Saggio di elettrotassi: un metodo per osservare la locomozione in C. elegans

- Senza stimoli sensoriali, il movimento di C. elegans è generalmente in avanti ed è interrotto da inversioni e svolte, manovre di riorientamento casuali che provocano un cambio di direzione. C. elegans è elettrorecettivo. Cioè, possono percepire i campi elettrici. Quando esposti a una lieve corrente continua o CC, i vermi si muovono in un percorso rettilineo ininterrotto in direzione dell'elettrodo negativo o del catodo, un comportamento chiamato elettrotassi.

Per osservare più accuratamente la locomozione del verme, posizionare l'animale in un dispositivo microfluidico e applicare un campo elettrico CC. Invertendo la direzione del campo, il verme girerà nella direzione opposta, verso la direzione del catodo. Applica una corrente alternata, CA, e il verme si fermerà. Il cambiamento alternato nella direzione del campo travolge i sistemi neuromotori del verme, provocando l'immobilizzazione del verme. Riapplicare il campo CC e il verme riprenderà il movimento in avanti verso il catodo.

Nel seguente protocollo di esempio, vedremo una configurazione che dimostra un saggio di elettrotassi in un dispositivo microfluidico.

- Iniziare questo passaggio posizionando il microcanale appena assemblato su un tavolino xy-mobile di un microscopio con una telecamera montata collegata a un monitor. Collegare l'alimentatore agli elettrodi del microcanale.

Dopo aver confermato che la resistenza del microcanale è di circa 0,6 megaohm, collegare il tubo di uscita del microcanale a una siringa monouso. Quindi immergere la bocca del tubo di ingresso in una soluzione di nematodi sospesi in tampone fisiologico M9. Applicare una pressione negativa all'interno della siringa per aspirare il liquido nel canale.

Quando i tubi di ingresso e di uscita sono entrambi pieni, scollegare la siringa e manipolare idrostaticamente il flusso regolando l'altezza relativa del tubo per posizionare una vite senza fine al centro del canale. Quindi stendere entrambi i tubi alla stessa altezza. Per mantenere il flusso zero all'interno del microcanale quando si commutano i campioni a vite senza fine durante un esperimento di elettrotassi, dopo aver livellato entrambi i tubi di ingresso alla stessa altezza, se c'è ancora flusso apportare piccole regolazioni all'altezza del tubo l'uno rispetto all'altro.

- Se non siamo sicuri che il flusso sia davvero zero, possiamo indurre un'inversione nel movimento del verme cambiando la polarità del campo elettrico e quindi valutando la velocità lineare del verme mentre gira.

- Ora, imposta l'alimentatore sulla tensione appropriata. Attivare il segnale elettrico e attendere un minuto di pre-esposizione affinché il verme si acclimati al campo, durante il quale il verme dovrebbe iniziare a muoversi verso il catodo. Trascorso il minuto, iniziare a registrare.

Al termine dell'esperimento, rimuovere tutto il liquido e i vermi dal canale. Sciacquare la camera con acqua deionizzata e lasciare asciugare il dispositivo su una piastra calda a 125 gradi Celsius.