Waiting
Elaborazione accesso...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Medicine
Click here for the English version

Medicine

ऑर्थोटोपिक लिवर प्रत्यारोपण के चूहे मॉडल में धमनी पुनर्संबंध के बाद कम जटिलताओं

Published: November 7, 2020 doi: 10.3791/60628
Automatic Translation
*1, *1,2, *1, 1, 1,2, 1, 1, 3, 3, 1, 1, 1,2,3, 1
1Multi-Organ Transplant Program, University Health Network, 2Department of Immunology, University of Toronto, 3Department of Laboratory Medicine and Pathobiology, University of Toronto
* These authors contributed equally

Summary

इस अध्ययन का लक्ष्य मानव यकृत प्रत्यारोपण का बेहतर प्रतिनिधित्व करने और प्राप्तकर्ता के अस्तित्व में सुधार करने के लिए चूहा ऑर्थोटोपिक लिवर प्रत्यारोपण मॉडल को संशोधित करना है। प्रस्तुत विधि प्राप्तकर्ता जिगर की उचित हेपेटिक धमनी के लिए दाता जिगर की आम हेपेटिक धमनी को जोड़ने के द्वारा हेपेटिक धमनी प्रवाह reestablishes ।

Abstract

चूहा ऑर्थोटोपिक लिवर प्रत्यारोपण (OLT) मॉडल तीव्र और पुरानी अस्वीकृति का अध्ययन करने के लिए एक शक्तिशाली उपकरण है। हालांकि, धमनी पुनर्संबंध के अभाव के कारण यह मानव यकृत प्रत्यारोपण का पूर्ण प्रतिनिधित्व नहीं है। यहां वर्णित एक संशोधित प्रत्यारोपण प्रक्रिया है जिसमें हेपेटिक धमनी (एचए) पुनर्संबंध का समावेश शामिल है, जिससे प्रत्यारोपण परिणामों में उल्लेखनीय सुधार हुआ है। 12 मिनट और 14 एस के एक मतलब anhepatic समय के साथ, हा पुनर्संबंध प्रत्यारोपित जिगर के बेहतर परफ्यूजन और ३७.५% से ८८.२% के लिए दीर्घकालिक प्राप्तकर्ता अस्तित्व में वृद्धि में परिणाम है । इस प्रोटोकॉल में पोर्टल नस और इंफ्राहेपेटिक अवर वेना कावा को जोड़ने के लिए 3डी-मुद्रित कफ और धारकों का उपयोग शामिल है। यह जिगर प्रत्यारोपण के कई पहलुओं का अध्ययन करने के लिए लागू किया जा सकता है, प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया और संक्रमण से प्रक्रिया के तकनीकी पहलुओं के लिए । एक माइक्रोवैस्कुलर तकनीक का उपयोग करके धमनी पुनर्संबंध के लिए एक सरल और व्यावहारिक विधि को शामिल करके, यह संशोधित चूहा ओएलटी प्रोटोकॉल मानव यकृत प्रत्यारोपण के पहलुओं की बारीकी से नकल करता है और एक मूल्यवान और चिकित्सकीय प्रासंगिक अनुसंधान मॉडल के रूप में काम करेगा।

Introduction

यकृत रोग का वैश्विक बोझ लगातार बढ़ता जा रहा है, जिसमें 2005 से 20131,,2 तक यकृत रोग से होने वाली मौतों में30%की वृद्धि हुई है। लिवर प्रत्यारोपण अक्सर अंत चरण जिगर की बीमारी के साथ रोगियों के लिए एकमात्र सहारा है । जिगर दूसरा सबसे अधिक बार प्रत्यारोपित ठोस अंग है, और विश्व स्तर पर किए गए यकृत प्रत्यारोपण की संख्या में 2015 से 20161,2 तक 7.25% की वृद्धिहुई।1 इसकी व्यापकता के बावजूद, प्रत्यारोपण के बाद जीवित रहने की दर3,,4,,5स्थिर हो गई है । 15 वर्ष रोगी जीवित रहने की दर 53% बताई जा रही है, और 20 वर्ष रोगी जीवित रहने की दर 21%3,,5के रूप में कम हो सकती है। हालांकि रोमांचक नई इम्यूनोबायोलॉजी पहल है कि नए उपचार और बेहतर नैदानिक परिणामों के लिए नेतृत्व कर सकते हैं, वहां अभी तक एक विश्वसनीय छोटे पशु मॉडल में उंहें परीक्षण करने के लिए नहीं है ।

लिवर प्रत्यारोपण की जांच में चूहे ओएलटी मॉडल का व्यापक रूप से उपयोग किया गया है, जिसमें अस्वीकृति6,,7,,8,,9,10,प्रतिरक्षा सहिष्णुता11,प्रत्यारोपण इस्केमिया-रिफ्यूजन इंजरी12,इम्यूनोसप्रेसियन13और पित्त के पेड़,की चोट14,15,,,16,,17शामिल हैं। हालांकि, अपने वर्तमान रूप में मॉडल का एक नुकसान इसकी उच्च पोस्ट-ऑपरेटिव रुग्णता और मृत्यु दर18,,19है। यह एक गंभीर खामी है जो मानव संचालन के साथ बाधाओं पर है, और यह मॉडल20से चिकित्सकीय प्रासंगिक निष्कर्ष निकालने की क्षमता से समझौता करता है।

इसके अतिरिक्त, इस रुग्णता का एक बड़ा हिस्सा अनुपस्थित या अपूर्ण हेपेटिक धमनी (एचए) पुनर्संबंध18के लिए जिम्मेदार ठहराया जा सकता है। हालांकि मानव जिगर प्रत्यारोपण में एक महत्वपूर्ण कदम है, तकनीकी कठिनाइयों चूहा OLT मॉडल में हा पुनर्संबंध समझौता करते हैं । नतीजतन, पित्त वाहिनी (बीडी) एनास्टोमोसिस कमजोर है और इसके परिणामस्वरूप पित्त रिसाव और बीडी नेक्रोसिस21की उच्च दरें होती हैं। पित्त की जटिलताओं22की उच्च घटनाओं से परे, धमनी प्रवाह की अनुपस्थिति से भ्रष्टाचार के बाद प्रत्यारोपण23के शरीर विज्ञान में परिवर्तन होता है, दाता यकृत भ्रष्टाचार24 में हाइपोक्सिया के साथ और सूजन वाले लोब्स19,25,26में जिगर की क्षति देखी जाती है ।26 धमनी पुनर्संबंध के बिना चूहा ओएलटी भी फाइब्रोसिस27को बढ़ावा देने के लिए जाता है । नीचे वर्णित चूहा ओएलटी प्रोटोकॉल पहले प्रकाशित चूहा ओएलटी विधि28के साथ एक सरल एचए पुनर्निर्माण कदम को शामिल करके इन मुद्दों को संबोधित करता है, जिसके परिणामस्वरूप यकृत परेन्चिमा का संरक्षण होता है और जीवित रहने की दर में सुधार होता है।

जिगर प्रत्यारोपण तीन चरणों है: (1) दाता से जिगर भ्रष्टाचार की निकासी, (2) दाता जिगर भ्रष्टाचार की तैयारी, और (3) जिगर भ्रष्टाचार के साथ प्राप्तकर्ता जिगर के प्रतिस्थापन । प्रक्रिया में पांच शारीरिक संरचनाओं में हेरफेर शामिल है: सुप्रेपेटिक अवर वेना कावा (एसएचवीसी), पोर्टल नस (पीवी), इन्फ्राहेपेटिक अवर वेना कावा (आईएचवीसी), हेपेटिक धमनी (एचए), और पित्त वाहिनी (बीडी)।

चूहे में OLT पहले ली एट अल द्वारा पेश किया गया था एसएचवीसी, पीवी और आईएचवीसी के माइक्रोयूचर एनास्टोमोसिस का उपयोग करके, और बीडी29के लिए एक पुल-थ् माध्यम से तकनीक । बाद में 197930में दो कफ तकनीक के उपयोग के माध्यम से इस मॉडल में सुधार किया गया। तब से, कई वैकल्पिक तकनीकों का प्रस्ताव किया गया है, जिसमें बहुमत के साथ वेनस एनास्टोमोसिस पर ध्यान केंद्रित किया गया है और कुछ संशोधनों31के साथ दो-कफ तकनीक का उपयोग किया गया है। यद्यपि एचए एनास्टोमोसिस को पहले चूहे ओल्ट मॉडल में माइक्रोसुचर, कफ और,इंट्राल्यूमिनल आस्तीन26, 31, 32,,,33,,3134जैसी तकनीकों का उपयोग करके वर्णित किया गया है, इन तकनीकों को अक्सर अत्यधिक प्रशिक्षित माइक्रोसर्जिकल कौशल की आवश्यकता होती है, जो चूहे के शरीर विज्ञान को काफी बदल देते हैं, और थ्रोम्बोसिस और/या पित्त जटिलताओं3327,,35से बाधित होते हैं।

इसके अलावा, शल्य प्रक्रिया का विकल्प भी anhepatic समय को प्रभावित कर सकते है (पीवी क्लैंपिंग से पुनर्गठित पीवी के माध्यम से भ्रष्टाचार के अर्क के लिए समय), जो चूहा जिगर प्रत्यारोपण की सफलता के लिए महत्वपूर्ण है । विशेष रूप से, उच्च जीवित रहने की दर 15-20 मिनट36के एंहेपेटिक समय के साथ देखी जाती है, और 30 मिनट सफलता के लिए ऊपरी सीमा37,,38है। इसलिए, इस विधि का लक्ष्य कम आक्रामक और अधिक आसानी से अपनाने योग्य सर्जिकल चूहा ओएलटी मॉडल को लागू करना है जो हेपेटिक धमनी को फिर से जोड़ने, प्रत्यारोपित यकृत के कुशल पर्फ्यूजन को बढ़ावा देने, प्राप्तकर्ता पित्त वाहिनी के प्रवाह को बनाए रखने और प्राप्तकर्ता की शारीरिक स्थिति को संरक्षित करने में सक्षम है।

यहां विस्तृत इस संशोधित प्रोटोकॉल के सभी चरण हैं, जिनमें दाता यकृत के सीलिएक ट्रंक के हेरफेर के साथ-साथ 1 का उपयोग भी शामिल है) प्राप्तकर्ता उचित एचए के साथ एक बाह्राम आस्तीन कनेक्शन करने के लिए 1.5 मिमी स्टेंट, 2) एसएचवीसी पुनर्निर्माण के लिए एक चल सीवन, 3) पीवी और आईएचवीसी पुनर्निर्माण के लिए दो 3डी-मुद्रित प्लास्टिक कफ39,,40,4) एचए,18,27,41 और 5 के लिए एक माइक्रोवैस्कुलर स्लीव रीकनेक्शन) एक पहले वर्णित बीडी स्टेंटिंग तकनीक28।, दो अतिरिक्त कदम भी शामिल हैं: पीवी के माध्यम से एक ठंडा फ्लश, और एक एंटीबायोटिक आहार जो पिछले निष्कर्षों17पर आधारित है। यह अनुकूलित ओएलटी प्रोटोकॉल पेरिऑपरेटिव जटिलताओं और रुग्णता को कम करता है और मानव यकृत प्रत्यारोपण में नियोजित सर्जिकल ऑपरेटिंग प्रक्रिया को अधिक बारीकी से मॉडल करता है।

