Morris water maze Test: Ottimizzazione per ceppo di topi e Ambiente di prova

L'obiettivo di questa procedura è identificare i deficit cognitivi in un modello murino di Alzheimer attraverso l'uso di un protocollo di labirinto d'acqua Morris, su misura per l'uso con il ceppo di fondo 1 2 9 6 FBB. Ciò si ottiene prima acclimatando i topi al compito di alleviare i deficit di prestazione indotti dallo stress. Il secondo passo consiste nell'utilizzare l'attività della piattaforma visiva in cui una piattaforma viene sollevata di un pollice sopra la linea di galleggiamento per valutare il funzionamento visivo e motorio.

Successivamente, vengono condotte le prove della piattaforma nascosta in cui la piattaforma è immersa cinque millimetri sotto la superficie dell'acqua. Il passaggio finale consiste nell'utilizzare prove di sonda in cui la piattaforma viene rimossa per valutare la memoria di riferimento spaziale e determinare il tipo di strategia di ricerca utilizzata. In definitiva, questa procedura di MA dell'acqua su misura consente la valutazione dell'apprendimento spaziale e della memoria in un modello murino comunemente usato della malattia di Alzheimer.

In generale, gli individui che non conoscono questo metodo avranno difficoltà a causa della necessità di ottimizzare le procedure di test, come il numero di prove di addestramento e le sonde utilizzate in base alla tensione di fondo della linea di topi e all'ambiente in cui i topi vengono testati. Questa parte della procedura acclimata i topi per tirare l'ingresso e la rimozione. Per prima cosa, posiziona la scatola in modo che sia sollevata a un'altezza comoda e riempila con due litri d'acqua a una temperatura di 21 gradi Celsius e a un livello di circa un centimetro.

Dopo aver portato i topi nella sala prove, rimuovere un soggetto dalla gabbia, verificare l'identificazione del soggetto e quindi contrassegnare la coda con un pennarello indelebile non tossico per distinguerla dai topi che non sono stati sottoposti alla procedura. Posizionare un mouse nel becher di trasferimento per circa cinque secondi. Quindi versare delicatamente il mouse fuori dal becher nella piscina di pre-manipolazione tempo il mouse nella piscina per 20 secondi.

Trascorso il tempo, posizionare delicatamente una paletta davanti al mouse senza inclinarlo. Consenti al mouse di entrare ed esplorare la paletta Se necessario, incoraggia il mouse a salire sulla paletta facendo scorrere delicatamente la paletta sotto il mouse mentre la sollevi lentamente. Fai attenzione a non spaventare i topi con la paletta.

Ripeti queste procedure per ogni topo nella gabbia una volta al giorno per 10 giorni. Dopo ogni animale, raccogli il boli fecale e la lettiera dalla piscina, usando una rete che funge da bicchiere di trasferimento tra le gabbie. Esegui una formazione visibile nei giorni di test uno, due e tre con sei prove ogni giorno e circa 10 minuti tra una prova e l'altra.

Innanzitutto, configura il software di monitoraggio delle prestazioni del mouse e crea i fogli di esecuzione secondo le istruzioni nella parte di testo del protocollo. Una volta configurato il software, allestisci la stanza appendendo prima le tende in modo da oscurare eventuali segnali spaziali. Quindi, prepara la vasca riempiendola con acqua del rubinetto a 21 gradi Celsius.

Utilizzare un termometro per assicurarsi che la temperatura dell'acqua rimanga entro un grado da questa temperatura. Durante i test. Posiziona la piattaforma, che ha una bandiera montata che raggiunge l'altezza di 13 centimetri ed è di 4,5 per 4,5 centimetri con un audace carattere a forma di S in rilievo su di essa nella prima posizione predeterminata della vasca in modo che si alzi di circa un pollice sopra la superficie dell'acqua.

Ora prendi il primo topo dalla gabbia. Verificare l'identificazione del soggetto, contrassegnare la coda con un pennarello indelebile del colore corretto e posizionarla in un becher di trasferimento. Posiziona delicatamente il topo nella vasca.

Avvia il timer e assicurati che il software di tracciamento stia tracciando l'animale. Attendere al mouse fino a due minuti per individuare la piattaforma. Una volta che il mouse ha individuato la piattaforma, lasciare che il mouse rimanga sulla piattaforma per 20 secondi.

Se l'animale non riesce a trovare la piattaforma entro il periodo di due minuti, raccogli il topo e posizionalo sulla piattaforma per 20 secondi. Dopo 20 secondi sulla piattaforma, rimuovi il mouse dalla piattaforma come fatto nell'allenamento di acclimatazione e posizionalo in una gabbia riscaldata foderata con tovaglioli di carta e riscaldalo a circa 31 gradi Celsius da un termoforo e una lampada riscaldante per 30 secondi. Quindi trasferisci il mouse nella gabbia di supporto con solo un termoforo, ma nessuna lampada termica per recuperare tra le prove.

