Name: מסירה של סוכני טיפולית באמצעות Intracerebroventricular (ICV) ו תוך ורידי (IV) הזרקה של עכברים (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-10-03T12:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 55 s
Description: למד שיטות הזרקה תוך-חדרית ותוך-ורידית בעכברים נאונטליים. טכניקות אלו מאפשרות מסירה ממוקדת של סוכנים טיפוליים למערכת העצבים המרכזית וחציית מחסום הדם-מוח.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

המחברים מבקשים להודות ג&#39;ון Marston עבור המומחה גידול בעלי חיים, ד&quot;ר מרקו א Passini לקבלת סיוע טכני בשלבים המוקדמים של הפרויקט הזה. עבודה זו מומנה על ידי מענק מטעם מכון הבריאות הלאומי כדי CLL (R01NS41584; R01HD054413).

1. Intracerebroventricular הזרקה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השלב הראשון הוא הכנת הפתרונות מניות זריקה; פתרונות אלה וקטור נגיפי, הדנ"א פלסמיד, סמים, וצריך להיות מוזרק בתנאים סטריליים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מערבבים titer הרצויה של וקטור ויראלי (סה"כ μL 5-7) עם 0.05% w / v trypan כחול PBS להדמיה של הזריקה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פתרון ה-DNA פלסמיד (5 בסך הכל אני μL) מכיל D-(+), גלוקוז 20% (w / v) (1 μL), trypan כחול (0.05%) PBS (1 μL), פלסמיד (~ 5 ~ g / L ~ ) (2 ~ L), ו -2.5 kDa ליניארי homopolymer PEI (150 מ"מ) (1 ~ L). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשתק את PND 2 בילודים באמצעות הרדמה-cryo במשך 1-2 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מחט המשמש להזרקת זהו מיקרו ליטר מכויל micropipette זכוכית מעוקר כי מצורף מזרק 3ml 3 המילטון מ"ל דרך צינור ארוך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשבור את קצה המחט (עם מרית) כדי להתאים את החדירה 2 מ"מ לתוך הגולגולת. מניחים את המחט באלכסון בצינור microcentrifuge המכיל את פתרון ההזרקה. טען הפתרון זריקה לתוך המחט בקפידה על ידי משיכת הבוכנה של המזרק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר ספיגת הפתרון, לנתק את המזרק מהצינור, למשוך את הבוכנה עד נוספת ולאחר מכן לצרף את המחט שוב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החזק את המחט ביד ימין בין האגודל והאצבע והמקום מזרק בין האצבעות באמצע טבעת עם הבוכנה נגיעה בכף יד ימין. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תפוס את העכבר משותקת בתוקף על ידי העור מאחורי הראש בעזרת יד שמאל במקום על אור סיבים אופטיים כדי להאיר מבנים אנטומיים רלוונטי שיכול לשמש כמדריך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכנס את מחט 2 מ"מ עמוק, בניצב לפני השטח בגולגולת, במיקום כ 0.25 מ"מ לרוחב תפר sagittal ו - 0.50-0.75 מ"מ מקורי אל תפר כלילית בילוד (איור 1A). ואז, לדחוף את הבוכנה באמצעות כף היד של יד ימין מאוד לאט ובזהירות. צג עבור כלי מקרע או נפיחות בפנים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את המחט 15 שניות לאחר הפסקת תנועת הבוכנה כדי למנוע backflow. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי לשחזר, לשמור על עכברים למשך 5-10 דקות במיכל חימם עד התנועה ואת ההיענות הכללית היא כנו. </li></ol> 2. הזרקה תוך ורידי דרך הווריד הזמני / פנים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפתרון להיות מוזרק צריך להיות מוכן להשלים עם צבע מאכל ירוק מסונן על דילול 1:100 והזריקו בתנאים סטריליים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צרף פלסטיק קטנה luer לסוף מזרק 100 μL המילטון זכוכית. כדי luer, לצרף 33 0.25 אינטש מד מחט המזרק. להבטיח כי כל החלקים מחוברים היטב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> טען את המזרק עם נפח להיות מוזרק, להבטיח כי יש אוויר בתוך המזרק כמו הזרקת אוויר לתוך כלי קטלני. לעתים קרובות מועיל pipet נפח להיות מוזרק אל פיסת parafilm. זה מאפשר ראיה ברורה של ספיגת הפתרון לתוך המזרק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Transilluminator מראה Wee משמש לחזות בקלות את הווריד הזמני שטחית, או וריד הפנים, ב הילוד (איור 2 א). לפני ההזרקה, כדי להבטיח את הילוד transilluminator באמצעות פלסטר. גזה צריך להיות ממוקם בין הילוד לבין קלטת כדי למנוע את הקלטת מפגיעה העור של החיה. Secure את בעל החיים transilluminator בצד שלה, להבטיח כי הקלטת אינה מונעת הנשימה. הצוואר של רך נולד יש פנתה בעדינות כך וריד הפנים גלוי בקלות את האף צריך להיות מודבק על מנת לייצב את הראש. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעזרת זכוכית מגדלת סרט 2.25X כדי לאפשר ראיה קל, לאט לאט להכניס את המחט לווריד. וריד היא שטחית מאוד כך המחט צריכה להישאר גלוי מתחת לעור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאט לאט להחדיר את עוצמת הקול של פתרון לתוך הווריד. צבע ירוק מאפשר ראיה קל של הזריקה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> המתן 15 שניות לפני הסרת מחט כפי שקיים פער בין באופן מלא מדכא על הבוכנה של המזרק וגירוש הפתרון הנותרים עקב נשא מחט צר ביותר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר הסרת המחט, שימוש גזה להפעיל לחץ על הזריקה עד שהדימום נפסק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צג הילוד סימנים של מצוקה. לאחר הזרקת ראויה, אין מצוקה גלויה יש לשים לב. רך נולד יש לתת כ 5 דקות כדי להתאושש לפני שהוא חזר הכלוב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פלאש יחידת מחט / מזרק עם PBS בין זריקות כמו דם המחט מהר לסתום אותו בשל נשא קטן. </li></ol> 3. נציג התוצאות: ICV הזרקה: המוח ניתן לקצור בכל זריקה שלאחר בנקודות שונות בזמן דמיינו להפגין טכניקה זריקה מוצלחת. אם הצבע לא מתווסף פתרון הזריקה, זה יהיה קשה לבדוק את הדיוק של בjection. הזרקה נכונה של אחד החדרים תאפשר הפצה של כחול trypan בצד מוזרק של המוח כ 10-15 דקות לאחר הזרקה (איור 1B). התפלגות אחידה של trypan כחול בשתי אונות המוח על ימין ועל שמאל נורות הריח יהיה גלוי כ -60 דקות הזרקת פוסט (תרשים 1C). זאת בשל קישוריות של החדרים מוחין אשר יאפשרו את הפצתו של צבע כחול על החדר הסמוך. זריקות מדויקות ניתן דמיינו ידי פיזור של צבע כחול מקורי בתעלת השדרה המרכזית כ בתוך 12 שעות לאחר ההזרקה (1D איור). זריקות שגוי ניתן להבחין בחוסר צבע כחול אונות המוח. במקרה זה, את העומק של המחט לא היתה מספקת את הפתרון הזרקת הפיצה כנראה מתחת לעור. אפשרות חלופית היא כי המחט חדרה עמוק מדי במוח, ובכך עובר מעבר החדר והפתרון הוא רוקן מתחת החדרים מוחין. הזרקה IV: מדויק ויעיל הזרקה לווריד הזמני / פנים ניתן דמיינו מיד לאחר ההזרקה. כמו הפתרון מוזרק, לצבוע בירוק מאפשר הדמיה של הפתרון הנכנסים זורם דרך וריד הפנים (איור 2 א). בנוסף, שינוי צבע העור של העכבר יקויימו הזריקה הבאה. צבע ורוד נורמלי של הילוד מומר ירוק, בשל נוכחותם של צבע מאכל ירוק בפתרון הזרקה (2B איור). היקף לשנות את צבע ירוק שנצפתה הילוד תלוי ריכוז של צבע המשמשים. להדמיה פשוטה של ​​הזרקת בתקופה בפועל, דילול 01:50 מומלץ. עם זאת, צבע העור משתנה באופן דרמטי לעתים קרובות תוצאות הגור מדחייה של האם ולכן, הסרת צבע או ריכוז הקטינה באופן משמעותי יש לשקול במהלך הפרוצדורות. הזרקה מדויקת תגרום הצטברות של צבע ירוק מתחת לעור במקום של הזריקה. זריקה הושלמה, אשר מתרחשת כאשר הפתיחה של המחט אינו מוכנס היטב בתוך הווריד, נתפסת כאשר פתרון כמה זורם בווריד וחלק מצטבר מתחת לעור. אם זאת הוא ציין, המחט צריך להיות מוכנס לתוך כלי נוסף. <img src="/files/ftp_upload/2968/2968fig1.jpg" alt="איור 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="איור 1"> באיור 1. הפגנה מוצלחת של זריקות ICV ב PDN2 עכברים. סכמטי) של אתרי הזרקה מנוצל ICV זריקות לתוך החדרים. B) מן המוח ICV מוזרק גור עם trypan כחול PBS על החדר השמאלי, תמונה שצולמה 15 דקות הזרקת הודעה. C ) מן המוח ICV מוזרק גור עם trypan כחול PBS על החדר השמאלי, תמונה שצולמה 60 דקות הזרקת הודעה. D) מקורי תעלת השדרה המרכזית מוצגת ICV מוזרק הגור עם trypan כחול PBS על החדר השמאלי, תמונה שצולמה 12 שעות שלאחר ההזרקה. <img src="/files/ftp_upload/2968/2968fig2.jpg" alt="איור 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="איור 2"> איור 2. הפגנה מוצלחת של זריקות הרביעי PDN2 עכברים. סכמטי) של וריד הפנים מנוצל IV זריקות. B) IV מוזרק גור עם צבע ירוק PBS לעומת להמלטה בלתי מוזרק, צולם הזרקת לפרסם באופן מיידי.

