研究者向けに設計されたオープンソースのノーマザミック灌流システム

サマリー

ここでは、既存のプラットフォームの高コストと限られた柔軟性を克服するように設計された、オープンソースで変更可能な常温 ex vivo 灌流システムのプロトコルを提示し、前臨床生物医学研究におけるよりアクセスしやすく、コスト効率が高く、反復的な使用を可能にします。

要約

移植前のヒト臓器に対する ex vivo 灌流装置の統合により、レシピエントの転帰が改善され、臓器の利用可能性が向上し、トランスレーショナルメディシンの新たな研究の道筋が明らかになりました。しかし、これらのマシンは、実験的な変更のための利用可能性が限られており、研究者には多額の初期費用投資と法外な使用単価を提示します。さらに、生物医学研究では、多細胞臓器環境における細胞プロセスの真の調査を可能にする、改良された前臨床モデルが大いに必要とされています。

より大きな研究コミュニティが同様の技術にアクセスできるようにするために、私たちは、ユーザーが変更可能なPythonコードで実行される容易に調達できる部品から、費用対効果の高いモジュール式の常温灌流マシンを構築しました。このシステムにはカスタマイズされたハードウェアがないため、研究者は個別の研究アプリケーションの必要に応じてシステムを構築および拡張できます。

ここでは、機械のセットアップと灌流プロセスについて詳しく説明し、ブタと人間の臓器での経験を伝え、早期の概念実証実験結果を提供します。これらの研究は、無傷のヒト組織を使用して病態生理学と複雑な細胞プロセスを調査できる可能性を示しています。

概要

移植 ^1,2,3,4,5 の前に、腎臓や肝臓には短時間 (<12 時間) の常温マシン灌流が以前から使用されていましたが、2020 年に Liver4Life マシン⁶ で長期の常温 ex vivo 肝臓灌流が現実のものとなりました。この技術の意図は、生存可能なドナー臓器の拡大に向けられていたが、可能なトランスレーショナルアプリケーションは、研究コミュニティ7,8,9,10,11,12に容易に明らかであった。ベンチサイエンティストや従来の研究室にとって、これらの臨床ツールは、多額の初期費用と経常費用のために、ほぼ確実に手の届かないものです^12,13。臨床常温灌流装置は250,000米ドル以上で、使い捨ての使い捨ては1回あたり9,500ドルから60,000米ドルの範囲です13,14,15,16,17,18,19,20,21,22,23.さらに、所有権と既存の技術を調整できないことが、科学的な応用を困難にしています。

生物医学研究における改良された前臨床モデル24,25,26の顕著なニーズは、前述の制限と相まって、オープンソースで変更可能な灌流システムの作成に影響を与えました(図1)。回路の設計と開発は、コスト利用、実験室のスペース要件、およびトランスレーショナルアプリケーションのモビリティの原則によって導かれました。このシステムは48,000ドルから66,000ドルで構築でき、各灌流コストは1,000ドルから2,300ドルの範囲であり、これは無料でダウンロード可能なコードによって実行される容易に調達できる個々のコンポーネントの統合によって達成されました。このシステムは、ドナーのブタの血液と、手術室から呼気されたヒトの血液、ブタの肝臓、およびヒトの肝臓の一部分節を利用する反復プロセスを通じて最適化されました(補足表1、補足表2、および補足表3)。臓器は、圧迫壊死を最小限に抑え、理想的なカニューレ挿入軌道を可能にし、流出を排出し、正常体温を確保するために標本を最適に配置する密閉された洗面器に収容されます。リザーバーには、流入回路に向けられる前に、約2〜3Lの灌流液が収納されています。血液透析は、電解質の恒常性と肝灌流6,27,28,29の血中濃度に重要であり、独立したローラーポンプを備えたサイド回路を介して統合されました。薬理学的注入は、生理学的機能(例:.、全非経口栄養(TPN)、胆汁酸塩など³⁰)、血管緊張の増強(エポプロステノール、フェニレフリン)、凝固の予防(エノキサパリン)、および感染(ピペラシリン-タゾバクタム、アムホテリシン)。.生理学的灌流パラメータは、リアルタイムのインラインセンサーを使用して保証され、血液ガス、圧力、および流量の値を取得します。このシステムは、ハードウェアコンポーネントの統合が回路内の任意のポイントで発生するように、ユーザーの適応性を最大限に高めます。さらに、回路内の個々の各コンポーネントを交換または変更して、特定の研究課題や実験ニーズに合わせて調整することができます。例えば、デュアルインフロー回路は、ポンプヘッドの前にYコネクタを取り外すだけで、シングルインフローの臓器(腎臓や膵臓)の灌流用に変更でき、インフュージョン/サンプリング用のクレーブを回路内の任意のポイントに取り付けることができます。さらに、システムはPythonコードで実行され、エンドユーザーが指示した特定の灌流パラメータのセットに基づいて半自動灌流が可能です(補足図1)。たとえば、センサーは連続動脈血ガス(ABG)、圧力、および流量の読み取り値を取得し、入力として機能して、酸素供給器のガス流量、ポンプ速度などを自動的に調整する出力コマンドを実装します。グラフィックユーザーインターフェース(GUI)では、必要に応じてこの自動化を手動で上書きできます。回路のカスタマイズ性がその特徴であり、このシステムの全体的な適用性を幅広い実験的研究に広げます。

システム全体へのアクセスは自由に利用でき(https://github.com/CCR-SOP/OpenSourcePerfusionSystem.git)、トランスレーショナルサイエンスの複数の分野で新たな知識の深さを築くためのコラボレーションとイノベーションを促進します。

図1:オープンソースの灌流システム。 (A)肝臓灌流用のデュアルインフローセットアップ用のオープンソース灌流システム概略図。(B)画面に示されているように、ソフトウェア統合による臓器灌流中のシステムの3次元(3D)レンダリング。(C)ブタ灌流実験中の灌流装置の写真。図で公開されている設定は、デモンストレーションのみを目的としています。灌流中、滅菌された加温ドレープが臓器を覆い、無菌の囲いを維持します。P/Fセンサー:圧力センサーと流量センサー。HA:肝動脈。PV:門脈。HV:肝静脈。BD:胆管です。 この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。

プロトコル

このプロトコルは、当機関のヒト研究倫理委員会の倫理基準に従って実施され、ヒトの被験者と組織を含む研究に適用されるすべてのガイドラインと規制を順守しています。

1. 機械のセットアップ

1. テーブルの準備
   1. 卓上と移動式カートを70%アルコールスプレーで滅菌し、完全に拭きます。モバイルカートをテーブルの左側に対して垂直に置きます。プロトコル全体ですべてのチューブとハードウェアを接続する前に、70%アルコールまたはオートクレーブ(該当する場合)をスプレーして滅菌します。
      注:臓器の取り扱いや介入の前に、滅菌手袋とアルコールスプレーを使用して、灌流前および灌流中の無菌性を促進します。
   2. ワークステーションを滅菌ブルーのドレープで覆い、次に吸収性のアンダーパッドで覆います。
   3. リザーバーホルダーをベンチに最も近いカートの脚に取り付け、リングを外側に突き出し、ワークステーションの上部の底から約12インチ下に突き出します。
   4. ドラムファンネルをワークステーションの右側に置き、注ぎ口をテーブルの前端に張り出します。ドラムの底を埋めるために円形のメモリーフォームを切り取り、注ぎ口の近くに4インチの隙間を空けます。マスクに接続されたフォームの下にダイヤフラムを置きます。
   5. 2つの給湯ブランケットを入手し、コネクタチューブをブランケットの左上に向けてフォームインサートの上に置きます。チューブから白いクランプを切り取り、3/16インチのオスルアーバーブを各チューブに挿入します。Y'ed給湯タンクラインから各ブランケットに1本の流入ラインと1本の流出ラインを固定します。
   6. 滅菌ウォーマードレープを入手し、中央の青い正方形を特定します。半分に2回折り、折り目の角から2mm切り取って流出穴を作ります。ドラムの上に滅菌ドレープを置き、切り口が流出注ぎ口と一直線になるようにします。
   7. 3Dプリントされたコンセントコネクタを入手し、磁石を溝に配置します。流出注ぎ口を通してアンダードレープを置き、コネクタと磁石の切断穴と穴を合わせます。ドレープを固定するために、流出物に合わせて2つ目の磁石を置きます。
   8. 余分なドレープを上げてドラム漏斗全体を覆い、輪ゴム/伸縮性のあるタイで固定します。余分なドレープを上に折りたたんで、滅菌バリアを作成します。折りたたまれたドレープの上にある2番目のウォータージャケットを交換します。
   9. 1/4インチのチューブを~30インチカットし、ドラムファンネルの注ぎ口の底から近位面を出口部分に取り付け、遠位面をリザーバー流入バーブに取り付けます。
2. ポンプと酸素供給器の準備
   1. ワークステーションの端に最も近い移動式カートにポンプを置き、スタンドとポンプのすぐ後ろに2つのクランプを配置して、クランプがポンプの6インチ上になるようにします。
   2. ポンプヘッドを2つ用意し、ポンプで固定します。
   3. 2つの酸素供給器を入手し、スタンドに取り付けられたクランプ内に水平に配置します。バーブを外側に向け、横方向のバーブを右に向けて、酸素供給器を向けます。
      注意: ルアーコネクタ付きの酸素供給器には、ラベルを外側に向け、内側のプロングを上に向けて、別の構成が必要です。
3. ガスミキサーの準備
   1. 1/8インチチューブの4インチチューブを2個カットし、オスの1/8インチルアーを各チューブの端に挿入します。各動脈ガスと静脈ガスの流入に1本のチューブを接続します。
   2. 1/4インチチューブの2インチ2個を切り取り、1/4インチメスルアーを一方の端に取り付けます。これらのチューブピースをそれぞれ、各酸素供給器の右上のとげに取り付けます。
   3. 動脈および静脈の1/8インチガス流入チューブを、それぞれの酸素供給器の右上のルアーコネクタに接続します。
4. 血液透析回路の準備
   1. 血液透析キットから、フィルターに直接通じるチューブ(青、赤、緑、黄色の線)を除くすべてのチューブを取り外します。フィルターをワークステーションの背面、ポンプの右側~12インチ、またはリザーバーと一直線に、ペグボードに固定します。
   2. 血液流入用のフィルターのすぐ右側に1つの大きなローラーポンプを置きます。血液ローラーポンプの右側に2つの小さな蠕動ポンプを配置します。
      1. 2つの1/^8th 蠕動チューブを入手し、白いポンプクランプ内に配置します。各チューブの両端に2つのメス1/^8th ルアーバーブを取り付けます。
   3. 5Lの透析液袋をワークステーションの右側に吊るします。
      1. 1/^8th チューブをバッグのルアーコネクタに取り付けて、透析液バッグを血液透析フィルターの流入に接続します。オスの1/8ルアーをこのチューブの端に取り付け、流入ペリスタルティックポンプチューブに取り付けます。
   4. 透析液の流入/流出:両端にオスの1/^8thルアーを装備した3 1/^8thチューブを入手します。
