Questo articolo descrive una metodologia dettagliata dell'utilizzo di una gomma di silicone radiopaco base di piombo per irrorare il vasculature murino per la quantificazione di diametro aortico in un modello murino di aneurisma e dissezione.
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Articolo metodologico
Analisi quantitativa di Micro-CT di Aortopathy in un modello murino di indotta da β-aminopropionitrile aneurisma e dissezione
In questo articolo
Sommario
Abstract
Dissezione e aneurisma aortico è associate a significativa morbidità e mortalità nella popolazione e può essere altamente letale. Mentre esistono modelli animali di malattia aortica, in vivo imaging del sistema vascolare è stato limitato. Negli ultimi anni, micro-automatizzato la tomografia (micro-CT) è emerso come una modalità preferita per l'imaging di piccoli e grandi vasi sia in vivo ed ex vivo. In concomitanza con un metodo di fusione vascolare, abbiamo con successo usato micro-CT per caratterizzare la frequenza e la distribuzione di patologia aortica in topi C57/Bl6 β-aminopropionitrile-trattati. Limiti tecnici di questo metodo includono variazioni nella qualità della perfusione introdotta dalla scarsa preparazione degli animali, l'applicazione di metodologie adeguate per la quantificazione di dimensione del vaso e la non-sopravvivenza di questa procedura. Questo articolo descrive in dettaglio una metodologia per la perfusione intravascolare di una gomma di silicone radiopaco a base di piombo per la caratterizzazione quantitativa del aortopathy in un modello murino di aneurisma e dissezione. Oltre alla visualizzazione di patologia aortica, questo metodo può essere utilizzato per l'esame di altri letti vascolari in vivo o letti vascolari rimossi post mortem.
Introduzione
L'incidenza della dissezione aortica è di 3 casi per 100.000 all'anno1. Dissezione aortica e malattie aneurismatiche rappresentano oltre 10.000 morti negli Stati Uniti ogni anno, pari a 1-2% di tutte le morti in paesi occidentali2. Dissezione aortica viene avviata da una lacrima nello strato intimal della nave con la propagazione del sangue attraverso gli strati della parete aortica sotto pressioni fisiologiche. Pressioni elevate paziente polso sono associate con un'incidenza aumentata della dissezione e complicazioni. Sollecitazione di taglio della parete aumentato è associato con l'espansione di parete aortica che cond....
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Protocollo
I protocolli per la gestione degli animali erano approvati dal comitato di uso dell'Università del Maryland, Baltimora (numero di protocollo animale 0116024) e istituzionali Animal Care e condotto secondo gli standard internazionali di AAALAC.
1. preparazione dei reagenti
-
Eparina
- Diluire 250 µ l di 1000 U/mL eparina solfato in 50 mL di fosfato tampone salino per rendere una concentrazione finale di 5 U/mL.
- Caldo al eparinizzata (5 U/mL) tampone fosfato salino, che sostituirà il sangue nel sistema vascolare in un bagnetto ad acqua settato a 37 ° C.
- Preparare la pompa di pressione co....
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Risultati
Al fine di valutare questo protocollo, 20 topo maschio adulto, del fondo misto come descritto in precedenza19 e del 20-30 settimane di età, con o senza trattamento BAPN, sono stati irrorati con una gomma di silicone radiopaco a base di piombo (Vedi il tabella materiali ) utilizzando il protocollo di cui sopraelencato. Hanno subito l'esame di micro-CT il giorno seguente (Figura 1 e
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Discussione
Micro-CT imaging consente di fornire ricostruzioni altamente dettagliate e tridimensionale di patologia vascolare in modelli animali. Attraverso l'uso di media di contrapporre-aumentata intravascolare, tessuti molli, non potenziate, come il lume di un vaso sanguigno, possono essere differenziati da quelli che intende potenziare. Mentre laser Doppler, microangiography, angiografia a risonanza magnetica, l'istologia con microscopia confocale, o due-fotone può essere utilizzato per valutare letti vascolari, essi in genere c.......
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Dichiarazioni
Gli autori non hanno nulla a rivelare.
Ringraziamenti
Vorremmo ringraziare Mark Smith per la sua assistenza con formazione immagine radiografica. Questo lavoro è sostenuto dalla sovvenzione di T32 NIH per la ricerca interdisciplinare nella malattia cardiovascolare (BOA), l'associazione americana di cuore (SMC) e il NIH R35 Grant (DKS).
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Microfil | Flow Tech, Inc | MV-122 | Usiamo il giallo, un colore diverso può essere ordinato a piacere. Il kit include il composto MV, il diluente MV e l'agente indurente MV. |
| Eparina (1000 U/mL) | Sagent Pharmaceuticals | 25021-400-10 | |
| Soluzione salina tamponata con fosfato | Corning | 21-031-CV | |
| Isoflurane | Vet One, MWI | 502017 | |
| 3-Aminopropionitrile fumarato sale | Sigma-Aldrich | A3134 | |
| Pompa a siringa singola | Fisher Scientific | 14-831-200 | |
| calibro 27 ago per vene del cuoio capelluto Exel | Int | 26709 | 27G x 3/4", tubo da 12" |
| Inveon Scanner Micro-CT | Siemens Medical Solutions | ||
| Osirix MD | Pimxmeo SARL | Versione 8.0.2 | |
| Inveon Research Workplace | Siemens Medical Solutions | Versione 4.2 | |
| Roditore Chow | Harlan Teklad | 2018sx |
Riferimenti
- Meszaros, I., et al. Epidemiology and clinicopathology of aortic dissection. CHEST. 117 (5), 1271-1278 (2000).
- Kochanek, K. D., et al. Deaths: final data for 2009. National Vital Statistics Reports. 60 (3), 1-116 (2011).
- Li, J. S., Li, H. Y., Wang, L., Zhang, L.,....
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Ristampe e permessi
