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Articolo di ricerca
L'uso combinato di un laser excimero a 308 nm e della matrina orale ha notevolmente aumentato la repigmentazione della vitiligine promuovendo la rigenerazione dei melanociti e ripristinando l'equilibrio immunitario. Questa terapia duale ha ridotto le citochine pro-infiammatorie, normalizzato le immunoglobuline, elevato l'IL-10 e raggiunto un'efficacia clinica superiore con eccellente sicurezza e tolleranza per i pazienti.
Il vitiligine è un disturbo autoimmune cronico della depigmentazione caratterizzato dalla perdita di melanociti funzionali e da un'attivazione immunitaria aberrante. Nonostante i progressi nella fototerapia, le risposte cliniche rimangono incoerenti, principalmente a causa di un'attività infiammatoria persistente e di una regolazione immunitaria inadeguata. Questo studio ha indagato l'efficacia terapeutica e i meccanismi immunologici della combinazione della fototerapia laser a 308 nm con la matrina orale, un alcaloide naturale dotato di proprietà antinfiammatorie e immunoregolatrici. Un totale di 232 pazienti con vitiligine non segmentaria è stato assegnato prospetticamente a ricevere monoterapia laser excimero o terapia combinata per 12 settimane. Il miglioramento clinico è stato valutato utilizzando il Vitiligo Area Scoring Scoring Index (VASI), e sono state analizzate immunoglobuline e citochine sierive per valutare la modulazione immunitaria sistemica. Entrambi i regimi hanno prodotto una ripigmentazione significativa, eppure la terapia combinata ha ottenuto una riduzione del VASI più pronunciata (da 9,72 ± 3,24 al punto di partenza a 5,76 ± 2,18 dopo il trattamento) rispetto al solo laser excimer (da 9,68 ± 3,37 a 6,63 ± 2,34, p < 0,001). La percentuale di pazienti che hanno mostrato una ripigmentazione eccellente o buona è stata notevolmente più alta con il regime combinato (76,7%) rispetto alla monoterapia (58,7%). Parallelamente, i livelli sierici di IgG sono diminuiti notevolmente (13,72 ± 2,64 g/L a 11,85 ± 2,18 g/L, p < 0,001), mentre i livelli di IgA sono aumentati modestamente (2,07 ± 0,68 g/L a 2,23 ± 0,61 g/L, p = 0,041). Le citochine pro-infiammatorie, inclusi IFN-γ e IL-17, sono state significativamente ridotte ( entrambe p < 0,001), mentre l'IL-10 antinfiammatorio è aumentata da 8,3 ± 3,2 a 12,9 ± 3,5 pg/mL (p < 0,001). Il miglioramento del VASI è stato correlato inversamente con i cambiamenti di IFN-γ (r = –0,482, p < 0,05) e IL-17 (r = –0,451, p < 0,001), e positivamente con l'elevazione di IL-10 (r = 0,503, p < 0,001). Questi risultati dimostrano che il matrine aumenta l'efficacia del laser excimero promuovendo la rigenerazione dei melanociti e ripristinando l'equilibrio immunitario, stabilendo una strategia dual-modality basata su biomarcatori per una gestione precisa e duratura del vitiligine.
Il vitiligine è un disturbo cutaneo cronico e acquisito e depigmentante, caratterizzato dalla distruzione o disfunzione selettiva dei melanociti epidermici, che porta allo sviluppo di macule bianche ben definite di dimensioni e distribuzione variabili. Colpisce circa lo 0,5%–2% della popolazione mondiale, senza predilezione di genere o razzia, e spesso si manifesta prima dei 30anni (1,2). Sebbene la malattia non sia pericolosa per la vita, impone un notevole carico psicosociale ed emotivo, compromettendo significativamente l'autostima, il funzionamento sociale e la qualità dellavita 3. La patogenesi della vitiligine rimane multifattoriale e incompletamente chiara, coinvolgendo predisposizione genetica, stress ossidativo, reazioni autoimmuni e fattorineuroumorali 4. Evidenze recenti hanno evidenziato in particolare il ruolo fondamentale della disregolazione immunitaria sia nell'inizio che nella persistenza della distruzione deimelanociti 5,6. Nell'epidermide, i linfociti T citotossici autoreattivi CD8⁺ riconoscono antigeni melanocitici come tirosinasi e gp100, rilasciando perforina e granzima B per indurreapoptosi 7. Contemporaneamente, le citochine pro-infiammatorie, tra cui interferone-γ (IFN-γ), fattore di necrosi tumorale α (TNF-α), interleucina-1β (IL-1β), IL-6 e IL-17, amplificano la cascata infiammatoria, compromettono la sopravvivenza dei melanociti e inibiscono la migrazione delle cellulepigmentarie 8. Lo squilibrio tra le cellule T regolatorie (Treg) e le cellule T effettrici contribuisce ulteriormente all'attivazione immunitaria persistente e alla perdita dimelanociti 9. Pertanto, le strategie terapeutiche volte sia a promuovere la rigenerazione dei melanociti sia a ristabilire l'omeostasi immunitaria sono di grande importanza clinica.