      1. 流入:近位端をポンプチューブの遠位側面に接続し、遠位端を黄色の流入チューブ(1/8メスルアー付き)に接続して血液透析フィルターに接続します。
      2. 流出:近位端を緑色の流出チューブ(1/8メスルアー付き)に接続し、遠位端を流出蠕動ポンプチューブに接続します。1/8thチューブをペリスタルティックポンプの遠位面に接続し、ルアーコネクタを介して廃棄物袋に排出します。
5. 近位回路の作成
   1. リザーバーをリザーバーホルダー内に配置し、外側の番号と黄色のキャップ付きコネクタを外側に向けて取り付けます。
   2. 5/16インチのチューブを~36インチ切断し、近位端をリザーバーの底にある流出スピケットに接続します。5/16インチYコネクタをこのチューブの遠位端に接続します。
   3. 5/16インチチューブの2つの4インチの長さをカットし、これらをYコネクタの端に接続します。これらの4インチチューブの各端を、各ポンプヘッドの水平プロングに取り付けます。
   4. 4インチの長さの1/4インチチューブを2本カットし、ポンプヘッドの垂直バーブのそれぞれに1本を接続します。遠位面を各酸素供給器の左下のプロングに接続します。
   5. 2インチの長さの1/4インチチューブを2本カットし、メスのルアーを一方の端に接続します。オスのルアーキャップを追加し、各酸素供給器の右下のプロングに取り付けます。
6. 静脈回路創成
   1. 長さ30インチの5/16インチチューブを1本カットし、近位端を静脈酸素供給器の流出(右)バーブに取り付けます。半分にカットし、遠位のカット端に5/16インチYコネクタを配置します。残りの半分をYコネクタの上部バーブに取り付け直します。
   2. サイドサンプリング回路:1/4インチチューブの2インチ1個を切り取り、ニードルドライバーを使用して近位端を伸ばします。これを5/16インチYコネクタの他のバーブに接続します。
      1. キュベットセンサーを入手します。とげのある側をYコネクタに接続された2"チューブに接続します。遠位キュベットチューブの1〜2インチを切り取り、オスの1/4インチルアーに接続します。キャリブレーションが完了したら、シャントセンサーの近位端に取り付け、遠位側でオスの1/8インチルアーを1/8インチチューブに接続します。
      2. メスTコネクタの水平面を1/8インチチューブとオスルアーに接続します。垂直面には、サンプリングクラーベを接続します。1/8インチのオスルアーをTコネクタの残りの水平面に接続します。
      3. 12インチの1/8インチチューブをカットし、近位端をサンプリングクレーブに取り付け、1/8インチのオス型ルアーを遠位端に取り付けます。これを別のメスTコネクタに接続します。メスTコネクタの片側に、1/4インチのオスルアーを取り付け、2インチの1/4インチチューブを使用して流入チャネルに接続します。
   3. 5/16インチチューブの遠位端に戻り、別の5/16インチYコネクタを取り付けます。~55インチの1/4インチチューブを入手し、5/16インチYコネクタの上端に取り付けます。
   4. 血液透析血液回路の作成:1/4インチチューブの遠位端に1/4インチのオス型ルアーを取り付けます。チューブを大型ローラーポンプに通します。血液透析フィルター(青い裏地付きチューブ)の上部にある血液流入に接続します。
      1. 1/4インチチューブの24インチチューブを1つカットし、オスの1/4インチルアーを近位面に接続します。このチューブを血液流出血液透析フィルター(赤線付きチューブ)に接続します。遠位面を貯水池の流入バーブに接続します。
   5. 戻って、検体につながる静脈流入回路を完成させます。36インチの1/4インチチューブを1本カットし、5/16インチYコネクタのバーブに収まるように伸ばします。
   6. 薬物注入部位:3つの4方向ストップコックを取得し、直線的に接続します。このピースをメスTコネクタの垂直アームに接続します。メスTコネクタのインラインアームに、2つのオス1/4インチルアーを取り付けます。チューブの左側から12インチピースを挿入します。
   7. 外部フローセンサーを薬物注入部位の後の1/4インチチューブに取り付けます。1 9インチマウントを入手し、ドラムファンネルの高さに固定します。フローセンサーの端に2インチの遠位にカットを入れ、バーブ付きの圧力センサーを1/4インチのチューブに挿入します。チューブの遠位面をドラムファンネルの中央に配置します。1 つの 1/4 インチのオス ルアーを、標本への静脈カニューレ挿入用に予約します。
7. 動脈回路創成
   1. 5/16インチのチューブを別の~30インチカットし、動脈酸素供給器の右流出バーブの近位端を取り付けます。このチューブを約半分まで切断し、1 5/16インチYコネクタを1つ取り付けます。
   2. サイドサンプリング回路:手順1.6.2で説明したように、重複するサイドサンプリング回路を作成し、キュベットを省略してYコネクタの下位面に取り付けます。完了したら、アウトフロー1/8インチルアーをTコネクタに取り付けます。
   3. 1/4 "チューブの36"チューブを1つカットし、5/16 "Yコネクタのバーブに取り付けます。
   4. 手順1.6.7を繰り返します。1 つの 1/4 インチ オス ルアーを、標本への動脈カニューレ挿入用に予約します。
8. 静脈流出の創出
   1. 1/4インチのチューブを~30インチカットし、1本のオスの1/4インチルアーを近位端に取り付けて、標本の下大静脈(IVC)の流出に取り付けます。遠位端をリザーバーの流入バーブの1つに取り付けます。
   2. このチューブをリザーバーから~6インチ切り取り、両端に2 1/4インチのオスルアーを取り付けます。サンプリングのために、垂直面にクラーブが取り付けられたメスTを挿入します。
9. ステップ4で説明したように、回路に灌流液を導入します。ステップ6.1.4で説明されているように、標本を再温めて接続します。またはステップ 6.2.4.そして灌流を開始します。

2. CDIセンサーのキャリブレーション

1. キャリブレーターのガスボンベがいっぱいで、ユーザー操作マニュアルに従って取り付けられていること、およびモニターがキャリブレーションモードに設定されていることを確認してください。製造元の指示に従って校正します。
2. キャリブレーションが完了したら、センサーケーブルヘッド装置をモニターから外し、すぐにそれぞれの静脈側回路と動脈側回路に統合します。ルアー接続は、手順 1.6.2 と 1.7.2 で作成します。

3. コードの開始

1. GitHub リポジトリにある Python コードをダウンロードしてインストールし、開きます。PythonおよびPyCharmソフトウェアが適切にインストールされていることを確認してください。
2. 正確なデータ記録のために、灌流実行ごとに一意のブランチを作成します。開始すると、GUI が 2 つのウィンドウとともに表示されます。ディスプレイごとに1つのウィンドウを配置できるため、ハードウェアの制御と灌流パラメータの表示が容易になります。
3. 灌流パラメータを手動で調整するか、GUIに表示されるそれぞれのボタンを使用して灌流を自動化します(補足図1)。

4. 灌流液の作成とシステムのプライミング

1. 臓器灌流の約2時間前に回路をプライミングして、代謝/電解質の異常の修正、正常発熱への温化、抗凝固、抗生物質、およびその他の医薬品の投与を可能にします。.
2. 豚灌流
   1. 2 LのOO型全ブタ血を採取し、開いた50〜100 mLのシリンジで排出してリザーバーに導入します。全血を約1mL採取し、ポイントオブケアマシンでベースラインのpH、電解質、ヘマトクリットを測定します。
   2. 必要に応じて8.4%重炭酸ナトリウムのアリコートを投与し、冷血防腐剤による酸性度を打ち消します。.必要に応じて高カリウム血症と乳酸血症を正常化するために血液透析を開始し、所望のヘマトクリット濃度まで滴定します。.ガス流量を調整して、生理学的なpO2およびpCO2レベルまで滴定します。
   3. 以下に説明するように医薬品を投与します(セクション5)。
   4. 必要に応じて、1-2 L 型 OO 全血を断続的なボーラスとして保存し、灌流実験全体でヘマトクリット値を ~30-40% に維持します。
3. ヒト灌流
   1. 血液バンクからタイプが一致した血液製剤を入手します(有効期限が近づいているか、研究目的で提供されています)。
      注:各灌流実験には、パック赤血球(RBC)と血漿がそれぞれ約4ユニット必要です。
   2. プライミング前に、pRBCを洗浄して防腐剤を除去し、RBCペレットの電解質の異常を正常化します。RBCを2回洗います。
      1. RBC洗浄:pRBCと0.9%NaClを1:1の比率で遠心チューブに入れます。1300 × g で15分間遠心分離します。ピペットで上清を取り除き、RBCペレットに対して1:1の比率で新鮮な0.9%NaClをReadministerします。上記のように再度遠心分離し、最終的に洗浄したRBCペレットの2番目の上清を取り除きます。
   3. 洗浄したRBCペレットを、オープンな50〜100mLシリンジを使用してリザーバーに導入します。4ユニットのプラズマをリザーバーに入れ、循環を開始します。
   4. 透析を開始し、毛布を温め、灌流液が循環したらガスの流入を開始します。
   5. 灌流をサンプリングし、必要に応じて薬理学的介入を適用して、臓器灌流前に可能な限り生理学的な灌流レベルに近づけます。
   6. ヘマトクリットレベルを30〜40%に維持するために、必要に応じて血液透析を通じて追加の洗浄pRBCペレットを洗浄して導入し、容量状態を滴定します。

