18 בנובמבר 2012
פרוטוקול זה מתאר תחזוקה וטיפול קבוע כדי לשמור על תנאים אופטימליים לגידול בעלי דג זברה. הסרטון מדגים את הפרוטוקול לתחזוקת מערכת, דיור רגיל, הזנה, רבייה, וגידול של זחלי דג זברה.
פרוטוקול זה מתאר את הטיפול והתחזוקה השוטפים של מעבדת דגי זברה. בשל העניין הגובר במחקר על דגי זברה, עולה גם הצורך להקים ולתחזק מתקן להשכנת דגי זברה. למרות שקיימת ספרות בנושא תחזוקת מעבדת דגי זברה, קיים חסר בפרוטוקול וידאו תמציתי.
סרטון זה מסביר את תחזוקת המערכת, ההאכלה, הרבייה וגידולם של זחלי דגי זברה. שלום, אני ABH מהפקולטה למדעי הרפואה באוניברסיטה. שלום, אני Manchi מ-Thee Institution.
היום נדגים לכם את הטיפול והתחזוקה השוטפים של מעבדת דגי זברה. דגי הזברה הופכים לנפוצים במחקרים גנטיים, פרמקולוגיים והתנהגותיים. בשל קלות התחזוקה וההתפתחות המהירה שלהם, הם ניתנים למניפולציות גנטיות בקלות ומתאימים לסריקת תרופות בהיקף רחב.
קוד חלק זה מספק רעיונות לגידול דגי זברה עבור משתמשי דגים וחוקרים השוקלים הקמה של מתקן דגים חדש. בואו נתחיל. מספר חברות מספקות מערכות לדגים, אך אנו משתמשים במערכות של aquatic habitats.
במעבדה שלנו, דגי זברה נשמרים בטמפרטורה של 26 עד 28.5 °C ובמחזור אור-חושך של 14 עד 10 שעות. דגי הזברה נשמרים במערכת סירקולציה, המסננת ומאווררת את מי המערכת באופן רציף. כדי לשמור על איכות המים הנדרשת לסביבה מימית בריאה, המערכת עושה שימוש בסט של מסננים מסוגים שונים בתוך המערכת שלנו.
מים מהמיכלים עוברים דרך רפידת סינון, פילטר קניסטר (canister filter), פילטר ביולוגי, פילטר פחם פעיל ופילטר UV לפני שהם מוסבים חזרה אל המיכל. במערכת לדגי זברה נעשה שימוש במים ללא כלור או במים שעברו יישון. ניתן להסיר כלור מהמים על ידי יישון למשך 48 שעות לפחות.
יש לבדוק מדי יום את ה-pH של מי המערכת ולשמור עליו בטווח שבין 6.8 ל-7.5. יש לנקות את מיכלי הדגים באופן קבוע באמצעות סודיום ביקרבונט. כדי לנקות מיכל דגים, סגרו את זרימת המים למיכל זה, רוקנו את עודפי המים על ידי הטיית המיכל לאחור והוציאו את המיכל מהמערכת בזהירות.
הכינו מיכל נקי ומלאו אותו במי מערכת. העבירו בזהירות את הדגים למיכל זה באמצעות רשת לדגים. סגרו את המכסה והחזירו בזהירות את תג השם של המיכל.
הנח את המכל במערכת. החזר את הצינור אל המכל והפעל את אספקת המים. חטא את רשת הדגים ואת המכל באמצעות 70% ethanol.
שטוף במים והנח להתייבש לפני השימוש החוזר. יש לבדוק ולהחליף את המסננים של מערכת הסירקולציה באופן קבוע כדי להבטיח את תקינות פעולתם.
את רפידת הסינון של 120 micron בודקים וממקמים מחדש לכיוון זרימת המים מדי יום לפני החלפתה. יש להחליף את מסנן המכל (canister filter) מדי שבוע. כדי להחליף את מסנן המכל, יש להסิירו באמצעות מפתח ברגים או בידיים.
הניחו יריעת פלסטיק או מגבת מתחת למכשיר כדי למנוע נזילת מים. הכניסו מיכל חדש, מסנן, והתקינו את היחידה בחזרה במערכת. הדקו בזהירות תחילה בידיים ולאחר מכן באמצעות מפתח ברגים.
במידת הצורך, יש להחליף את מסנן הפחם אחת לשבועיים. כדי להחליף את מסנן הפחם, הסירו אותו בזהירות. באמצעות מפתח ברגים, השליכו את הפחם הפעיל ממסנן הפחם והחליפו אותו בפחם פעיל חדש.
החזירו את מחזיק הפחם למקומו והכניסו אותו חזרה ליחידת הסינון. התקינו את יחידת הסינון חזרה במערכת. הפעילו את המערכת ובדקו אם המים זורמים אל המסנן.
יש לנקות את המסנן הביולוגי מדי שישה חודשים. כדי להחליף את המסנן הביולוגי, הוצא את המסנן מהמערכת. שחרר את הלחץ מהמסנן על ידי לחיצה על כפתור שחרור הלחץ.
שחררו את המסנן והסירו את המכסה. רוקנו את התוכן לכלי נפה כדי להפריד את ה-Cy Oex מהמים. אם ה-Cy Oex מלוכלך מאוד, החליפו אותו.
מלאו את המסנן ב-cy ax חדש. מלאו את היחידה במים של המערכת. סגרו את מכסה המסנן, התקינו מחדש את היחידה והפעילו אותה.
מסנני UV משמשים לשליטה במזהמים ביולוגיים ויש להחליפם מדי תשעה עד 10 חודשים. ניתן להזין דגי זברה במזון יבש או במזונות חיים כגון ארטמיה (brine shrimps); ביצי ארטמיה זמינות בחנויות חיות מקומיות וניתן להבקיען במעבדה על ידי ביצוע השלבים הפשוטים המתוארים כאן. המיסו מלח ים אדום במי המערכת כדי להכין תמיסה של 30 עד 35 גרם לליטר.
