרוסקופ. זה לא מומלץ לעלות על 30 דקות בשעה 37 ° C עם היפוך הצינורות או מתנדנד בעדינות כל 10 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צנטריפוגה התא וכתוצאה מכךs מחדש להשעות את התא גלולה ב 10 מ&quot;ל של הפצת נשק בינוני (PM). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לנתק את ההשעיה התא על ידי העברת לחלץ באמצעות סדרה של מחטים. התאים מועברים לאחר מכן 2 פעמים דרך 18G, אז 23G, ולבסוף מחט 27G. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לעבור את תמצית התא דרך מסננת 70 מיקרומטר תא. </li></ol> שלב 4: Preplating לבודד אוכלוסיות תאים שונים המבוססים על הידבקות התא שיעור 1-3 <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צנטריפוגה ו resuspend את כדורי תא בינוני הפצתו. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> התא פלייט תערובות על בקבוק T-25 קולגן מצופה (או 60 צלחת מ&quot;מ) ולסמן אותו PP1. ההשעיה התא צריך לשמור כבעל מספר גדול של גרעינים השבירה ופסולת אחרת מתחת למיקרוסקופ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לדגור על 37 מעלות צלזיוס humidified, 5% CO 2 באינקובטור למשך 2 שעות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העברת התאים nonadherent כדי קולגן חדש מצופה T-25 צפחת (או 60 צלחת מ&quot;מ) סימן הוא כמו PP2. הוסף 5 מ&quot;ל PM לתוך צלחת שכותרתו PP1. התאים הראשונים אשר דבקות לצרף בקבוק הם ברובם myofibroblasts 3. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החזר את צלוחיות אל האינקובטור לעוד 24 שעות, כדי להעביר תאים nonadherent חדש קולגן מצופה T-25 צפחת (או צלחת) ולסמן אותו PP3. הוסף 5 מ&quot;ל של מדיום הפצת נשק לתוך צלחת שכותרתו PP2. תאים אלה דבקות אשר לצרף בקבוק זה הם בעיקר fibroblasts 2,3. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חזור צלוחיות אל האינקובטור לחזור על התהליך בעוד 24 שעות עד PP6 האוכלוסייה נוצר. שמרו על כל קבוצה של תאים מושעה ולאפשר להם להתרבות ולבחון אותם באופן קבוע באמצעות מיקרוסקופ הפוכה. PP3-PP4 הם בעיקר myoblasts בעוד הלוויין לתאי שריר נראים לעתים קרובות בעיקר PP5 2. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> רוב התאים לאט דבקות בדרך כלל לצרף ידי PP6. בשלב זה, התאים להופיע קטן, עגול השבירה, אור הם דלילים מאוד מספר נחשבים תא גזע 1,2 האוכלוסייה. </li></ol> שלב 5: זיהוי הרחבה בתאי גזע בודד <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מבודדים PP6 תאים מעטים ביותר ויש צורך להישמר בינוני FBS הפצת נשק עשיר (20% FBS ב DMEM) כי הוא השתנה מדי יום. רוב התאים הנמצאים למות PP6 התרבות במהלך 1-2 השבועות הבאים של culturing, אבל גדול, אוכלוסייה בריאה PP6 נוצרת בדרך כלל לאחר 1-2 שבועות נוספים של התרחבות. בתאי גזע שבודדו עכברים מאוד לבטא בתאי גזע אנטיגן 1 (Sca1), CD34, kinase כבד עוברית 1 (Flk1), ו סמנים גזע אחרים 1,2,6,7 אשר ניתן דמיינו באמצעות מכתים immunocytochemical. אלה בתאי גזע גם להפגין יכולות התמיינות מספר 3,6,8. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תאים בודדים נשמרים והרחיב בצפיפות נמוכה תא בתרבות (12 מנות גם ב 50-100 תאים / או גם &lt;מפגש 20-30% בבקבוק או צלחת) כדי למנוע 1,2 בידול. תאים מעטים טופס שיבוטים במהלך הרחבה, אלה בתאי גזע משובטים יכול לעבור זמן רב התפוצה (LTP) עבור כל יכולת מחקרים אחרים. בתאי גזע משובטים גם ניתן לאחסן באמצעות חנקן נוזלי כללי אחסון הליכים כגון תא בינוני PM DMSO עם 10%. בצע מספר נמוך של מניות מעבר בתאי גזע עבור כל המחקרים את השני בחזרה. </li></ol>