5. 薬理学的介入と輸液準備

1. 抗生物質および抗真菌剤の投与
   1. 2.5 gのピペラシリン/タゾバクタムのバイアル2つを滅菌検体カップに入れ、40 mLの滅菌生理食塩水と組み合わせます。.「抗生物質プライム」としてリザーバーに10mLを加えます。
      1. 残りの混合物を60 mLの滅菌生理食塩水で希釈し、2つの50 mLシリンジに分けます。.1 台のシリンジをシリンジポンプに接続し、門脈薬物注入部位に 41 μL/min を連続的に送達するようにプログラムします (ステップ 1.6.6)。
      2. 残りの抗生物質は4°Cの冷蔵庫で保存してください。
   2. アムホテリシンの50 mgバイアル1つを10 mLの滅菌水で再構成します。.
      1. 1 mLの濃縮アンホテリシンを汲み上げ、9 mLの滅菌生理食塩水と組み合わせます。10 mLの混合物をリザーバーに投与して、灌流開始時の「抗真菌プライム」として機能します。.
      2. 12時間ごとに1mLの濃縮アンホテリシンをリザーバーに投与します。.
2. 抗 凝固
   1. 1 mL(100 mg)のエノキサパリンと49 mLの滅菌生理食塩水を組み合わせます。.灌流の開始時に灌流液1リットルあたり5mLの混合物を投与し、「抗凝固プライム」を行います。
      1. 残りのエノキサパリン溶液は4°Cの冷蔵庫で保存します。
      2. エノキサパリン溶液(5 mL / 1 Lの灌流液)を12時間ごとにリザーバーに投与します。.
3. ステロイド
   1. 1gのメチルプレドニゾロンを20mLの滅菌水で再構成します。.
   2. 灌流開始前に、投与仕様に従ってシステムをプライミングします:ブタの肝臓は10 mL(500 mg)のメチルプレドニゾロンを受け取ります。.部分的な人間の肝臓は、2 mL(100 mg)のソルメドロールを受け取ります。.
   3. 残りの混合物を50 mLシリンジで40 mLの生理食塩水で希釈し、シリンジポンプに入れて、33 μL / minを門脈薬物注入部位に連続的に送達します(ステップ1.6.6)。
4. 非経口栄養と胆汁酸塩
   1. 1.7 g のタウロコール酸を 50 mL の 10% アミノ酸 + 電解質濃縮 TPN の非経口栄養成分 (デキストロースと混合されていない) と共に滅菌検体カップに再構成します。50 mLシリンジに引き込み、シリンジポンプに入れて、83 μL/minを門脈薬物注入部位に連続的に送達します(ステップ1.6.6)。
5. 血管緊張制御
   1. 血管拡張:0.5 mgのエポプロステノールを滅菌カップに50 mLの滅菌生理食塩水で再構成し、50 mLシリンジに入れます。.シリンジポンプに入れ、肝動脈流量センサーの近位にあるクレーブに接続します。
      1. ボーラスまたは必要に応じて(10μL / min)連続的に注入して、目的の平均動脈圧を達成し、および/または血管痙攣を打ち消します。
   2. 血管収縮:5 mL(50 mg)のフェニレフリンを滅菌カップで45 mLの滅菌生理食塩水で希釈し、50 mLシリンジに入れます。.混合物を4°C冷蔵庫に保管し、必要に応じてボーラスにして、希望の平均動脈圧を維持します。
      注:これが必要になることはめったになく、再構成は省略され、必要な場合にのみ実装できます。
6. 圧力および流量センサーのキャリブレーション
   1. 圧力校正:灌流液が流れないように圧力センサーを校正します。チューブの端が0mmHgの圧力で空気に開放されているときに、製造元の指示に従ってゼロ以外の圧力測定値が表示された場合は、センサーを再ゼロにします。チューブの近位端と遠位端の両方を穏やかに塞ぎ、圧力を上昇させることにより、適切な圧力測定を確保します。
   2. 流量校正:臓器灌流の前に回路が灌流液を循環させたら、正確な測定を確実にするために校正します。フローセンサーの遠位にチューブをクランプして、流れを遮断します。メーカーの指示に従ってゼロ以外の流量が表示された場合は、流量センサーを再ゼロにします。チューブのクランプを解除して、流量と正確な流量測定を可能にします。

6. 肝臓の調達

1. 豚の調達
   注:豚の肝臓は、USDAの家畜の人道的な取り扱いプロトコルに準拠して、地元の肉屋から調達されています。解剖は、研究チームによって指導され、下部および上肝大静脈と胆管が含まれます。
   1. 滅菌生理食塩水で希釈したヨウ素で肝臓を滅菌し、氷上の滅菌洗面器に入れます。門脈、肝動脈、上大静脈、総胆管を特定し、カニューレを挿入して4-0シルクタイで固定します。
      注:胆管は、その直径が小さいため、また変異型ブタ胆汁系の胆道閉塞を防ぐために、穴あき血管カテーテルでカニューレ挿入されることがよくあります。
   2. カニューレを装着した門脈と肝動脈を3Lの冷滅菌生理食塩水(2 L PV:1 L HA)で洗い流し、続いて1 Lの冷臓器保存液(750 mL PV:250 mL HA)を洗い流します。肝臓を氷を入れた冷たい臓器保存液に浸して輸送します。
   3. 生理学的パラメータが満たされるまで、上記のようにシステムを準備します(ステップ4.1)。
   4. カニューレを接種した肝臓を温めた滅菌生理食塩水に浸して、空気の塞栓を迅速に再温めて除去します。適切な流入チューブを門脈と肝動脈カニューレに接続します。生理学的な流量と圧力の値に対するポンプ速度を滴定します。
   5. 大静脈カニューレをアウトフローチューブに接続して、リザーバーへのアウトフローを促進し、回路を完成させます。
   6. シリンジチューブを胆管カニューレと円錐形のバイアルに接続して収集する前に、胆嚢から残留胆汁を排出します。.
2. 人的調達
   1. 上記のようにシステムをプライミングします(ステップ4.1)。
   2. 示された標準治療の腫瘍学的切除後にヒトの標本を入手します。術中超音波法で in vivo 流量を測定し、 ex vivo システムでのキャリブレーションを行います。外科的解剖中に、門脈、肝動脈、胆管を同定します。標準的な外科技術に従ってトライアドを横断し、手術野の標本を滅菌バックテーブルに渡します。
   3. 分節門脈、肝動脈、肝静脈、胆管を特定し、カニューレ挿入し、4-0シルクタイまたはプロレン縫合糸で固定します。
      注:うっ血性肝障害を避けるために、セグメントに優勢な流出静脈がない場合は、流出カニューレ挿入を省略します。その後、洗面器の流出は、肝静脈/IVCの流出チューブとして機能します。
   4. ex vivoラボに戻り、検体を計量します。検体を温めた滅菌生理食塩水に浸し、それぞれの流入/流出チューブを接続します。胆管カニューレをシリンジチューブに接続して、円錐形のバイアルにドレナージします。
   5. 灌流を開始し、目的の流量と圧力灌流パラメータに対してポンプの流れを滴定します。

7. 灌流パラメータ滴定

1. ポイントオブケアの血液ガス、電解質、ヘマトクリット値、ヘモグロビン値に基づく灌流パラメータの滴定のために、多数の時点での肝臓前(HAおよびPV側回路)および肝臓後(IVCまたは流域流出)クレーブからの灌流液をサンプリングします。
2. 手動の試料分析を使用して、灌流中のCDIセンサーを校正します。
3. 血液透析の流入と流出を適宜調整し、ボリューム状態とヘマトクリット濃度を30〜40%に維持し、代謝と電解質の乱れを修正します。
4. 電解質の異常を修正するために、必要に応じて5%デキストロース、遊離水、8.4%重炭酸ナトリウム、および0.9%NaClのアリコートを手動で投与します。.

8.灌流回路のバリエーション

1. 交通適応
   1. 運転中はポンプを移動式電源に差し込むと、イメージングマシンまでの連続的な灌流が容易になります。モバイル電源をACコンセントに差し込んで、灌流中に外部バッテリーを充電します。
   2. 灌流実験が終了したら、壁のACコンセントからモバイル電源を抜きます。
   3. 酸素供給器へのガス流入を遮断します。血液透析側回路をクランプオフし、血液流入をフィルターに切断します。透析液ポンプを停止します。
   4. 流入チューブからフローセンサーを取り外します。薬物の注入を切断し、ストップコックをオフにします。圧力センサーを入力/出力プラグから抜きます。
   5. ドラムファンネルとチューブを慎重に移動させると、モバイルカートは独立したユニットとなり、イメージングスイートに輸送することができます。

結果

代表的な豚の遡上
豚の肝臓全体は、コスト効率のために地元の肉屋から入手し、機械開発のさまざまな最適化およびテスト段階に灌流しました(補足表1)。ここでは、代表的な肝臓の3回のランのうち最初の24時間を評価します(図2)。平均肝動脈圧は80 mmHg±11 mmHg、平均門脈圧は7.1 mmHg±3.3 mmHgで、それぞれ107 mL/分±102 mL/分、501 mL/分±329 mL/分の流れでした。圧力と流量の大きな標準偏差は、肝臓のサイズの大きな差と相関しており、豚の体重は50ポンドから350ポンドの範囲です。デュアルインフロー回路により、平均動脈飽和度(SO₂)が95 ± 7.4%であるのに対し、平均門脈SO₂ は85 ± 13%(p < 0.001)の生理学的酸素差が可能になります。肝静脈からの_SO2 流出は74±18%で、酸素消費量(p < 0.01)を示しており、末梢pH測定値は7.2±0.09で生理学的範囲内でした。総ヘモグロビン(9 ± 2.5 g/dL)、ヘマトクリット値(28.3 ± 6.4%)、血糖値(477 ± 15 mg/dL)、乳酸(3.0 ± 2.5 mmol)およびカリウム(-0.77 ± 2.3 mmol)の変化などの追加の生理学的パラメータを、定期的にサンプリングすることにより、灌流全体を通してモニターしました。ブタ灌流の場合、胆汁産生は臓器の生存率を示していました。臓器が常温性になったら、胆嚢を手動で排出し、総胆管を小さなチューブに取り付けて収集しました。灌流中の総胆汁産生は、合計6.9mL±4.0mL/hの割合で41±6.9mLでした。

図2:ブタ肝灌流中の灌流液の指標(n = 3)。 (A)肝臓動脈と門脈の経時的な平均血液流入量(mL / min)。(B)肝臓動脈と門脈の平均血流圧(mmHg)の経時変化。(C)肝動脈、門脈、および下大静脈の間のRBC O₂ 飽和度の比較は、二重流入と流出中の酸素消費との間の酸素差を示しています。門脈と動脈の飽和度(p < 0.0001)、門脈とIVCの飽和度(p < 0.01)、動脈とIVCの飽和度(p < 0.0001)との間には、統計的に有意な差が認められました。(D)肝動脈、門脈、下大静脈の間の血液pHの評価。(E)灌流中のヘマトクリット値(%)とヘモグロビン(g/dL)のレベル(上)、さらに溶血のマーカーとしてのPVカリウム(mmol)(下)の変化。(F)灌流全体の平均回路グルコース(mg / dL)を反映したリザーバーグルコースレベル。(G)肝動脈の流入、IVCの流出、およびシステム灌流における時間0の乳酸値と比較した、灌流中の乳酸レベル(mg / dL)の変化。(H)灌流中の経時的な胆汁産生(mL)。 この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。

代表的なヒューマンラン
3つの腫瘍担在ヒト肝セグメントを灌流し、灌流持続時間は実験の要件に応じて48〜72時間の範囲でした(図3)。代表的なアプリケーションの実行間のデータを比較するために、生化学的値の最初の 48 時間を評価しました。連続的な低圧、大量の門脈流入および拍動性高圧、少量の動脈流入により、滴定を容易にするためにリアルタイムで表示されるin vivo パラメータに近似した灌流。肝臓が灌流から2時間以内に生理学的な生化学的値に達しなかった場合、実験は終了しました。肝灌流が成功した場合、平均肝動脈圧は 84 mmHg ± 11 mmHg で、平均門脈圧は 9 mmHg ± 4 mmHg で、それぞれ 113 mL/分 ± 66 mL/分、317 mL/分 ± 302 mL/分の流れでした。デュアルインフロー回路により、平均動脈飽和度(SO₂)が98%±3%であるのに対し、平均門脈_SO2 は92%±7%(p < 0.0001)の生理学的酸素差が可能になります。肝静脈からの流出の_SO2 は86±9%であり、酸素消費量(p < 0.0001)を示しており、システム全体のpH測定値は7.3±0.09の生理学的範囲内でした。総ヘモグロビン(10.2 g/dL± 1.6 g/dL)、ヘマトクリット値(30.2% ± 5.5%)、血糖値(170 mg/dL ± 68 mg/dL)、乳酸の変化(3.6 mmol/L ± 2.2 mmol/L)などの追加の生理学的パラメータを、定期的にサンプリングすることにより、灌流全体を通してモニターしました。代表的な分析では、平均 1.4 mL/h の胆汁が生成されました。灌流実験の前および終了時に、組織分析のために生検が行われました。代表的な組織切片は、灌流後の肝実質、転移性神経内分泌腫瘍、および転移性結腸直腸腺癌を示しています。