Oltre alle anomalie immunitarie locali, ogni numero di evidenze indica che il vitiligine rappresenta una condizione autoimmune sistemica. Sono stati documentati livelli sierici alterati di immunoglobuline (IgG, IgA e IgM) nei pazienti, riflettendo un'attivazione generalizzata delle cellule B e un'immunità umoraleanomala 10,11. Una produzione disregolata di immunoglobuline può facilitare la formazione di autoanticorpi contro antigeni specifici dei melanociti, aggravando i danni tissutitori. Inoltre, il milieu delle citochine nei pazienti con vitiligine presenta frequentemente IFN-γ, TNF-α, IL-6, IL-17 e IL-23 elevati, suggerendo un'attivazione immunitaria sistemica oltre la pellelesionale 12,13. Questi mediatori immunitari non solo fungono da fattori patogeni, ma correlano anche con l'attività della malattia e la risposta terapeutica, posizionandoli come potenziali biomarcatori per il monitoraggio del trattamento14. Pertanto, interventi in grado di ripristinare l'equilibrio immunitario—modulando sia le risposte immunitarie cellulari che umorale—possono offrire risultati clinici superiori e duraturi. Nonostante la disponibilità di corticosteroidi topici, inibitori della calcineurina, immunosoppressori sistemici e fototerapia, l'efficacia del trattamento rimane insoddisfacente per molti pazienti, in particolare per quelli con malattia estesa orefrattaria 15. Di conseguenza, negli ultimi anni gli approcci combinati che mirano a molteplici meccanismi fisiopatologici hanno guadagnato terreno.
La fototerapia è da tempo una pietra miliare nella gestione del vitiligine. Tra le varie modalità, il laser excimero (EL) a 308 nm si è rivelato una delle opzioni più mirate ed efficaci per il vitiliginelocalizzato 16,17. Fornisce radiazioni UVB monocromatiche a 308 nm direttamente alle lesioni depigmentate, stimolando così la proliferazione e la migrazione dei melanociti dai follicoli piliferi minimizzando l'esposizione dei tessuti sanicircostanti 18. Rispetto all'UVB convenzionale a banda stretta, il laser excimero offre vantaggi come un rapido avviso della repigmentazione, tempi di esposizione cumulativi più brevi e un profilo di sicurezzamigliorato 19,20. Meccanicamente, l'irradiazione a bassa dose di 308 nm induce un'immunomodulazione locale riducendo l'attività delle cellule epidermiche di Langerhans, aumentando l'infiltrazione di Treg e aumentando la melanogenesi tramite la regolazione all'alto della tirosinasi e del fattore di trascrizione associato alla microftalmia (MITF)21. Tuttavia, le risposte rimangono variabili e molti pazienti non riescono a raggiungere una ripigmentazione completa. Un'irradiazione eccessiva o prolungata può paradossalmente scatenare il rilascio di citochine infiammatorie—come IL-1β, IL-6 e TNF-α—e ulteriori danni ai melanociti. Pertanto, sebbene il trattamento con laser excimero stimoli efficacemente la rigenerazione dei melanociti, la sua efficacia può essere limitata dall'attivazione infiammatoria concomitante. Questa dualità sottolinea la necessità di terapie aggiuntive capaci di mitigare l'infiammazione e migliorare la tolleranza immunitaria durante la fototerapia.
