November 18th, 2012
פרוטוקול זה מתאר תחזוקה וטיפול קבוע כדי לשמור על תנאים אופטימליים לגידול בעלי דג זברה. הסרטון מדגים את הפרוטוקול לתחזוקת מערכת, דיור רגיל, הזנה, רבייה, וגידול של זחלי דג זברה.
פרוטוקול זה מתאר את הטיפול והתחזוקה השוטפים של מעבדת דגי זברה. בשל העניין העודף במחקר דגי זברה, הולך וגובר הצורך בהקמה ותחזוקה של מתקן דיור לדגי זברה. למרות שקיימת ספרות לתחזוקה של מעבדת דגי זברה, חסר פרוטוקול וידאו תמציתי.
סרטון זה מסביר את תחזוקת המערכת, האכלה, גידול וגידול זחלי דג הזברה. היי, אני ABH מבית הספר למדעי הרפואה באוניברסיטה. היי, אני מנצ'י ממוסד Thee.
היום אנו הולכים להראות לכם טיפול ותחזוקה שוטפים של מעבדת דג זברה. דג הזברה הופך פופולרי במחקר גנטי, פרמקולוגי והתנהגותי. בשל קלות התחזוקה הגבוהה וההתפתחות המהירה שלהם, הם מתאימים מאוד לאפנון גנטי ומתאימים לבדיקת תרופות לשבץ מוחי.
קוד חלק זה מספק רעיונות לגידול דגי זברה לאותם משתמשי דגים ולחוקרים ששוקלים להקים מתקן דגים חדש. אז בואו נתחיל. מספר חברות מספקות מערכות דגים, אך אנו משתמשים במערכות מבתי גידול מימיים.
במעבדה שלנו, דגי זברה מוחזקים בטמפרטורה של 26 עד 28.5 מעלות צלזיוס ומחזור אור עד חושך של 14 עד 10. דגי זברה מוחזקים במערכת מחזור, המסננת ומאווררת באופן רציף את מי המערכת. כדי לשמור על איכות המים הנדרשת לסביבה מימית בריאה, המערכת משתמשת במערכת מסננים מסוגים שונים בתוך המערכת שלנו.
מים מהמיכלים עוברים דרך כרית סינון, מסנן מיכל, מסנן ביולוגי, מסנן פחם פעיל ומסנן UV לפני שהם מוזרמים חזרה למיכל. מים נטולי כלור או מיושנים משמשים במערכת דג הזברה. ניתן להסיר כלור במים על ידי הזדקנות של 48 שעות לפחות.
בדוק את ה-pH של מי המערכת מדי יום ושמור על בין 6.8 ל-7.5. באמצעות נתרן ביקרבונט, יש לנקות את מיכלי הדגים באופן קבוע. כדי לנקות מיכל דגים, סגור את זרימת המים למיכל זה, נקז עודפי מים על ידי הטיית המיכל לאחור והסר את המיכל בזהירות מהמערכת.
הגדר מיכל נקי ומלא אותו במי מערכת. העבירו בזהירות את הדגים למיכל זה בעזרת רשת דייגים. סגור את המכסה והחלף את שם המיכל tag בזהירות.
הנח את המיכל במערכת. הכנס את הצינור בחזרה למיכל והפעל את אספקת המים. לטהר את רשת הדגים והמיכל עם אתנול 70%.
שוטפים במים ונותנים לו להתייבש. לפני שימוש חוזר. יש לבדוק ולהחליף מסננים של מערכת המחזור באופן קבוע כדי להבטיח את תפקודם התקין.
רפידת המסנן של 120 מיקרון נבדקת וממוקמת מחדש לכיוון זרימת המים מדי יום לפני החלפתה. יש להחליף את מסנן המיכל מדי שבוע. כדי להחליף את מסנן המיכל, הסר אותו בעזרת מפתח ברגים או ידיים.
הניחו סדין פלסטיק או מגבת למטה כדי למנוע שפיכת מים. הכנס מיכל חדש, סנן והכנס את היחידה בחזרה למערכת. מהדקים בזהירות בידיים ובעזרת מפתח ברגים.
במידת הצורך יש להחליף את מסנן הפחמן אחת לשבועיים. כדי להחליף את מסנן הפחמן, הסר אותו בזהירות. עם מפתח ברגים בידיים, השליכו את הפחם הפעיל מהפילטר והחליפו אותו בפחם פעיל חדש.
החזר את מחזיק הפחמן והכנס אותו בחזרה ליחידת המסנן. הכנס את יחידת המסנן בחזרה למערכת. הפעל את המערכת ובדוק אם המים זורמים למסנן.
יש לנקות את המסנן הביולוגי כל חצי שנה. כדי להחליף את המסנן הביולוגי, הסר את המסנן מהמערכת. שחרר את הלחץ מהמסנן על ידי לחיצה על כפתור שחרור הלחץ.
נתק את המסנן והסר את המכסה. רוקנו את התכולה למיכל ניפוי כדי להפריד את ה-Cy Oex מהמים. אם ה- Cy Oex מלוכלך מאוד, החלף אותו.
מלאו את המסנן בגרזן cy החדש. מלא את היחידה למי מערכת. סגור את מכסה המסנן והחזר את היחידה והפעל.
