Questo documento fornisce una descrizione dettagliata di come costruire un modello animale della fase anepatica (ischemia epatica) nei ratti per facilitare la ricerca di base sulle lesioni da ischemia-riperfusione dopo il trapianto di fegato.
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Articolo metodologico
Lesione da ischemia-riperfusione dell'organo simulando cambiamenti emodinamici nel modello di trapianto di fegato di ratto
In questo articolo
Sommario
Abstract
Il trapianto di fegato ortotopico (OLT) nei ratti è un modello animale provato e collaudato utilizzato per studi preoperatori, intraoperatori e postoperatori, tra cui lesioni da ischemia-riperfusione (IRI) di organi extraepatici. Questo modello richiede numerosi esperimenti e dispositivi. La durata della fase anepatica è strettamente correlata al tempo in cui sviluppare l'IRI dopo il trapianto. In questo esperimento, abbiamo usato cambiamenti emodinamici per indurre danni extraepatici agli organi nei ratti e determinato il tempo massimo di tolleranza. Il tempo fino alla lesione d'organo più grave variava per diversi organi. Questo metodo può essere facilmente replicato e può anche essere utilizzato per studiare l'IRI degli organi extraepatici dopo il trapianto di fegato.
Introduzione
La lesione da ischemia-riperfusione (IRI) è una complicazione comune dopo il trapianto di fegato. L'IRI epatico è un processo patologico che coinvolge danni cellulari mediati dall'ischemia e deterioramento anomalo della riperfusione epatica. L'IRI epatico e la risposta immunitaria innata locale possono essere suddivisi in IRI caldo e freddo, in base alle differenze nell'ambiente clinico1. L'IRI caldo è indotto da lesioni alle cellule staminali, di solito a seguito di trapianto di fegato, shock e trauma2. L'IRI freddo è una complicazione del trapianto di fegato causata da cellule endoteliali e circolazione periferica
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Protocollo
Il Comitato etico animale ha approvato l'esperimento della Guangxi Medical University (No20190920). Tutti gli animali sono stati forniti dall'Animal Experiment Center della Guangxi Medical University. Abbiamo usato ratti Sprague Dawley maschi SPF (200-250 g, 10-12 settimane), mantenuti sotto la temperatura ambiente di 25 ± 2 °C e umidità di 50 ± 10%. L'alimentazione è stata interrotta 24 ore prima dell'operazione; tuttavia, l'acqua è stata fornita.
NOTA: Un operatore può eseguire tutte le operazioni senza una base di microchirurgia o un microscopio chirurgico.
1. Operazione
- Dopo la pesatura, anestetizza....
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Risultati
Tolleranza dei ratti all'ischemia epatica
In questo modello animale, i siti in cui i vasi sanguigni sono stati legati durante il funzionamento sono mostrati nella figura 1. I ratti sono stati divisi casualmente in 5 gruppi per ischemia per 15 minuti (gruppo I15), 30 minuti (gruppo I30), 45 minuti (gruppo I45), 60 minuti (I60) e gruppo sham, con 10 ratti in ogni gruppo. Il tasso di sopravvivenza di ogni gruppo è stato osservato 14 giorni dopo l'operazione. Tutti i ratti so.......
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Discussione
L'OLT nei ratti è un modello ideale per studiare la conservazione degli organi nel trapianto di fegato, nell'IRI, nel rigetto dei trapianti, nella tolleranza immunitaria, nella patologia e farmacologia dei trapianti, nell'omotrapianto e nello xenotrapianto. Attualmente, è ampiamente utilizzato nella ricerca sperimentale del trapianto di fegato.
Durante gli studi pilota abbiamo somministrato per la prima volta l'anestesia intraperitoneale al sodio pentobarbitale e abbiamo scoperto che ciò ha po.......
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Dichiarazioni
Gli autori di questo manoscritto non hanno conflitti di interesse da rivelare.