La matrina, un alcaloide naturale di chinolizidina estratto da Sophora flavescens (Ku Shen), ha recentemente attirato notevole attenzione come agente immunomodulatore e antinfiammatorio con bassatossicità 24,25. Studi sperimentali hanno dimostrato che la matrine può sopprimere le vie di segnalazione NF-κB e JAK/STAT, regolare alla ridotta la produzione di citochine pro-infiammatorie (inclusi IFN-γ, TNF-α e IL-6) e promuovere l'espressione di mediatori antinfiammatori comeIL-10-26. Nelle malattie immunocorrelate, matrine ha dimostrato efficacia nel modulare la differenziazione Th1/Th17, migliorare la funzione regolatoria delle cellule T e normalizzare i profili diimmunoglobuline 27,28. Inoltre, la matrine presenta effetti antiossidanti e anti-apoptotici che possono proteggere i melanociti da danni indotti dallo stressossidativo 29. Sebbene queste proprietà rendano la matrine un candidato interessante per le malattie autoimmuni della pelle, pochi studi hanno esplorato il suo ruolo nella vitiligine. La combinazione di matrine con fototerapia presenta un approccio terapeutico innovativo: matrine potrebbe attenuare il microambiente infiammatorio, stabilizzare l'omeostasi dei melanociti e potenziare la melanogenesi indotta dal laser. Inoltre, l'attività immunoregolatrice sistemica del matrine può integrare gli effetti locali del laser excimer, portando a un beneficio clinico sinergico. Per quanto ne sappiamo, nessuno studio clinico precedente ha indagato in modo approfondito l'uso combinato del laser excimero a 308 nm e della matrine nel vitiligine né ha valutato i suoi correlati immunologici tramite profilazione dei biomarcatori sierici.
Sulla base di questa logica, abbiamo ipotizzato che la combinazione del laser excimero a 308 nm e della matrine avrebbe prodotto un'efficacia terapeutica superiore rispetto alla monoterapia con laser excimero, promuovendo contemporaneamente la rigenerazione dei melanociti e sopprimendo l'attivazione immunitaria aberrante. In particolare, abbiamo ipotizzato che la somministrazione matrine aggiuntiva avrebbe aumentato i tassi di repigmentazione clinica, modulato i livelli di immunoglobulina sierica (IgG, IgA e IgM) verso l'equilibrio fisiologico e ridotto le citochine pro-infiammatorie come IFN-γ, TNF-α e IL-17, aumentando al contempo le citochine antinfiammatorie. In questo studio, abbiamo valutato sistematicamente gli esiti clinici, i parametri immunologici e le loro correlazioni nei pazienti con vitiligine trattati con questa terapia combinata. La novità di questa indagine risiede nel suo doppio focus meccanicistico—stimolazione fotobiologica locale e modulazione immunitaria sistemica—e nell'integrazione dell'analisi quantitativa dei biomarcatori per chiarire i meccanismi terapeutici. Chiarendo l'impatto immunoregolatore della matrine quando combinata con la fototerapia mirata, il nostro lavoro mira a fornire una base basata sulle evidenze per un nuovo paradigma terapeutico nella gestione della vitiligine. In definitiva, questi risultati potrebbero far avanzare il campo verso strategie di fototerapia di precisione guidate dal sistema immunitario che ottengono non solo la ripigmentazione, ma anche la stabilizzazione a lungo termine della malattia e la prevenzione delle ricadute.
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Questo studio è stato condotto in conformità con i principi etici della Dichiarazione di Helsinki e i regolamenti istituzionali che regolano la ricerca umana. Lo studio è stato condotto in conformità con i principi etici della Dichiarazione di Helsinki e approvato dal Comitato Etico dell'Ospedale Popolare di Xingtai, Dipartimento di Dermatologia (ID approvazione: 2021[029]). Tutti i partecipanti hanno fornito un consenso informato scritto prima della partecipazione.
Selezione dei pazienti
In totale, 232 pazienti diagnosticati clinicamente con vitiligine sono stati arruolati in un periodo di 3 anni, da gennaio 2021 a dicembre 2023. Tutti i partecipanti sono stati diagnosticati con vitiligine non segmentaria (tipo generalizzato o localizzato) e classificati come stabili o progressivi in base all'assenza o presenza di nuove lesioni entro 3 mesi prima dell'iscrizione. La durata della malattia e la distribuzione delle lesioni sono state registrate al punto di partenza. I criteri di iscrizione includevano individui di età compresa tra 18 e 65 anni con vitiligine stabile o progressiva confermata dai dermatologi tramite esame clinico, illuminazione con lampada di Wood e dermoscopia. I criteri di esclusione erano gravidanza, allattamento, disturbi fotoallergici, malattie autoimmuni sistemiche, grave disfunzione epatica o renale e uso preventivo di corticosteroidi sistemici, immunosoppressori o fototerapia entro 3 mesi. Tutte le procedure sono state eseguite sotto supervisione etica continua, garantendo comfort e sicurezza del paziente durante tutto il percorso di trattamento.
