אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
אימונולוגיה
0 צפיות • 5:45 דק׳ • July 8th, 2025
תאי T רגולטוריים, או Tregs, הם תת-אוכלוסייה מיוחדת של תאי T המפעילה השפעות מדכאות חיסון כדי לתווך הומאוסטזיס של מערכת החיסון. Tregs מבטאים את סמני פני התא CD4, CD25 ו-Neuropilin 1, Nrp1, ואת גורמי השעתוק הגרעיני תיבת מזלג P3, Foxp3 ו-Helios.
כדי לבודד Tregs מבלוטות לימפה מנקזות לבלב של עכבר, או PDLNs, הנח רשת מתכת מעל צינור חרוטי. הנח את ה-PDLN על הרשת וטחן את הרקמה כדי לנתק אותה מכנית. הוסף מדיום מתאים מעל הרשת, ושטוף את התאים לתוך הצינור.
צנטריפוגה, הסרת תאים מתים ופסולת תאית. השעו מחדש את התאים הקיימים בתקשורת. העבירו את התאים דרך מכסה מסננת תאים המותאם לצינור תחתון עגול כדי לקבל תרחיף תא יחיד הומוגני, תוך ביטול כל גושי התאים שנותרו.
הוסף נוגדנים מצומדים נגד CD4, אנטי-CD25 ואנטי-Nrp1 מצומדים לפלואורוכרום. הנוגדנים נגד CD4 ואנטי-CD25 נקשרים לאנטיגנים שלהם על פני התא ב-Tregs. במקביל, אנטי-Nrp1 נקשר לקולטני Nrp1.
טפל בתאים עם מאגר קיבוע חדירה מתאים, קיבוע התאים וחדירה לממברנות התא והגרעין. הוסף נוגדנים מצומדים פלואורוכרום המכוונים ל-Foxp3 ו-Helios.
הממברנות החדירות מאפשרות לנוגדנים להיכנס לתאים ולהיקשר למטרות התוך-גרעיניות שלהם. נתח את התאים באמצעות ציטומטריית זרימה.
Tregs מאופיינים בביטוי חיובי על פני התא של CD4, CD25 ו-Nrp1, יחד עם גורמי השעתוק הגרעיני Foxp3 ו-Helios.
ראשית, הניח
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים