Separazione di miscele tramite precipitazione

1. Precipitazione di CaCO₃

1. Preparare 5 ml di 1 M CaCl₂.
2. Preparare 5 mL 1 M Na₂CO₃.
3. In un piccolo tubo centrifugo (1,5 mL), aggiungere 750 μL di CaCl₂ e 750 μL di Na₂CO₃.
4. Attendere 2 minuti affinché si verifichi la reazione. La soluzione dovrebbe diventare torbia.
5. Centrifugare la miscela a 10.000 × g per 5 min.
6. Decantare il surnatante.
7. Aggiungere 1 mL di acqua fredda al pellet.
8. Risuspendare il pellet mescolando in un miscelatore a vortice per 10 s.
9. Centrifugare la miscela a 10.000 × g per 5 min.
10. Decantare il surnatante.

2. Precipitazione delle proteine del latte

1. Versare il latte in un becher e aggiungere una barra di agitazione.
2. Scaldare delicatamente il latte fino a 40 °C in una piastra calda mescolando. Non riscaldare oltre i 40 °C.
3. Preparare un 15% (v/v) di acido acetico mescolando 7,5 ml di acido acetico e diluendo in acqua sufficiente per raggiungere i 50 ml.
4. Immergere l'elettrodo di un pHmetro nel latte caldo e monitorare il pH.
5. Aggiungere l'acido acetico goccia al latte fino a raggiungere un pH di 4,6.
6. Filtrazione del latte
   1. Scanalare un pezzo di carta da filtro e metterlo in un imbuto.
   2. Posizionare l'imbuto in un pallone e versare la soluzione di latte acidificata nell'imbuto.
   3. Quando la soluzione viene versata, la carta da filtro potrebbe intasarsi. Usando un'asta di agitazione, agitare la soluzione e la carta da filtro di tanto in tanto per sbloccare. Se non migliora il passaggio della soluzione, cambiare la carta da filtro.
   4. Posizionare una nuova carta da filtro sul piano di lavoro e trasferire la maggior parte del solido bagnato nella nuova carta da filtro. Questo dovrebbe assorbire più acqua dal solido.
   5. Se la nuova carta da filtro si bagna troppo, continuare a cambiarla fino a quando non c'è una quantità minima di umidità sulla carta da filtro. Premerlo leggermente per assorbire più acqua, se necessario.
   6. Prendere il solido essiccato e ri-sospendere in circa il 70% di etanolo. Filtrare nuovamente il solido seguendo i passaggi da 2.6.1 a 2.6.5.
7. Centrifugazione del latte (in alternativa alla filtrazione)
   1. Trasferire porzioni da 50 mL della miscela in tubi centrifughi da 50 mL.
   2. Centrifugare a 4.500 × g per 10 min, quindi decantare il surnatante.
   3. Aggiungere 50 ml di etanolo al 70% al pellet.
   4. Utilizzando un'asta di agitazione, risusediare il pellet nell'etanolo.
   5. Centrifugare questa sospensione seguendo il punto 2.7.2.
8. Risuspenare il pellet in tampone per ulteriori analisi come SDS-PAGE, altrimenti conservarlo a 4°C.

3. Ricristallizzazione di KCl

1. Pesare 50 g di KCl in un matraccio Erlenmeyer e aggiungere 100 ml di acqua
2. Riscaldare la miscela fino a quando l'acqua bolle. Assicurarsi che tutta la polvere di KCl sia sciolta. Alcune impurità potrebbero non dissolversi in acqua.
3. Scaldare un altro matraccio Erlenmeyer (vuoto) insieme al composto e tenerlo molto caldo.
4. Mettere un imbuto con carta da filtro nel pallone caldo e vuoto.
5. Versare la soluzione attraverso la carta da filtro per rimuovere le impurità non disciolte. Il pallone ricevente viene mantenuto caldo per assicurarsi che non si verifichino variazioni di temperatura durante la filtrazione, altrimenti si formerà un precipitato grezzo. Se ciò accade, riscaldare nuovamente la miscela fino a quando tutto il precipitato si dissolve.
6. Togliere il matraccio con la soluzione dal fuoco.
7. Tenerlo in un luogo fresco nella stanza e lasciarlo raffreddare lentamente per circa 30 minuti, o fino a quando non è più caldo al tatto.
8. Una volta raffreddato a temperatura ambiente, mettere il pallone in un bagno di ghiaccio per abbassare ulteriormente la temperatura. In alternativa, si può lasciare il pallone all'interno del frigorifero o in un locale a temperatura controllata a 4 °C.
9. I cristalli possono essere raccolti filtrando come nei passaggi 3.4-3.5 (utilizzare un pallone e un imbuto a temperatura ambiente).