Protocol

अध्ययन कृंतक हैंडलिंग और सर्जरी के दिशा निर्देशों के अनुसार किया गया था, और अध्ययन प्रोटोकॉल विश्वविद्यालय स्वास्थ्य नेटवर्क पशु देखभाल समिति (UHN AUP #: ५८४०.३) द्वारा अनुमोदित किया गया था और पशु देखभाल के कनाडा परिषद के दिशा निर्देशों का पालन करता है । अध्ययन पुरुष लुईस चूहों (तनाव LEW/SsNHsd), 12-14 सप्ताह पुराने, 250-300 ग्राम के बीच वजन का उपयोग करता है ।

1. उपकरण सेट-अप

  1. एक सुई धारक के साथ एक 31 जी तेज टिप पकड़ो और टिप को बार-बार ठोककर एक कुंद एल के आकार का इंजेक्टर बनाएं जब तक कि टिप बंद न हो जाए। एक फ्लैट धातु फ़ाइल का उपयोग करना, इंजेक्टर के अंत को कुंद और चिकना करें।
    1. पोर्टल नस (पीवी) और इंफ्राहेपेटिक अवर वेना कावा (आईएचवीसी) कफ को 3डी-प्रिंटेड बेस से काटते हुए एक स्केलपेल(सप्लीमेंट्री मटेरियल 1, सप्लीमेंट्री मैटेरियल 2, फिगर 1, सप्लीमेंट्री फिगर 1)के साथ ।
      नोट: कफ और धारकों को डिजाइन करने के लिए 3 डी डिज़ाइन सॉफ्टवेयर का उपयोग किया जाता है, जो ऑटोक्लेवेबल राल 39,,40 (पूरक सामग्री 1-10में शामिल सभी 3डी-मुद्रित सामग्री के लिए विनिर्देश) का उपयोग करके3डी प्रिंटर(सामग्री की तालिका)पर मुद्रित होते हैं।
    2. 22 जी कैथेटर को दो तरफा तिरछी ट्यूब (लंबाई में 3.5 मिमी) में काटने के लिए एक नए स्केलपेल का उपयोग करें। स्केलपेल का उपयोग करना, पित्त वाहिनी (बीडी) स्टेंट की सतह पर धीरे-धीरे नक़्क़ाशी लाइनों (ट्यूब की दीवार के माध्यम से कटौती न करें)। ये नक़्क़ाशी प्रक्रिया के दौरान संबंधों को फिसलने से रोकेंगे ।
    3. 24 जी कैथेटर को एक तरफा तिरछा-किनारे ट्यूब (लंबाई में 2.0 मिमी) में काटने के लिए एक नए स्केलपेल का उपयोग करें, और नए धमनी स्टेंट की सतह पर कई खरोंच बनाएं।
      नोट: स्टेंट के लिए दबाव के आवेदन से बचने के द्वारा बीडी स्टेंट के ल्यूमेन के संकुचन या ऑक्सीक्फ्यूजन को रोकें। यदि स्टेंट संकुचित या occluded है, प्राप्तकर्ता के अस्तित्व पित्त बाधा से समझौता किया जाएगा ।

2. डोनर ऑपरेशन

  1. 37 डिग्री सेल्सियस के लिए एक हीट पैड सेट करें और इसे सर्जिकल प्लेटफॉर्म के नीचे रखें। तापमान की निगरानी चालू करें ताकि चूहे के मुख्य तापमान को गुदा जांच के माध्यम से निगरानी की जा सके। आइसोफ्लुरेन एनेस्थीसिया उपकरण की स्थापना करें।
    नोट: सर्जरी के दौरान, श्वास दर, हृदय गति, अंगों के रंगाई/श्लेष्म झिल्ली, और किसी भी पेडल निकासी सजगता की उपस्थिति को ध्यान में रखते हुए संज्ञाहरण की गहराई की निगरानी करें ।
  2. सभी आवश्यक उपकरणों और सामग्रियों के साथ शल्य चिकित्सा से लिपटी कार्यक्षेत्र की व्यवस्था (यानी, कैंची, संदंश, धुंध, हेपरिन, रिट्रैक्टर्स, मिडसेक्शन पैड, कॉटन टिप्स, 4-0 रेशम, 7-0 रेशम, 8-0 गैर-अवशोषित बाँझ सीवन, और 10-0 गैर अवशोषित मोनोफिलामेंट सीवन) शल्य चिकित्सा मंच के किनारों पर आसानी से रखा गया।
  3. रिंगर के लैक्टेट समाधान और सोडियम हेपरिन के 300 आईयू (सामग्री की तालिका देखें) सहित सभी समाधानों केसाथ वर्कस्टेशन की व्यवस्था करें।
  4. जानवर का वजन करें। डोनर चूहे को 5% आइसोफ्लोरैन, 5 एल/मिन एयर फ्लो और इंडक्शन के लिए 70% फियो2 के साथ एनेस्थेटिक चैंबर में रखकर एनेस्थेटाइज करें। जब चूहा चेतना खो देता है, तो एनेस्थीसिया को 3% आइसोफ्लाणे, 0.5 एल/मिन वायु प्रवाह और 70% फियो 2 में कमकरें। पैर के पैर की अंगुली चुटकी द्वारा पेडल प्रतिक्रिया की कमी के लिए जांच करें ।
  5. पेट की त्वचा तैयार करें। एक इलेक्ट्रिक शेवर का उपयोग करके, वेंट्रल साइड से फर को हटा दें। ध्यान से दाता की श्वसन दर का पालन करें जब तक कि यह एक स्थिर और गहरी दर प्राप्त नहीं करता है।
    1. शल्य चिकित्सा से लिपटे चूहे को बिछाएं ताकि इसका वेंट्रल साइड छत का सामना कर रहा हो। नाक को 3% आइसोफ्लुन, 0.5 एल/मिन वायु प्रवाह, और 70% फियो2 के साथ एक संज्ञाहरण मेहतर में रखें। पेट की दीवार को पोविडोन-आयोडीन के साथ तैयार करें, मिडलाइन आउटवर्ड से काम करें, इसके बाद 70% इथेनॉल करें।
  6. एक गोल इत्तला दे दी सर्जिकल कैंची का उपयोग कर जघन सिम्फिसिस के लिए xiphoid प्रक्रिया से एक चीरा बनाओ, तो एक द्विपक्षीय ट्रांसवर्स चीरा के साथ जोखिम में सुधार । कॉटरी के लिए द्वि-ध्रुवीय इलेक्ट्रोसर्जिकल यूनिट का उपयोग करके पेट की दीवार से किसी भी रक्तस्राव को रोकें। चीरा के बाद, रखरखाव आइसोफ्लाणे को घटाकर 2%, 0.5 एल/मिन वायु प्रवाह, और 70% फियो2।
    नोट: प्रति सेकंड लगभग एक सांस की श्वसन दर प्राप्त करने के लिए आइसोफ्लुएरेन वाष्पीकरण को समायोजित करें और ऑपरेशन के दौरान संज्ञाहरण की गहराई का नियमित रूप से आकलन करना याद रखें।
  7. xiphoid प्रक्रिया में एक 4-0 रेशम सिलाई रखें और छाती की दीवार सिफलाड को वापस लेने के लिए सीवन का उपयोग करें। रेशम के धागे को संरचना के शीर्ष पर टेप करें जो एनेस्थीसिया मेहतर को जगह में रखता है। पेट के दोनों ओर रखे गए 3 डी-मुद्रित रिट्रैक्टर्स (पूरक सामग्री 3देखें) के साथ दाता चूहे के शरीर गुहा को खुला रखें (रिट्रैक्टर्स सर्जिकल प्लेटफॉर्म पर मैग्नेट से जुड़े रबर बैंड के साथ जगह में आयोजित किए जाते हैं)।
    नोट: मच्छर संदंश का उपयोग xiphoid प्रक्रिया को समझने और सिफलाड को वापस लेने के लिए भी किया जा सकता है। टेप का उपयोग करके मच्छर संदंश को ठीक करें।
  8. छोटी और बड़ी आंतों को संलग्न करने के लिए रिंगर के लैक्टेट समाधान द्वारा घटाए गए एक गैर-बुना हुआ धुंध स्पंज (4 सेमी x 4 सेमी) का उपयोग करें। जिगर को धीरे-धीरे कवर करने के लिए एक छोटे, गीले, गैरबुने धुंध स्पंज (2 सेमी x 4 सेमी) का उपयोग करें।
  9. पेट को उठाने और सुप्रेपाटिक अवर वेना कावा (एसएचवीसी) के एक्सपोजर में सुधार करने के लिए मिडसेक्शन के नीचे एक छोटा लुढ़का हुआ धुंध रखें।
  10. फाल्सीफॉर्म स्नायु काटें। माइक्रो-फोर्सप्स का उपयोग करके बाईं डायाफ्रामेटिक नस को एसएचवीसी से अलग करें। 7-0 रेशम के साथ बाईं डायाफ्रामेटिक नस को लिगेट करें, जो एसएचवीसी के करीब रहते हैं।
    नोट: छोटे, गीले, गैरबुनाय धुंध स्पंज का उपयोग करें, रिंगर के लैक्टेट के साथ घटा और जिगर पर रखा, धीरे से जिगर को जिम्फाइड प्रक्रिया से दूर वापस लेना और बाईं डायाफ्रामेटिक नस का पर्दाफाश करने के लिए।
  11. गोल इत्तला दे दी कैंची के साथ बाईं त्रिकोणीय और गैस्ट्रो-हेपेटिक स्नायुबंधन काटें।
  12. एक छोटे, गीले, गैरबुने धुंध स्पंज का उपयोग करके xiphoid प्रक्रिया की ओर बाईं और मध्यम पालियों को ध्यान से वापस खींचकर कॉडेट लोब का पर्दाफाश करें। एक गोल इत्तला दे दी कैंची के साथ जिगर के बाकी हिस्सों से कौडेट पालि को अलग करने वाले स्नायु को रिहा करें।
  13. घेघा के करीब द्वि-ध्रुवीय इलेक्ट्रोसर्जिकल इकाई का उपयोग करके हेपेटो-एसोफेगल स्नायु को विभाजित और अलग करें।
    नोट: धीरे-धीरे छोटी और बड़ी आंतों को पेट की गुहा के बाईं ओर स्थानांतरित करें और उन्हें गीले, गैर-बुनी धुंध से ढक दें।
  14. आईएचवीसी को कवर करने वाले रेट्रोपेरिटोनम और फैट को विच्छेदन करें। बेनकाब और बाईं गुर्दे नस करने के लिए नीचे IHVC अलग ।
  15. थोड़ा एक कपास झाड़ू के साथ IHVC विस्थापित करने के लिए बेनकाब और फिर किसी भी छोटी नसों IHVC के दाईं ओर में विलय cauterize, द्वि ध्रुवीय इलेक्ट्रोसर्जिकल इकाई का उपयोग कर । इसके अलावा किसी भी काठ की नसों आईएचवीसी में विलय cauterize ।
  16. आईएचवीसी के करीब रहने वाले दो 7-0 रेशम लिगेचर के बीच सही सुपररेनल (एड्रेनल) नस को विभाजित करें। कोमल कर्षण के तहत इन्हें काटकर अपने पीछे के बंधनों से जिगर को मुक्त करें।
  17. सही गुर्दे की नस को सही गुर्दे की धमनी से और पड़ोसी ऊतक से एक ठीक टिप कॉटरी का उपयोग करके अलग करें। एक 8-0 के साथ सही गुर्दे की नस छिद्र सील गैर अवशोषित बाँझ लिगेचर।
  18. पीवी को कवर करने वाले वसा को उन बिंदुओं पर पाइलोरिक नस (दाएं गैस्ट्रिक नस) और प्लीहा नस का पता लगाने के लिए अलग करें जहां वे पीवी को मर्ज करते हैं। 7-0 रेशम के साथ इन नसों Ligate, एक 8-0 के साथ पीवी के निकटतम पक्ष मजबूत गैर अवशोषित बाँझ सीवन सिलाई। संबंधों के बीच नसों को विभाजित करें।
    नोट: डुओडेनम को वापस आकर्षित करने के लिए छोटे, गीले धुंध का उपयोग करके पीवी को बेनकाब करें। यदि वसा पीवी से अलग हो जाता है, तो कफ का सम्मिलन आसान है, जो पीवी कफ के स्टेनोसिस को भी रोकता है।
  19. आईएचवीसी में हेपरिन सोडियम के 300 आईयू इंजेक्ट करें, जो 1 मिली सी सिरिंज (31 जी सुई) का उपयोग करके सामान्य नमकीन के 1 एमएल तक पतला हो जाता है।
  20. बीडी विभाजन के नीचे एक चीरा 5 मिमी बनाओ और बीडी स्टेंट को आम बीडी में डालें। चीरा के ऊपर 7-0 रेशम लिगेचर 1 मिमी के साथ स्टेंट को सुरक्षित करें। चीरा के नीचे एक अतिरिक्त टाई बनाया जा सकता है, जो विभाजन के नीचे 10 मिमी है। एक बार स्टेंट सुरक्षित होने के बाद इन दोनों संबंधों के बीच बीडी काट लें।
  21. कभी भी बीडी या उचित हेपेटिक धमनी (एचए) को क्लिप न करें। पुनर्संबंध के बाद घुमा को रोकने के लिए एक मार्कर के रूप में चीरा पर बीडी में 3 बजे की स्थिति में एक 10-0 गैर अवशोषित बाँझ शल्य मोनोफिलमेंट सीवन सिलाई रखें।
  22. उचित एचए का पर्दाफाश करें और गैस्ट्रोड्यूडेनल धमनी (जीडीए) को दो 7-0 रेशम लिगेचर के बीच विभाजित करें। बाईं गैस्ट्रिक धमनी, प्लीहा धमनी, और सीलिएक ट्रंक का पर्दाफाश करें। तीन धमनियों दोनों distally टाई और उनके ले नापसंद के करीब ।
  23. धमनी संबंधों के बीच बाईं गैस्ट्रिक धमनी, प्लीहा धमनी, और सीलिएक ट्रंक काटें। धीरे-धीरे 21.5 जी सुई के साथ 20 एमएल सिरिंज का उपयोग करके पीवी में 20 एमएल ठंड (4 डिग्री सेल्सियस) रिंगर के लैक्टेट समाधान इंजेक्ट करें। वेना कावा को उस बिंदु के नीचे काटें जिस पर बाईं गुर्दे की नस आईएचवीसी के साथ विलीन हो जाती है ताकि फ्लश बहिर्वाह की अनुमति दी जा सके।
    नोट: सुई जहां तक संभव हो हिलम से रखा जाना चाहिए। दाता जिगर ठंडा परफ्यूजन 1-2 मिनट के बीच पिछले चाहिए। जिगर को फ्लश करते समय, दूसरे हाथ का उपयोग जिगर की सतह पर कोल्ड रिंगर के लैक्टेट को धार देने के लिए करें।
  24. फ्लश के बाद प्लीहा नस के नीचे पीवी ट्रंक काट लें। बाईं गुर्दे की नस के ठीक ऊपर आईएचवीसी काट लें। एसएचवीसी को सीधे डायाफ्राम से सटाकर काट लें।
  25. लिवर और रेट्रोपेरिटोनम के बीच लिगामेंट्स और कनेक्टिव टिश्यू को काटें।
    नोट: सुनिश्चित करें कि ऊपरी कैवल एनास्टोमोसिस को सुविधाजनक बनाने के लिए पूर्वकाल और पीछे की एसएचवीसी दीवारों की पर्याप्त लंबाई है। जितना संभव हो उतना लंबाई बनाए रखने के लिए डायाफ्राम के तुरंत निकट काटना महत्वपूर्ण है।
  26. पेट से लिवर निकालने के बाद इसे जल्दी से 4 डिग्री सेल्सियस रिंगर के लैक्टेट सॉल्यूशन से भरे डिश में रखें। ठंडे तापमान को बनाए रखने के लिए डिश को आइस पैड के ऊपर रखें।
  27. संस्थागत दिशा-निर्देशों का पालन करते हुए दाता चूहे के अवशेषों को त्यागें।