<ol><li>Gharaibeh, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+a+slowly+adhering+cell+fraction+containing+stem+cells+from+murine+skeletal+muscle+by+the+preplate+technique%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Isolation of a slowly adhering cell fraction containing stem cells from murine skeletal muscle by the preplate technique.</a> Nat Protoc. 3, 1501-1509 (2008).</li>
<li>Qu-Petersen, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+a+novel+population+of+muscle+stem+cells+in+mice%3A+potential+for+muscle+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Identification of a novel population of muscle stem cells in mice: potential for muscle regeneration.</a> J Cell Biol. 157, 851-864 (2002).</li>
<li>Li, Y. &amp, Huard, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differentiation+of+muscle-derived+cells+into+myofibroblasts+in+injured+skeletal+muscle%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Pathol%22%5BJournal%5D)">Differentiation of muscle-derived cells into myofibroblasts in injured skeletal muscle.</a> Am J Pathol. 161, 895-907 (2002).</li>
<li>Watt, D. J., Lambert, K., Morgan, J. E., Partridge, T. A. &amp, Sloper, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Incorporation+of+donor+muscle+precursor+cells+into+an+area+of+muscle+regeneration+in+the+host+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurol+Sci%22%5BJournal%5D)">Incorporation of donor muscle precursor cells into an area of muscle regeneration in the host mouse.</a> J Neurol Sci. 57, 319-331 (1982).</li>
<li>Lu, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+myogenic+progenitor+populations+from+Pax7-deficient+skeletal+muscle+based+on+adhesion+characteristics%5BTitle%5D)+AND+%22Gene+Ther%22%5BJournal%5D)">Isolation of myogenic progenitor populations from Pax7-deficient skeletal muscle based on adhesion characteristics.</a> Gene Ther. 15, 1116-1125 (2008).</li>
<li>Lee, J. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clonal+isolation+of+muscle-derived+cells+capable+of+enhancing+muscle+regeneration+and+bone+healing%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Clonal isolation of muscle-derived cells capable of enhancing muscle regeneration and bone healing.</a> J Cell Biol. 150, 1085-1100 (2000).</li>
<li>Cao, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+receptors+in+the+maturation-dependent+adenoviral+transduction+of+myofibers%5BTitle%5D)+AND+%22Gene+Ther%22%5BJournal%5D)">The role of receptors in the maturation-dependent adenoviral transduction of myofibers.</a> Gene Ther. 8, 627-637 (2001).</li>
<li>Cao, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Muscle+stem+cells+differentiate+into+haematopoietic+lineages+but+retain+myogenic+potential%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Muscle stem cells differentiate into haematopoietic lineages but retain myogenic potential.</a> Nat Cell Biol. 5, 640-646 (2003).</li>
<li>Huard, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regenerative+medicine+based+on+muscle+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Musculoskelet+Neuronal+Interact%22%5BJournal%5D)">Regenerative medicine based on muscle stem cells.</a> J Musculoskelet Neuronal Interact. 8, (2008).</li>
<li>Gates, C. B., Karthikeyan, T., Fu, F. &amp, Huard, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regenerative+medicine+for+the+musculoskeletal+system+based+on+muscle-derived+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Acad+Orthop+Surg%22%5BJournal%5D)">Regenerative medicine for the musculoskeletal system based on muscle-derived stem cells.</a> J Am Acad Orthop Surg. 16, 68-76 (2008).</li>
</ol>

אין ניגודי אינטרסים הכריז.

