זיהוי של Aspergillosis ריאתי פולשני בחולים ממאירות Haematological באמצעות זרימת לרוחב, טכנולוגיה

המטרה הכוללת של הליך זה היא להדגים את השימוש במכשיר זרימה רוחבית לזיהוי מהיר של אנטיגן אבחון אספרגילוס בסרום אנושי ובנוזלי BAL. זה מושג על ידי מריחת דגימת הסרום או ה-BAL תחילה על יציאת השחרור של מכשיר הזרימה הרוחבית. השלב השני הוא לאפשר לתמיסה לנדוד לאורך הממברנה.

השלב הבא הוא לקבוע אם הבדיקה תקפה על ידי בחינת קו הבקרה הפנימי. השלב האחרון הוא לפרש את תוצאת הבדיקה על ידי בחינת קו הבדיקה. בסופו של דבר, מכשיר הזרימה הרוחבית משמש לאיתור נוכחות של אנטיגן אבחון אספרגילוס בנוזלי סרום או BAL.

האספרגילוס LFD יכול לשמש כבדיקה משלימה לאבחון אספרגילוזיס ריאתי פולשני. היתרון העיקרי של טכניקה זו על פני שיטות קיימות כמו אספרגילוס, גלקטו, מאנאן אנזים אימונואסי, פאנף, פונדל, בדיקת בטא גלוקן ובדיקת אספרגילוס PCR, הוא שמדובר בבדיקת אבחון מהירה הדורשת מתקני מעבדה והכשרה מינימליים. למרות שה-LFD פותח לאיתור מיני אספרגילוס, ניתן ליישם טכנולוגיית זרימה רוחבית גם לאיתור פתוגנים זיהומיים אחרים כגון cetosporium, fusarium ומיני riser.

על ידי שילוב נוגדנים חד-שבטיים ספציפיים לאורגניזמים אלה, הדגמה חזותית של שיטה זו היא קריטית. מכיוון שפרשנות של תוצאות LFD מחייבת היכרות עם פורמט הבדיקה כדי לאסוף סרום מדגימות דם לא מטופלות אפשר לדם להיקרש בארבע מעלות צלזיוס סרום ושטיפת סימפונות, או נוזלי BAL יש לאחסן כמינוס 20 מעלות צלזיוס לפני השימוש באחסון מכיוון שמגביל את הפוטנציאל לפירוק אנטיגן המטרה על ידי אחסון חופשי חוזר ונשנה של דגימות במהלך בדיקה חוזרת להכנת דגימות סרום ו-BAL לבדיקה, להפשיר דגימות בטמפרטורת החדר, ולאחר מכן להמשיך לערבב קרח ביסודיות על ידי מערבולת ולאחר מכן צנטריפוגה למשך דקה אחת ב-14,000 סל"ד לבדיקה שגרתית של דגימות אנושיות, יש לדלל את הסרום אחד לאחד עם מדיום תרבית רקמות לחלופין, ולנתק את אנטיגן המטרה מקומפלקסים חיסוניים בסרום. יש לדלל סרום אחד עד שניים עם PBS המכיל 4% חום EDTA למשך שלוש דקות באמבט מים רותחים וצנטריפוגה למשך חמש דקות של 14,000.סל"ד.

נוזלי BAL אנושיים אינם דורשים טיפולים מקדימים. דגימת BAL הופשרה מערבולת וצנטריפוגה היא דגימה מסודרת שניתן ליישם ישירות על מכשיר הזרימה הרוחבית. לצורך בדיקה, התקני הזרימה הרוחבית או LFD מאוחסנים בטמפרטורת החדר או 23 מעלות צלזיוס בהן הם יציבים למשך 12 חודשים.

כדי להתחיל בבדיקה, הוציאו את המכשירים מהשקיות שלהם והניחו על משטח ישר. בעזרת קצה פיפטה סטרילי, מרחו 100 מיקרוליטר של סרום שטופל מראש על יציאת השחרור של המכשיר תוך שניות. הנוזל צריך לנדוד על ידי פעולה נימית לאורך קרום התאית החנקנית בחלון התצפית.

באותו אופן, יש למרוח 100 מיקרוליטר של דגימת BAL מסודרת על יציאת השחרור של המכשיר. אפשר לבדיקה לפעול במשך 15 דקות בטמפרטורת החדר, ואז יש לרשום את תוצאות הבדיקה. אין להשאיר את הבדיקה יותר מ-15 דקות לפני רישום התוצאות.

