Modellazione di xenotrapianti derivati da pazienti: una tecnica per generare modelli murini di melanoma

- Nei modelli di xenotrapianto o PDX derivati da pazienti, cellule tumorali o frammenti di pazienti umani vengono impiantati in topi riceventi immunodeficienti. I modelli PDX simulano le caratteristiche biologiche e molecolari del microambiente tumorale umano. Per sviluppare un modello PDX di melanoma, in primo luogo, prelevare il tessuto tumorale da un paziente con melanoma. Rimuovere il tessuto necrotico dal tumore. Tritare il tumore per ottenere un impasto. Quindi, preparare un topo ricevente anestetizzato in posizione prona. Praticare una piccola incisione chirurgica sulla pelle dorsale. Tagliare delicatamente la membrana fasciale o lo strato di tessuto connettivo sciolto appena sotto la pelle. Questo separa la pelle dagli strati muscolari sottostanti e aiuta a creare una tasca per l'impianto del tumore.

Trasferire delicatamente il liquame tumorale nella tasca. Ora, somministrare una matrice extracellulare artificiale nella tasca per stabilizzare e fissare le cellule tumorali impiantate. Pinzare chirurgicamente la ferita e lasciare che il topo si riprenda. Monitorare settimanalmente il topo ricevente per osservare la crescita del tumore xenotrapianto. Nel seguente protocollo, dimostreremo l'impianto sottocutaneo di cellule tumorali di melanoma derivate da pazienti in un topo NSG immunodeficiente per generare modelli di xenotrapianto derivati da pazienti con melanoma.

- Per impiantare l'escissione chirurgica o il tessuto bioptico chirurgico, in primo luogo, radere i peli dalla parte bassa della schiena di topi anestetizzati NSG di età compresa tra sei e otto settimane lasciando un'area di circa 1,5-3 centimetri senza peli. Preparare i pezzi di tumore e dividere l'impasto tumorale in una capsula di Petri in singoli tumuli per l'impianto chirurgico. Usando la lama di un bisturi, praticare un'incisione lunga circa 5 millimetri al centro della parte posteriore del topo. Con un paio di pinze, sollevare la pelle sul lato dell'incisione opposto all'operatore. Con le forbici nell'altra mano, separare la pelle dallo strato muscolare tagliando delicatamente la membrana fasciale con piccoli tagli a forbice, creando così una tasca per il tessuto tumorale.

Usa una lama di bisturi per raccogliere un pezzo di tumore e un singolo cumulo di tessuto di liquame tumorale e posiziona delicatamente il tessuto nella tasca creata. Quindi, aggiungere 100 microlitri di matrice extracellulare artificiale sul tumulo di tessuto tumorale nella tasca. Usando due paia di pinze, tira verso l'alto l'incisione su entrambe le estremità in modo che i bordi della ferita si avvicinino. Quindi, applicare una o due clip per chiudere la ferita. Iniettare per via sottocutanea 1-5 milligrammi per chilogrammo di analgesico. Al termine della guarigione, dopo circa 7 giorni, rimuovere le clip della ferita.