Dopo aver pulito la vasca dai detriti con una rete, ripeti questi passaggi per ogni topo del gruppo. Quando ogni mouse è completato, la prima prova, sposta la piattaforma nella seconda posizione predeterminata. Esegui l'addestramento con la piattaforma nascosta dal quarto al decimo giorno dopo aver appeso le tende.

Come prima, posiziona le stecche strategicamente sulle tende. Assicurati che le stecche siano grandi e contengano colori contrastanti per una migliore visibilità e siano impostate su distanza e altezza in modo che siano visibili ai topi dall'interno della vasca. Configurare il software secondo le istruzioni riportate nella parte scritta del protocollo.

Quindi allestisci la vasca riempiendola prima d'acqua in modo che la piattaforma si trovi a circa cinque millimetri sotto la superficie dell'acqua. Posizionare la piattaforma nella posizione predeterminata. La posizione della piattaforma rimarrà la stessa per essere quasi testata in tutti i giorni e le prove.

It.It è fondamentale variare la posizione di partenza in modo che gli animali non sviluppino una strategia motoria non spaziale, non ippocampale. Per risolvere il labirinto, utilizzare vernice temperata bianca atossica per rendere l'acqua opaca. Fallo per assicurarti che la parte superiore della piattaforma sia invisibile all'altezza degli occhi dell'animale durante il nuoto.

Dopo aver identificato e contrassegnato i topi in precedenza, versare delicatamente il topo nel labirinto, in modo che l'otorinolaringoiatra sia rivolto verso il muro. Ogni mouse verrà posizionato nella stessa posizione di partenza per una prova unica. Al rilascio iniziale del mouse, avviare il timer e posizionarsi in un'area in cui il tester non è facilmente visibile ai mouse.

Una volta che l'animale raggiunge la piattaforma, lascialo rimanere sulla piattaforma per 15 secondi per orientare la sua posizione spaziale all'interno della stanza. Se il mouse non individua la piattaforma entro 60 secondi, raccogli delicatamente il mouse e posizionalo sulla piattaforma. Dopo 15 secondi sulla piattaforma, rimuovi il mouse dal labirinto e rimettilo nella gabbia riscaldata.

Dopo aver ripulito il labirinto dai detriti, ripeti queste procedure per i topi rimanenti nel gruppo. Pertanto, per i giorni di test dal quarto al nove, condurre quattro prove di allenamento su piattaforma nascosta al giorno con circa 20 minuti tra una prova e l'altra. Eseguire prove della sonda prima dell'addestramento sulla piattaforma il sei, settimo e ottavo giorno e la prova finale della sonda.

Il giorno 10, condurre le prove della sonda in modo simile all'addestramento su piattaforme nascoste, con l'eccezione che nessuna piattaforma è nel labirinto. Rilasciare un topo da un punto di rilascio predeterminato e lasciare che il topo nuoti per 60 secondi nel labirinto Dopo la prova della sonda del giorno 10, non ci sono ulteriori prove condotte durante le prove della sonda. Usa il software di tracciamento degli animali per tracciare la lunghezza del percorso dell'animale, la percentuale di tempo che l'animale trascorre in ogni quadrante del labirinto e il numero di volte in cui un animale nuota sopra l'area precedentemente tracciata.

Apri la scheda dell'elenco degli esperimenti e ottieni le misurazioni dalla scheda Analisi dati e dalla scheda Labirinto d'acqua. Esporta direttamente in un foglio di calcolo Excel. Quindi analizza i dati secondo le istruzioni nella parte scritta del protocollo.

41 topi TP 3 0 1 L contenenti il gene umano P 3 0 1 LTL e 46 controlli sono stati testati utilizzando questo protocollo a circa 6,5 mesi di età. Ciò rappresenta tre mesi di espressione di Tau P 3 0 1 L nei transgenici. Ogni gruppo conteneva un numero approssimativamente uguale di maschi e femmine di lunghezza del percorso.

L'allenamento su piattaforma invisibile non differiva tra i controlli e i topi TP 3 0 1 L. Questa mancanza di differenza indica che il controllo e la tau P 3 0 1 LM non differiscono nella capacità visiva o locomotoria, e che i deficit di prestazione nei test di prova nascosti possono quindi essere attribuiti a disturbi della memoria. Tuttavia, durante l'addestramento su piattaforma nascosta, il TP 3 0 1 LM ha dimostrato lunghezze di percorso significativamente più lunghe in tutti i blocchi di addestramento.

Infine, i controlli sono migliorati nelle quattro prove di sonda. Mentre i topi Tau P 3 0 1 L non controllavano, i topi erano in grado di utilizzare meglio una strategia spaziale per risolvere il compito e avevano imparato meglio a localizzare la piattaforma nella zona bersaglio. Quando si adatta questa procedura per l'uso con altre linee di topi, è importante valutare il tasso di apprendimento dei controlli, identificare il numero di prove di addestramento al colpo necessarie e determinare quando inserire la prima prova con la sonda.