זה כבר הכיר בכך כמה רקמות בוגרות מכילים בתאי גזע מרובים. במהלך השנים האחרונות של המחקר, בתאי גזע זוהו ברקמות השלד רך, כולל שריר גיד השלד. זה פרוטוקול הנוכחית פרטים הליך המכונה הטכניקה preplate שונה, כי שימש בהצלחה במעבדה שלנו לבודד בתאי גזע בוגרים של גידים שרירי השלד. באמצעות טכניקה שונה preplate שתוארו לעיל התאים ניתן לחלק את האוכלוסיות כמה בהתבסס על מאפייני הדבקה שלהם צלוחיות מצופה קולגן (איור 1). Fibroblasts ו myofibroblasts נמצא בתוך הרקמות מהר לדבוק צלוחיות מצופה קולגן בתוך 2...

<table><tbody><tr><td>DMEM</td><td>Invitrogen</td><td>#11995-073</td><td></td></tr><tr><td>FBS</td><td>Invitrogen</td><td>#10437-028</td><td></td></tr><tr><td>סרום סוס שעבר אינאקטיבציה בחום</td><td>Invitrogen</td><td>#26050-088</td><td></td></tr><tr><td>תמצית עוברי אפרוח</td><td>Accurate Chemical</td><td>#CE650T-10</td><td></td></tr><tr><td>100U ml פניצילין/סטרפטומייצין</td><td>Invitrogen</td><td>#15140-122</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco's PBS</td><td>Invitrogen</td><td>#14190-250</td><td></td></tr><tr><td>תמיסת מלחים בבופר של הנקס (Hank's Buffered Salt Solution)</td><td>Invitrogen</td><td>#24020-117</td><td></td></tr><tr><td>קולגנאז מסוג XI בריכוז 0.2%(wt/vol)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>#C7657</td><td></td></tr><tr><td>דיספאז 2.4U ml</td><td>Invitrogen</td><td>#17105-041</td><td></td></tr><tr><td>Trypsin-EDTA בריכוז 0.5%(wt/vol) (10x; 5g liter טריפסין (1:250)</td><td>Invitrogen</td><td>#15400-054</td><td></td></tr><tr><td>קולגן לציפוי בקבוק: קולגן מסוג I המופק מעור עגל בריכוז 0.1 g liter</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>#C-9791</td><td></td></tr><tr><td>DMSO</td><td>Sigma</td><td>#D-2650</td><td></td></tr></tbody></table>

בידוד בתאי גזע רקמות השלד והשרירים soft

Isolating Stem Cells from Soft Musculoskeletal Tissues

בתאי גזע בוגרים כבר מזמן דנו לגבי היישום שלהם ברפואה רגנרטיבית. בתאי גזע בוגרים יצרו מידה רבה של התרגשות לטיפול רקמות פצועים וחולים בגלל היכולות המרשימות שלהם לעבור רב השושלת התמיינות תאים ויכולת התחדשות עצמית שלהם. והכי חשוב, התכונות הללו הפכו אותם יתרון לשימוש טיפולים עצמיים השתלת תאים. הפרוטוקול הנוכחי יהיה להכניס את הקוראים לטכניקה preplate שונה שבו הרקמות הרכות של מערכת השלד, שריר גיד למשל ואת, הם 1<sup&gt; רחוב</sup&gt; ניתק enzymatically ואז להציב צלוחיות קולגן מצופה בינוני. Supernatant, המורכבת בינוני התאים הצפים הנותרים, מועבר סדרתי היומי צלוחיות חדשות. בתאי גזע האיטי ביותר לדבוק צלוחיות אשר בדרך כלל לוקח 5-7 ימים (העברות סדרתי או preplates). באמצעות טכניקה זו, בתאי גזע בוגרים הנמצאים ברקמות אלה ניתן לקצור בקלות דרך למדי פולשני ההליכים.