Panoramica dello studio e flusso di lavoro del trattamento
Il flusso di lavoro complessivo dello studio, inclusi l'arruolamento dei pazienti, l'assegnazione dei gruppi, le valutazioni di follow-up e l'analisi dei biomarcatori, è illustrato nella Figura 1. I partecipanti idonei sono stati assegnati in un rapporto 1:1 a uno dei due gruppi di studio paralleli: il gruppo di monoterapia con laser excimero a 308 nm (solo laser excimer; n = 116) e il gruppo di terapia combinata (laser excimer a 308 nm più matrine orale; n = 116). L'assegnazione dei gruppi è stata effettuata utilizzando una sequenza casuale generata al computer preparata da un membro dello staff di ricerca indipendente che non era coinvolto nella valutazione degli esiti; Le assegnazioni venivano inserite in buste sigillate numerate sequencialmente e aperte dopo l'iscrizione per determinare l'assegnazione dei trattamenti. Il flusso di lavoro terapeutico è composto da tre fasi principali: (1) valutazione e documentazione della base, (2) 12 settimane di trattamento attivo secondo il regime assegnato e (3) valutazione post-trattamento, inclusi test di laboratorio di immunoglobuline sieriche e citochine infiammatorie. Ogni paziente ha ricevuto un piano di cura standardizzato, intervalli di follow-up identici e procedure di analisi di laboratorio uniformi. Fotografie cliniche e punteggi VASI sono state effettuate da dermatologi ciechi rispetto all'assegnazione dei trattamenti. Tutte le procedure sono state eseguite nella sala di fototerapia dermatologica dell'Ospedale Popolo di Xingtai in condizioni ambientali controllate (temperatura ambiente 22–24 °C, umidità relativa 40%–60%).
Preparazione dell'area trattata
Prima di ogni sessione laser, le aree depigmentate del bersaglio venivano delicatamente pulite con soluzione fisiologica sterile e asciugate con una garza medica senza pelucchi. La pelle lesionale è stata ispezionata per confermare l'assenza di infezione, excoriazione o croste. Quando più di una lesione veniva trattata in una singola visita, ogni lesione veniva preparata e trattata in modo sequenziale. Le lesioni che superavano un singolo campo di irradiazione venivano suddivise in campi di irradiazione adiacenti, e la pelle normale circostante era schermata con un foglio opaco che blocca i raggi UV per ogni campo, al fine di minimizzare l'esposizione inutile. Ai pazienti è stato consigliato di evitare agenti topici, cosmetici fotosensibilizzanti o profumi per 24 ore prima del trattamento. Durante tutta la procedura sono stati indossati occhiali protettivi sia dal paziente che dall'operatore.
Procedura di irradiazione laser excimero a 308 nm
Fu utilizzato un sistema laser monocromatico a 308 nm con cloruro di xeno (XeCl). Tutte le sedute laser sono state eseguite da due medici dermatologi formati secondo un protocollo standardizzato per garantire un'emissione di energia costante, distanza di irradiazione e riproducibilità. L'output del dispositivo veniva verificato con un misuratore di potenza UV calibrato prima di ogni giorno di trattamento, e tutti i sistemi venivano sottoposti a una calibrazione settimanale da parte di un tecnico certificato per mantenere un margine di errore sotto il ±5%. Prima della prima irradiazione, la dose minima di eritema (MED) per ogni paziente veniva determinata applicando dosi incrementali (100–400 mJ/cm 2) su piccole aree di test sull'avambraccio interno e valutando la risposta dell'eritema dopo 24 ore; I risultati sono stati fotografati e registrati nelle cartelle dei pazienti. Una documentazione rappresentativa del MED e un grafico di aggiustamento dose sessione per sessione sono forniti nella Tabella Supplementare 1. La MED è stata definita come la dose di test più bassa che produce un eritema uniforme e chiaramente riconoscibile a 24 ore. La dose iniziale del trattamento è stata fissata all'80%–90% del singolo MED, e le successive variazioni di dose hanno seguito un algoritmo predefinito basato sulla risposta eritema di 24 ore della sessione precedente (aumento del 10%–20% per eritema assente o lieve, mantenimento della stessa dose per eritema moderato e riduzione del 10%–20% per vesciche o dolore