Summary
تظهر المخطوطة والفيديو المرتبط بها تقنية خزعة عن طريق الجلد للحصول على عينات من الأنسجة الدهنية تحت الجلد من المناطق المحيطة بالسرة. هذه الطريقة هي طريقة منخفضة المخاطر وفعالة للتحقيق في مجموعة من المعلمات (على سبيل المثال ، التعبير الجيني أو البروتين ، نشاط الإنزيم ، محتوى الدهون) داخل الأنسجة الدهنية.
Abstract
الدراسات على الأنسجة الدهنية مفيدة في فهم الحالات الأيضية وغيرها. يمكن الوصول إلى الأنسجة الدهنية البشرية تحت الجلد. مع التدريب المناسب والالتزام الصارم بتقنية التعقيم ، يمكن الحصول على عينات دهنية تحت الجلد بأمان وكفاءة في بيئة غير سريرية من قبل الباحثين. بعد إعطاء التخدير الجانبي الموضعي إلى السرة ، يتم إدخال إبرة 14 جم متصلة بحقنة 5 أو 10 مل من خلال الجلد إلى الأنسجة تحت الجلد. تحت الشفط ، يتم نقل المحقنة في حركة متبادلة ، تقطيع لعزل شظايا الأنسجة الدهنية. سحب المكبس يكفي لضمان شفط شظايا الأنسجة الدهنية من خلال الإبرة إلى المحقنة. يمكن لخزعة واحدة جمع حوالي 200 ملغ من الأنسجة. تقنية الخزعة هذه آمنة جدا لكل من المشاركين وموظفي البحوث. بعد الخزعة ، يمكن للمشاركين استئناف معظم الأنشطة اليومية ، على الرغم من أنه يجب عليهم تجنب السباحة والأنشطة الشاقة للغاية لمدة 48 ساعة لتجنب النزيف المفرط. يمكن للمشاركين الخضوع بأمان ل 2 خزعات في غضون يوم واحد ، مما يعني أنه يمكن تطبيق هذه التقنية في دراسات التدخل الحاد قبل وبعد ذلك.
Introduction
يمكن أن توفر الأنسجة الدهنية معلومات مفيدة عن وظيفة التمثيل الغذائي للبشر. الأنسجة الدهنية البشرية تحت الجلد يمكن الوصول إليها بسهولة. تم وصف تقنية لاستخراج الأنسجة الدهنية تحت الجلد لأول مرة في منتصف 80s1. منذ ذلك الحين ، تم تحسين البروتوكول الأولي لزيادة العائد وتحسين تحمل المشاركين في الدراسة. يمكن الحصول على الأنسجة الدهنية تحت الجلد من العديد من المواقع ، وأكثرها شيوعا من glutei1 ومنطقة البطن2. قد تكون العينات من هذا الأخير مرغوبة أكثر لأنها توفر معلومات أكثر قيمة في السياقات المتعلقة بأمراض التمثيل الغذائي3.
يمكن إجراء خزعة الأنسجة الدهنية تحت الجلد باستخدام طريقة شفط الدهون المصغرة بأمان وكفاءة في بيئة غير سريرية. بعد التدريب المناسب من قبل طبيب معتمد من مجلس الإدارة واستخدام تقنية تعقيم صارمة ، يمكن للباحثين إجراء هذه الخزعات بشكل روتيني بأقل قدر من المخاطر على كل من المشاركين والمحققين. يجب أن يتكون فريق الخزعة من 2 أفراد على الأقل: الشخص الذي سيقوم بإجراء الخزعة ومساعد.
يتم تكليف الشخص المسؤول عن الخزعة بتأكيد هوية المشارك ، والتحقق من أن المشارك يمكن أن يخضع للإجراء بأمان (انظر خطوات البروتوكول 2.1-2.4 أدناه) ، وضمان راحة المشارك طوال الإجراء ، وضمان الحفاظ على تقنية معقمة طوال الإجراء ، وتنفيذ الإجراء ، وتزويد المشارك بإجراءات الرعاية اللاحقة اللفظية والمكتوبة. يتمثل دور المساعد في التعامل مع الأنسجة الدهنية التي تم الحصول عليها ومعالجتها بسرعة لتحليلها و / أو تخزينها لاحقا. يساعد المساعد أيضا من خلال كونه "الأيدي غير المعقمة" وضمان راحة المشارك طوال الإجراء. الغرض من هذا الفيديو والورقة هو وصف إجراء الخزعة خطوة بخطوة للحصول بأمان على الأنسجة الدهنية تحت الجلد من منطقة البطن.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
ملاحظة: وافقت لجنة الأبحاث السريرية أو لجنة الأبحاث السريرية أو جامعة ستيرلينغ NHS أو Invasive على إجراء الخزعة الموضح أدناه. يجب أن تتم الموافقة على جميع الدراسات البحثية التي تستخدم هذا الإجراء من قبل لجنة الأخلاقيات المستقلة المناسبة. يجب أن يكون متلقي الخزعة قد أكمل تدريبا رسميا على التقنية الموصوفة وفقا لمتطلبات مؤسسته. عادة ، يتضمن ذلك مراقبة عرض توضيحي لتقنية خزعة الأنسجة الدهنية الموصوفة من قبل طبيب معتمد من مجلس الإدارة ، تليها ممارسة خاضعة للإشراف. بمجرد أن يقوم المتدرب بإجراء 10 خزعات من الأنسجة الدهنية على مواضيع تطوعية تحت الإشراف ، سيتم فحصها من قبل طبيب معتمد من مجلس الإدارة لضمان المعرفة الجيدة والممارسة العملية. ثم يقوم الطبيب المعتمد من مجلس الإدارة بتزويد الفرد بنموذج فحص موقع.