מלאו את מדגרה של ארטמיה במי מלח והוסיפו ביצי ארטמיה בריכוז של 1.2 כפות לליטר. אווררו את המדגרה בעוצמה באמצעות משאבת אוויר והשאירו את ביצי הארטמיה להבקיע למשך כ-48 שעות. הסירו את צינור האוויר והניחו לתרבית לשקוע למשך ארבע עד חמש דקות.
חרטית המלח המופרית נאספת בתחתית המדגרה. באמצעות הברז שבתחתית המדגרה, השליכו את הזרימה הראשונה, המכילה ביצים לא מופרות. לאחר מכן, אספו את חרטית המלח המופרית. הפרידו את חרטית המלח מהמים המלוחים.
השתמשו ברשת לאיסוף ארטמיות. שטפו את הארטמיות לתוך מכל. באמצעות מי מערכת, הארטמיות יצטברו בריכוז גבוה בתחתית המכל והן יהיו מוכנות להאכלת דגי זברה. האכילו את הדגים בארטמיות באמצעות פיפטה או טפטפת.
כמות המזון המוגשת תלויה בגודל האוכלוסייה בכל מיכל בנפרד. לאחר הזרקת המזון למים, הדגים הרעבים שוחים כדי לתפוס את הארטמיה, דבר החשוב עבור הפעילות הגופנית הסדירה שלהם. ניתן לבצע האכלה יבשה באמצעות מפזרי מזון לדגים עבור סביבות מימיות, או באמצעות כף פשוטה.
דגי זברה מתחילים להתרבות עם עליית האור. ניתן להשיג ביצים באמצעות רבייה בתוך מתקן (inta) או רבייה בזוגות. בעוד שרבייה בתוך מתקן היא יעילה יותר מבחינת כוח אדם ומשמשת לאיסוף עוברי שגרתי, רבייה בזוגות מועדפת כאשר יש לסנן גנים או מוטציות; לצורך רבייה בתוך מיכל, הרכיבו את מתקן הרבייה והנחילו אותו לאט אל תוך המיכל.
לאחר הדלקת האור, השאירו את מערך הרבייה בתוך המיכל למשך כ-15 דקות כדי לאפשר לדגים להתרבות, לפני הוצאת מערך הרבייה מהמיכל ואיסוף הביצים. מערך רבייה זוגי מוקם בשעות אחר הצהריים המאוחרות על ידי הרכבת מיכל הרבייה ומילויו במי המערכת. העבירו נקבה אחת וזכר אחד לצדדים מנוגדים של המיכל.
ניתן להבחין בין הנקבות לזכרים בשל בטנן הגדול יותר. הסר את המחיצה בבוקר למחרת. זמן קצר לאחר עליית האור, השאר את הדגים להתרבות ללא הפרעה במשך 20 דקות או עד להטלה של מספר מספיק של עוברי דגים בתחתית המיכל.
לאחר הההתרבייה, החזירו את הדגים לאקווריומים שלהם. אספו את הביצים באמצעות מסננת. שטפו את העוברים ביסודיות.
עם מי המערכת. העבירו את העוברים לצלוחית פטרי על ידי שטיפת המסננת עם תווך עוברים. ניתן לצפות בעוברים תחת מיקרוסקופ.
יש להפריד בין עוברים לא מופרים לעוברים מופרים באמצעות מחט ופיפט. לאחר הפרדת הביצים המופרות מהביצים שאינן מופרות, יש לשמור אותן באינקובטור בטמפרטורה של כ-28.5 °C למשך 72 שעות עד לבקיעת הזחלים. כעת הזחלים יצאו מה-CORs ושוחים בחופשיות.
יש להאכיל את הזחלים החל מחמישה ימים לאחר ההפריה ולהחזיקם במים עומדים למשך מספר ימים לפני העברתם למערכת. העבירו את הזחלים בעדינות למכל המכיל מחיצה בגודל קטן של כ-300 עד 400 microns. לאחר 14 ימים, ניתן להעביר את מכלי הזחלים למדפי המערכת ולספק להם זרימה קטנה של מים במחזור.
יש להשתמש במחיצות בגדלים שונים בהתאם לגודל הזחלים והדגים הבוגרים. בדרך כלל נדרשים שלושה חודשים כדי שהעוברים יתפתחו לבוגרים בשלים מבחינה מינית. תודה שצפיתם בתפריט, ובהצלחה בניסוייכם.
פרוטוקול זה מפרט את התחזוקה השוטפת והטיפול הנדרשים לגידולה אופטימלית של דגי זברה. הוא כולל נהלים מפורטים לתחזוקת המערכת, דיור, האכלה, רבייה וגידול של זחלי דג הזברה.
ביסוס פרוטוקולים חסונים לגידול דגי זברה תומך ביצירת מודלים פרה-קליניים מהימנים למחקר פרמקולוגי וגנטי. נהלי דיור, האכלה ורבייה סטנדרטיים מפחיתים את השונות הביולוגית ומשפרים את השחזוריות של הנתונים בזרימות עבודה של שלבי הגילוי המוקדמים. הדבר מאפשר סריקת פנוטיפ עקבית ותיקוף מטרות במערכות הרלוונטיות למחלה.
גידול דגי זברה משתלב ברצף הגילוי, החל מתיקוף מוקדם של מטרות דרך זיהוי מובילים ואפיון פרה-קליני, על ידי אספקת פלטפורמה ביולוגית יציבה וניתנת להרחבה.