significativo). La dose terapeutica iniziale è stata fissata a 150–250 mJ/cm2 (circa l'80%–90% della singola MED). Ogni seduta iniziava con il paziente comodamente seduto su una sedia regolabile. Il supporto laser era tenuto perpendicolarmente (90°) alla pelle a una distanza di 10–15 cm, e i campi di irradiazione circolari o rettangolari venivano allineati per coprire completamente le aree depigmentate con minima sovrapposizione. L'irradiazione durava da 1 a 3 secondi per campo di esposizione, a seconda della fluenza. Le dosi sono state successivamente aumentate del 10%–20% per seduta secondo la risposta eritema precedente; Se si verificava un eritema moderato, la dose precedente veniva mantenuta, mentre vesciche o dolore richiedevano una riduzione del 10%–20%. La dose massima non ha superato i 2.000 mJ/cm2. Ogni sessione ha coperto tutte le lesioni visibili e durava 10–20 minuti, a seconda dell'estensione. I trattamenti sono stati eseguiti 2 volte a settimana, con almeno 72 ore tra una sessione e l'altra, per un totale di 12 settimane (24 sedute). Dopo l'irradiazione, è stato applicato uno strato sottile di gel sterile a base di aloe per alleviare l'eritema locale. Ai pazienti è stato consigliato di evitare l'esposizione al sole per 48 ore e di utilizzare una crema solare a largo spettro (SPF >30) durante tutto il trattamento. Le lesioni che mostravano una ripigmentazione del >50% continuarono con gli stessi parametri fino al raggiungimento di una pigmentazione stabile.
Somministrazione orale in matrina
Nel gruppo combinato, un estratto acquoso sterile di radici di Sophora flavescens è stato preparato in conformità con la Farmacopea Cinese (edizione 2020)30 e standardizzato a una concentrazione di 5 mg/mL con purezza del ≥98%, verificato tramite cromatografia liquida ad alte prestazioni (HPLC). La soluzione veniva conservata a 4 °C in bottiglie di vetro ambrato per prevenire la fotodegradazione. I test a lotti casuali hanno confermato la concentrazione di alcaloidi (5 ± 0,3 mg/mL) e la sterilità microbica. Ogni paziente ha ricevuto la soluzione matrina per somministrazione orale a una dose di 0,3 g (60 mL) due volte al giorno per 12 settimane, sincronizzata con il programma di trattamento laser. Il dosaggio è stato selezionato sulla base di dati farmacologici precedenti che dimostravano un'immunomodulazione efficace con un profilo di sicurezza favorevole nelle dermatosi infiammatoriecroniche 31,32. Ai pazienti è stato consigliato di assumere la soluzione 30 minuti dopo i pasti per minimizzare il disagio gastrointestinale e evitare alcol, tè forte e cibi piccanti durante la terapia, per ridurre il carico epatico. La lieve nausea o stanchezza veniva gestita con la somministrazione di una piccola quantità di acqua calda. L'aderenza al trattamento è stata valutata tramite un diario dei farmaci e la verifica della restituzione tramite bottiglia ad ogni visita di follow-up. La sicurezza è stata valutata a ogni visita tramite indagini strutturate sui sintomi e documentazione di eventi avversi, tra cui fastidio gastrointestinale, affaticamento e eventuali segni suggerenti di intolleranza epatica. Durante il periodo di osservazione non sono stati consentiti ulteriori farmaci sistemici, corticosteroidi topici o immunosoppressori per prevenire effetti di confusione.
Valutazione della risposta clinica
Le variazioni della pigmentazione sono state valutate al primo periodo e alle settimane 4, 8 e 12 da due dermatologi esperti, ciechi alle informazioni sul trattamento. Le fotografie digitali standardizzate venivano scattate con illuminazione e impostazioni identiche della fotocamera (distanza 60 cm, esposizione 1/60 s, ISO 200). Il grado di ripigmentazione è stato quantificato utilizzando il Vitiligine Area Scoring Index (VASI). Le lesioni sono state inoltre classificate in quattro categorie: Eccellenti (≥75% di ripigmentazione), Buone (50%–74%), Moderate (25%–49%), Povere (<25%). I pazienti hanno inoltre completato una Visual Analogue Scale (VAS) a 10 punti per la soddisfazione e il sollievo dei sintomi. Eventi avversi come eritema, bruciore, prurito, vesciche e iperpigmentazione sono stati documentati ad ogni visita.