1. إعداد غرفة المختبر
- تأكد من أن المختبر يحتوي على غرفة خاصة مناسبة مع أسطح نظيفة وغير مسامية قابلة للمسح وسرير نظيف ومريح (يفضل أن يكون غير مسامي) يمكن للمشارك الاستلقاء عليه. نظف جميع الأسطح المطلوبة لإجراء الخزعة باستخدام رذاذ الإيثانول بنسبة 70٪ والمناشف الورقية النظيفة. توفير وسائد أو وسائد نظيفة لدعم المشارك إذا لزم الأمر.
- احتفظ بصناديق التخلص من الأدوات الحادة المناسبة وأكياس النفايات ذات المخاطر البيولوجية في متناول اليد من المنطقة التي يتم فيها إجراء الخزعة وفي متناول الشخص الذي يأخذ الخزعة.
- قم بإعداد المعدات اللازمة للإجراء ووضعها على عربة طبية عامة تم تنظيفها حديثا قبل وصول المشارك إلى المختبر (الشكل 1). للحصول على قائمة كاملة بالمواد الاستهلاكية المطلوبة، راجع جدول المواد.
2. إعداد المشاركين
- التأكد من أن جميع المشاركين يقدمون موافقة خطية مستنيرة قبل الخضوع للإجراء وفقا للبروتوكولات المطلوبة من قبل لجنة الأخلاقيات المستقلة في المؤسسة. بالإضافة إلى ذلك ، اطلب من المشاركين إكمال استبيان مكتوب للتأكد من أنهم لا يعانون من حساسية تجاه أي مواد مستخدمة في الإجراء (وهي النيكل والكروم والتخدير الموضعي واليود والمحار واللصقات).
- تأكد من هوية المشارك. تأكد من أن المشارك يفهم الإجراء الذي سيتم تنفيذه والآثار الثانوية المحتملة ، بما في ذلك الكدمات والألم والعدوى (الجدول 1). جمع الموافقة الشفهية بالإضافة إلى الموافقة الخطية المستنيرة التي تم الحصول عليها مسبقا.
- صف للمشارك كيف سيتم تنفيذ الإجراء ، مع التركيز على كيفية شعور إدارة المخدر والخزعة نفسها. تأكد من أن المشارك مرتاح للمتابعة.
ملاحظة: المخدر الموضعي تحت الجلد سوف ينتج إحساسا لاذعا ، على غرار لدغة النحل لمدة قصيرة. أفاد العديد من المشاركين أن إدارة التخدير هي الجزء الأكثر إزعاجا من هذه التقنية. بمجرد أن يصبح المخدر ساري المفعول ، يجب ألا يشعر المشارك بأكثر من إحساس طفيف بالسحب أثناء الخزعة. - تأكد من أن المشارك ليس لديه حساسية من المخدر الموضعي (على وجه التحديد من نوع أمينو أميد ، إذا كان يستخدم يدوكائين أو ما شابه) ، وبعض المعادن (النيكل والكروم) ، والمحار (إذا كان يستخدم المحاليل القائمة على اليود). بالإضافة إلى ذلك ، تأكد من أن المشاركين لا يتناولون أي شكل من أشكال الأدوية المضادة للتخثر.
- وفر للمشارك فرصة للذهاب وإفراغ المثانة إذا لزم الأمر ، للتأكد من أنه لا يتعين عليه مقاطعة الإجراء أو تجربة عدم الراحة غير المبررة في الخطوة 4.1.
3. إجراء الخزعة - تعليمات لأخذ الخزعة
- بمجرد أن يكون المشارك مستلقيا في وضع ضعيف ، حدد موقع الخزعة على بعد حوالي 5-10 سم جانبي من السرة.
ملاحظة: إذا كان المشارك سيخضع لخزعات متعددة في نفس اليوم ، فحدد مواقع الخزعة على الجانبين المتعارضين من السرة لكل خزعة. سيضمن ذلك المسافة القصوى بين كل موقع خزعة. - اغسل يديك بالصابون والماء الدافئ وفقا للإرشادات الطبية القياسية4.
- ضع الورقة المعقمة على العربة النظيفة أو منطقة العمل ، مع الحرص على لمس الحواف الخارجية للورقة فقط.
- ارتداء قفازات جراحية معقمة باستخدام تقنية التعقيم المناسبة. اطلب من المساعد فتح بقية المعدات بطريقة تسقط على الورقة المعقمة المعدة دون لمس / تلويث المعدات. تأكد من أن المساعد يحرص على عدم لمس العناصر عند إزالة الأدوات من أغلفتها المعقمة.
- اطلب من المساعد توزيع كمية صغيرة من المحلول القائم على اليود على بعض الشاش المعقم (دون الإفراط في تشبع الشاش) على سطح العمل.
- تعقيم ما يقرب من 5-10 سم2 حول موقع الخزعة المختار باستخدام الشاش المعقم والمحلول القائم على اليود. تأكد من تنظيف الجلد بحركة لولبية تتحرك إلى الخارج من موقع الخزعة المقترح. كرر عملية تنظيف البشرة مرتين. قم بإزالة السائل الزائد (على سبيل المثال ، الجري خارج المنطقة المعقمة) عن طريق المسح بشاش معقم جديد.
- جنبا إلى جنب مع المساعد ، تأكد شفهيا من محتوى قارورة التخدير الموضعي (2٪ يدوكائين في هذا البروتوكول) وأن هذا في حدود تاريخ انتهاء صلاحيته. اطلب من المساعد أن يمسك القارورة المفتوحة رأسا على عقب ويسحب 5 مل من المخدر الموضعي إلى حقنة ، باستخدام إبرة 21 جم. تخلص من الإبرة في صندوق الأدوات الحادة ، وتأكد من خلو المحقنة من فقاعات الهواء.
- ضع إبرة 26 جم على المحقنة واطرد أي فقاعات هواء. قرصة بلطف جلد البطن والأنسجة الدهنية ، وتحريكها بعيدا عن جدار البطن. ثم أدخل الإبرة أفقيا في الأنسجة تحت الجلد بزاوية لا تزيد عن 10 درجات بالنسبة لسطح الجلد.
- اسحب مكبس المحقنة 0.5 مل إضافي (للتأكد من أن الإبرة ليست في وعاء دموي). إذا ظهر دم في المحقنة، اسحب الإبرة وأعد إدخالها بزاوية مختلفة.
- ارفع لطخة قطرها 2-4 مم لتخدير منطقة الإدراج.
- قم بإدخال الإبرة في الأنسجة تحت الجلد وقم بإعطاء ~ 1 مل من يدوكائين في نمط على شكل مروحة (الشكل 2) ، مع الحرص على سحب المكبس في كل مرة قبل حقن المخدر.
- قم بإزالة إبرة 26 G والتخلص منها ، وتطبيق إبرة 21 G على المحقنة ، وطرد أي فقاعات هواء ، وإدارة ما تبقى ~ 4 مل من يدوكائين في نمط على شكل مروحة (الشكل 2) ، مع الحرص على سحب المكبس في كل مرة قبل حقن المخدر.
- انتظر حوالي 5 دقائق حتى يصبح المخدر الموضعي ساري المفعول. استخدم مشرطا معقما لحث منطقة الخزعة بلطف على i) التأكد من أن المخدر الموضعي قد أصبح ساري المفعول و ii) تحديد حدود المنطقة المخدرة. إذا لزم الأمر ، انتظر دقيقة أو دقيقتين إضافيتين وأعد تقييمه.
- بمجرد الاقتناع بأن المخدر الموضعي يعمل ، قم بقرصة الجلد والأنسجة الدهنية بلطف (كما في الخطوة 3.8) واستخدم مشرطا معقما لعمل ثقب صغير 1-2 مم في الجلد.
ملاحظة: يجب أن يكون هذا فقط كبيرا بما يكفي لتسهيل دخول إبرة 14 G ويجب أن يكون صغيرا بما يكفي بحيث لا يلزم خياطة لإغلاقه. من الشائع أن يحدث بعض النزيف من هذه النقطة فصاعدا ، والتي يمكن السيطرة عليها بقطعة من الشاش المعقم. - أولا ، ضع إبرة 14 جم على حقنة 5 أو 10 مل. ثم، أثناء الضغط بلطف على الجلد والأنسجة الدهنية، أدخل الإبرة تدريجيا من خلال الثقب في الأنسجة الدهنية بشكل مركزي تقريبا في منطقة التخدير وبزاوية لا تزيد عن 10 درجات بالنسبة لسطح الجلد.
ملاحظة: بالنسبة لجميع حالات تقدم الإبرة في الخطوة 3.11 ، يجب الحفاظ على زاوية حقنة لا تزيد عن 10 درجات.- ضع الشفط عن طريق سحب المكبس إلى علامة 2.5 مل تقريبا. خذ الخزعة عن طريق تحريك الإبرة في حركة سريعة للخلف وإلى الأمام لتقطيع شظايا الأنسجة الدهنية. بعد حوالي 30 ثانية ، قم بلف الإبرة والمحقنة من خلال 90 درجة وكرر هذا الإجراء لتفتيت شظايا الأنسجة الدهنية ، والتي يتم شفطها بعد ذلك إلى المحقنة عن طريق الشفط.
ملاحظة: يمكن استخدام أحجام المحاقن الأخرى. من الضروري أن يختار الباحث حجم حقنة يسمح بقبضة جيدة على المحقنة والحفاظ على تراجع المكبس بشكل مريح للحفاظ على الفراغ. تتوفر محاقن القفل التي تحافظ على الفراغ ، والتي يمكن أن تحسن التحكم في الإبرة وتقلل من الصعوبة المتصورة لأخذ الخزعة 5. - بعد حوالي 45-60 ثانية من الخطوة 3.11.1 ، قم بإزالة الإبرة وإفراغ محتوى المحقنة على طبقة من الشاش تغطي قارب وزن. تأكد من أن تجويف الإبرة متجه لأسفل لتجنب تناثر الدم المحتمل.
- كرر الخطوتين 3.11.1 و3.11.2 لمدة أقصاها 3 مرات. تحقق من أن المشارك راض عن المتابعة قبل كل تكرار للإجراء أعلاه.
- أثناء تنفيذ الخطوتين 3-11-1 و 3-11-2، أوعز إلى المساعد بمعالجة العينات وإعدادها للتحليل/التخزين (انظر القسم 5).
- ضع الشفط عن طريق سحب المكبس إلى علامة 2.5 مل تقريبا. خذ الخزعة عن طريق تحريك الإبرة في حركة سريعة للخلف وإلى الأمام لتقطيع شظايا الأنسجة الدهنية. بعد حوالي 30 ثانية ، قم بلف الإبرة والمحقنة من خلال 90 درجة وكرر هذا الإجراء لتفتيت شظايا الأنسجة الدهنية ، والتي يتم شفطها بعد ذلك إلى المحقنة عن طريق الشفط.
4. إجراء ما بعد الخزعة
- بمجرد الحصول على عينة مرضية (أي ~ 200 ملغ) من الأنسجة الدهنية ، ضع 1-2 طبقات من الشاش المعقم فوق جرح الثقب ، ثم ضع كيس ثلج فوقها ، واضغط بقوة لمدة 10 دقائق تقريبا للحث على الإرقاء.
- عند حدوث الإرقاء ، امسح أي محلول قائم على اليود / الدم المجفف بشاش معقم ، وقم بتطبيق ضمادة جرح لاصقة مع وسادة ماصة على الموقع. تحقق من أن المشارك يشعر بصحة جيدة وقدم تعليمات شفهية ومكتوبة حول الرعاية اللاحقة لموقع الخزعة.
- التأكيد على أن المشاركين من المرجح أن يظهروا بعض الكدمات في الأيام القليلة المقبلة. أخبرهم أن هذا قد يكون كبيرا ، على الرغم من أنه يتم تقليله بواسطة كيس الثلج في الخطوة 4.1 وسيتم حله دون آثار دائمة.
- نوصي بأنه إذا شعر المشاركون بأي إزعاج / ألم بمجرد أن يزول المخدر ، فيجب عليهم تناول المسكنات مثل الباراسيتامول باتباع التعليمات الموجودة على العبوة ولكن الامتناع عن تناول المسكنات التي لها أنشطة مضادة للتخثر (مثل الإيبوبروفين أو الأسبرين).
- اشرح أن التورم أو الاحمرار أو الإفرازات من موقع الخزعة هي مؤشرات على العدوى. في حالة حدوث هذه العلامات أو الأعراض غير المحتملة ، اطلب من المشارك طلب المشورة الطبية على وجه السرعة من الطبيب أو وحدة الحوادث والطوارئ المحلية. أبلغ المشارك أنه إذا طلب المشورة الطبية ، فيجب عليه أيضا إخطار فريق البحث.
ملاحظة: بصفتهم موظفين في مجال البحوث، لا يمكن لمقدم الخزعة ولا للمساعد تقديم المشورة الطبية أو العلاج؛ ومع ذلك ، من المهم أن يكون فريق البحث على دراية بجميع حالات المضاعفات الناتجة عن إجراء الخزعة وتسجيلها. - نوصي المشاركين بتجنب السباحة أو النشاط الشاق المفرط لمدة 48 ساعة حتى يتم إغلاق موقع الشق.
- قم بإزالة أي أدوات حادة مستخدمة ومواد ملوثة إلى أدوات حادة و / أو حاويات نفايات سريرية مخصصة.
- نظف جميع الأسطح المستخدمة في إجراء الخزعة باستخدام رذاذ الإيثانول بنسبة 70٪ وتنظيف المناشف الورقية. ضع عناصر الفراش التي يمكن التخلص منها والتي لا يمكن التخلص منها في أكياس سريرية مناسبة للتخلص منها أو تنظيفها ، على التوالي.
5. معالجة العينات - تعليمات للمساعد
- استخدم ملاقط معقمة ومحلول ملحي بنسبة 0.9٪ لشطف عينة الأنسجة الدهنية لإزالة الملوثات المرئية (أي الدم والأوعية الدموية). ثم قم بوزن عينات الأنسجة الدهنية باستخدام المقاييس الرقمية. قسم الأنسجة إلى قطع ذات حجم مناسب لتحليلها في مجرى النهر وضعها في أنابيب تخزين مناسبة باستخدام ملاقط معقمة. اغمر الأنابيب التي تحتوي على خزعات الأنسجة الدهنية في النيتروجين السائل عند -190 درجة مئوية لتجميد الفلاش حتى يتم تخزين العينات عند -80 درجة مئوية.
ملاحظة: يجب على المساعد إكمال معالجة العينة في أسرع وقت ممكن، عادة في غضون 3 دقائق من استخلاص العينة، لتقليل تدهور العينة المحتمل.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
يعد إجراء خزعة الأنسجة الدهنية الموصوف تقنية فعالة ومنخفضة المخاطر للباحثين للحصول على عينات من الأنسجة الدهنية تحت الجلد من متطوعين بشريين. أجرينا 39 خزعة من الأنسجة الدهنية تحت الجلد باستخدام الإجراء الموصوف في 11 أنثى صحية وذات وزن طبيعي (العمر ، 27.4 ± 3.3 سنة ؛ مؤشر كتلة الجسم (BMI) ، 22.6 ± 1.5 kg.m2). حضر جميع المشاركين المختبر بين الساعة 07:00 صباحا والساعة 10:00 صباحا بعد فترة صيام تتراوح بين 8 و12 ساعة. كان محصول العينة باستخدام إجراء خزعة الأنسجة الدهنية هذا 192.0 ± 97.1 ملغ (النطاق = 32.8-393.6 ملغ) (الشكل 4). لم نلاحظ أي علاقة بين عائد الخزعة ومؤشر كتلة الجسم المشارك (p = 0.643) ، على الرغم من أن مؤشر كتلة الجسم للمشاركين كانوا جميعا ضمن نطاق الوزن الصحي (النطاق = 21.1-25.4 كجم / م2). عادة ما يتم الحصول على وزن العينة الكافي بعد 2-3 نوبات من جمع الأنسجة (أي عدد مرات تكرار الخطوتين 3.11.1 و 3.11.2). بعد خزعات الأنسجة الدهنية ، عانى جميع المشاركين من كدمة ، لكن لم يعاني أي منهم من ألم مفرط لم يتم تخفيفه بواسطة مسكنات الألم. كما لم تكن هناك أي ردود فعل سلبية أخرى (الجدول 1). وهذا يتفق مع معدلات المضاعفات المبلغ عنها سابقا لخزعات الأنسجة الدهنية 1,5.
الشكل 1: المواد اللازمة للإجراء. (أ) العربة الموضوعة مع المواد اللازمة للإجراء. (ب) المواد المرتبة في الحقل المعقم. 1: حقل معقم. 2: قفازات معقمة. 3: مشرط. 4: إبرة 14 غرام ؛ 5: إبرة 21 جم ؛ 6: إبرة 26 جم ؛ 7: حقنة 5 مل. 8: يدوكائين 2 ٪. 9: شاش معقم. 10: ضمادة الجرح لاصقة. 11: الحل القائم على اليود. يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
الشكل 2: مخطط لمواقع الحقن على شكل مروحة لإدارة المخدر الموضعي. تمثل الخطوط الصلبة والمنقطية المكان الذي يجب أن يدار فيه المخدر باستخدام إبرة 26 G و 21 G ، على التوالي. يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
الشكل 3: عينة الأنسجة الدهنية تنتج من النساء الأصحاء وذوات الوزن الطبيعي (ن = 39). يمثل المخطط الشريطي مع أشرطة الخطأ متوسط ± الانحراف المعياري. تمثل الدوائر نقاط بيانات فردية. يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
الشكل 4: مثال على كدمة ناتجة عن محاولة تدريب مبكرة. يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
| تعقيد | استجابه | |
| ألم | يمكن للمشارك تناول المسكنات إذا لزم الأمر ، باتباع التعليمات الموجودة على العبوة (على سبيل المثال ، الباراسيتامول). يجب على المشاركين الامتناع عن تناول المسكنات التي لها أنشطة مضادة للتخثر. | |
| نزف | يجب إبلاغ المشارك بأنه من المتوقع حدوث بعض النزيف. | |
| كدمات | يجب إبلاغ المشارك بأنه من المتوقع حدوث كدمات. | |
| ندبا | يجب إبلاغ المشارك بأنه من المتوقع تطور بعض الأنسجة الندبية في موقع الخزعة. | |
| عدوى | يجب إبلاغ المشارك بجميع أعراض العدوى في موقع الخزعة قبل الخزعة. يجب توجيه المشاركين إلى طلب المشورة الطبية من الطبيب أو وحدة الحوادث والطوارئ المحلية في حالة حدوث هذه الأعراض وإخطار فريق البحث بأثر رجعي. | |
الجدول 1: قائمة المضاعفات التي قد يعاني منها المشاركون.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
يوفر البروتوكول الموصوف والفيديو المرتبط به نظرة عامة خطوة بخطوة على تقنية شفط الدهون المصغرة للحصول على عينات من الأنسجة الدهنية تحت الجلد من منطقة البطن. أجرت هذه المجموعة البحثية ما مجموعه 124 خزعة على مدار 19 شهرا دون أي آثار ضارة لدى المشاركين. الإجراء آمن ويرتبط بالحد الأدنى من المخاطر على المشاركين أو فريق الخزعة ، شريطة اتباع تدابير السلامة الموصوفة. يجب الحفاظ على تقنية التعقيم (بما في ذلك فتح المعدات المعقمة وتوزيعها دون تلويثها ، وارتداء / إزالة القفازات المعقمة بشكل مناسب ، ونظافة اليدين العامة) في جميع الأوقات من قبل الباحثين الذين يقومون بإجراء العملية (لتقليل خطر العدوى على المشارك)6. بالإضافة إلى ذلك ، فإن التخلص من الأدوات الحادة المستخدمة بطريقة مناسبة يضمن سلامة الباحث وغيره ممن يتعاملون مع هذه النفايات عن طريق تقليل خطر إصابات الإبرة7.
على الرغم من أن الإجراء يمكن تصنيفه على أنه "منخفض المخاطر" ، إلا أن هناك العديد من الخطوات الحاسمة بالإضافة إلى تقنية التعقيم والتخلص المناسب من النفايات التي يجب اتباعها لتقليل الآثار الضارة. في المقام الأول ، يجب على المشاركين التأكد من أنه ليس لديهم حساسية من التخدير الموضعي في عائلة الأميد الأمينية (على سبيل المثال ، يدوكائين) أو عائلة الأدوية من المخدر الموضعي المستخدم ، وبعض المعادن التي قد تكون موجودة في الإبر (الكروم والنيكل والكوبالت) ، والمحار / اليود إذا كنت تستخدم محلول مطهر للبشرة قائم على اليود (الخطوة 2.4). نظرا لأن المشاركين قد لا يكونون على دراية باسم المخدر ، وبما أن يدوكائين يستخدم بشكل شائع في إجراءات طب الأسنان ، فقد يكون من المفيد أن نسأل ما إذا كان لديهم رد فعل على إعطاء التخدير في هذا السياق. وبالمثل ، يمكن سؤال المشاركين عما إذا كان لديهم ردود فعل تحسسية تجاه أي مجوهرات / ثقوب بدلا من الكروم والنيكل على وجه التحديد. يجب ألا يخضع الأفراد الذين يتناولون مضادات التخثر حاليا لهذا الإجراء لأنهم معرضون لخطر متزايد من النزيف المفرط. المشاركون الذين يتناولون بشكل روتيني جرعة منخفضة من الأسبرين لن يمنعوا المشاركة في بروتوكول الخزعة. ومع ذلك ، يجب على المشاركين إبلاغ متلقي الخزعة لأن هذا قد يؤثر على معدل الإرقاء8. في حين أن مكملات أحماض أوميغا 3 الدهنية لن تمنع إجراء الخزعة ، يجب على المشاركين تأكيد ما إذا كانت هذه المكملات الغذائية (أو الأسماك الغنية بالدهون) جزءا من نظامهم الغذائي الروتيني لأن هذا قد يؤثر على لزوجة الدم9. قبل البدء في الإجراء ، يجب أيضا سؤال المشاركين عما إذا كان لديهم أي ظروف قد تؤثر على الخزعة. على سبيل المثال ، ستؤثر الجراحة التجميلية (أي شفط الدهون) على كمية / نوعية عينة الأنسجة ، ويجب تجنب الندوب / مواقع الوشم السابقة. وأخيرا، قد يرغب فريق الخزعة في التفكير في حلاقة المشاركين الذين لديهم كميات كبيرة من شعر الجسم لجعل منطقة الخزعة أكثر وضوحا.
عند اختيار منطقة الخزعة (الخطوة 3.1) ، يجب على الباحث التأكد من أن الموقع بعيد بما فيه الكفاية عن السرة (حوالي 5-10 سم) لأن المنطقة القريبة هي الأوعية الدموية للغاية. يمكن أن يؤدي اختيار موقع خزعة قريب جدا من السرة إلى كدمات واسعة النطاق دون داع (على سبيل المثال ، الشكل 4). في حين أن الكدمات المفرطة يمكن أن تكون محدودة من خلال الاختيار المناسب لمنطقة الخزعة وتطبيق كيس ثلج بعد الإجراء ، يجب إبلاغ المشاركين بأنه من المحتمل حدوث درجة معينة من الكدمات. ضمن هذه المجموعة البحثية ، لاحظنا قصصيا أن مثل هذه الكدمات تتبدد في غضون 3-5 أيام. بالإضافة إلى ذلك ، قد يصاب بعض المشاركين ببعض الأنسجة الندبية في موقع الخزعة ، والتي تظهر على شكل كتلة من الأنسجة يصعب لمسها. يجب أن يدرك أي شخص يخضع لإجراء الخزعة أن النسيج الندبي عابر وسيحل نفسه في غضون 2-3 أسابيع. لتحقيق أقصى قدر من التحمل للمريض ، يجب على الباحث تحديد المنطقة المتأثرة بالمخدر الموضعي (الخطوة 3.9): باستخدام مشرط وحث منطقة الخزعة بلطف ، يمكن للباحث أن يؤكد شفهيا مع المشارك أن المنطقة قد تم تخديرها بنجاح. يجب تأكيد حدود المنطقة المخدرة من خلال تجاوز المنطقة. أخبر المشارك أنه سيتم القيام بذلك وأنه قد يشعر ببعض الانزعاج الطفيف جدا. هذه خطوة مهمة بشكل خاص ، لأن وضع إبرة الخزعة في مناطق غير مخدرة سيسبب عدم الراحة للمشاركين.
تعد تقنية خزعة شفط الدهون المصغرة الموصوفة هنا بديلا منخفض التكلفة للإجراءات الجراحية ولا تتطلب أدوات متخصصة. نظرا لاستقامتها ، يمكن إجراء هذه الخزعات بشكل روتيني مع مشاكل قليلة أو معدومة. المشكلة الأكثر شيوعا التي تواجهها عند إجراء أخذ عينات الأنسجة الدهنية هي أن عمود إبرة 14 G يمكن أن يصبح مسدودا ، مما يمنع شفط الأنسجة الدهنية في المحقنة. سيلاحظ الفرد المتمرس المدرب على تقنية الخزعة الموصوفة الانسداد من خلال التغييرات في استجابة مكبس المحقنة (أي أنه "يلتصق" في مكانه). في حالة حدوث انسداد إبرة ، ينصح الباحث في المقام الأول بمحاولة إزالة العائق عن طريق الضغط بقوة على المكبس أثناء وجود شطبة الإبرة فوق قارب الوزن. إذا تم وضع الانسداد بقوة ، فإن الخيار الثاني هو استبدال الإبرة والمحقنة. بعد العملية ، يمكن استرداد الأنسجة الموجودة في إبرة عن طريق دفع محلول ملحي معقم عبر الإبرة. لمنع تدهور العينة ، يجب تنظيف الأنسجة التي تم الحصول عليها ومعالجتها وتخزينها في أقرب وقت ممكن بعد الإجراء10. لتقليل تحلل الحمض النووي الريبي، يمكن استخدام محلول تثبيت في الخطوة17 لمعالجة العينات (يرجى الرجوع إلى جدول المواد).
القيد الرئيسي لهذه التقنية هو أنه في حين أنها سريعة نسبيا (~ 15 دقيقة لفرد مدرب وذي خبرة) وفعالة من حيث التكلفة ، إلا أنها لا تؤدي إلا إلى عينة متوسطة الحجم (~ 200 ملغ). في حين أن حجم العينة هذا عادة ما يكون كافيا لمختلف مقايسات التمثيل الغذائي ، فمن المستحسن أن يضمن الباحث أن العائد المتوقع للعينة يكفي لتحليل العينة المقصود. عادة ما يكون عائد العينة الذي تم الحصول عليه باستخدام التقنية الموصوفة أقل من إنتاج التقنيات الجراحية11 ؛ ومع ذلك ، فإن مواقع الشق الأكبر المستخدمة في الخزعات الجراحية تسبب المزيد من الانزعاج للمشاركين وقد تمنعهم من الانخراط في بعض الأنشطة اليومية حتى الشفاء التام11. من المرجح أيضا أن تثني هذه التقنيات المشاركين عن التسجيل في الدراسات البحثية وتتطلب طبيبا مدربا. تتمثل إحدى المزايا الرئيسية لخزعة شفط الدهون المصغرة الموصوفة في هذا الفيديو في أنه يمكن إجراؤها بسرعة في بيئة غير سريرية من قبل باحثين غير طبيين. علاوة على ذلك ، فإن القدرة على إكمال خزعات متعددة على مشارك واحد في نفس اليوم تمكن الباحثين من إجراء دراسات التدخل الغذائي / التمرين الحادة قبل وبعد التمرين. تجدر الإشارة إلى أنه في المملكة المتحدة ، تتطلب إدارة يدوكائين وصفة طبية. أحد أعضاء فريقنا مؤهل في الوصفات الطبية غير الطبية. يجب فحص اللوائح المحلية قبل إعطاء التخدير الموضعي.
طبقت العديد من المجموعات البحثية تقنية شفط الدهون المصغرة على مجموعة متنوعة من الأسئلة البحثية. وتشمل هذه ، على سبيل المثال لا الحصر ، توفير ملامح هرمون الأنسجة الدهنية في المشاركين المصابين بداء السكري2 ، وتحديد حجم تعبير miRNA الأنسجة الدهنية في المرضى الذين يعانون من خلل التمثيل الغذائي 12 ، وتقييم التدخلات الغذائية وممارسة الرياضة في السكان الذين يعانون من زيادة الوزن13,14. بالإضافة إلى ذلك ، تسمح المعالجة الفورية لعينات الأنسجة الدهنية ؛ عزل الخلايا الشحمية المسبقة لزراعة الخلايا15 ؛ وتحليل المعلمات الأيضية خارج الجسم الحي ، مثل معدل الدهون 16 ، وإفراز الهرمونات13 ، والتنفس الميتوكوندريا14. تجدر الإشارة إلى أن عينات الأنسجة الدهنية التي تم الحصول عليها عبر التقنية الموصوفة لديها مستويات عالية من التجزئة عند مقارنتها بالعينات التي تم الحصول عليها عن طريق التقنيات الجراحية باستخدام إبرة القطع أو المشرط5. وهذا يحول دون الاستخدام الناجح للتقنيات التحليلية لتقييم المعلمات المعمارية والمورفولوجية5. إذا كان الباحثون يعتزمون الحصول على عينات من الأنسجة الدهنية لتحليل المعلمات المعمارية والمورفولوجية ، فإن الطرق البديلة ترتبط بتقليل تجزئة الأنسجة18. ومع ذلك ، فإن الحصول على عينات الأنسجة الدهنية عبر التقنية الموصوفة يسمح بالتحقيق في مجموعة واسعة من العمليات الفسيولوجية الرئيسية.
باختصار ، يصف الفيديو والورقة الحالية تقنية خزعة شفط الدهون المصغرة غير السريرية للحصول على الأنسجة الدهنية تحت الجلد في البطن. مع وجود الضوابط المناسبة ، تكون الطريقة خالية نسبيا من الألم وآمنة وفعالة من حيث الوقت / التكلفة. طريقة الخزعة هذه مناسبة بشكل خاص للدراسات التي تنفذ تصميما قبل الدراسة ولا تتطلب كميات كبيرة من عينات الأنسجة.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
ليس لدى المؤلفين أي تضارب في المصالح للإعلان.
Acknowledgments
ليس لدى المؤلفين أي تمويل للإعلان عنه.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Item: 14 G needle 14 G x 3 1/8" 210 mm x 80 mm |
B Braun | 4665473 | Per biopsy: 1 |
| Item: 21 G needle 21 G x 1 1/2" 0.8 mm x 38 mm |
Terumo | AN*2138R1 | Per biopsy: 2 |
| Item: 26 G needle 26 G x 1/2" microlance needle 0.45 mm x 13 mm |
BD | 303800 | Per biopsy: 2 |
| Item: 5 mL syringe 5 mL luer |
DB plastipak | 302187 | Per biopsy: 2 |
| Item: Adhesive wound dressing Opsite Post-Op Dressing 9.5 x 8.5 |
Smith & Nephew | 6600709 | Per biopsy: 1 |
| Item: Disposable sterile scalpel Disposable Scalpel Sterile Blade no. 10 |
Swann Morton | /0501 | Per biopsy: 1 |
| Item: Icepack BlueDot Reusable Hot/Cold Pack 26.5 cm x 13.0 cm |
NuCare | F711 | Per biopsy: 1 |
| Item: Iodine based antiseptic Videne antiseptic solution |
Ecolab Videne | 3030440 | Per biopsy: q.s |
| Item: Lidocaine 2% w/o epinephrine Lidocaine 2% injection 5 mL |
B Braun | 3558553 | Per biopsy: 5 mL |
| Item: Non-sterile gloves Starguard sensitive powder free nitrile gloves |
Starguard | SG-N-S | Per biopsy: pair |
| Item: Sodium chloride 0.9% Sodium chlride 0.9% w/v intravenous infusion BP |
BBraun | S8004-5384 | Per biopsy: q.s. |
| Item: Stabilization solution* RNAlater Stabilization Solution |
ThermoFisher Scientific | AM7020 | Per biopsy: q.s |
| Item: Sterile forceps Sterile forceps |
Rocialle | RML109-006 | Per biopsy: 1 |
| Item: Sterile gauze swabs Non woven swabs sterile 7.5 x 7.5 cm |
Prestige | 1860 | Per biopsy: 5 |
| Item: Sterile gloves Prestige soft vinyl sterile powder free medical gloves |
Prestige | S: P4301 M:P3302 L:P3301 |
Per biopsy: pair |
| Item: Sterile Microcentrifuge tubes 1.5 mL Sterile Microcentrifuge Tubes |
StarLab | I1415-5510 | Per biopsy: q.s |
| Item: Sterile sheet Paper plain white 90 x 90 cm |
Rocialle | RML 126-216 | Per biopsy: 1 |
| Item: Weighing boat Diamond shape weigh boats |
Heathrow Scientific | HS1427C | Per biopsy: 1 |
| * denotes optional materials |
References
- Beynen, A. C., Katan, M. B. Rapid sampling and long-term storage of subcutaneous adipose-tissue biopsies for determination of fatty acid composition. American Journal of Clinical Nutrition. 42 (2), 317-322 (1985).
- Moran, C. N., et al. Effects of diabetes family history and exercise training on the expression of adiponectin and leptin and their receptors. Metabolism. 60 (2), 206-214 (2011).
- Jialal, I., Devaraj, S. Subcutaneous adipose tissue biology in metabolic syndrome. Hormone Molecular Biology and Clinical Investigation. 33 (1), (2018).
- WHO Guidelines on hand hygiene in health care: a summary. World Health Organization. , Available from: https://www.who.int/gpsc/5may/tools/who_guidelines-handhygiene_summary.pdf (2009).
- Kettwich, L. G., et al. New device technologies for subcutaneous fat biopsy. Amyloid. 19 (2), 66-73 (2012).
- Preston, R. M. Aseptic technique: evidence-based approach for patient safety. British Journal of Nursing. 14 (10), 540-546 (2005).
- Handiyani, H., Meily Kurniawidjaja, L., Irawaty, D., Damayanti, R. The effective needle stick injury prevention strategies for nursing students in the clinical settings: a literature review. Enfermeria Clinica. 28, Suppl 1 167-171 (2018).
- Raggio, B. S., Barton, B. M., Kandil, E., Friedlander, P. L. Association of continued preoperative aspirin use and bleeding complications in patients undergoing thyroid surgery. JAMA Otolaryngology-Head & Neck Surgery. 144, 335 (2018).
- Cartwright, I. J., Pockley, A. G., Galloway, J. H., Greaves, M., Preston, F. E. The effects of dietary omega-3 polyunsaturated fatty acids on erythrocyte membrane phospholipids, erythrocyte deformability and blood viscosity in healthy volunteers. Atherosclerosis. 55 (3), 267-281 (1985).
- Hemmrich, K., Denecke, B., Paul, N. E., Hoffmeister, D., Pallua, N. RNA isolation from adipose tissue: an optimized procedure for high RNA yield and integrity. Laboratory Medicine. 41 (2), 104-106 (2010).
- Chachopoulos, V., et al. A technique for subcutaneous abdominal adipose tissue biopsy via a non-diathermy method. Journal of Visual Experiments: JoVE. (127), e55593 (2017).
- Civelek, M., et al. Genetic regulation of human adipose microRNA expression and its consequences for metabolic traits. Human Molecular Genetics. 22 (15), 3023-3037 (2013).
- Chen, Y. C., et al. Feeding influences adipose tissue responses to exercise in overweight men. American Journal of Physiology Endocrinology and Metabolism. 313 (1), 84-93 (2017).
- Mendham, A. E., et al. Exercise training results in depot-specific adaptations to adipose tissue mitochondrial function. Scientific Reports. 10 (1), 3785 (2020).
- Carswell, K. A., Lee, M. J., Fried, S. K. Culture of isolated human adipocytes and isolated adipose tissue. Methods in Molecular Biology. 806, 203-214 (2012).
- Arner, P., Andersson, D. P., Backdahl, J., Dahlman, I., Ryden, M. Weight gain and impaired glucose metabolism in women are predicted by inefficient subcutaneous fat cell lipolysis. Cell Metabolism. 28 (1), 45-54 (2018).
- Mutter, G., et al. Comparison of frozen and RNALater solid tissue storage methods for use in RNA expression microarrays. BMC genomics. 5, 88 (2004).
- Coleman, S. Structural fat grafting: more than a permanent filler. Plastic and Reconstructive Surgery. 118, Suppl 3 108-120 (2018).