3. दाता चूहा जिगर की तैयारी ("पीठ बेंच")

  1. डोनर चूहा लिवर को जलमग्न करने के लिए 4 डिग्री सेल्सियस रिंगर के लैक्टेट सॉल्यूशन की पर्याप्त मात्रा के साथ कोल्ड पेट्री डिश भरें। डिश में तैरते डोनर लिवर को सावधानी से घुमाएं ताकि अवर सतह ऊपर की ओर आ सके। पीवी और आईएचवीसी के लिए कफ(अनुपूरक सामग्री 1 और अनुपूरक सामग्री 2,क्रमशः) डिश में रखें।
  2. पीवी कफ के माध्यम से पीवी खींचो और कफ के ऊपर नस के अंत गुना। पीवी को 7-0 रेशम का उपयोग करके कफ के चारों ओर सुरक्षित रूप से बांधें। 4 डिग्री सेल्सियस रिंगर के लैक्टेट सॉल्यूशन के 10 एमएल के साथ पीवी फ्लश करें।
  3. फ्लश के बिना आईएचवीसी के साथ चरण 3.2 दोहराएं।
  4. सीलिएक ट्रंक के आसपास वसा ऊतक निकालें। सीलिएक ट्रंक, प्लीहा धमनी, और बाईं गैस्ट्रिक धमनी(चित्रा 2ए)के विभाजन को खोलकर एक बड़ा धमनी आस्तीन कफ बनाएं।
    नोट: आम एचए में धमनी स्टेंट डालना मुश्किल है। स्टेंट डालने से पहले कई बार संदंश के साथ धमनी को स्ट्रेच और सीधा करें। सुनिश्चित करें कि स्टेंट का बेजल ऊपर की ओर सामना करता है और धमनी मुड़ नहीं जाती है(चित्र 2बी)।
  5. धमनी कफ के माध्यम से दाता आम हा में 1.5 मिमी लंबाई 24 जी धमनी स्टेंट रखो। स्टेंट को 8-0 से सुरक्षित करते हैं पॉलीप्रोपाइलीन लिगेचर(चित्रा 2सी)और रिंगर के लैक्टेट समाधान(चित्रा 2डी)के साथ स्टेंट फ्लश करें।
  6. समीपस्थ आईएचवीसी पर माइक्रो-क्लैंप (लंबाई में 4-6 मिमी) की स्थिति, जिसका उद्देश्य पोर्टल रिफ्यूजन के बाद रक्त हानि को रोकना और वायु एम्बोलिज्म से बचना है।
  7. जिगर को घुमाएं और उसके बेहतर पक्ष का पर्दाफाश करें। दो 8-0 डालें एसएचवीसी के पार्श्व और मध्यीय किनारों पर पॉलीप्रोपाइलीन टेपर पॉइंट टांके।
  8. लिवर को 4 डिग्री सेल्सियस पर रखें तो यह डोनर में प्रत्यारोपण के लिए तैयार है।

4. प्राप्तकर्ता ऑपरेशन

  1. ऊपर दाता ऑपरेशन अनुभाग को देखें और चरण 2.1-2.4 दोहराएं।
    नोट: पुरुष लुईस 12-14 सप्ताह पुराने आयु वर्ग के चूहों यहां इस्तेमाल कर रहे हैं, 5-20 ग्राम दानदाताओं की तुलना में भारी वजनी । सर्जरी के दौरान, श्वास दर, हृदय गति, अंगों/श्लेष्म झिल्ली के रंगाई, और किसी भी पेडल निकासी सजगता की उपस्थिति को नोट करके संज्ञाहरण की गहराई की निगरानी करें।
  2. शल्य चिकित्सा से लिपटे चूहे को ऊपर की ओर अपने वेंट्रल साइड के साथ रखें। आइसोफ्लुने में सांस लेने के लिए संज्ञाहरण मेहतर में नाक रखें। ऑप्थेलमिक लुब्रिकेंट के साथ आंखों को गीला करें। पेट की दीवार को पहले प्रोविडोन-आयोडीन के साथ तैयार करें, फिर 70% इथेनॉल के साथ।
  3. वेंट्रल पेट की दीवार के दोनों निचले किनारों पर रिंगर के लैक्टेट समाधान के 5 एमएल को चमड़े के रूप में इंजेक्ट करें। लेप्रोटॉमी से पहले बाएं पेट की दीवार में 200 मिलीग्राम/किलो पाइपरैसिलिन सोडियम इंट्रामस्कुलरली के 0.5 एमएल इंजेक्ट करने के लिए एक सर्जिकल सहायक के सहयोगी का उपयोग करें। इसके अलावा, 10 मिलीग्राम/एमएल bupivacaine के 0.5 एमएल को सही पेट की दीवार में चमड़े के साथ प्रशासित करें।
    नोट: 10 दिनों के बाद 1x/दिन के लिए piperacillin सोडियम 1x/दिन की एक ही खुराक प्रशासन ।
  4. पेट की दीवार को फिर से प्रोविडोन-आयोडीन के साथ पहले और फिर 70% इथेनॉल के साथ तैयार करें। प्यूबिक सिम्फिसिस के ऊपर स्टर्नल xiphoid से 1 सेमी तक मिडलाइन चीरा बनाएं। चीरा बनाने के बाद संज्ञाहरण के रखरखाव के लिए 2%, 0.5 एल/मिन वायु प्रवाह, और FiO2 70% करने के लिए आइसोफ्लुएंज कम करें।
    नोट: मच्छर संदंश का उपयोग xiphoid प्रक्रिया को समझने और सिफलाड को वापस लेने के लिए किया जा सकता है। टेप का उपयोग करके मच्छर संदंश को ठीक करें। शरीर गुहा को 3डी-मुद्रित रिट्रैक्टर्स द्वारा खुला रखा जाता है (पूरक सामग्री 3देखें) दोनों तरफ रबर बैंड के साथ चुंबकीय रूप से सर्जिकल प्लेटफॉर्म पर आयोजित किया जाता है।
  5. छोटी और बड़ी आंतों को गीले, नॉनबुने गॉज स्पंज (4 सेमी x 4 सेमी) के साथ लपेटें जो रिंगर के लैक्टेट समाधान के साथ घटा हुआ है। जिगर को धीरे-धीरे कवर करने के लिए रिंगर के लैक्टेट समाधान के साथ गीला, गैर-बुना हुआ धुंध स्पंज का उपयोग करें।
  6. स्पिन को ठोककर एसएचवीसी के एक्सपोजर को बढ़ाने के लिए चूहे के मिडसेक्शन के नीचे एक छोटा 3डी-प्रिंटेड सपोर्ट पैड (बैक होल्डर; सप्लीमेंट्री मटेरियल 4देखें) रखें । यह चूहों में सुरक्षित रूप से किया जा सकता है और एक सर्जन सहायक द्वारा निष्पादित किया जाता है।
  7. मिथ्यारूप स्नायु को काटें और जिगर को धीरे-धीरे शीफोइड प्रक्रिया से दूर करने और बाईं डायाफ्रामेटिक नस का पर्दाफाश करने के लिए छोटे, गीले नॉनबुन गॉज स्पंज का उपयोग करें। माइक्रो-फोर्सप्स का उपयोग करके बाईं डायाफ्रामेटिक नस को एसएचवीसी से अलग करें। डायाफ्राम के करीब 7-0 रेशम के साथ बाईं डायाफ्रामेटिक नस को लिगेट करें।
  8. गोल इत्तला दे दी कैंची के साथ बाईं त्रिकोणीय और गैस्ट्रो-हेपेटिक स्नायुबंधन काटें।
  9. कोडेट लोब को प्रकट करने के लिए एक छोटे, गीले नॉनबुवेन गॉज स्पंज के साथ xiphoid प्रक्रिया की ओर बाएं और मध्य पालि को नाजुक रूप से खींचें। स्नायु को तोड़ दें जो कोडेट पालि को यकृत के शेष हिस्सों से अलग करता है।
  10. हेपेटो-एसोफेगल स्नायु को विभाजित करें और जिगर के करीब रहने वाले द्वि-ध्रुवीय इलेक्ट्रोसर्जिकल इकाई के साथ किसी भी रक्तस्राव बिंदुओं को इकट्ठा करें। जिगर के पीछे के पहलू पर स्नायुबंधन काटें।
  11. पेट की गुहा के बाईं ओर छोटी और बड़ी आंतों को ध्यान से वापस लें और उन्हें गीले, गैर-बुनी धुंध से ढक दें।
  12. आईएचवीसी पर रेट्रोपेरिटोनम और वसा को सही गुर्दे की नस के नीचे बेनकाब और अलग करने के लिए विच्छेदन करें। थोड़ा एक कपास झाड़ू के साथ IHVC विस्थापित और किसी भी छोटी नसों IHVC के दाईं ओर में विलय cauterize, द्वि ध्रुवीय इलेक्ट्रोसर्जिकल इकाई का उपयोग कर । इसी तरह, आईएचवीसी में प्रवेश करने वाली किसी भी काठ की नसों को कॉटराइज करें।
  13. दाईं सुपररेनल (एड्रेनल) नस को दो 7-0 रेशम लिगेचर के बीच विभाजित करें। कोमल कर्षण के तहत उन्हें काटकर अपने पीछे के बंधनों से जिगर को मुक्त करें।
  14. डुओडेनम को वापस लेने और पीवी को बेनकाब करने के लिए रिंगर के लैक्टेट समाधान के साथ छोटे, गीले धुंध का उपयोग करें। पीवी और पाइलोरिक नस के विभाजन से वसा को अलग करें।
  15. बीडी 0.5 सेमी को अपने हिलार विभाजन से नीचे विभाजित करें और डिस्टल कॉमन बीडी में बीडी स्टेंट डालें। चीरा के नीचे 0.2 मिमी के बारे में 7-0 लिगेचर के साथ स्टेंट को सुरक्षित करें। एक अतिरिक्त टाई चीरा के ऊपर रखा जा सकता है, विभाजन के करीब। जिगर के करीब बीडी कट लेकिन टाई के लिए डिस्टल ।
  16. बीडी को संदंश के साथ अलग करें और बीडी या उचित एचए की कतरन से बचें। पुनर्संबंध के बाद घुमा को रोकने के लिए एक मार्कर के रूप में बीडी में 3 बजे की स्थिति में एक 10-0 गैर अवशोषित मोनोफिलमेंट (जैसे, ethilon) सिलाई रखें ।
  17. उचित एचए और आम एचए और जीडीए के विभाजन का पर्दाफाश करें। बाएं हा, मध्य हा, और सही हा का पर्दाफाश । तीन धमनियों को चा विभाजन से अलग करें और धमनियों को संबंधों के ऊपर जिगर के करीब काट लें।
  18. एसएचवीसी के पीछे धुंध का एक लंबा पतला टुकड़ा रखो।
  19. आईएचवीसी के पीछे 3डी-मुद्रित आईएचवीसी धारक या "हैंडल" (कावा 150 ग्राम 2.1; पूरक सामग्री 5देखें) रखें, और 10-0 गैर-अवशोषित मोनोफिलामेंट सीवन(चित्रा 3ए)का उपयोग करके 3डी-मुद्रित "हैंडल" के सिरों को एक साथ सीना करें।
  20. पीवी के पीछे 3 डी-मुद्रित पीवी धारक या "हैंडल" (पोर्टा 1.4.1-देखें अनुपूरक सामग्री 6)रखें, सीधे जिगर से कमतर, और 10-0 गैर-अवशोषित मोनोफिलमेंट सीवन का उपयोग करके 3 डी-मुद्रित "हैंडल" के सिरों को सीना करें।
  21. शिथिल दोनों 3 डी मुद्रित धारकों (IHVC और पीवी)(चित्रा 3ए)के नीचे एक 7-0 रेशम लिगेचर टाई ।
  22. सही गुर्दे की नस के ठीक ऊपर आईएचवीसी को क्लैंप करें, जो अभी भी 3डी-मुद्रित कैवल होल्डर से नीचे होना चाहिए।
  23. पाइलोरिक नस के ठीक ऊपर पीवी को क्लैंप करें, जो 3डी-मुद्रित पीवी धारक से नीचे होना चाहिए। anhepatic समय है, जो इस बिंदु पर शुरू होता है रिकॉर्ड। एनेस्थीसिया के रखरखाव के लिए 0.5% आइसोफ्लुरेन, 0.5 एल/मिन वायु प्रवाह, और 70% एफीओ2 तक कमी।
  24. 27 जी सुई संलग्न के साथ एक 3 मिली सी सिरिंज का उपयोग कर पीवी के विभाजन के माध्यम से 37 डिग्री सेल्सियस रिंगर लैक्टेट समाधान के 2 मिलील फ्लश।
  25. एक Kitzmiller क्लैंप के साथ जिगर के ऊपर SHVC क्लैंप। एक ही क्लैंप के नीचे काटें, जितना संभव हो सके जिगर के करीब रहें।
  26. पीवी और आईएचवीसी(चित्रा3ए)दोनों के लिए 3डी-मुद्रित धारकों के ऊपर कट करें। प्राप्तकर्ता के जिगर को हटा दें। ध्यान से दाता जिगर उन्मुख और यह प्राप्तकर्ता के शरीर गुहा में इस तरह से स्थिति है कि ऊपरी कैवल एनास्टोमोसिस बनाया जा सकता है।
  27. 8-0 का उपयोग करें पॉलीप्रोपाइलीन डायाफ्राम के पास प्राप्तकर्ता के एसएचवीसी के साथ दाता के एसएचवीसी में शामिल होने के लिए सीवन चल रहा है। सबसे पहले, 8-0 के रहने टांके रखें दाता और प्राप्तकर्ता एसएचवीसी के बाएं और दाएं पहलुओं पर पॉलीप्रोपाइलीन। फिर, नस की दीवार के बाहर पर इन्हें नीचे बांधें।
  28. बाएं 8-0 का उपयोग करें पॉलीप्रोपाइलीन बाएं से दाएं एसएचवीसी की पीछे की दीवार को सिलाई करने के लिए और दाईं ओर टाई करने के लिए 8-0 पॉलीप्रोपाइलीन। बाएं 8-0 का उपयोग करें पॉलीप्रोपाइलीन ने एसएचवीसी एनास्टोमोसिस की पूर्वकाल की दीवार को बाएं से दाएं सिलाई करने के लिए, सीवन लाइन के अंतिम दो-तिहाई को ढीला छोड़ दिया। किसी भी हवा के बुलबुले निकालने के लिए सुनिश्चित करते हुए ढीले टांके के बीच में रिंगर लैक्टेट के 20 एमएल का उपयोग कर फ्लश ।
  29. ढीले टांके कस लें और एसएचवीसी के बाहर की तरफ टाई बनाएं। शेष 8-0 काट पॉलीप्रोपाइलीन सीवन।
    नोट: क्लिप जगह में प्राप्तकर्ता के SHVC रखती है, यह आसान दाता और प्राप्तकर्ता के SHVC एक साथ सीना बनाने के लिए कर रही है । एसएचवीसी एनास्टोमोसिस की अवधि रिकॉर्ड करें। इस बिंदु पर, पोर्टा हैंडल धारक आर्म उपकरण (धारक आर्म मैकगिल + धारक मिनी आर्म लैब + धारक आर्म सॉफ्ट पार्ट 1.3; पूरक सामग्री 7, पूरक सामग्री 8,और पूरक सामग्री 9,क्रमशः देखें), सीधे जिगर से कमतर से जुड़े होते हैं। Supplementary Material 8 यह उपकरण 3डी-मुद्रित धारक आधार (धारक आधार 3.1; पूरक सामग्री 10देखें) द्वारा समर्थित है।
  30. प्राप्तकर्ता पीवी में दाता से पीवी कफ(अनुपूरक सामग्री 1)डालें और 7-0 रेशम टाई को कस लें। नायक और प्राप्तकर्ता के पीवी को रिंगर के लैक्टेट समाधान के साथ फ्लश करें जो कनेक्शन से पहले 37 डिग्री सेल्सियस तक गर्म हो गया है।
  31. एसएचवीसी (पहले) से एट्रामैटिक क्लैंप निकालें, फिर पीवी (दूसरा) के लिए माइक्रोवैस्कुलर क्लिप। गर्म रक्त के साथ जिगर को फिर से देखना; इस बिंदु पर, anhepatic चरण समय समाप्त हो गया है । इस बार रिकॉर्ड।
  32. गर्म करने के लिए जिगर के शीर्ष पर गर्म घंटी के लैक्टेट समाधान के 10 एमएल डालो। राउंड-इत्तला दी कैंची के साथ 3 डी मुद्रित धारकों को हटा दें (सुरक्षा सिलाई काटें)।
  33. प्राप्तकर्ता आईएचवीसी में दाता आईएचवीसी कफ(अनुपूरक सामग्री 2)डालें और 7-0 रेशम टाई के साथ सुरक्षित करें। दाता IHVC क्लिप पहले निकालें, तो प्राप्तकर्ता की क्लिप(चित्रा 3बी)। कावा धारक तंत्र और धारक आधार से जुड़ा हुआ है जैसा कि ऊपर वर्णित है,
  34. राउंड-इत्तला दी कैंची के साथ 3 डी प्रिंटर धारकों (पोर्टा और कावा) को हटा दें (सुरक्षा सिलाई में कटौती करें; चित्रा 3सी),जिसके परिणामस्वरूप एक जुड़ा हुआ आईएचवीसी(चित्रा 3डी)होता है।
  35. ध्यान से किसी भी रक्तस्राव के लिए जिगर के आसपास के क्षेत्र की जांच करें। शरीर गुहा के अंदर 37 डिग्री सेल्सियस रिंगर के लैक्टेट घोल का 3 एमएल इंटिल करें।
  36. धमनी एनास्टोमोसिस: रक्तदाता से सीलिएक ट्रंक के हिस्से को काट दें जो स्टेंट से परे फैली हुई है।
  37. प्राप्तकर्ता के उचित हा क्लैंप और अंत में टाई काट दिया। पोत(चित्रा 4ए)के आसपास के किसी भी अतिरिक्त ऊतक को काट दें। रिंगर के लैक्टेट समाधान के साथ, दाता और प्राप्तकर्ता पोत दोनों के ल्यूमेंस को फ्लश करें।
  38. हा एनास्टोमोसिस को पूरा करने के लिए दाता हा स्टेंट की आस्तीन में प्राप्तकर्ता उचित हा खींचो। (दाता) एचए के बाएं पहलू के माध्यम से 10-0 एथिलॉन रखें, स्टेंट के डिस्टल छिद्र के ऊपर 2.5 मिमी (बाहर से अंदर तक), फिर स्टेंट के अंत के माध्यम से, 10-0 एथिलॉन (4 सेमी लंबाई) के साथ एक घुमावदार सुई(चित्रा 4बी)द्वारा निर्देशित।
  39. प्राप्तकर्ता को पोत छिद्र के नीचे उचित एचए 0.5 मिमी ट्रांसफिक्स करें, सिलाई को पहले (अंदर से बाहर तक) पोत के बाईं ओर रखें, फिर (बाहर से अंदर तक) धमनी के दाईं ओर।
  40. मूल सिलाई के समान स्टेंट छिद्र से दूरी पर, अंदर से बाहर तक (दाता) एचए की दाहिनी दीवार के माध्यम से सीवन रखें। 10-0 गैर अवशोषित मोनोफिलामेंट के दो सिरों पर खींचो, जो प्राप्तकर्ता उचित हा ऊपर और HA स्टेंट(चित्रा 4सी)में पर्ची जाएगा ।
    नोट: रक्त के पंप के लिए निरीक्षण करें। एक विकल्प के लिए दाता जीडीए में कटौती करने की पुष्टि है कि रक्त एनास्टोमोसिस के माध्यम से पंप है । यदि जीडीए कटे हुए हैं तो प्रक्रिया के अगले चरण पर जाने से पहले धमनी को फिर से बांधना सुनिश्चित करें।
  41. दाता हा (चित्रा 4डी)पर, खुद के साथ10-0गैर अवशोषित मोनोफिलामेंट टाई। धमनी एनास्टोमोसिस अब पूरा हो गया है।
  42. पित्त एनास्टोमोसिस: प्राप्तकर्ता बीडी और स्टेंट(चित्रा 5ए)के चारों ओर एक टाई को ढीला रखें, फिर बीडी स्टेंट को हटा दें। बिलियरी कनेक्शन पूरा होने से पहले प्राप्तकर्ता और दाता दोनों के बीडी को फ्लश करें।
  43. प्राप्तकर्ता के पित्त वाहिनी(चित्रा 5बी)में दाता के बीडी स्टेंट डालें और उस टाई को कस लें जो पहले प्राप्तकर्ता बीडी(चित्रा 5सी)के आसपास रखा गया था।
  44. आंतों को शरीर की गुहा में लौटाएं। इसे फ्लश करने के लिए गुहा में 37 डिग्री सेल्सियस रिंगर के लैक्टेट समाधान के 2 एमएल पैदा करें। कुछ समाधान को धुंध के साथ भिगो दें।
  45. सुनिश्चित करें कि आंतों को 5-0 मोनोक्रिल के साथ पैरीटल पेरिटोनम और त्वचा को सिलाई करने से पहले अपनी मूल स्थिति में वापस आ रहे हैं।
  46. चीरा को 5-0 मोनोक्रिल के साथ दो लेयर्स में बंद कर दें। सिलना पैरीटल पेरिटोनम के चारों ओर 0.5% bupivacaine के 0.5 एमएल इंजेक्ट करें और त्वचा को एक साथ सिलने के बाद इसे दोहराएं।
  47. पिंजरे में स्थानांतरित करते समय धीरे-धीरे प्राप्तकर्ता चूहे को एक कागज तौलिया में स्वेडल करें। जागरण के समय से ही पशु को पानी और भोजन तक मुफ्त पहुंच की अनुमति दें। पिंजरे के एक-आधे हिस्से के नीचे गर्म पानी से घूम रहे कंबल को 24-38 घंटे के लिए रखें। तत्काल पोस्ट-ऑपरेटिव अवधि के दौरान एक चूहे को एक पिंजरे में नामित किया जाता है।

5. पोस्ट-ऑपरेटिव केयर

  1. भोजन के छर्रों को पानी में भिगो दें और उन्हें पिंजरे के फर्श पर पेट्री डिश में रखें।
  2. चूहे की हृदय गति, श्वास दर और त्वचा के रंग की निगरानी करें।
  3. पोस्ट-ऑपरेटिव दिनों 1, 2, और 3 पर पिपरासिलिन का प्रशासन करें। बुप्रेनोरफिन को कम से कम प्रशासित करें और दर्द के किसी भी लक्षण जैसे किसी भी व्यवहार परिवर्तन, सुस्ती, अघ्र्यीय फर, अवसाद, विकृति, या पहले 72 घंटे के लिए भूख न लगने के लिए निगरानी करें।
    नोट: दर्द प्रत्यारोपण के बाद 3 दिनों के लिए दैनिक कम से कम 2x का आकलन किया जाता है, फिर कम से कम 1x दैनिक।

Representative Results

पहले वर्णित प्रोटोकॉल 28 का उपयोग करके एक गैर-एचए एनास्टोमोसिस चूहा ओएलटी मॉडल स्थापित करते समय, हमारी टीम ने क्रमशः21दिनों और 60 दिनों के बाद ऑपरेशन में 50% और 37.5% जीवित रहने की दर देखी। हालांकि हा एनास्टोमोसिस के बिना दीर्घकालिक अस्तित्व की उच्च दरों को कुछ समूहों द्वारा सूचित किया गया है28,ये शुरुआती परिणाम धमनी प्रवाह नहीं होने की कमियों को उजागर करते हैं। इसके विपरीत, अनुकूलित एचए पुनर्संबंध प्रक्रिया ने दीर्घकालिक अस्तित्व को 37.5% से बढ़ाकर 88.2% (पी = 0.015)(चित्रा 6) मेंकाफी वृद्धि की।

एचए पुनर्संबंध (6 और 13 के बाद के ऑपरेशन के दिनों में) के बिना प्रत्यारोपित जानवरों के एक प्रतिनिधि सबसेट के हिस्टोलॉजिकल विश्लेषण ने सेंट्रलीनोबुलर नेक्रोसिस(चित्र 7)के साथ हाइपोक्सिक यकृत की चोट के लक्षण दिखाए। व्यापक यकृत परिगलन इन जानवरों(चित्र 7)में एलेनिन अमीनोट्रांसफेरेज (एएलटी) और एस्पार्टेट अमीनोट्रांसफेरेज (एएसटी) के काफी ऊंचा स्तर से जुड़ा हुआ था। इसके विपरीत, हा पुनर्संबंध के साथ प्रत्यारोपित चूहों जिगर की चोट का कोई संकेत नहीं दिखाया, और हिस्टोलॉजिकल विश्लेषण संगठित acini, lobules (जैसे, केंद्रीय नस और हेपेटिक नस के साथ पोर्टल ट्रायड्स), धमनियों, और पित्त वाहिनी(चित्रा 7)के साथ एक सामान्य जिगर parenchyma संरचना का पता चला ।

यद्यपि 23 अलग-अलग संचालन के दौरान औसत एनहेपेटिक समय स्वीकार्य था (12 मिनट और 14 एस [± 78 एस]), यह अभी भी संभव है कि गैर-एचए पुनर्कनेक्शन मॉडल में अस्तित्व को अंततः बढ़े हुए अभ्यास के साथ सुधारा जा सकता है। हालांकि, यह देखने लायक है कि चार जानवरों में से तीन हा पुनर्संबंध के बिना प्रत्यारोपित (जो दीर्घकालिक अस्तित्व के लिए पीछा किया जा रहा था) दिन ५६, ९६, और १११ के बाद आपरेशन पर संकट के कारण इच्छामृत्यु थे । इसके अतिरिक्त, यकृत के हिस्टोलॉजिकल विश्लेषण ने हाइपोक्सिक यकृत की चोट के बाद प्रतिक्रियाशील परिवर्तनों का खुलासा किया जिसमें चिह्नित पित्त वाहिनी प्रसार, पेरिपोर्टल फाइब्रोसिस और सूजन, और विकृत यकृत पैरेन्चिमा(अनुपूरक चित्रा 2)शामिल हैं। हाइपोक्सिक यकृत चोट की रूपात्मक विशेषताओं की उपस्थिति उन निष्कर्षों की पुष्टि करती है कि एचए पुनर्संबंध कुशल यकृत परफ्यूजन और सामान्य कार्य के लिए महत्वपूर्ण है।

Figure 1
चित्रा 1: पोर्टल नस और इन्फ्राहेपेटिक अवर वेना कावा के लिए 3 डी-मुद्रित कफ डिजाइन का योजनाबद्ध प्रतिनिधित्व। पहली टाई को हैंडल (iii) के निकटतम नाली (ii) में कड़ा किया जाता है, और दूसरी टाई को हैंडल से दूर नाली (i) दूर में कड़ा किया जाता है। बाहर के व्यास (iv) पोर्टल नस (पीवी) के लिए 2.38 मिमी और इन्फ्राहेपेटिक अवर वेना कावा (आईएचवीसी) के लिए 2.15 मिमी हैं। अंदर व्यास (v) पीवी के लिए 1.74 मिमी और आईएचवीसी के लिए 1.38 मिमी हैं। पीवी के लिए लंबाई (vi) 2.60 मिमी और आईएचवीसी के लिए 2.15 मिमी (सभी 3डी-मुद्रित सामग्रियों के लिए सटीक विनिर्देश पूरक सामग्रीमें पाए जा सकते हैं)। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।

Figure 2
चित्रा 2: हेपेटिक धमनी स्टेंट प्रविष्टि भ्रष्टाचार में। (क)सीलिएक ट्रंक (i) के उद्घाटन के अंत को बाईं गैस्ट्रिक धमनी में प्लीहा धमनी को काटकर चौड़ा किया जाता है, जो आम एचए के विभाजन को उजागर करता है । 2 डोनर चूहा लिवर निकालने से पहले बीडी स्टेंट बांधा जाता है। 3 पीवी कफ और (iv) आईएचवीसी कफ को कफ के ऊपर वाहिकाओं के सिरों को मोड़कर बांधा जाता है। (ख)(i) एचए स्टेंट डालने के लिए, उजागर आम एचए को संदंश के साथ कई बार बढ़ाया जाता है । (ग)(i) एचए स्टेंट को आम एचए में सुरक्षित रूप से रखा जाता है और 8-0 से बांधा जाता है प्रोलीन। (घ)(i) एचए स्टेंट (ii) रिंगर के लैक्टेट सॉल्यूशन (बीडी = पित्त वाहिनी, आईएचवीसी = इंफ्राहेपेटिक अवर वेना कावा, एचए = हेपेटिक धमनी) के साथ फ्लश किया जाता है। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।

Figure 3
चित्रा 3: 3 डी-मुद्रित धारक का उपयोग करके इन्फ्राहेपेटिक अवर वेना कावा कनेक्शन। (A)(i) पीवी आईएचवीसी कनेक्शन के रूप में एक ही तकनीक का उपयोग कर जुड़ा हुआ है । भ्रष्टाचार (ii) (iii) आईएचवीसी कफ के ऊपर क्लैंप किया जाता है। प्राप्तकर्ता आईएचवीसी खोलने (iv) एक 3 डी मुद्रित धारक के लिए खोलने के पक्ष में sutured है इसे खुला रखने के लिए । प्राप्तकर्ता आईएचवीसी के चारों ओर एक ढीला (v) 7-0 रेशम बंधा हुआ है। (ख)भ्रष्टाचार आईएचवीसी का कफ प्राप्तकर्ता आईएचवीसी के भीतर डाला जाता है । ढीली टाई अब कस दी गई है। (ग)क्लैंप को हटा दिया जाता है, और (i) 3 डी मुद्रित धारक को कैंची से अलग किया जाता है। (घ)एक अतिरिक्त (i) 7-0 रेशम कनेक्शन के आसपास बंधा हुआ है अगर सुरक्षित नहीं है, लेकिन आम तौर पर एक टाई पर्याप्त है (पीवी = पोर्टल नस, IHVC = इंफ्राहेपेटिक अवर वेना कावा) । कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।