<ol><li>Blanchette, M., Fortin, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blood-brain+barrier+disruption+in+the+treatment+of+brain+tumors%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol.+Biol%22%5BJournal%5D)">Blood-brain barrier disruption in the treatment of brain tumors.</a> Methods Mol. Biol. 686, 447-463 (2011).</li>
<li>Foust, K. D., Kaspar, B. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Over+the+barrier+and+through+the+blood%3A+to+CNS+delivery+we+go%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Cycle%22%5BJournal%5D)">Over the barrier and through the blood: to CNS delivery we go.</a> Cell Cycle. 24, 4017-4018 (2009).</li>
<li>Snyder, E. Y., Taylor, R. M., Wolfe, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neural+progenitor+cell+engraftment+corrects+lysosomal+storage+throughout+the+MPS+VII+mouse+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Neural progenitor cell engraftment corrects lysosomal storage throughout the MPS VII mouse brain.</a> Nature. 374, 367-370 (1995).</li>
<li>Passini, M. A., Wolfe, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Widespread+gene+delivery+and+structure-specific+patterns+of+expression+in+the+brain+after+intraventricular+injections+of+neonatal+mice+with+an+adeno-associated+virus+vector%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Virol%22%5BJournal%5D)">Widespread gene delivery and structure-specific patterns of expression in the brain after intraventricular injections of neonatal mice with an adeno-associated virus vector.</a> J. Virol. 24, 12382-12392 (2001).</li>
<li>Kienstra, K. A., Freysdottir, D., Gonzales, N. M., Hirschi, K. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Murine+neonatal+intravascular+injections%3A+modeling+newborn+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Am.+Assoc.+Lab.+Anim.+Sci%22%5BJournal%5D)">Murine neonatal intravascular injections: modeling newborn disease.</a> J. Am. Assoc. Lab. Anim. Sci. 46, 50-54 (2007).</li>
<li>Sands, M. S., Barker, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Percutaneous+intravenous+injection+in+neonatal+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Lab.+Anim.+Sci%22%5BJournal%5D)">Percutaneous intravenous injection in neonatal mice.</a> Lab. Anim. Sci. 49, 328-330 (1999).</li>
<li>Foust, K. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rescue+of+the+spinal+muscular+atrophy+phenotype+in+a+mouse+model+by+early+postnatal+delivery+of+SMN%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Rescue of the spinal muscular atrophy phenotype in a mouse model by early postnatal delivery of SMN.</a> Nat. Biotechnol. 28, 271-274 (2010).</li>
<li>Foust, K. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intravascular+AAV9+preferentially+targets+neonatal+neurons+and+adult+astrocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Intravascular AAV9 preferentially targets neonatal neurons and adult astrocytes.</a> Nat. Biotechnol. 27, 59-65 (2009).</li>
<li>Passini, M. A., Watson, D. J., Wolfe, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene+delivery+to+the+mouse+brain+with+adeno-associated+virus%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol.+Biol%22%5BJournal%5D)">Gene delivery to the mouse brain with adeno-associated virus.</a> Methods Mol. Biol. 246, 225-236 (2004).</li>
