MITO permette di rilevare sensibile delle interazioni transienti e stabili tra proteine che sono espresse nel modello organismo Saccharomyces cerevisiae. E 'stato applicato con successo allo studio esogeni e lievito proteine integrali di membrana allo scopo di individuare i propri partner che interagiscono in modo elevato throughput.
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Articolo metodologico
Split-Ubiquitina membrana a base di lievito Due-Hybrid (MITO) Sistema: un potente strumento per identificare interazioni proteina-proteina
In questo articolo
Sommario
Abstract
L'importanza fondamentale biologici e clinici di proteine di membrana integrali portato allo sviluppo di un lievito-based per la high-throughput identificazione di interazioni proteina-proteina (PPI) per la full-length proteine transmembrana. A tal fine, il nostro laboratorio ha sviluppato il split-ubiquitina lievito base a membrana a due ibridi (MITO) del sistema. Questa tecnologia consente per la rilevazione delle interazioni proteina sensibile transitoria e stabile con
Protocollo
1. Informazioni di base
Interazioni proteina-proteina (PPI) sono i mattoni fondamentali coinvolti nel governare tutti i processi cellulari. Di conseguenza, è essenziale che tutte le interazioni sono strettamente regolati per mantenere l'omeostasi cellulare, come un cambiamento di questo equilibrio biologico gioca spesso un ruolo nella malattia e la trasformazione delle cellule tumorali. Proteine di membrana associati sono tra la classe più importante di proteine biologicamente in quanto possono avviare complesse cascate di segnalazione, e mediare sia l'importazione e l'esportazione di varie molecole, tra cui i farmaci, che è stato di im....
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Discussione
MITO è il primo sistema ad alto rendimento che permette l'identificazione delle interazioni tra full-length proteine di membrana e citosoliche o legata alla membrana partner. E 'stato utilizzato per lo studio delle proteine di membrana di una serie di organismi [3-7]. Vi sono, tuttavia, i dettagli specifici che potrebbero dover essere esaminato per assicurare la proteina d'interesse è riconducibile a studiare con MITO.
Molte proteine di membrana sono diretti alla membrana p.......
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Dichiarazioni
Igor Stagljar è una co-fondatore di DualSystems Biotech, in Svizzera.
Ringraziamenti
Vorremmo ringraziare Edmonds Alba per una lettura critica di questo manoscritto. Il laboratorio Stagljar è sostenuto da fondi della Fondazione canadese per l'innovazione (CFI), il Canadian Institute for Health Research (CIHR), la Fondazione cardiache e ictus, la Canadian Cancer Society, e Novartis.
....Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Polietilene glicole (PEG3350) | BioShop Canada | PEG335 | |
| Acetato di litio diidrato | BioShop Canada | LIA001 | |
| X-Gal (5-Bromo-4-cloro-3-indolil-β-D-galattopiranoside) | BioShop Canada | XGA001 | |
| N,N-dimetilformammide | BioShop Canada | DMF 451 | |
| 3-ammino-1,2,4-triazolo (3-AT) | BioShop Canada | ATT124 | |
| Fosfato disodico | BioShop Canada | SPD307 | |
| Fosfato monosodico | Fisher Scientific | BP329-500 | |
| DNA di sperma di salmone | VWR international | CA80601-120 | |
| D-Glucosio | BioShop Canada | GLU501 | |
| Brodo LB LENOX | BioShop Canada | LBL405 | |
| Base di azoto per lieviti | BioShop Canada | YNB406 | |
| Estratto di lievito | BioShop Canada | YEX401 | |
| Peptone | BD Biosciences | 211677 | |
| Bio-Triptone | BioShop Canada | TRP402 | |
| Solfato di adenina | BioShop Canada | ADS201 | |
| L-Uracile | BioShop Canada | URA241 | |
| L-Treonina | BioShop Canada | THR002 | |
| L-Istidina | BioShop Canada | HIS200 | |
| L-Metionina | BioShop Canada | MET222 | |
| L-Valina | BioShop Canada | VAL201 | |
| L-Fenilalanina | BioShop Canada | PHA302 | |
| L-Isoleucina | BioShop Canada | ISO910 | |
| L-Tirosina | BioShop Canada | TYR333 | |
| L-Leucina | BioShop Canada | LEU222 | |
| L-Arginina | BioShop Canada | ARG006 | |
| L-Triptofano | Fisher Scientific | BP395-100 | |
| L-Lisina | BioShop Canada | LYS101 | |
| L-Alanina | Fisher Scientific | BP369-100 | |
| Agar | BioShop Canada | AGR001 | |
| Perle di vetro al sodio e calce | Biospec Products | 11079105 | |
| Cloruro di sodio | BioShop Canada | SLD002 |
Riferimenti
- Stagljar, I., Fields, S. Analysis of membrane protein interactions using yeast-based technologies. Trends Biochem Sci. 27 (11), 559-563 (2002).
- Iyer, K. Utilizing the split-ubiquitin membrane yeast two-hybrid s....
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Ristampe e permessi