Figure 4
चित्रा 4: हेपेटिक धमनी का माइक्रोवैस्कुलर स्लीव कनेक्शन। (a)(i) बीडी स्टेंट प्राप्तकर्ता से जुड़ा नहीं है । (ii) एचए स्टेंट को भ्रष्टाचार में रखा जाता है, जो प्राप्तकर्ता के उचित एचए से जुड़ा होता है । 3 पीवी जुड़ा हुआ है। (ख)10-0 एथिलॉन के साथ एक (i) घुमावदार सुई प्राप्तकर्ता एचए उद्घाटन अंत के पक्षों के लिए HA स्टेंट के माध्यम से खींचा जाता है । (ग)10-0 एथिलॉन को एचए स्टेंट के माध्यम से वापस खींचा जाता है; इसलिए, प्राप्तकर्ता के उचित हा को आस्तीन की तरह स्टेंट के माध्यम से खींचा जाता है। (घ)(i) 10-0 ethilon के साथ एक टाई एक बार प्राप्तकर्ता के उचित HA भाग है कि पहले HA स्टेंट के माध्यम से चलाता है स्टेंट में खींच लिया जाता है बनाया जाता है । (ई)यहां दिखाया गया है(बी),(सी),और (बी=Dपित्त वाहिनी, HA = हेपेटिक धमनी, पीवी = पोर्टल नस) में वर्णित HA एनास्टोमोसिस की एक योजनाबद्ध है । * सीलिएक ट्रंक के उद्घाटन के अंत को बाईं गैस्ट्रिक धमनी में प्लीहा धमनी को काटकर चौड़ा किया जाता है। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।

Figure 5
चित्रा 5: पित्त वाहिनी कनेक्शन दो स्टेंट का उपयोग कर। (ए)(i) भ्रष्टाचार बीडी स्टेंट प्राप्तकर्ता बीडी में (ii) स्टेंट की सहायता से ढीला प्राप्तकर्ता के बीडी के उद्घाटन पर बंधे की सहायता से डाला जाता है । (iii) पीवी बीडी कनेक्शन से पहले जुड़ा हुआ है, जो बीडी के पीछे स्थित है ।(बी)प्राप्तकर्ता के बीडी के अंत में स्टेंट हटा दिया जाता है और (i) के लिए एक व्यापक खोलने के रूप में इस्तेमाल किया जाता है ( मैं) बीडी स्टेंट डालने के लिए एक विस्तृत खोलने के रूप में इस्तेमाल किया । (ग)जो टाई शिथिल रूप से प्राप्तकर्ता स्टेंट को सुरक्षित कर रहा है, उसका उपयोग अब कनेक्शन बांधने के लिए किया जाता है, और (i) एक और 7-0 रेशम का उपयोग स्टेंट को फिसलने या घुमाने से बचने के लिए दृढ़ता से रखने के लिए किया जाता है । कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।

Figure 6
चित्रा 6: प्रत्यारोपण प्रतिशत अस्तित्व । एचए रिकनेक्शन (एन = 8) और एचए रिककनेक्शन (एन = 17) के बिना ऑर्थोटोपिक चूहा लिवर प्रत्यारोपण। पशुओं को जिगर की विफलता और/या संक्रमण के लक्षणों के लिए प्रत्यारोपण के बाद बारीकी से पीछा किया जाता है कम से ६० दिनों के लिए । चूहों कि सर्जरी के बाद कोई जटिलताओं से पता चला बचे माना जाता था (* पी = ०.०१५, के रूप में Kaplan-Meier अनुमान [लंबी रैंक परीक्षण] द्वारा गणना की) । कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।

Figure 7
चित्रा 7: जिगर हिस्टोपैथोलॉजिकल मूल्यांकन। प्रतिनिधि हेमटॉक्सीलिन और ईओसिन-सना हुआ वर्ग जानवरों में(ए)बिना और(बी)के साथ हेपेटिक धमनी (एचए) लिवर प्रत्यारोपण (एलटीएक्स) के बाद 6 और 13 दिनों में पुनर्संबंध। (ग)सामान्य यकृत परेन्चिमा दिखा पोर्टल ट्रायड (पोर्टल नस, धमनी, और पित्त वाहिनी), केंद्रीय नस सहित lobules, और acini । पोर्टल ट्रायड के बगल में हेपेटोसाइट्स जोन 1 हेपेटोसाइट्स हैं; लोबुल के भीतर केंद्रीय नस के बगल में हेपेटोसाइट्स जोन 3 हेपेटोसाइट्स हैं; और जोन 1 और 3 के बीच हेपेटोसाइट्स जोन 2 हेपेटोसाइट्स (एएलटी = एलेनिन अमीनोट्रांसफेरेज, एएसटी = एस्पार्टेट अमीनोट्रांसफेरेज, सीवी = केंद्रीय नस) हैं। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।

Supplementary Figure 1
अनुपूरक चित्रा 1: स्टेंट और कफ आयाम। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।

Supplementary Figure 2
अनुपूरक चित्रा 2: लिवर हिस्टोपैथोलॉजिकल असेसमेंट जिसमें लिवर पैरेन्चिमा में व्यवधान दर्शाया गया है। प्रतिनिधि हेमेटॉक्सीलिन और ईओसिन-दाग वर्ग बिना एचए के बिना एलएक्स के बाद 54, 96 और 111 दिन में पुनर्संबंध करते हैं. कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें.

अनुपूरक सामग्री 1: पोर्टा कफ 200 ग्राम - समर्थन 2.0। कृपया इस फ़ाइल को देखने के लिए यहां क्लिक करें (डाउनलोड करने के लिए सही क्लिक करें) ।

अनुपूरक सामग्री 2: कावा कफ 200 ग्राम - समर्थन 2.0। कृपया इस फ़ाइल को देखने के लिए यहां क्लिक करें (डाउनलोड करने के लिए सही क्लिक करें) ।

अनुपूरक सामग्री 3: लिवर रिट्रैक्टर 200 ग्राम। कृपया इस फ़ाइल को देखने के लिए यहां क्लिक करें (डाउनलोड करने के लिए सही क्लिक करें) ।

अनुपूरक सामग्री 4: बैक होल्डर - 1.2। कृपया इस फ़ाइल को देखने के लिए यहां क्लिक करें (डाउनलोड करने के लिए सही क्लिक करें) ।

अनुपूरक सामग्री 5: कावा 150g - 2.1। कृपया इस फ़ाइल को देखने के लिए यहां क्लिक करें (डाउनलोड करने के लिए सही क्लिक करें) ।

अनुपूरक सामग्री 6: पोर्टा 1.4.1। कृपया इस फ़ाइल को देखने के लिए यहां क्लिक करें (डाउनलोड करने के लिए सही क्लिक करें) ।

अनुपूरक सामग्री 7: धारक शाखा मैकगिल। कृपया इस फ़ाइल को देखने के लिए यहां क्लिक करें (डाउनलोड करने के लिए सही क्लिक करें) ।

अनुपूरक सामग्री 8: धारक मिनी आर्म लैब। कृपया इस फ़ाइल को देखने के लिए यहां क्लिक करें (डाउनलोड करने के लिए सही क्लिक करें) ।

अनुपूरक सामग्री 9: धारक और हाथ नरम भाग 1.3। कृपया इस फ़ाइल को देखने के लिए यहां क्लिक करें (डाउनलोड करने के लिए सही क्लिक करें) ।

अनुपूरक सामग्री 10: धारक आधार - 3.1. कृपया इस फ़ाइल को देखने के लिए यहां क्लिक करें (डाउनलोड करने के लिए सही क्लिक करें) ।

Discussion

छोटे पशु यकृत प्रत्यारोपण मॉडल प्रत्यारोपण प्रतिरक्षा को समझने और उपन्यास चिकित्सीय रणनीतियों की पहचान करने के लिए महत्वपूर्ण हैं32. आदर्श छोटे पशु यकृत प्रत्यारोपण मॉडल धमनी एनास्टोमोसिस सहित मानव प्रक्रिया के सभी चरणों को दोहराता है। चूहा ओएलटी मॉडल से परिणामों की व्याख्या करना चुनौतीपूर्ण हो सकता है, क्योंकि अधिकांश संस्करणों में एचए एनास्टोमोसिस चरण शामिल नहीं होता है, जिससे जटिलताओं और रुग्णता42की उच्च दरें होती हैं। कुछ पुनर्निर्माण प्रक्रियाओं ने गुर्दे की धमनी का उपयोग किया है, जिसके लिए गुर्दे को हटाने की आवश्यकता है27। यह प्रोटोकॉल अंग हटाने से बचा जाता है, क्योंकि यह मानव प्रक्रिया में होने वाली घटनाओं से परे है।

धमनी पुनर्निर्माण भी चूहा महाधमनी31में हेरफेर करके किया जा सकता है। हालांकि, इन तरीकों को महाधमनी के व्यापक विच्छेदन और क्लैंपिंग की आवश्यकता होती है। यदि क्लैंप का समय लंबे समय तक है, तो प्राप्तकर्ता चूहे के पास डिस्टल इस्केमिया43से संबंधित खराब परिणाम होंगे। मनुष्यों में, एक एलटी सर्जिकल तकनीक में प्राप्तकर्ता गैस्ट्रोडुओडेनल धमनी (जीडीए) का बंधन और विभाजन शामिल है। हालांकि, कृंतक की शारीरिक और शारीरिक विशेषताएं इस तकनीक का उपयोग करके प्रत्यारोपण को अधिक शारीरिक रूप से चुनौतीपूर्ण बनाती हैं और जटिलताओं का कारण बन सकती हैं (यानी, अग्न्याशय और पित्त वाहिनी35 और पित्त रिसाव44)की परिगलन) । इस प्रोटोकॉल में धमनी पुनर्संबंध का उद्देश्य इस चुनौती को दरकिनार करना, डक्ट रक्त प्रवाह को बनाए रखना और प्राप्तकर्ता परिणाम में सुधार करना है।

चूहे के हा के पुनर्निर्माण के लिए आस्तीन और स्टेंटिंग तकनीक का उपयोग पहले27वर्णित किया गया है । इस तकनीक में, एक स्टेंट का उपयोग गाइड के रूप में किया जाता है, और धमनी को दाता सीलिएक ट्रंक से प्राप्तकर्ता आम एचए तक खंगाला जाता है। प्राप्तकर्ता आम हा तो बाहर विच्छेदित है, और प्राप्तकर्ता जीडीए27से बंधा हुआ है । नतीजतन, प्राप्तकर्ता बीडी के निचले हिस्से और अग्न्याशय के सिर पर रक्त की आपूर्ति से समझौता हो सकता है। ऐसा माना जाता है कि इस क्षेत्र में संपाश्र्वक परिसंचरण अक्सर पित्त वाहिनी को अपर्याप्त रक्त प्रवाह प्रदान करता है। उदाहरण के लिए, यह प्रोटोकॉल प्राप्तकर्ता जीडीए को माइक्रोवैस्कुलर क्लिप के साथ पहले क्लैंप करता है, फिर प्राप्तकर्ता बीडी को विभाजित करता है। जीडीए क्लैंप होने से विभाजित बीडी का खून नहीं निकलता। जीडीए क्लैंप हटाने के बाद बीडी से तेज रक्तस्राव देखा जाता है। यह प्रोटोकॉल, जो विभाजित प्राप्तकर्ता पित्त वाहिनी के लिए अच्छा प्रवाह रखता है, पर्याप्त यकृत रक्त परफ्यूजन प्रदान करके और पोस्ट-ओएलटी हाइपोक्सिक यकृत चोट को रोककर प्राप्तकर्ता यकृत ऊतक के शरीर विज्ञान की रक्षा करता है।

