Questo articolo viene illustrato due metodi molto diversi di iniezione: 1) nel cervello (intracerebroventricolare) e 2) sistemica (endovenosa) per introdurre gli agenti terapeutici nel sistema nervoso centrale di topi neonati.
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Articolo metodologico
Consegna di agenti terapeutici attraverso intracerebroventricolare (ICV) e per via endovenosa (ev) nei topi
In questo articolo
Sommario
Abstract
Nonostante il ruolo protettivo che la barriera sanguigna del cervello gioca nella protezione del cervello, che limita l'accesso al sistema nervoso centrale (SNC), che il più delle volte si traduce in mancanza di terapie potenziali previsti per le malattie neurodegenerative 1,2. Malattie neurodegenerative come l'atrofia muscolare spinale (SMA), in cui i neuroni motori inferiori sono interessati, possono trarre grandi vantaggi di introdurre gli agenti terapeutici nel sistema nervoso centrale. Lo scopo di questo video è quello di dimostrare due paradigmi diversi di iniezione per fornire materiali terapeutici in topo neonato subito dopo la nascita. Uno di questi metodi è l'iniezione direttamente nel cervello ventricoli laterali (intracerebroventricolare) che si traduce in consegna dei materiali nel sistema nervoso centrale attraverso il fluido cerebrospinale 3,4. Il secondo metodo è una iniezione vena temporale (per via endovenosa) che possono introdurre terapie diverse nel sistema circolatorio, con conseguente consegna sistemiche tra cui il sistema nervoso centrale 5. Trasduzione diffusa del sistema nervoso centrale è realizzabile se un vettore virale appropriato e sierotipo virale viene utilizzato. Visualizzazione e l'utilizzo della vena temporale per l'iniezione è possibile fino al giorno dopo la nascita 6. Tuttavia, se il materiale consegnato è destinato a raggiungere il sistema nervoso centrale, queste iniezioni dovrebbero avvenire mentre la barriera emato-encefalica è più permeabile per il suo status immaturi, preferibilmente prima del giorno post-natale 2. La pienamente sviluppato barriera emato-encefalica limita fortemente l'efficacia della consegna per via endovenosa. Entrambi i sistemi di consegna sono semplici ed efficaci, una volta l'attitudine chirurgica è raggiunto. Essi non richiedono dispositivi chirurgici ampio e può essere eseguita da una sola persona. Tuttavia, queste tecniche non sono senza sfide. Le piccole dimensioni dei post-natale giorno 2 cuccioli e le aree successive bersaglio di piccole dimensioni può rendere le iniezioni di difficile esecuzione e inizialmente difficili da replicare.
Protocollo
1. Iniezione intracerebroventricolare
- Il primo passo è la preparazione delle soluzioni madre l'iniezione; queste soluzioni sono vettore virale, DNA plasmidico, droghe, e deve essere iniettato in condizioni sterili.
- Mescolare un titolo desiderato di vettore virale (5-7 totale mL) con il 0,05% w / v in PBS tripano blu per la visualizzazione del sito di iniezione.
- Soluzione di DNA plasmidico (5 in totale l mL) contiene D-(+)-glucosio al 20% (w / v) (1 mL), trypan blu (0,05%) PBS (1 mL), il plasmide (~ 5 ~ g / L ~ ) (2 ~ L), e 2,5 kDa lineare PEI omopolimero (150 mm) (1 ~ L).
- Immobilizzare il PND 2 neonati tramite crio-anestesia p....
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Discussione
La ricerca che utilizza modelli murini di malattie spesso richiede la somministrazione di farmaci o altre sostanze per neonati. In questo video, dimostriamo il passo per passo le procedure che coinvolgono due tipi di strategie di iniezione che possono essere utilizzati per indirizzare il sistema nervoso centrale: 1) iniezione diretta nel sistema nervoso centrale che utilizza intracerebroventricolare (ICV) di iniezione, oppure 2) intese a promuovere l'iniezione IV / temporali vena facciale. I tempi di queste iniezion.......
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Dichiarazioni
Nessun conflitto di interessi dichiarati.
Ringraziamenti
Gli autori desiderano ringraziare John Marston esperto per la zootecnia e il Dott. Marco A. Passini di assistenza tecnica nelle fasi iniziali di questo progetto. Questo lavoro è stato finanziato dalla sovvenzione da parte del National Institutes of Health a CLL (R01NS41584; R01HD054413).
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Nome del reagente | Azienda | Numero di catalogo | Commenti (opzionale) |
| Green Food Dye | McCormick | n / a | Devono essere filtrati |
| Hamilton siringa di vetro (100 mL) | Sigma Aldrick | 20702 | |
| LuerMxF filo di nylon Style Bianco | Parti piccole, Inc. | VPLF-LC78-1-25 | |
| Belle calibro aghi ipodermici | Bottone automatico | 7111 | Dimensioni: 33 (SWG) x ¼ "(6,35 mm) |
| Vista Transilluminatore Wee | Respironics | 1017920 | |
| 2.25X fascia Magnifier | MagEyes | Modello n. 5 | Seleziona ingrandimento per soddisfare le preferenze individuali |
Riferimenti
- Blanchette, M., Fortin, D. Blood-brain barrier disruption in the treatment of brain tumors. Methods Mol. Biol. 686, 447-463 (2011).
- Foust, K. D., Kaspar, B. K. Over the barrier and through the blood: to CNS delivery we go. Cell Cycle. 24, 4017-4018 (2009).
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Ristampe e permessi