Raccolta di campioni di siero
Per l'analisi dei biomarcatori, è stato raccolto sangue periferico a digiuno (5 mL) da ciascun paziente al punto di partenza e alla fine della dodicesima settimana utilizzando tubi di separazione sierica. I campioni sono stati lasciati coagulare per 30 minuti a temperatura ambiente e centrifugati a 800 x g per 10 minuti a 4 °C. Il siero soprantantante è stato allicitamente alquotato in crioviali da 0,5 mL e conservato a −80 °C fino all'analisi. Tutti i campioni sono stati processati entro 2 ore dalla raccolta per minimizzare la degradazione delle citochine.
Quantificazione delle immunoglobuline sieriche
Le concentrazioni sieriche di IgG, IgA e IgM sono state determinate tramite immunonefelometria automatica seguendo le istruzioni del produttore. Le curve di calibrazione venivano preparate utilizzando diluizioni seriali degli standard di riferimento. Ogni saggio includeva siero di controllo qualità a concentrazioni alte e basse. Le misurazioni sono state espresse in g/L e ripetute 2 volte per garantire una variazione intra-analisi < 5%. La precisione e la calibrazione dello strumento venivano verificate quotidianamente utilizzando standard di controllo tracciabili. I risultati sono stati registrati elettronicamente e revisionati da due tecnici indipendenti, ciechi alle informazioni dei pazienti.
Misurazione delle citochine infiammatorie
Il profiling delle citochine includeva IFN-γ, TNF-α, IL-1β, IL-6, IL-17 e IL-10, quantificati utilizzando una piattaforma multiplex di immunosorbente legato a enzimi (ELISA). La preparazione dei reagenti seguiva il protocollo standard del produttore. Per breve, sono stati aggiunti 100 μL di siero diluito a ciascun pozzo rivestito di anticorpi e incubati per 2 ore a 37 °C. Dopo il lavaggio con soluzione salina tamponata fosfato contenente 0,05% Tween-20 (PBST), sono stati aggiunti 100 μL di anticorpo biotinilato di deteczione e incubati per 1 ora. I pozzi sono stati poi incubati con streptavidina-perossidasi di rafano per 30 minuti, seguiti dallo sviluppo del colore usando substrato di tetrametilbenzidina (TMB) per 10 minuti al buio. La reazione fu interrotta con 50 μL di acido solforico da 2 mol/L e l'assorbanza fu misurata a 450 nm utilizzando un lettore di microplacche. Curve standard sono state generate da diluzioni seriali di citochine ricombinanti, e le concentrazioni sono state espresse come pg/mL. Tutti i campioni sono stati misurati in duplicata. Per garantire la riproducibilità, il coefficiente di variazione (CV) tra sagaggi è stato mantenuto sotto il 10%. I pozzi blank contenevano tamponi di analisi senza siero, e i pozzi di controllo negativi contenevano una matrice priva di citochine processata identica ai campioni e equivalente allo standard 0 pg/mL per confermare la specificità del saggio. Qualsiasi campione emolizzato o lipemico è stato escluso dall'analisi finale.
Analisi statistica
I dati venivano inseriti in un database elettronico dedicato e controllati incrociati per l'accuratezza da due gestori dati indipendenti. La dimensione del campione è stata stimata in base alla dimensione dell'effetto attesa (d di Cohen = 0,5) con α = 0,05 e potenza (1–β) = 0,8, ottenendo un minimo di 100 partecipanti per gruppo. Per controllare i confronti multipli tra citochine, la correzione di Bonferroni è stata applicata quando appropriato. È stata applicata una regressione lineare multivariata dove necessario per adeguare ai possibili fattori di confusione, inclusi età, sesso, durata della malattia e area della lesione di base. La distribuzione normale delle variabili continue è stata verificata tramite il test di Shapiro–Wilk. Le statistiche descrittive sono state presentate come media ± deviazione standard (SD) per i dati normalmente distribuiti o come mediana (intervallo interquartile, IQR) per dati atimetrici. I cambiamenti prima e dopo il trattamento sono stati analizzati utilizzando test t accoppiati, mentre i confronti tra gruppi sono stati analizzati con test t a campione indipendente o test U di Mann–Whitney, a seconda dei criteri. I dati categorici sono stati confrontati con il chi-quadrato o test esatto di Fisher. Le correlazioni tra livelli di citochine, immunoglobuline e miglioramento della pigmentazione sono state valutate utilizzando il coefficiente di correlazione di Pearson. Tutte le analisi sono state effettuate con SPSS v26.0 (RRID: SCR_002865), e un p < bilaterale di 0,05 è stato considerato statisticamente significativo.