दाता पक्ष पर, एचए स्टेंट को सीलिएक ट्रंक, लेफ्ट गैस्ट्रिक धमनी और प्लीहा धमनी से पैच बनाकर आसानी से भ्रष्टाचार की तैयारी के दौरान सीलिएक ट्रंक में डाला जाता है। स्टेंट को ब्रॉड ओपनिंग के जरिए डाला जा सकता है, जो अकेले सीलिएक ट्रंक में स्टेंट डालने की कोशिश करने से कम मुश्किल होता है । यह पाया गया है कि 24 जी एचए स्टेंट के लिए उपयोग करने के लिए एक आदर्श आकार है। स्टेंट की लंबाई 1.0-1.5 मिमी लंबी होनी चाहिए, क्योंकि यह प्राप्तकर्ता के उचित हा को दाता के आम हा में आसानी से खींचने की अनुमति देने के लिए एक खुले गेट के रूप में कार्य करता है। जहां 10-0 ethilon सीवन रखा जाता है करने के लिए सावधान ध्यान के साथ, इस कनेक्शन के माध्यम से बह रक्त सीधे स्टेंट को छूने कभी नहीं होगा, और प्राप्तकर्ता के उचित हा यह अंदर से ढाल, जटिलताओं के जोखिम को कम करेगा । महत्वपूर्ण बात यह है कि वासोस्पास्म से बचने के लिए दाता के हा को कभी क्लैंप नहीं किया जाता है। दाता जीडीए को खुला छोड़कर धमनी पुनर्निर्माण की सफलता का मूल्यांकन किया जाता है। सफल एनास्टोमोसिस के परिणामस्वरूप पुनर्निर्माण पूरा होने के बाद दाता जीडीए से अच्छा रक्त प्रवाह होता है।

इस प्रोटोकॉल में, दूसरों के समान, एसएचवीसी पुनर्कनेक्शन सबसे धीमा कदम है और अंततः एंहेपेटिक चरण की अवधि तय करता है। जैसे-जैसे एनहेपेटिक समय की अवधि बढ़ती है, जोखिम इस्कीमिक चोट और यकृत रोग45बढ़ जाता है। OLT चूहा मॉडल का एक और महत्वपूर्ण घटक भ्रष्टाचार, स्टेंट, और कफ के आकार है । यदि भ्रष्टाचार बहुत छोटा है, तो भ्रष्टाचार मोड़ या फ्लिप हो सकता है, संवहनी कनेक्शन में बाधा डाल सकता है। स्टेंट और कफ के आकार के लिए चूहे की उम्र, लिंग, वजन और तनाव के अनुसार समायोजन की आवश्यकता हो सकती है। यहां उपयोग किए जाने वाले कफ के आकार को पहले28वर्णित चुना गया था, और चूहे के आकार के लिए नियंत्रित एक कफ आकार का उपयोग किया गया था। अनुवर्ती अवधि के दौरान संकट या जटिलताओं (यानी, यकृत की भीड़, एडिमा, एसाइट्स, या स्प्लेनोमेगाली) के कोई संकेत नहीं थे (आज तक: औसत = 133 दिन बाद ऑपरेशन, न्यूनतम = 115 दिन पोस्ट-सेशन, अधिकतम = 161 दिन बाद सेशन)। उम्र और सेक्स दोनों के लिए लेखांकन विभिन्न चूहा उपभेदों के लिए पीवी और आईएचवीसी के उपयुक्त आकार को निर्धारित करने के लिए आगे के अध्ययनों की आवश्यकता है।

यह संशोधित चूहा ओएलटी प्रोटोकॉल पीवी और आईएचवीसी के लिए 3डी-मुद्रित कफ का उपयोग करता है, जैसा कि पहले39,,40वर्णित है। पीवी और आईएचवीसी को जोड़ने के मौजूदा तरीकों में माइक्रोसुचर तकनीक32,कफ तकनीक46और माइक्रोसुचर-अस्थायी स्प्लिंट तकनीक47शामिल हैं। 3 डी-मुद्रित कफ तकनीक को चुना गया था, क्योंकि यह कफ के आकार को चूहे के तनाव के अनुसार मानकीकृत करने की अनुमति देता है और तैयार करने और उपयोग करने में आसान है। एक ही आयाम के साथ बड़ी मात्रा में कफ एक बार में मुद्रित किया जा सकता है। कफ की बाहरी सतह संबंधों को सुरक्षित करने और फिसल को रोकने के साथ सहायता करने के लिए दो खांचे है । कफ के आसान हेरफेर के लिए अनुमति देने के लिए कफ डिजाइन में एक पूंछ भी शामिल है। कुल मिलाकर, यह माना जाता है कि 3 डी-मुद्रित कफ को शामिल करने से उच्च सफलता दर होती है और ओएलटी प्रक्रिया की पुन: उत्पन्नता होती है। यह निर्धारित किया जाता है कि यह तकनीक सर्जिकल लर्निंग कर्व को भी छोटा करती है।

अंत में, वर्णित प्रोटोकॉल ने एक मॉडल की स्थापना की जो धमनी पुनर्संबंध चरण को शामिल करके मानव यकृत प्रत्यारोपण के समान है। इस प्रोटोकॉल को यकृत प्रत्यारोपण के कई इम्यूनोलॉजिक और सर्जिकल पहलुओं का अध्ययन करने के लिए अनुकूलित किया जा सकता है और प्रत्यारोपण के लिए प्रासंगिक उपन्यास चिकित्सीय हस्तक्षेपों का परीक्षण करने के लिए एक मॉडल के रूप में काम कर सकता है।

Disclosures

लेखकों के पास खुलासा करने के लिए कुछ नहीं है ।

Acknowledgments

इस शोध को यूएचएन में मल्टी-ऑर्गन ट्रांसप्लांट प्रोग्राम से फंड के जरिए फंड दिया गया था और टोरंटो जनरल और टोरंटो वेस्टर्न फाउंडेशन से सपोर्ट किया गया था ।

Materials

Name Company Catalog Number Comments
10-0 Ethilon Ethicon 2830G 10-0 Ethilon Black 1X5" BV100-4 Taper
10mL Syringe BD B302995 Luer-Lok Tip, Sterile, Disposable
1mL Syringe BD B309628 Luer-Lok Tip, Sterile, Disposable
20mL Syringe BD B301031 Luer-Lok Tip, Sterile, Disposable
3D Printed Cuff for IHVC Custom
3D Printed Cuff for PV Custom
3D Printed Holder for IHVC Custom
3D Printed Holder for PV Custom
3mL Syringe BD B309657 Luer-Lok Tip, Sterile, Disposable
4-0 Sofsilk Coviden GS-835 Wx coded braided silk, 30", Suture 1-Needle 26 mm Length 1/2 Circle Taper Point Needle
5-0 Monocryl Ethicon Y433H Undyed Monofilament 1X27" TF
5mL Syringe BD B309646 Luer-Lok Tip, Sterile, Disposable
7-0 Silk Teleflex Medical 103-S Black
8-0 Prolene Ethicon 2775G 8-0 Prolene Blue 1X24" BV130-5 EVP Double Armed
Barraquer Micro Needle Holder Without Catch Aesculap Surgical Instruments FD231R Curved 120 mm, 4 3/4″
Barraquer Needle Holder, Extra Fine Jaws 8.0mm, Curved With Out Lock Rumex International Co. 8-025T Small Size, Titanium
Barraquer Needle Holder, Fine Jaws 12.0mm, Curved With Out Lock Rumex International Co. 8-021T Small Size, Titanium
BD Insyte Autoguard BC 22 GA x 1.00 IN BD Angiocath / Autoguard 382523 22 G x 1.00" (0.9 mm x 25 mm) Wingless catheter, 37 mL/min
BDPrecisionGlide Single-use Needles: Regular Bevel - Regular Wall. BD B305106 PrecisionGlide stainless-steel needles with translucent, color-coded, polypropylene hubs. 22 G
BD Precisionglide Syringe Needle 21G BD 305167 Gauge 21, length 1.5 inch, hypodermic needle
BD Precisionglide Syringe Needle 30G BD 305128 Gauge 30, length 1 inch, hypodermic needle
Betadine Solution by Purdue Products LP Purdue Products Lp 67618-150-17 10% povidone–iodine topical solution USP
Bupivacaine Injection BP 0.5% SteriMax Inc. DIN:02443694 0.5% (100mg/20mL)
Curved Tying Forceps Duckworth & Kent 2-501E 6mm tying platforms, straight shafts, flat handle, length 88mm
DC Temperature Controller FHC Inc. 40-90-8D
DK Iris Scissors (Curved) Duckworth & Kent 1-211B Blunt tips, cut length 4mm, tip to pivot length 11mm, round handle, length 107mm
Ethanol, 200 proof (100%), USP, Decon Labs Decon Labs, Inc. 2716 Dilute to 70% with d2H2O
Fine Adjustable Wire Retractor Fine Science Tools 17004-05 Maximum spread: 3.5cm, Depth 5cm
Harvard Apparatus Isoflurane Funnel-Fill Vaporizer Harvard Appartus Limited 34-1040SV
Heparin LEO(heparin sodium) LEO Pharma Inc. DIN:00453811 10,000 i.u./10 mL
Ice-Pak Cryopak FIP88016 4.00 in. x 7.00 in., thickness 1.50 inch
Isoflurane United States Pharmacopeia (USP) 99.9% Piramal Healthcare Limited DIN: 02231929 250 mL, Inhalation Anesthetic, NDC 66794-017-25
Khaw Transconjunctival Adjustable Suture Control Forceps Duckworth & Kent 2-502N 5mm highly polished tying platforms, straight shafts, flat handle, length 84mm
Lactate Ringer's Injected USP, 1000mL Baxter Co. DIN: 00061085 JB2324
McPherson Tying Forceps Duckworth & Kent 2-500E 6mm tying platforms, straight shafts, flat handle, length 90mm
Metzenbaum Scissors - 14.5 cm Fine Science Tools 14024-14 Straight Sharp/Blunt
Micro Kitzmiller Clamp Scanlan 3003-630 Jaw length 23mm, Length 11cm
Microscope-Leica M525 F20 Leica Microsystems No catalog number
Non-woven Gauze Sponges Fisherbrand 22-028-556
Olsen-Hegar with Suture Cutter Fine Science Tools 12002-14 15 mm cutting edge, 2mm jaw surface - 14cm
OptixCare Eye Lube, 25gm OptixCare ES-KE8O-69U1 Formerly Optixcare Surgical Eye Lubricant
Piperacillin sodium salt Sigma-Aldrich P8396 Penicillin analog
Puritan 3" Standard Cotton Swab w/Wooden Handle Puritan Medical Products Company LLC 803-WC Regular Cotton Tipped Applicator with Wooden Handle
Round Handled Needle Holder Straight w/ Lock Fine Science Tools 12075-12 Round handles allow easy fingertip adjustments - 12.5cm
Shea Scissors Curved Blunt Fine Science Tools 14105-12 Transplant scissors with light and delicate pattern - 12cm
Stainless Steel Micro Serrefines Curved - 4mm Fine Science Tools 18055-06 Jaw length 4mm, Jaw width 0.75mm, Total length 16mm, Jaw pressure 125g
Stainless Steel Micro Serrefines Curved - 6mm Fine Science Tools 18055-05 Jaw length 6mm, Jaw width 1mm, Total length 17mm, Jaw pressure 100g
Stainless Steel Micro Serrefines Straight - 6mm Fine Science Tools 18055-03 Jaw length 6mm, Jaw width 1mm, Total length 15mm, Jaw pressure 100g
Surgical Platform Custom, magnetic
SurgiVet Vaporstick Anesthesia Machine General Anesthetic Services, Inc V7015
T/Pump Localized Therapy Stryker TP700 Series
Vacuum-Pressure Pump Barnant Co. 400-1901
Vannas Scissors with Microserrations Straight Fine Science Tools 15070-08 Cutting edge: 5mm, Tip diameter: 0.1mm - 8.5cm
Vetergesic Buprenorphine Ceva Animal Health Ltd NAC No.:12380352 0.324 mg/ml buprenorphine hydochloride Solution for Injection for Dogs and Cats
Vetroson V-10 Bipolar Electrosurgical Unit Summit Hill Laboratories No catalog number
Surgical Drape PDC Healthcare DRP1824 Multi-purpose sterile clear plastic, 18" x 24", 40/case

