ויזואליזציה והערכת גודל של Faustovirus באמצעות מיקרוסקופיה אלקטרונית

קח תרבית של אמבה שזוהמה בנגיף ענק המכונה Faustovirus.

אסוף את עליית התרבית המכילה את ה-Faustovirus.

יש להניח את העל-נוזל (supernatant) על רשת למיקרוסקופיה אלקטרונית שעברה פריקה חשמלית (glow-discharge).

דגרו כדי לאפשר ספיחה של חלקיקי נגיף על גבי הרשת.

ספגו את הרשת בנייר סינון כדי להסיר חלקיקי נגיף שאינם קשורים.

הניחי טיפה של ammonium molybdate.

אמוניום מוליבדט פועל כצבע שלילי על ידי קישור לרשת מסביב לנגיף והכהיית הרקע כדי להגביר את הניגודיות במהלך הדימוי.

הסר את עודפי ה-ammonium molybdate על ידי ספיגה של הרשת בנייר סינון.

הניחו את הרשת בתוך צלחת פטרי והניחו לה להתייבש.

לאחר מכן, הנח את הרשת על מחזיק הדגימות.

הכנס את התומך לתוך מיקרוסקופ האלקטרונים.

צלם תמונה של ה-Faustovirus ומדוד את גודלו של ה-Faustovirus לצורך ניתוח נוסף.

לביצוע מיקרוסקופיה אלקטרונית, הניחו 5 µl של הדגימה החיובית על רשת שעברה פריקה פלוורסצנטית (glow-discharged grid), והדגירו בטמפרטורת החדר למשך כ-20 דקות. ייבשו את הרשת בזהירות, לאחר מכן הוסיפו כמות קטנה של 1% ammonium molybdate והדגירו למשך 10 שניות. לאחר הסרה זהירה של הטיפה, הניחו לרשת להתייבש למשך חמש דקות. לאחר מכן, כווןו את המיקרוסקופ האלקטרוני ל-200 keV. לאחר מכן, הניחו את הרשת על התומך והכניסו את התומך אל המיקרוסקופ. לחצו על סמל סקירת הוואקום ובדקו את הוואקום. לאחר מכן, סגרו את השסתומים, וכוונו את גודל הנקודה (spot size) ל-5 ואת ההגדלה ל-25,000 לפני תחילת התצפית. לאחר איתור של וירוס ענק על מסך הרכישה, השתמשו בכלי המדידה כדי למדוד את הווירוס.

בצע ביולוגיה מולקולרית וריצוף של הגנום הויראלי בהתאם לפרוטוקול הכתוב.