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Le caratteristiche cliniche di base hanno mostrato profili demografici e di malattia comparabili tra i gruppi
Un totale di 232 pazienti con vitiligine non segmentaria sono stati arruolati e distribuiti equamente nel gruppo escimero (n = 116) o nel gruppo di terapia combinata che ha ricevuto laser più matrine orale (n = 116). I parametri demografici e clinici di base, inclusi l'età (35,8 ± 6,0 ± 35,4 5,6 anni), la distribuzione sessuale (maschi/femmina: 59/57 ...
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Questo studio introduce un approccio terapeutico combinato che integra un laser escimero a 308 nm con matrine orale per il trattamento del vitiligine non segmentale. La proposizione centrale è che la doppia modulazione—stimolazione fotobiologica locale dei melanociti unita a un'immunoregolazione sistemica—può ottenere una repigmentazione più robusta e sostenuta rispetto al gruppo excimero. I risultati supportano questa ipotesi: la terapia combinata ha prodotto una pigmentazione perifolli...
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Non ci sono conflitti di interesse finanziari da divulgare.
Gli autori desiderano ringraziare l'intero team del Dipartimento di Dermatologia per il duro lavoro svolto durante tutto il progetto.
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| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Sistema laser excimer XeCl a 308 nm | STRATA Scienze della Pelle (XTRAC) | Velocity 400 (Modello) | Laser UVB a 308 nm mirato per lesioni di vitiligine; Verifica il modello nel tuo sito; o dispositivo equivalente |
| – 80 ° C Congelatore Ultra-Basso | Thermo Scientific | Serie Forma 900 (Modello 980) | Conservazione sirica a lungo termine |
| Piastre ELISA a 96 pozzi (alta adesione) | Corning Costar | 9018 | Se si usano rivestimenti interni o flussi di lavoro single-plex |
| Sedia medica regolabile | Midmark | 641 Presidente delle Procedure | Posizione del paziente per una distanza di irradiazione costante |
| Gel lenitivo a base di aloe | 3M | 9236 | Strato sottile post-irradiazione per il rilievo dell'eritema; o gel medico equivalente |
| Bottiglia di vetro ambrato (500 mL) | Fisherbrand | 02-897-2J | Stoccaggio protetto dalla luce a 4 gradi C per soluzione matrine |
| Bilancio analitico (0,1 mg) | METTLER TOLEDO | ME104E | Preparazione gravimetrica e controllo qualità |
| Immunonefelometro Automatizzato | Siemens Healthineers | Sistema BN ProSpec | Quantifica IgG/IgA/IgM per produttore s IFU |
| Etichette con codici a barre (Crio-sicure) | Biotecnologia diversificata | CRY-1000 | Tracciamento del campione e catena di custodia |
| Set di Anticorpi di Rilevamento Biotinilato | MSD | Incluso con il pannello | Abbinati per catturare anticorpi |
| Protezione Solare a largo spettro SPF ≥ 30 | Neutrogena | 070501017052 (SPF ultra trasparente 50) | Fotoprotezione post-sessione; Item di consulenza ambulatoriale |
| Calibratori per immunoglobuline | Siemens Healthineers | N Protein Standard SL | Calibrazione tracciabile per la nefelometria |
| Controllo siero (alto/basso) per i saggi Ig | Siemens Healthineers | Controlli delle proteine N/T | Controllo qualità giornaliero delle corse nephelometriche |
| Fiale criogeniche, 0,5 mL | Termo Scientifico Nunc | 375418 | Aliquote sieriche; thread esterno; Priva di DNasi/RNasi |
| Dermatoscopio | DermLite | DL4 | Dermatoscopio portatile polarizzato per l'ispezione delle lesioni |
| Scheda in scala per dermatoscopia/fotografia | 3Gen | Scheda di riferimento scala/colore | Garantisce la coerenza dei colori tra i punti temporali |