בידוד גזע בוגרים תאים ברקמות הרכות השלד מבוסס על מהירות הדבקות של התא בקבוק.

בידוד בתאי גזע רקמות השלד והשרירים Soft

תאי גזע בוגרים נדונו מזה זמן רב בהקשר של יישומם ברפואה רגנרטיבית. תאי גזע בוגרים עוררו עניין רב ב...

המטרה הכללית של הליך זה היא לבודד תאי גזע בוגרים מרקמות רכות של השרירים והשלד, כגון שריר שלד. דבר זה מושג תחילה על ידי נטילת ביופסיה של הרקמה הרכה, ביצוע דהברידמנט וקיצוץ של הרקמה לחתיכות קטנות. השלב השני של ההליך הוא עיכול אנזימטי של הרקמה.השלב השלישי של הפרוצדורה הוא בידוד התאי הגזע באמצעות שלבי pre plating חוזרים. השלב הסופי של הפרוצדורה הוא זיהוי התאי הגזע שבודדו. בסופו של דבר, ניתן להשיג תוצאות המראות את ההתנהגויות המורפולוגיות והתאיות של התאים באמצעות אימונופלורסצנציה, מיקרוסקופיה ו/או ציטומטריה עם זרימה.שלום, אני y Lee מהמעבדה לפתולוגיה מולקולרית במחלקה לכירורגיה אורתופדית באוניברסיטה של פיטסבורג. היום אראה לכם כיצד לבודד תאי גזע בוגרים מרקמות רכות של מערכת השלד, כגון שריר שלד. שלום, אני ד"ר ג'וני וורד.אני פרופסור בבית הספר לרפואה של אוניברסיטת פיטסבורג, במחלקה לכירוגיה אורתופדית. אני עובד, כפי שאתם יודעים, בשיתוף פעולה הדוק עם ד"ר Young Lee על הפרוצדורות הללו לבידוד סוגים שונים של תאי גזע משריר שלד ומרקמות אחרות, כגון רסס. אנו משתמשים בפרוצדורות הללו במעבדה שלנו כדי לבודד תאי גזע עבור מחקרי בסיס על יישומים של רפואה תרגומית.כעת נתחיל בלימוד. הרקמות מהן ניתן לבודד תאי גזע יכלולו גידים ושרירים שלדון שנקצרו מהטיביה או משרירי הסולאוס (Soleus) של הגפה האחורית של עכברים מסוג פרא (

isolating-stem-cells-from-soft-musculoskeletal-tissues

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

סרט הווידאו הזה מראה כיצד מיקרו לנתח את שק החלמון ואת אבי העורקים, בלוטת המין, כלית בינים האזור מעוברים ולהשתמש cytometry זרימה למיין בתאי גזע hematopoietic.

בידוד מוקדם בתאי גזע hematopoietic מ Murine חלמון Sac ו AGM

מיקרו גזור טכניקה explants היא שיטה חזקה ואמינה לבידוד שגשוג התאים שריר השלד מן, השרירים נוער למבוגרים או עובריים כמקור לתאי גזע שרירי השלד. באופן ייחודי, התאים האלה כבר נגזר clonally לייצר גזע שריר השלד שורות תאים המשמשים in vivo השתלה.

למבוגרים עובריים שרירי השלד Microexplant התרבות בידוד בתאי גזע שרירי השלד

הבידוד והתרבות של אוכלוסייה טהורה של תאי לווין שקטים, אוכלוסיית תאי גזע שריר, הוא חיוני להבנה של ביולוגיה שרירים תאי גזע והתחדשות, כמו גם בתאי גזע להשתלה עבור טיפולים בניוון שרירים ומחלות ניווניות אחרות.