<li>Coady, T. H., Lorson, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Trans-splicing-mediated+improvement+in+a+severe+mouse+model+of+spinal+muscular+atrophy%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Trans-splicing-mediated improvement in a severe mouse model of spinal muscular atrophy.</a> J. Neurosci. 30, 126-130 (2010).</li>
<li>Baughan, T. D., Dickson, A., Osman, E. Y., Lorson, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Delivery+of+bifunctional+RNAs+that+target+an+intronic+repressor+and+increase+SMN+levels+in+an+animal+model+of+spinal+muscular+atrophy%5BTitle%5D)+AND+%22Hum.+Mol.+Genet%22%5BJournal%5D)">Delivery of bifunctional RNAs that target an intronic repressor and increase SMN levels in an animal model of spinal muscular atrophy.</a> Hum. Mol. Genet. 18, 1600-1611 (2009).</li>
<li>Coady, T. H., Baughan, T. D., Shababi, M., Passini, M. A., Lorson, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+single+vector+system+that+enhances+trans-splicing+of+SMN2+transcripts%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Development of a single vector system that enhances trans-splicing of SMN2 transcripts.</a> PLoS One. 3, e3468-e3468 (2008).</li>
<li>Dickson, A., Osman, E., Lorson, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Negatively-Acting+Bifunctional+RNA+Increases+Survival+Motor+Neuron+in+vitro+and+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Hum.+Gene.+Ther%22%5BJournal%5D)">Negatively-Acting Bifunctional RNA Increases Survival Motor Neuron in vitro and in vivo.</a> Hum. Gene. Ther. 19, 1307-1315 Forthcoming.</li>
<li>Mattis, V. B., Ebert, A. D., Fosso, M. Y., Chang, C. W., Lorson, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Delivery+of+a+read-through+inducing+compound%2C+TC007%2C+lessens+the+severity+of+a+spinal+muscular+atrophy+animal+model%5BTitle%5D)+AND+%22Hum.+Mol.+Genet%22%5BJournal%5D)">Delivery of a read-through inducing compound, TC007, lessens the severity of a spinal muscular atrophy animal model.</a> Hum. Mol. Genet. 18, 3906-3913 (2009).</li>
<li>Williams, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oligonucleotide-mediated+survival+of+motor+neuron+protein+expression+in+CNS+improves+phenotype+in+a+mouse+model+of+spinal+muscular+atrophy%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Oligonucleotide-mediated survival of motor neuron protein expression in CNS improves phenotype in a mouse model of spinal muscular atrophy.</a> J. Neurosci. 29, 7633-7638 (2009).</li>
<li>Passini, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CNS-targeted+gene+therapy+improves+survival+and+motor+function+in+a+mouse+model+of+spinal+muscular+atrophy%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Invest%22%5BJournal%5D)">CNS-targeted gene therapy improves survival and motor function in a mouse model of spinal muscular atrophy.</a> J. Clin. Invest. 120, 1253-1264 (2010).</li>
<li>Shababi, M., Glascock, J., Lorson, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Combination+of+SMN+Trans-Splicing+and+a+Neurotrophic+Factor+Increases+the+Life+Span+and+Body+Mass+in+a+Severe+Model+of+Spinal+Muscular+Atrophy%5BTitle%5D)+AND+%22Hum.+Gene.+Ther%22%5BJournal%5D)">Combination of SMN Trans-Splicing and a Neurotrophic Factor Increases the Life Span and Body Mass in a Severe Model of Spinal Muscular Atrophy.</a> Hum. Gene. Ther. 22, 1-10 (2010).</li>
</ol>