| Fotocamera digitale per immagini standardizzate | Canon | EOS 80D | Distanza fissa 60 cm; esposizione 1/60 s; ISO 200; Consigliato il treppiede |
| Centrifuga refrigerata ad angolo fisso | Eppendorf | 5810 R | 800 e volte; g, 10 min, 4 e deg; Separazione del siero di C |
| Colonna HPLC (C18, 4,6 e volte; 250 mm, 5 e micro; m) | Agilent | ZORBAX Eclipse Plus C18, 959990-902 | Separazione di routine degli alcaloidi; o equivalente |
| Sistema HPLC | Agilent | 1260 Infinity II (G7111B) | Verifica della purezza e standardizzazione in batch della matrine |
| Analisi / Misurazione dell'immagine | ImageJ (NIH) | 1,54 (RRID:SCR_003070) | Quantificazione opzionale dell'area della lesione dalle fotografie |
| Garza medica senza pelucchi (Sterile) | Johnson & Johnson | 546112 | Area di trattamento per l'asciugatura dopo la pulizia |
| Matrine (≥ 98%, HPLC) | MedChemExpress | HY-N0156 | Preparazione della soluzione orale; verifica la conformità del fornitore locale e della farmacopea |
| Lettore di micropiastre (450 nm) | BioTek (Agilent) | Sinergia H1 | Assorbenza a 450 nm; correzione della lunghezza del percorso |
| Lavatrice per microplacche | BioTek (Agilent) | ELx405 | Cicli di lavaggio automatici; riduce la variabilità |
| Panel multiplex di citochine umane (Custom 6-plex) | Scoperta su scala mesotecnica (MSD) | Piattaforma U-PLEX (K15067L) | Include IFN-&gamma, TNF-&alpha, IL-1 e beta, IL-6, IL-17A, IL-10; o equivalente |
| Tablet PBS | Gibco | 18912-014 | Preparazione PBS per lavaggi/tamponi |
| Film sigillanti per piastre | Bio-Rad | MSB1001 | Previene l'evaporazione durante le incubazioni |
| Occhiali UV protettivi (operatore) | Uvex (Honeywell) | S0360X Ultra-Specifica 2000 | Protezione oculare per operatori; Usa una coppia dedicata |
| Occhiali UV protettivi (paziente) | Uvex (Honeywell) | S0360X Ultra-Specifica 2000 | Occhiali che bloccano i raggi UV per la sicurezza del paziente durante l'irradiazione |
| Tubi di separazione sierologica (SST II Advance) | BD Vacutainer | 367955 | Prelievo di sangue a digiuno al primo momento e alla dodicesima settimana |
| Software statistico | IBM | SPSS Statistics v26.0 (RRID:SCR_002865) | Analisi dei dati primari per protocollo |
| Soluzione fisiologica sterile (0,9%) | Baxter | 2B1324 (500 mL) | Pulizia delle lesioni prima di ogni sessione laser |
| Soluzione di fermamento (2 M H2SO4) | Sigma-Aldrich | 258105 | Ferma la reazione TMB |
| Streptavidina-HRP | Thermo Scientific | N100 | Reagente di rilevamento; Compatibile con il kit |
| Substrato TMB (ELISA) | Thermo Scientific | 34028 | Sviluppo cromogenico; 10 minuti al buio |
| Treppiede con indicatore di distanza | Manfrotto | MKCOMPACTLT-BK | Mantiene una distanza costante tra la telecamera e il soggetto |
| Preadolescente-20 (per PBST 0,05%) | Sigma-Aldrich | P1379 | Tensioattivo tampone di lavaggio |
| Radiometro UV / Misuratore di potenza | Tecnologie Internazionali della Luce | ILT2400 | Per la verifica giornaliera dell'output e i test MED; con rivelatore SED240/NS254 o equivalente |
| Tenda/telo opaco che blocca i raggi UV | Thorlabs | Tessuto oscurante BK5 | Coperture che circondano la pelle normale per evitare esposizioni indesiderate; o equivalente |
| Foglie di punteggio VASI (Stampate) | Interno | NA-VASI-2025 | Moduli standardizzati di valutazione clinica; archivio con ID soggetto |
| Wood' s Lamp (UV-A, 365 nm) | Spettrolina | ENF-260C | Diagnosi clinica e valutazione del bordo della lesione |
| Wood' Copru della lampada s | DermLite | DL Hood | Migliora il contrasto durante l'esame UV-A |
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