בידוד, תרבות והשתלה של תאי לווין שריר

כלי דם בתוך אוכלוסיות אנושיות נמל שריר שלד כמה רבת שושלת המבשרת כי הם אידיאליים עבור יישומי משובי. שיטת בידוד זה מאפשרת טיהור בו זמני של שלוש אוכלוסיות תאי מבשר multipotent בהתאמה משלוש שכבות מבניות של כלי דם: תאי myogenic אנדותל מאינטימה, pericytes מתקשורת, ותאי adventitial מadventitia.

בידוד של דם המופק מכולים multipotent מבשרים משרירי שלד אדם

פרוטוקול זה מתאר טכניקות לבידוד תאים חיים ותרבית ראשונית של קווי תאים מיוגניים ופיברובלסטים מרקמת שריר או עור.  מתוארת גם טכניקה לאמורטליזציה של קווי תאים אלה.  בסך הכל, פרוטוקולים אלה מספקים כלי אמין ליצירה ושימור של תאים שמקורם בחולה עבור יישומים במורד הזרם.

בידוד והנצחה של שורות תאים שמקורם בחולה מביופסיה של שריר למחל דוגמנות

במאמר זה, נציג שיטות כדי לבודד, להבדיל תאי סטרומה מח עצם של תאי גזע hematopoietic עצמות ארוכות העכבר. שני פרוטוקולים שונים מוצגים מניב אוכלוסיות תאים שונים עבור הרחבת ובידול לתוך תאי העצם, adipocytes ו osteoclasts.

בידוד, תרבות, התמיינות של תאי סטרומה מח עצם ו אוסטאוקלסט אבות של עכברים

הזיהוי המדויק של תאי אב פיברו-אדיפוגניים (FAPs) ותאי גזע של שרירים (MuSCs) הוא קריטי לחקר תפקודם הביולוגי בתנאים פיזיולוגיים ופתולוגיים. פרוטוקול זה מספק הנחיות לבידוד, לטיהור ולתרבות של FAPs ו-MuSCs משרירי עכברים בוגרים.

בידוד ותרבית FACS של אבות פיברו-אדיפוגניים ותאי גזע של שרירים משרירי שלד עכברים לא מופרעות ופצועים

פרוטוקול זה מתאר בידוד של תאי גזע שריריים ואבות פיברו-אדיפוגניים משרירי שלד בודדים בעכברים. הפרוטוקול כולל דיסקציה של שריר יחיד, בידוד תאי גזע על ידי מיון תאים מופעל פלואורסצנטי, הערכת טוהר על ידי צביעה אימונופלואורסצנטית, ומדידה כמותית של כניסה לשלב S על ידי בדיקת שילוב 5-ethynyl-2'-deoxyuridine.

בידוד אוכלוסיות תאי גזע שקטים משרירי שלד בודדים

כאן אנו מציגים פרוטוקולים המאפשרים בידוד של תאי סטרומה מעצם מורין, מח עצם, בלוטת התימוס ורקמה תימית אנושית התואמת למולטיומיקה של תא יחיד.

בידוד תאי סטרומה מאיברים המטופויטיים

פרוטוקול זה מספק שיטה סטנדרטית לבידוד והעשרת מיובלסטים ראשוניים משרירי השלד של עכברים בוגרים ויילודים באמצעות ניתוק רקמות, סינון רציף, ציפוי מוקדם ותנאי תרבית מוגדרים, המאפשר הקמה ותחזוקה של תרביות מיובלסטים שמקורן בתאי לוויין ליישומים ניסיוניים במורד הזרם.

בידוד תאי לוויין שריר השלד למחקרי מיוגנזה במבחנה

למדו לבודד תאי גזע בוגרים מרקמות שריר שלד באמצעות עיכול אנזימטי ושיטת pre-plating חוזרת. שיטה זו מאפשרת אפיון תאים באימונופלואורסצנציה וציטומטריית זרימה למחקר רפואה רגנרטיבית.

בידוד בתאי גזע רקמות השלד והשרירים Soft

גלה סרטונים נוספים