מכיוון שהדבר עלול להטות את פרשנות התוצאה, תגובת שבוע לא תשתפר על ידי הארכת תקופת הדגירה. ה-LFD מורכב מקו בקרה פנימי המסומן באות C על בית הפלסטיק וקו בדיקה המצוין באות T.קו הבקרה צריך להופיע תמיד ללא קשר לאנטיגן אספרגילוס בדגימת הסרום או BAL. זה מראה שהבדיקה פעלה כהלכה אם אנטיגן האספרגילוס קיים בדגימת הסרום או ה-BAL.

קו הבדיקה יופיע גם תוך 15 דקות מיישום המדגם. עוצמות הבדיקה, תגובות ליים פרופורציונליות לריכוזי אנטיגן המטרה בדגימות הסרום וה-VAL. ההיבט המאתגר ביותר בהליך זה הוא הפרשנות של תוצאות הבדיקה.

יש לקרוא את תוצאות ה-LFD לאחר 15 דקות ואת תוצאת הבדיקה בהשוואה לדוגמא המייצגת המוצגת כאן, מוצגות באיור זה דוגמאות מייצגות של תוצאות LFD חלשות, חיוביות, חיוביות בינוניות וחיוביות חזקות עם דגימות BAL וסרום. כל קו בדיקה חיובי בדגימת הסרום, ללא קשר לעוצמה, יצביע על אספרגילוזיס פולשני או מחלת IPA עקב נוכחות של אנטיגן אספרגילוס במחזור הדם. תגובות BAL חיוביות ללא קשר לעוצמה יעידו על נביטה של נבגים והתפתחות של היפי פתוגני פוטנציאלי בריאות.

בהיעדר אנטיגן אספרגילוס, לא יופיע קו בדיקה והתוצאה נרשמת כשלילית. טבלה זו מציגה את תוצאות בדיקות LFD המשתמשות בנוזלי BAL מלוקמיה מיאלואידית חריפה או חולי ML שאובחנו על פי קריטריוני האבחון של הארגון האירופי למחקר וטיפול בסרטן וקבוצת המחקר של המכון הלאומי לאלרגיה ומחלות זיהומיות. בטבלה זו כלולים הנתונים הקליניים והפסיכולוגיים המתאימים, כמו גם תוצאות של בדיקת PCR ספציפית ל-ASPERIA עבור כל מטופל.

על פי הנחיות E-O-R-T-C-M-S-G משנת 2002, חולים 12, 13 ו-16 אובחנו עם IPA אפשרי על בסיס גורמי מארח וקריטריונים קליניים או חיוביים מהונדסים גנטית. על פי ההנחיות המתוקנות של E-O-R-T-C-M-S-G משנת 2008, גורמים מארחים וחיוביים מהונדסים גנטית בלבד או גורמים מארחים וקריטריונים קליניים בלבד לא יצביעו על זיהום פטרייתי פולשני אפשרי אלא אם כן הם מלווים בראיות תומכות מנתונים קליניים ומיקולוגיה בהתאמה. מטופל שישי אובחן עם IPA סביר על פי ההנחיות של 2002 ו-2008 בגלל גורמים מארחים, מאפיינים קליניים עיקריים וקטנים וחיוביות GM.

לבסוף, שימו לב שבעוד שבדיקת ה-LFD ובדיקת ה-PCR אינן נכללות כיום בהנחיות E-O-R-T-C-M-S-G בדגימות ה-BAL של חולים 6 ו-12, קיימת הסכמה חזקה בין שתי הבדיקות לבין בדיקת הגאלה המסחרית המצביעה על נוכחות של אנטיגן אספרגילוס וחומצת גרעין לאחר הליך זה. ניתן לבצע במקביל שיטות אחרות כמו בדיקת אמינו של אנזים פלה גלקטומאנן, PANF, בדיקת בטא-גלוקן פטרייתי או בדיקות PCR אספרגילוס כדי לאשר מחלה פטרייתית פולשנית. אל תשכח שעבודה עם סרום דם אנושי ונוזלי BAL עלולה להיות מסוכנת ביותר ומפעילי המכשיר צריכים תמיד להיות מחוסנים למחלות כמו הפטיטיס B ושחפת.