Ringraziamenti
Vorremmo riconoscere gli utili suggerimenti forniti dal Dr. Wen-tao Li e dal Dr. Ji-hua Wu del Secondo Ospedale Affiliato della Guangxi Medical University. Gli autori ringraziano i nostri compagni di squadra per i commenti e le discussioni utili. Gli autori vorrebbero anche ringraziare i revisori anonimi e gli editori di JoVE per i loro commenti. Un ringraziamento speciale dovrebbe andare ai genitori del dottor Yuan per il loro continuo sostegno e incoraggiamento. Il lavoro è stato sostenuto dalla Ningbo Natural Science Foundation (2014A610248).
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Soluzione di paraformaldeide al 4% | Shanghai Macklin Biochemical Co., Ltd | P804536 | |
| forno di essiccazione ad aria | Shanghai Binglin Electronic Technology Co., Ltd. | BPG | |
| Alanina aminotransferasi (ALT)Kit | Elabscience Biotechnology Co., Ltd | E-BC-K235-S | |
| ammoniaca | Sinopharm Chemical Reagents Co., Ltd | 10002118 | |
| Kit amilasi | Elabscience Biotechnology Co., Ltd | E-BC-K005-M | |
| etanolo anidro | Sinopharm Chemical Reagents Co., Ltd | 100092183 | |
| Animal macchina per anestesia | Shenzhen Ruiwode Life Technology Co., Ltd | Kit R640 | |
| aspartato aminotransferasi (AST) | Rayto Life and Analytical Sciences Co., Ltd. | S03040 | |
| analizzatore biochimico automatico. | SIEMENS AG FWB:SIE, NYSE:SI Co., Ltd. | 2400 | |
| Biosystems (quando necessario) | Chengdu Taimeng Electronics Co., Ltd. | BL-420F | |
| Centrifuga | Baiyang Medical Instrument Co., Ltd. | BY-600A | |
| vetro di copertura | Jiangsu Shitai Experimental Equipment Co., Ltd | 10212432C | |
| Kit creatinina | Rayto Life and Analytical Sciences Co., Ltd. | S03076 | |
| macchina di disidratazione | Ungheria 3DHISTECH Co., Ltd | Donatello Serie 2 | |
| macchina di inclusione | Hubei Xiaogan Kuohai Medical Technology Co., Ltd. | KH-BL1 | |
| Wuhan Junjie Electronics Co., Ltd | JB-L5 | ||
| Wuhan Saiwell Biotechnology Co., Ltd | G1005 | ||
| Shanghai huayong cera di paraffina co., Ltd | Q / YSQN40-91 | ||
| acido cloridrico | Sinopharm Chemical Reagents Co., Ltd | 10011018 | |
| pinze per lenti intraoculari (IOL) | Guangzhou Guangmei Medical Equipment Co., Ltd. | JTZRN | |
| Isoflurane | Shenzhen Ruiwode Life Technology Co. Ltd | ||
| micro forbici (quando nessary) | Shanghai Surgical Instrument Factory | WA1010 | |
| portaaghi | Shanghai Surgical Instrument Factory | J32010 | |
| gomma neutra | Shanghai Huashen Healing Equipment Co., Ltd. | — | |
| microscopio ottico normale | Nikon Instrument Shanghai Co., Ltd | Nikon Eclipse CI | |
| pinza oftalmica | Surgical Instrument Factory | J3CO30 | |
| pinza oftalmica | Surgical Instrument Factory | JD1060 | piegatura |
| Forbici oftalmiche | Surgical Instrument Factory | J1E0 | |
| affettatrice patologica | Shanghai Leica Instrument Co., Ltd | Pipette RM2016 | |
| Dragon Laboratory Instruments Co., Ltd. | |||
| divaricatori | Beijing Jinuotai Technology Development Co., Ltd. | Scanner JNT-KXQ | |
| Ungheria 3DHISTECH Co., Ltd | Pannoramic 250 | ||
| vetrini | Wuhan Saiwell Biotechnology Co., Ltd | G6004 | |
| xilene | Sinopharm Chemical Reagents Co. Ltd | 1330-20-7 |
Riferimenti
- Dar, W. A., Sullivan, E., Byon, J. S., Eltzschig, H., Ju, C. Ischaemia reperfusion injury in liver transplantation: Cellular and molecular mechanisms. Liver International. 39 (5), 788-801 (2019).
- Qiao, P. F., Yao, L., Zhang, X. C., Li, G. D., Wu, D. Q.
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Ristampe e permessi