אין ניגודי אינטרסים הכריז.

מחקרים באמצעות מודלים העכבר של המחלה לעתים קרובות מחייב את הממשל של תרופות או חומרים אחרים בילודים. בסרטון הזה, אנחנו מדגימים את צעד אחר צעד הליכים מעורבים שני סוגי אסטרטגיות הזרקת שיכולים לשמש למטרה CNS: 1) הזרקה ישירה לתוך מערכת העצבים המרכזית ניצול (ICV) הזרקה intracerebroventricular, או 2) הזרקה IV מיקוד / הזמני הפנים וריד. העיתוי של זריקות אלה היא בעלת חשיבות רבה. מאז זריקות ICV הם חופשי, הגולגולת חייב להיות נזיל יחסית. זה סוג של זריקה אפשרית רק באמצעות בשבוע הראשון של החיים,...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><th> שם מגיב </th><th> חברה </th><th> מספר קטלוגי </th><th> הערות (אופציונלי) </th></tr><tr><td> גרין דיי מזון </td><td> מקורמיק </td><td> n / a </td><td> חייב להיות מסונן </td></tr><tr><td> המילטון זכוכית מזרק (100 μL) </td><td> סיגמא Aldrick </td><td> 20702 </td><td></td></tr><tr><td> סגנון LuerMxF אשכול לבן ניילון </td><td> חלקים קטנים, Inc </td><td> VPLF-LC78-1-25 </td><td></td></tr><tr><td> פיין המזרק מד מחטים </td><td> פופר </td><td> 7111 </td><td> גודל: 33 (SWG) x ¼ &quot;(6.35 מ&quot;מ) </td></tr><tr><td> Sight Wee Transilluminator </td><td> Respironics </td><td> 1017920 </td><td></td></tr><tr><td> 2.25X סרט זכוכית מגדלת </td><td> MagEyes </td><td> דגם מספר 5 </td><td> בחר הגדלה כדי להתאים את העדפות הפרט </td></tr></tbody></table>

מסירה של סוכני טיפולית באמצעות intracerebroventricular (icv) ו תוך ורידי (iv) הזרקה של עכברים

Delivery of Therapeutic Agents Through Intracerebroventricular (ICV) and Intravenous (IV) Injection in Mice

למרות תפקיד המגן כי מחסום הדם במוח משחקת מיגון המוח, שהוא מגביל את הגישה אל מערכת העצבים המרכזית (CNS), אשר לרוב תוצאות הכישלון של הרפוי פוטנציאליים מיועד 1,2 הפרעות ניווניות. מחלות ניווניות כגון ניוון שרירים השדרה (SMA), שבו הנוירונים המנוע נמוך יותר מושפעים, יכול להפיק תועלת רבה מן מציגה את סוכני טיפולית לתוך מערכת העצבים המרכזית. המטרה של הוידאו הזה היא להדגים שתי פרדיגמות שונות כדי לספק הזרקת חומרים טיפוליים לעכברים הילוד לאחר הלידה. אחת השיטות הללו הוא להזריק ישירות לתוך החדרים לרוחב מוחין (Intracerebroventricular) שתוצאתה העברת חומרים לתוך מערכת העצבים המרכזית באמצעות נוזל השדרה 3,4. השיטה השנייה היא הזרקה לווריד הזמני (תוך ורידי) שיכולים להציג הרפוי שונים לתוך מערכת הדם, המובילה משלוח מערכתית כולל מערכת העצבים המרכזית 5. התמרה נרחבת של מערכת העצבים המרכזית הוא בר השגה אם וקטור ויראלי המתאים סרוטיפ ויראלי מנוצל. ויזואליזציה וניצול של וריד להזרקה הזמני אינו ריאלי עד יום הלידה 6. עם זאת, אם את החומר נמסר מיועד להגיע CNS, זריקות אלו צריכות להתקיים בעוד מחסום דם מוח הוא חדיר יותר בשל המצב שלה לא בשלה, רצוי לפני יום הלידה 2. המוח מפותחת מחסום הדם מאוד מגביל את היעילות של מתן תוך ורידי. שתי מערכות אספקת הם פשוט ויעיל פעם כישרון כירורגית מושגת. הם אינם דורשים כל התקנים כירורגיים נרחבים יכול להתבצע על ידי אדם אחד. עם זאת, שיטות אלו אינן בלי אתגרים. גודלו הקטן של הלידה 2 גורים יום בתחומים הבאים יעד קטן יכול לעשות זריקות קשה לבצע ומאתגר בתחילה לשכפל.

מאמר זה מדגים שתי שיטות שונות של הזרקת מאוד: 1) לתוך המוח (intracerebroventricular) ו 2) מערכתית (תוך ורידי) כדי להציג את סוכני טיפולית לתוך מערכת העצבים המרכזית של עכברים הילוד.

מסירה של סוכני טיפולית באמצעות Intracerebroventricular (ICV) ו תוך ורידי (IV) הזרקה של עכברים

למרות התפקיד המגן שממלא מחסום הדם-מוח בהגנה על המוח, הוא מגביל את הגישה למערכת העצבים המרכזית (CNS), שרוב...

בסרטון זה יודגמו שיטות להזרקה תוך-חדרית (intra cerebro ventricular) והזרקה תוך-ורידית בעכברים ניו-נאטליים. לצורך הזרקה תוך-חדרית, מניחים תחילה את העכבר המורדם מעל מקור אור סיב אופטי כדי להאיר את הסינוס הסגיטלי ואת הסינוסים העוברים. לאחר מכן, מזריקים בזהירות את התחליל בנקודה לטרלית לתפר הסגיטלי ורוסטרלית לתפר הקורונרי.בביצוע נכון, האינוקולום יתפזר תחילה בחדר המזרק ולאחר מכן יגיע לחדר השני לצורך הזרקה תוך-ורידית. העכבר מקובע למכשיר תאורה נשלפת (transluminator) באופן שבו וריד הפנים חשוף. לאחר מכן, האינוקולום מוזרק לאט ישירות לווריד ומתפזר באופן סיסטמי.ההשלכות של טכניקות אלו חולשות לעבר טיפול במחלות והפרעות רבות, כיוון שהן מאפשרות מיקום אופטימלי של חומרי טיפול. טכניקת ה-ICV מספקת אמצעי לחציית מחסום הדם-מוח, בעוד שטכניקת ה-IV מאפשרת הזרקה טיפולית סיסטמית. ראשית, הכין את תמיסת ההזרקה בתוך מבחנה למיקרו-צנטריפוגה.בדוגמה זו, התרביות להזרקה מכילות triam blue כדי לאפשר ויזואליזציה טובה יותר של אתר ההזרקה. להזרקה לעכברים, השתמשו במחט מיקרופיפט מזכוכית, שעברה סטריליזציה וכיול, המחוברת לסדרה של צינורות פלסטיק שקוטרם עולה בהדרגה ומסתיימת במזרק פלסטיק של שלוש מיליליטר. באמצעות פינצטה בעלת קצה שטוח, שברו את קצה מחט הזכוכית כך שאורכה יהיה שלושה מילימטרים.פעולה זו תאפשר חדירה של לפחות שני מילימטרים אל תוך המוח. טענו בזהירות את התמיסה להזרקה אל תוך מחט המיקרופיפט מזכוכית על ידי הנחתה באלכסון בתוך מבחנת המיקרו-צנטריפוגה ומשיכה בבוכנת המזרק. הפסיקו למשוך בבוכנה מיד עם השלמת טעינת המחט.כדי למנוע זיהום של הצינוריות, הוצא את המזרק ממערכת הצינוריות המחוברת למיקרו-פיפט הזכוכית. שלוף את הבוכנה לחלוטין וחבר שוב את המחט בחוזקה. החזק את מחט המיקרו-פיפט מזכוכית בין האגודל לאצבע המורה.הנח את המזרק בין האצבע הטבעתית לזרת, כאשר הבוכנה נוגעת בכף יד היד המזריקה, ובצע הרדמה בקירור (cryo anesthetize) לעכבר בן יומיים. לאחר מכן, אחז בחוזקה בעור בבסיס הראש של העכבר המורדם בקירור, והנח אותו על מקור אור סיב אופטי כדי להאיר את הסינוס הסגיטלי העליון (superior sagittal sinus) ואת הסינוס התעברתי (transfer sinus). אתר ההזרקה ממוקם כרבע מילימטר לצד אחד של נקודת המפגש של סינוסים אלה, כאשר המזרק מוחזק בניצב לפני השטח של הגולגולת.החדירו את המחט לעומק של שני מילימטרים. בעזרת כף יד היד המזריקה, דחפו באיטיות את הבוכנה למטה כדי להזריק את התמיסה. המתינו 15 שניות לפני הוצאת המחט כדי למנוע זרימה חוזרת, ועקבו אחר העכבר כדי לזהות נפיחות קרניאלית או סימנים לכלי דם פגועים.לאחר הזרקה לעכבר, מקמו אותו במכל שחומם מראש למשך חמש עד 10 דקות כדי לאפשר לו להתאושש. השוו את העכבר המזוהה לעכבר שלא קיבל הזרקה. 10 עד 15 דקות לאחר הזרקה תוך-חדרית (intra cerebro ventricular) של תמיסת ההזראה המכילה triam blue.הנוזל אמור להתפזר בצד המוזרק של המוח לאחר 60 דקות בשל הקישוריות של הפרונטריקלים המוחיים; פיזור אחיד של triam blue בשני חצאי המוח ובבצוללים הריחניים אמור להיות נראה לעין. לבסוף, לאחר 12 שעות, האינוקולום יהיה נראה בתעלת השדרה המרכזית הרוסטרלית. הכינו את תמיסות ההזרקה והוסיפו צבע מאכל ירוק בדילול של 1 ל-100.כדי להמחיש את ההזרקה, חברו פיתיון פלסטיק קטן לקצה של מזרק זכוכית Hamilton בנפח 100 µL. התקינו על המזרק מחט תת-עורית בכילייג' 33 ובאורך 0.25 inch וודאו שכל החלקים מחוברים היטב. מלאו את המזרק בנפח המיועד להזרקה.יש לוודא שכל בועות האוויר הוסרו מהאינוקולום, שכן הזרקת אוויר לווריד היא קטלנית. השתמשו בסרט הדבקה כירורגי ובגזה כדי לקבע את היילוד למכשיר הטרנסלומניטור. קבעו תחילה את האמה והגוף לטרנסלומניטור, ולאחר מכן קבעו את הראש כך שוריד הפנים יהיה גלוי.יש לוודא שהסרט רפוי מספיק כדי שהחיה תוכל להמשיך לנשום. בעזרת זכוכית מגדלת של 2.25 x מאפשרת ויזואליזציה טובה יותר, הכניסו את המחט באיטיות אל תוך הווריד. מכיוון שהווריד הוא שטחי, המחט תישאר גלויה מתחת לעור.הזריקו את האינוקולום לאט לווריד. המתינו 15 שניות לפני הסרת המחט כדי לאפשר את ריקונו המלא של הנוזל. לאחר הסרת המחט, השתמשו בפיסת גזה כדי להפעיל לחץ על נקודת ההזרקה עד להפסקת הדימום.החזירו את היילוד למקום חם והמתינו חמש דקות להתאוששותו. עקבו אחר סימני מצוקה. אם ההזרקה בוצעה כהלכה, בעל החיים לא אמור להפגין סימני אי-נוחות.ברגע שהעכבר התאושש, החזירו אותו לכלובו. אם ההזרקה הוורידית בוצעה כהלכה, הרך-נקודות יהפוך לירוק. לאחר צפייה בסרטון זה, אמורה להיות לכם הבנה טובה לגבי אופן ביצוע הזרקות ICV ו-IV בעכברים רך-נקודות.ניתן להשתמש בטכניקות אלו כאמצעי להזרקת הסוכן הטיפולי לבחירתכם.

