本論文では、肝移植後の虚血再灌流傷害に関する基礎研究を容易にするために、ラットにおける肝相(肝虚血)の動物モデルを構築する方法を詳しく説明する。
このコンテンツを表示するには、JoVEへの購読が必要です。 または、無料トライアルをお申し込みください。
この記事について
サマリー
要約
ラットにおける正体異形肝移植(OLT)は、肝外器官の虚血再灌流傷害(IRI)を含む術前、術中および術後の研究に使用される実証済みの動物モデルである。このモデルには、数多くの実験とデバイスが必要です。肝相の持続時間は、移植後にIRIを発症する時間と密接に関連している。本実験では、血行力学的変化を用いてラットの肝外臓器損傷を誘発し、最大許容時間を決定した。最も重度の臓器損傷までの時間は、異なる器官のために変化した。この方法は、容易に複製することができ、また、肝臓移植後の肝外器官のIRIを研究するために使用することができる。
概要
虚血再灌流傷害(IRI)は、肝臓移植後の一般的な合併症である。肝疾患は、虚血媒介性細胞損傷および肝再灌流の異常な悪化を伴う病理学的プロセスである。肝性IRIと局所的な自然免疫応答は、熱と冷間のIRIに分けることができる、臨床環境の違いに応じて1。ホットIRIは、通常、肝臓移植、ショック、および外傷2の結果として、幹細胞傷害によって誘発される。冷たいIRIは、内皮細胞および末梢循環によって引き起こされる肝臓移植の合併症である3.臨床報告によると、肝性IRIは初期臓器不全の10%に関連しており、急性および慢性拒絶反応4,5の発生率を増加させる可能性がある。また、肝性のIRIはまた、多臓器不全症候群または全身性炎症反応症候群を誘発し、高死亡率6を有する。肝外臓器の関与を有する患者は、病院に長く滞在し、より多くのお金を費やし、より悪い予後7を持っている傾向があります。合併症の発症は、肝臓移植8の肝相の長さと密接に関連している。
ラットにおける異形性肝移植(OLT)は、1973年にアメリ....
アクセスが制限されています。このコンテンツを表示するにはログインするか、トライアルを開始してください。
プロトコル
動物倫理委員会は広西医科大学(No20190920)の実験を承認した。すべての動物は広西医科大学動物実験センターから供給された。SPF雄のスプレイグ・ドーリーラット(200〜250g、10〜12週間)を使用し、室温25±2°C、湿度50±10%の下に保ちました。給餌は、操作の24時間前に停止しました;しかし、水が提供されました。
注:1人のオペレータは、マイクロ手術ベースまたは手術顕微鏡なしですべての操作を実行することができます。
1. 操作
- 体重を量った後、イオブルランでラットを麻酔(5%)動物麻酔装置を使用して。
- 1~2分後、ラットのつま先をピンセットで軽くクランプします。ラットがつまんでも反応しない場合、麻酔状態に入った。乾燥を防ぐために目に獣医軟膏を使用してください。ラットの体温を37~38°Cに保つには、動物用暖房ランプを使用してください。
- 腹部消毒(ポビドンヨウ素溶液)に続いて、ラットを動物解剖テーブルに固定する。鉗子およびはさみを使用してxiphoidプロセスの下に3cmの中央部の切開を作る。
- 腹腔を開き、レトラクターを使用して肝臓を露出させ、肝胃靭帯を動員する。綿棒を使用して肝臓の中央葉をそっとひっくり返し、上に回してポルタヘパティスを露出させます。CBD、PV、および HA を識別します。
- 綿棒を使用して....
アクセスが制限されています。このコンテンツを表示するにはログインするか、トライアルを開始してください。
結果
ラットの肝臓虚血に対する耐性
この動物モデルでは、手術中に血管が結紮された部位を図1に示す。ラットを15分間の虚血(I15群)に対して無作為に5群に分け、30分(I30群)、45分(I45群)、60分(I60)、およびシャム群を各群に10匹ずつ含む。各群の生存率は、手術後14日目に観察された。すべてのラットはI15群、I30群、およびシャム群で生存した。8人はI45グループで14日間生き残り、I60グループで生き残ったのはわずか2人でした。これらの結果は、ラットが最大45分間の無肝相を許容できることを示唆している(表1)。
ラットの循環に及ぼす血管結紮の影響
実験中、バイオシステムズは、無肝期の前後に心拍数と血圧(右内頸動脈挿管)を記録した。我々は、ラットの心拍数と平均動脈圧(MAP)が血管結紮後に劇的に変化することを発見した(図2)。
アクセスが制限されています。このコンテンツを表示するにはログインするか、トライアルを開始してください。
ディスカッション
ラットのOLTは、肝臓移植、IRI、移植拒絶反応、免疫寛容、移植病理学および薬理学、ホモ移植、異種移植における臓器保存を研究するための理想的なモデルです。現在、肝臓移植の実験研究に広く用いられている。
パイロット研究の間、我々は最初にペントバルビタールナトリウム腹膜内麻酔を投与し、これが高い術後死亡率と血行力学的変化に対する短い耐性につながったことを発見した。このように、我々は、その後の試験で吸入麻酔を使用して、作用の急速な開始と インビトロ 特性の迅速な排除を行った。吸入麻酔への切り替えは、ラットの許容時間と術後生存時間を有意に改善した。麻酔薬の過剰な処理を防ぐために、研究者はラットの呼吸と心拍数に注意を払う必要があります。生体システムは、心拍数と血圧を監視するために使用することができます。また、外科的縫合の厚さが血管の結紮に及ぼす影響も観察した。3-0より小さい線は血管を完全にリゲートすることができたが、それらは緩むのが難しく、血管の破裂につながる可能性がある。逆に、3-0より大きいラインは不完全な血管閉塞をもたらし、血行力学的変化を防ぐ。これらの物質的問題は.......
アクセスが制限されています。このコンテンツを表示するにはログインするか、トライアルを開始してください。
開示事項
この原稿の著者は、開示する利益相反はありません。
謝辞
広西医科大学第二付属病院のウェンタオ・リー博士とJi-hua Wu博士の有益な提案を認めたいと思います。著者たちは、チームメイトの皆様に有益なコメントやディスカッションをしてくれたことに感謝したいと思います。著者はまた、彼らのコメントのためにJoVEの匿名のレビュー担当者と編集者に感謝したいと思います。特別な感謝は、彼らの継続的なサポートと励ましのために元博士の両親に行く必要があります。寧波自然科学財団(2014A610248)の支援を受けた。
....アクセスが制限されています。このコンテンツを表示するにはログインするか、トライアルを開始してください。
材料
| 名前 | 会社 | カタログ番号 | コメント |
|---|---|---|---|
| 4%パラホルムアルデヒド溶液 | 上海マックリン生化学株式会社P804536 | ||
| 空気乾燥オーブン | 上海Binglin Electronic Technology Co.、Ltd. | BPG | |
| アラニンアミノトランスフェラーゼ(ALT)キット | エラブサイエンス・バイオテクノロジー(株 | E-BC-K235-S | |
| アンモニア | シノファーム化学試薬(株 | 10002118 | |
| アミラーゼキット | エラブサイエンス・バイオテクノロジー(株 | E-BC-K005-M | |
| 無水エタノール | シノファーム化学試薬(株) | 100092183 | |
| 動物麻酔器 | Shenzhen Ruiwode Life Technology Co., Ltd | R640 | |
| アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ (AST)キット | Rayto Life and Analytical Sciences Co., Ltd. | S03040 | |
| 自動生化学分析装置。 | SIEMENS AG FWB:SIE, NYSE:SI Co., Ltd. | 2400 | |
| Biosystems(ネサリー時) | Chengdu Taimeng Electronics Co., Ltd. | BL-420F | |
| 遠心分離機 | Baiyang Medical Instrument Co., Ltd. | BY-600A | |
| カバーガラス | 江蘇省泰実験装置有限公司 | 10212432C | |
| クレアチニンキット | レイト生命分析科学株式会社 | S03076 | |
| 水機 | ハンガリー3DHISTECH株式会社 | ドナテッロシリーズ2 | |
| 埋め込み機 | 湖北省Xiaogan国海医療技術有限公司。 | KH-BL1 | |
| 冷凍機 | 武漢Junjie電子有限公司 | JB-L5 | |
| ヘマトキシリン-エオシン染料溶液 | 武漢Saiwellバイオテクノロジー株式会社 | G1005 | |
| 高効率パラフィンワックス | 華龍パラフィンワックス株式会社 | Q / YSQN40-91 | |
| 塩酸 | シノファーム化学試薬株式会社 | 10011018 | |
| 眼内レンズ(IOL)鉗子 | Guangzhou Guangmei Medical Equipment Co., Ltd. | JTZRN | |
| イソフルラン | 深センRuiwode Life Technology Co.株式会社 | — | |
| マイクロハサミ(ネサリー時) | 上海手術器具工場 | WA1010 | |
| ニードルホルダー | 上海手術器具工場 | J32010 | |
| 中性ガム | 上海華神ヒーリング機器有限公司 | — | |
| 正常光学顕微鏡 | ニコンインスツルメンツ上海株式会社 | ニコンエクリプスCI | |
| 眼科用鉗子 | 上海外科用器具工場 | J3CO30 | ストレート |
| 眼科用鉗子 | 上海外科用器具工場 | JD1060 | |
| 眼科用ハサミ | 上海外科用器具工場 | J1E0 | |
| 病理学スライサー | Shanghai Leica Instrument Co., Ltd | RM2016 | |
| ピペット | Dragon Laboratory Instruments Co., Ltd. | ||
| リトラクター | 北京金諾台技術開発有限公司 | JNT-KXQ | |
| の走査器 | ハンガリー3DHISTECH株式会社 | Pannoramic 250 | |
| スライド | 武漢SaiwellのバイオテクノロジーCo.、株式会社 | G6004 | |
| キシレン | Sinopharmの化学試薬Co.株式会社 | 1330-20-7 |
参考文献
- Dar, W. A., Sullivan, E., Byon, J. S., Eltzschig, H., Ju, C. Ischaemia reperfusion injury in liver transplantation: Cellular and molecular mechanisms. Liver International. 39 (5), 788-801 (2019).
- Qiao, P. F., Yao, L., Zhang, X. C., Li, G. D., Wu, D. Q.
アクセスが制限されています。このコンテンツを表示するにはログインするか、トライアルを開始してください。
再版と許可