מסנני UV משמשים לשליטה במזהמים ביולוגיים ויש להחליפם כל תשעה עד 10 חודשים. ניתן להאכיל דגי זברה במזון יבש או במזון חי כגון שרימפס מלח, שרימפס מלח, ביצים זמינות בחנויות חיות מקומיות וניתן לבקוע אותן במעבדה על ידי ביצוע השלבים הפשוטים המתוארים כאן. ממיסים מלח ים סוף במי המערכת כדי ליצור תמיסה של 30 עד 35 גרם לליטר.
ממלאים את טלאי השרימפס במי המלח ומוסיפים את ביצי השרימפס בריכוז של 1.2 כפות לליטר. אווררו את הבקיעה במרץ בעזרת משאבת אוויר והשאירו את ביצי השרימפס המלח להפריה במשך כ- 48 שעות. הסר את צינור האוויר ותן לתרבית להתיישב במשך ארבע עד חמש דקות.
שרימפס המלח המופרי מתאספים בתחתית המדגר באמצעות הברז בתחתית המדגרת, משליכים את הזרימה הראשונה, המכילה ביצים לא מופרות. ואז אוספים את שרימפס המלח המופרי. הפרד את שרימפס המלח מהמים המלוחים.
שימוש ברשת איסוף שרימפס מלח. שוטפים את שרימפס המלח למיכל בעזרת מי מערכת, שרימפס המלח נמצאים בריכוז גבוה בתחתית המיכל וכעת מוכנים להאכלת דגי זברה. האכילו את שרימפס המלח לדגים באמצעות צינור או טפטפת.
כמות המזון המחולקת תלויה בגודל האוכלוסייה של טנקים בודדים. לאחר הזרקת מזון למים, דגים רעבים שוחים כדי לתפוס את שרימפס המלח, החשוב לפעילות הגופנית הסדירה שלהם. האכלה יבשה יכולה להתבצע באמצעות בתי גידול מימיים, מתקן מזון לדגים או באמצעות כף פשוטה.
דגי זברה מתחילים רבייה עם תחילת האור. ניתן להשיג ביצים באמצעות גידול אינטה או זוגי. בעוד שגידול אינטה יעיל יותר בעבודה ומשמש לאיסוף עוברים רגיל, נשימה זוגית עדיפה כאשר יש לסנן גנים או מוטציות בגידול טנקים, להרכיב את המגדל במיכל ולצנוח לאט לתוך מיכל.
לאחר תחילת האור, השאירו את הרבייה מוגדרת למשך כ-15 דקות במיכל כדי לאפשר לדג להזדווג לפני הוצאת המגדל מהמיכל ואיסוף הביצים. גידול אגסים נבנה בשעות אחר הצהריים המאוחרות על ידי הרכבת מיכל הרבייה ומילויו במי מערכת. העבירו נקבה אחת וזכר אחד לצדדים מנוגדים של המיכל.
ניתן להבחין בין נקבות לזכרים בגלל הבטן הגדולה יותר שלהם. הסר את המחיצה למחרת בבוקר. זמן קצר לאחר תחילת האור, השאירו את הדג להזדווג מתחת להפרעה למשך 20 דקות או עד שמספר מספיק של עוברים מונחים בתחתית המיכל.
לאחר הרבייה, החזירו את הדגים למיכלים שלהם. אוספים את הביצים בעזרת מסננת. שוטפים היטב את העוברים.
עם מי מערכת. העבירו את העוברים לצלחת פטרי על ידי שטיפת המסננת בעובר. ניתן לצפות בעוברים בינוניים במיקרוסקופ.
יש להפריד עוברים לא מופרים מעוברים מופרים באמצעות מחט ופיפט. לאחר הפרדת הביצים המופרות מהביצים הלא מופרות, הן נשמרות באינקובטור בסביבות 28.5 מעלות צלזיוס למשך 72 שעות עד לבקיעת הזחל. עכשיו הזחלים מחוץ ל-COR ושוחים בחופשיות.
יש להאכיל את הזחלים חמישה ימים לאחר ההפריה ולשמור אותם במים עומדים במשך כמה ימים לפני העברתם למערכת. העבירו את הזחלים בעדינות למיכל המכיל מבלבל בגודל קטן של כ-300 עד 400 מיקרון. לאחר 14 יום ניתן לגנוז מיכלי זחלים למערכת ולספק להם זרם קטן של מי מחזור.
יש להשתמש בבלבול בגדלים שונים בהתאם לגודל הזחלים והדגים הבוגרים. בדרך כלל לוקח שלושה חודשים עד שהעוברים מתפתחים לבוגרים מינית. תודה שצפיתם בתפריט, ובהצלחה על הניסויים שלכם.
פרוטוקול זה מתאר את התחזוקה והטיפול הרגילים הנדרשים למגדל דגי זברה אופטימלי. הוא כולל נהלים מפורטים לתחזוקת המערכת, דיור, האכלה, רבייה וגידול זחלי דגי זברה.
Establishing robust zebrafish husbandry protocols supports reliable preclinical models for pharmacological and genetic research. Standardized housing, feeding, and breeding practices reduce biological variability and improve data reproducibility in early discovery workflows. This enables consistent phenotypic screening and target validation in disease-relevant systems.
Zebrafish husbandry integrates into the discovery continuum from early target validation through lead identification and preclinical profiling by providing a stable, scalable biological platform.