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Global Observatory on Donation and Transplantation. Organ Donation and Transplantation Activities. , http://www.transplant-observatory.org/download/2016-activity-data-report (2016).
  2. Asrani, S. K., Devarbhavi, H., Eaton, J., Kamath, P. S. Burden of liver diseases in the world. Journal of Hepatology. 70 (1), 151-171 (2019).
  3. Dopazo, C., et al. Analysis of adult 20-year survivors after liver transplantation. Hepatology International. 9 (3), 461-470 (2015).
  4. Schoening, W. N., et al. Twenty-year longitudinal follow-up after orthotopic liver transplantation: a single-center experience of 313 consecutive cases. American Journal of Transplantation. 13 (9), 2384-2394 (2013).
  5. Pischke, S., et al. Factors associated with long-term survival after liver transplantation: A retrospective cohort study. World Journal of Hepatology. 9 (8), 427-435 (2017).
  6. Hamdani, S., et al. Delayed and short course of rapamycin prevents organ rejection after allogeneic liver transplantation in rats. World Journal of Gastroenterology. 23 (38), 6962-6972 (2017).
  7. Endo, K., et al. Pretransplant replacement of donor liver grafts with recipient Kupffer cells attenuates liver graft rejection in rats. Journal of Gastroenterology and Hepatology. 30 (5), 944-951 (2015).
  8. Zhao, Z., et al. IL-34 Inhibits Acute Rejection of Rat Liver Transplantation by Inducing Kupffer Cell M2 Polarization. Transplantation. 102 (6), e265-e274 (2018).
  9. Nagakawa, Y., et al. Over-expression of AIF-1 in liver allografts and peripheral blood correlates with acute rejection after transplantation in rats. American Journal of Transplantation. 4 (12), 1949-1957 (2004).
  10. Gao, L. H., Zeng, L. X., Chen, H. M., Wan, R. H. Cytomegalovirus infection accelerates the process of chronic rejection in rat liver transplantation. Transplantation Proceedings. 45 (6), 2536-2538 (2013).
  11. Wu, Y., et al. Effects of combined genes of CTLA4Ig and IDO in post-liver transplantation immune tolerance of rats. Annals of Hepatology. 15 (5), 729-737 (2016).
  12. He, X. S., et al. Influence of warm ischemia injury on hepatic functional status and survival of liver graft in rats. Hepatobiliary and Pancreatic Diseases International. 2 (4), 504-508 (2003).
  13. Tamura, A., et al. Combination effect of tacrolimus and FTY720 in liver transplantation in rats. Transplantation Proceedings. 31 (7), 2785-2786 (1999).
  14. Wang, Z., et al. RhGH attenuates ischemia injury of intrahepatic bile ducts relating to liver transplantation. Journal of Surgical Research. 171 (1), 300-310 (2011).
  15. Jiang, J. W., et al. Chronic bile duct hyperplasia is a chronic graft dysfunction following liver transplantation. World Journal of Gastroenterology. 18 (10), 1038-1047 (2012).
  16. Tang, Y., et al. S-Adenosylmethionine attenuates bile duct early warm ischemia reperfusion injury after rat liver transplantation. Molecular Immunology. 95, 83-90 (2018).
  17. Nosaka, T., Bowers, J. L., Cay, O., Clouse, M. E. Biliary complications after orthotopic liver transplantation in rats. Surgery Today. 29 (9), 963-965 (1999).
  18. Howden, B., Jablonski, P., Grossman, H., Marshall, V. C. The importance of the hepatic artery in rat liver transplantation. Transplantation. 47 (3), 428-431 (1989).
  19. Post, S., et al. The impact of arterialization on hepatic microcirculation and leukocyte accumulation after liver transplantation in the rat. Transplantation. 54 (5), 789-794 (1992).
  20. Hori, T., et al. Impact of hepatic arterial reconstruction on orthotopic liver transplantation in the rat. Journal of Investigative Surgery. 25 (4), 242-252 (2012).
  21. Zhou, S., et al. New method of stent-facilitated arterial reconstruction for orthotopic mouse liver transplantation. Journal of Surgical Research. 187 (1), 297-301 (2014).
  22. Noack, K., Bronk, S. F., Kato, A., Gores, G. J. The greater vulnerability of bile duct cells to reoxygenation injury than to anoxia. Implications for the pathogenesis of biliary strictures after liver transplantation. Transplantation. 56 (3), 495-500 (1993).
  23. Imamura, H., Rocheleau, B., Cote, J., Huet, P. M. Long-term consequence of rat orthotopic liver transplantation with and without hepatic arterial reconstruction: a clinical, pathological, and hemodynamic study. Hepatology. 26 (1), 198-205 (1997).
  24. Reck, T., et al. Impact of arterialization on hepatic oxygen supply, tissue energy phosphates, and outcome after liver transplantation in the rat. Transplantation. 62 (5), 582-587 (1996).
  25. Zhao, D., Wheatley, A. M. Orthotopic liver transplantation in the rat: comparison of models with and without rearterialization of the graft. European Surgical Research. 25 (5), 294-302 (1993).
  26. Chaland, P., et al. Orthotopic liver transplantation with hepatic artery anastomoses. Hemodynamics and response to hemorrhage in conscious rats. Transplantation. 49 (4), 675-678 (1990).
  27. Liu, X., He, C., Huang, T., Gu, J. Development of a New Technique for Reconstruction of Hepatic Artery during Liver Transplantation in Sprague-Dawley Rat. PLoS One. 10 (12), e0145662 (2015).
  28. Oldani, G., Lacotte, S., Morel, P., Mentha, G., Toso, C. Orthotopic liver transplantation in rats. Journal of Visualized Experiments. (65), (2012).
  29. Lee, S., Charters, A. C., Chandler, J. G., Orloff, M. J. A technique for orthotopic liver transplantation in the rat. Transplantation. 16 (6), 664-669 (1973).
  30. Kamada, N., Calne, R. Y. Orthotopic liver transplantation in the rat. Technique using cuff for portal vein anastomosis and biliary drainage. Transplantation. 28 (1), 47-50 (1979).
  31. Kashfi, A., et al. A review of various techniques of orthotopic liver transplantation in the rat. Transplantation Proceedings. 37 (1), 185-188 (2005).
  32. Chong, A. S., Alegre, M. L., Miller, M. L., Fairchild, R. L. Lessons and limits of mouse models. Cold Spring Harbor Perspectives in Medicine. 3 (12), a015495 (2013).
  33. Hasuike, Y., et al. A simple method for orthotopic liver transplantation with arterial reconstruction in rats. Transplantation. 45 (4), 830-832 (1988).
  34. Hickman, R., Engelbrecht, G. H., Duminy, F. J. A technique for liver transplantation in the rat. Transplantation. 48 (6), 1080 (1989).
  35. Steffen, R., Ferguson, D. M., Krom, R. A. A new method for orthotopic rat liver transplantation with arterial cuff anastomosis to the recipient common hepatic artery. Transplantation. 48 (1), 166-168 (1989).
  36. Shi, Y., et al. Magnetic ring anastomosis of suprahepatic vena cava: novel technique for liver transplantation in rat. Transplant International. 28 (1), 89-94 (2015).
  37. Dippe, B. E., et al. An improved model for rat liver transplantation including arterial reconstruction and simplified microvascular suture techniques. Journal of Investigative Surgery. 5 (4), 361-373 (1992).
  38. Kobayashi, E., Kamada, N., Goto, S., Miyata, M. Protocol for the technique of orthotopic liver transplantation in the rat. Microsurgery. 14 (8), 541-546 (1993).
  39. Oldani, G., et al. Efficient nonarterialized mouse liver transplantation using 3-dimensional-printed instruments. Liver Transplation. 22 (12), 1688-1696 (2016).
  40. Oldani, G., et al. Manufacturing devices and instruments for easier rat liver transplantation. Journal of Visualized Experiments. (75), e50380 (2013).
  41. Li, J., et al. Modified sleeve anastomosis for reconstruction of the hepatic artery in rat liver transplantation. Microsurgery. 22 (2), 62-68 (2002).
  42. Li, G. L., et al. High incidence of biliary complications in rat liver transplantation: can we avoid it? World Journal of Gastroenterology. 17 (26), 3140-3144 (2011).
  43. Zammert, M., Gelman, S. The pathophysiology of aortic cross-clamping. Best Practice and Research: Clinical Anaesthesiology. 30 (3), 257-269 (2016).
  44. Gao, W., Lemasters, J. J., Thurman, R. G. Development of a new method for hepatic rearterialization in rat orthotopic liver transplantation. Reduction of liver injury and improvement of surgical outcome by arterialization. Transplantation. 56 (1), 19-24 (1993).
  45. Ijtsma, A. J., et al. The clinical relevance of the anhepatic phase during liver transplantation. Liver Transplation. 15 (9), 1050-1055 (2009).
  46. Miyata, M., Fischer, J. H., Fuhs, M., Isselhard, W., Kasai, Y. A simple method for orthotopic liver transplantation in the rat. Cuff technique for three vascular anastomoses. Transplantation. 30 (5), 335-338 (1980).
  47. Marni, A., Ferrero, M. E. A four-technique comparative study of orthotopic liver transplantation in the rat. American Journal of Surgery. 156 (3 Pt 1), 209-213 (1988).

Tags

मेडिसिन अंक 165 ऑर्थोटोपिक लिवर ट्रांसप्लांट हेपेटिक धमनी एनास्टोमोसिस हेपेटिक धमनी रिककनेक्शन पोर्टल नस कफ इंफ्राहेपेटिक अवर वेना कावा कफ पित्त वाहिनी स्टेंट 3डी-प्रिंटेड कफ तकनीक माइक्रोवैस्कुलर तकनीक एंहेपेटिक समय
ऑर्थोटोपिक लिवर प्रत्यारोपण के चूहे मॉडल में धमनी पुनर्संबंध के बाद कम जटिलताओं
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Chen, X. C., Sekhon, M., Ma, X. Z.,… More

Chen, X. C., Sekhon, M., Ma, X. Z., Manuel, J., Chung, S., He, E., Bartczak, A., Fischer, S., Thoeni, C., Oldani, G., Perciani, C. T., MacParland, S., McGilvray, I. Reduced Complications after Arterial Reconnection in a Rat Model of Orthotopic Liver Transplantation. J. Vis. Exp. (165), e60628, doi:10.3791/60628 (2020).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter