Co-coltura di organoidi epiteliali murini dell'intestino tenue con cellule linfoidi innate

Emily Read; Geraldine M. Jowett; Diana Coman; Joana F. Neves

doi:10.3791/63554

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Articolo metodologico

Co-coltura di organoidi epiteliali murini dell'intestino tenue con cellule linfoidi innate

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DOI:

10.3791/63554

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23 marzo 2022

Emily Read^*¹^,² , Geraldine M. Jowett^*¹^,²^,³ , Diana Coman¹ , Joana F. Neves¹

¹Centre for Host-Microbiome Interactions, King’s College London, ²Wellcome Trust Cell Therapies and Regenerative Medicine Ph.D. Programme, King’s College London, ³Present address: Wellcome Trust/Cancer Research UK Gurdon Institute, Cambridge University

^* These authors contributed equally

In questo articolo

Sommario

Questo protocollo offre istruzioni dettagliate per stabilire organoidi murini dell'intestino tenue, isolare le cellule linfoidi innate di tipo 1 dalla lamina propria dell'intestino tenue murino e stabilire co-colture tridimensionali (3D) tra entrambi i tipi di cellule per studiare le interazioni bidirezionali tra le cellule epiteliali intestinali e le cellule linfoidi innate di tipo 1.

Abstract

Complesse co-colture di organoidi con cellule immunitarie forniscono uno strumento versatile per interrogare le interazioni bidirezionali che sono alla base del delicato equilibrio dell'omeostasi della mucosa. Questi sistemi 3D e multicellulari offrono un modello riduzionista per affrontare le malattie multifattoriali e risolvere le difficoltà tecniche che sorgono quando si studiano tipi di cellule rare come le cellule linfoidi innate residenti nei tessuti (ILC). Questo articolo descrive un sistema murino che combina organoidi dell'intestino tenue e ILC di tipo 1 (ILC1) derivati dalla lamina propria dell'intestino tenue, che possono essere facilmente estesi ad altre POPOLAZIONI ILC o immunitarie. Le ILC sono una popolazione residente nei tessuti particolarmente arricchita nella mucosa, dove promuovono l'omeostasi e rispondono rapidamente a danni o infezioni. Le co-colture organoidi con ILC hanno già iniziato a far luce su nuovi moduli di segnalazione epiteliale-immunitaria nell'intestino, rivelando come diversi sottoinsiemi di ILC influiscono sull'integrità e sulla rigenerazione della barriera epiteliale intestinale. Questo protocollo consentirà ulteriori indagini sulle interazioni reciproche tra cellule epiteliali e immunitarie, che hanno il potenziale per fornire nuove informazioni sui meccanismi dell'omeostasi e dell'infiammazione della mucosa.

Introduzione

La comunicazione tra l'epitelio intestinale e il sistema immunitario residente nell'intestino è fondamentale per il mantenimento dell'omeostasi intestinale¹. Le interruzioni di queste interazioni sono associate a malattie sia locali che sistemiche, tra cui la malattia infiammatoria intestinale (IBD) e i tumori gastrointestinali². Un esempio notevole di un regolatore critico dell'omeostasi descritto più di recente proviene dallo studio delle cellule linfoidi innate (ILC), che sono emerse come attori chiave nel panorama immunitario intestinale³. Le ILC sono un gruppo di cellule immunitarie innate et....