delivery-therapeutic-agents-through-intracerebroventricular-icv

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

סרטון זה מדגים הזרקה תוך-מוחית בתיווך אומאיה במודל עכבר. השיטה מאפשרת אספקה מקומית של תרופות מועמדות פוטנציאליות וחומקת ממחסום הדם-מוח.

הזרקה תוך-מוחית בעכבר: שיטת ניהול תרופות ישירה בתיווך אומאיה להעברת תרופות לחדרי המוח במוח עכבר

בסרטון זה אנו מתארים שיטה להשתלת קטטר בווריד הצוואר של מודל עכברי שדרכו ניתן להעביר חומרים ניסיוניים כגון תרופות וצבעי נותב דרך הווריד in vivo. סידור כזה, כאשר הוא מחובר למערכות אחרות, יכול לשמש גם לניטור המודינמיקה ודגימת דם.

הזרקה תוך ורידית מבוססת צנתר של חומרים ניסיוניים: טכניקה להעברת חומרים ניסיוניים תוך ורידי דרך וריד הצוואר במודל עכבר

מקור: Li, D., et al. הזרקה תוך-תקלית ישירה של נגיפים רקומביננטיים הקשורים לאדנו בעכברים בוגרים. J. Vis. Exp. (2019)סרטון זה מדגים את הליך ההזרקה התוך-תקלית של נגיפים הקשורים לאדנו (AAV) לנוזל המוח (CSF) של עכבר ער, המכסה הכנת מזרק, יישור עמוד השדרה והחדרת מחט מדויקת. שיטה זו מאמתת העברת גנים ממוקדת, ותומכת בפוטנציאל שלה לטיפולים במערכת העצבים המרכזית.

העברה תוך-תקלית של וירוסים במודל עכבר לטיפול במחלות מערכת העצבים המרכזית

מודלים של בעלי חיים למחלות ילדים יכולים לחוות התפרצות מוקדמת והתקדמות מחלה אגרסיבית. מבחינה קלינית משלוח טיפול רלוונטי למודלים של עכברים צעירים יכול להיות קשה מבחינה טכנית. פרוטוקול זה מתאר שיטת הזרקה תוך ורידית לא פולשנית לעכברים שזה עתה נולדו בתוך שני הימים לאחר הלידה הראשונה של חיים.

זריקות תוך ורידים בעכברים בילוד

כאן, אנו מתארים שיטה פשוטה של הזרקה תוך חדרית ותוך וסקולרית של חלקיקים נגיפיים או מיקרו-חרוזים פלואורסצנטיים למוח העכבר היילוד. ניתן לזהות את דפוס הלוקליזציה של הנגיף והננו-חלקיקים על ידי הערכה מיקרוסקופית או על ידי הכלאה באתר.

הזרקת intracerebroventricular ו intravascular של חלקיקים נגיפיים ו פלורסנט microbeads לתוך המוח בילוד

שיטה לאספקת תאי גזע עצביים, הניתנים להזרקת פתרונות או השעיות, דרך עורק הראש המשותף (עכבר) או העורק הראשי החיצוני (עכברוש) לאחר דיווח על שבץ. תאים מוזרק מופצים בהרחבה ברחבי המוח באתר וניתן לאתרם עד 30 d לאחר המסירה.

משלוח פנים-עורקי של תאי גזע עצביים למוח עכברוש ועכבר: יישום איסכמיה מוחין

כאן מתוארת גישה פשוטה ומהירה לביצוע הזרקות תוך-מוחיות בעכברים בגישה של יד חופשית (כלומר, ללא מכשיר סטריאוטקסי).

זריקות תוך-מוחיות ביד חופשית בעכברים

הפרוטוקול הנוכחי מתווה הוראות שלב אחר שלב לביצוע זריקות תוך-תיקליות בעכברים יילודים לצורך עריכת גנים והעברת תרופות.

הזרקה תוך-תטית של עכבר שזה עתה נולד לצורך עריכת גנום ואספקת תרופות

תיקון עורק התרדמה במודל עכברי לאחר הזרקה מחזיר את זרימת הדם לעורק מבלי להשפיע לרעה על פיזור החומר המוזרק. תיקון אתר ההזרקה מאפשר זריקות עוקבות דרך אותו עורק ומונע איסכמיה מוחית בזני עכברים חסרי מעגל שלם של וויליס.

הקלה על הזרקות חוזרות תוך קרוטיד במודלים של עכברים על ידי טכניקת תיקון אתר הזרקה חדשנית

זריקה תוך-מותנית מייצגת דרך מתן רלוונטית לתרגום למתן טיפול גנטי למערכת העצבים המרכזית. פרוטוקול סטנדרטי מקיף זה לזריקות תוך-מותניות בעכברים וחולדות בילודים, צעירים ובוגרים נועד להנחות חוקרים באימוץ טכניקה זו למחקרי ריפוי גנטי פרה-קליניים.

הזרקה תוך-מותנית של וקטורים של ריפוי גנטי למיקוד מערכת העצבים המרכזית בעכברים וחולדות

למד שיטות הזרקה תוך-חדרית ותוך-ורידית בעכברים נאונטליים. טכניקות אלו מאפשרות מסירה ממוקדת של סוכנים טיפוליים למערכת העצבים המרכזית וחציית מחסום הדם-מוח.

מסירה של סוכני טיפולית באמצעות Intracerebroventricular (ICV) ו תוך ורידי (IV) הזרקה של עכברים

גלה סרטונים נוספים