図3:ヒト肝臓セグメント灌流中の灌流液および組織メトリクス(n = 3)(A)肝動脈および門脈の平均灌流流量(mL/分)。(B)肝動脈と門脈の平均灌流圧力(mmHg)の経時的。(C)流入性肝動脈、流入門脈、および流出性肝静脈の赤血球酸素飽和度(%)。門脈と動脈の飽和度(p < 0.0001)、門脈とIVCの飽和度(p < 0.0001)、動脈とIVCの飽和度(p < 0.0001)との間には、統計学的に有意な差が認められました。(D)流入肝動脈、流入門脈、および流出肝静脈の灌流液pH。(E)平均ヘマトクリット値(%)およびヘモグロビン(g / dL)灌流レベル(上)とベースラインからの灌流カリウム(mmol)の経時変化(下)を含む、灌流中の赤血球指標。(F)流入性肝動脈、流入門脈、および流出性肝静脈の平均グルコース濃度(mg / dL)の経時変化。(G)流入肝動脈、流出肝静脈、および全身性灌流液のベースラインからの乳酸濃度(mg / dL)の経時変化。.(H)経時的な胆汁産生(mL)。(I)システム最適化後の圧力壊死の欠如を示す、灌流中(左)および灌流後(右)のヒト肝臓セグメント(Couinaud II-IV)。左の画像の上部に見られる焼灼の表在領域は、術中の止血によるものです。(J)肝実質を示す灌流後の組織切片(ヘマトキシリンおよびエオシン染色、10倍、挿入40倍、スケールバー50μM)。(K)転移性神経内分泌腫瘍を示す灌流後の組織切片(ヘマトキシリンおよびエオシン染色、10倍、挿入40倍、スケールバー250μM)。(L)転移性結腸直腸腺癌を示す灌流後組織切片(ヘマトキシリンおよびエオシン染色、10倍、挿入40倍、スケールバー50μM)。この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。

代表的な用途:灌流標本のCTイメージング
コンピューター断層撮影(CT)や磁気共鳴(MR)イメージングなどの臨床データソースを病理学と統合する能力は、個別化された診断と医療を前進させるものです。しかし、病理報告は要約所見であり、固形腫瘍に固有の不均一性は、人間の描写能力をはるかに超えています。考えられる解決策は、 ex vivo でイメージングを行い、その後、空間的に保存された細胞データ(空間トランスクリプトミクス、高度に多重な免疫蛍光など)のラジオミクス統合を可能にするために、マクロスケールの組織切片を直ちに調製することです。システム上での従来のイメージングに対応するために、ポンプを外部バッテリ電源に移行して、輸送中やイメージング中に中断のない電力を供給するなど、モバイルセットアップが構築されました(図4A)。肝臓をCT台に載せた状態で、ヨウ素化造影剤を投与し、画像を取得しました。これは、 in vivo で取得したものと一貫したX線写真の特徴を示しています(図4B)。

代表的な用途:腎臓および膵臓灌流
その設計に先天的に、システムは追加の臓器の灌流に適応可能であり(図4C-F)、これにより二重流入の必要性がなくなり、それにより使用あたりのコストが削減されます。実証するために、単一の動脈流入の門脈回路を切除し(補足図2)、ヒトの腎臓(図4C)とヒトの部分膵臓(図4E)を灌流しました。灌流後の代表的な組織切片は、糸球体(図4D)とランゲルハンス島(図4F)を示しています。

図4:灌流装置の代表的な用途:CTイメージングと臓器のモジュール性(A)輸送のためのシステムのモバイル適応。(B)ヨウ素化造影剤in vivo投与後の腫瘍を有する肝臓の代表的なCT画像(上)および灌流後のex vivo(下)。(C)単一の流入用に再構成されたマシン上のヒト腎臓灌流。(D)灌流後の組織切片は、腎糸球体と収集管を示しています(ヘマトキシリンとエオシン染色、8倍、スケールバー250μm)。(E) 再構成されたマシンでのヒト遠位膵臓灌流 シングルインフロー用。(F)灌流後の組織切片は、膵島を示しています(ヘマトキシリンおよびエオシン染色、8倍、スケールバー250μm)。この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。

補足図1:半自動灌流を容易にするPythonコード設定。 コードで使用される入力パラメータと出力パラメータを示した回路図で、一般的に使用される手動調整を追加して半自動化を可能にします(表)。 このファイルをダウンロードするには、ここをクリックしてください。

補足図2:腎臓と膵臓の灌流に使用されるシングルインフローの概略図。 P/Fセンサー:圧力センサーと流量センサー。 このファイルをダウンロードするには、ここをクリックしてください。

補足図3:赤血球の最適化。 (A)血液のみの灌流実験では、血漿を含まないヘモグロビンを細胞溶解の代用として使用した高RPM条件(p < 0.01)と比較して、低RPM条件での溶血が有意に少ないことが示されました。(B)経時的な血漿溶血の定性的比較は、高RPM状態と比較して、低RPM状態での溶血が少ないことを視覚的に示します。(C-F)抵抗性のレベルと血漿代替物との流域統合が異なるシステムでの溶血の評価:(C)並列回路のセットアップと閉じた槽のセットアップの両方との間に乳酸レベルの有意差が決定されました(それぞれp<0.0001およびp<0.0001)。(D)並列回路のセットアップと、クローズドシリーズとベイスンセットアップのシリーズの両方との間には、カリウムレベルの有意差が認められました(それぞれp<0.0001およびp<0.0001)。(E)並列回路のセットアップと、直列閉じたシリーズとベイスンのセットアップのあるシリーズの両方との間には、ヘマトクリットレベルの有意差が決定されました(それぞれp<0.0001およびp<0.0001)。(F)並列回路セットアップと直列クローズドおよび直列洗面器セットアップとの間には、ヘモグロビンレベルの有意差が認められました(それぞれp<0.0001およびp<0.0001)。このファイルをダウンロードするには、ここをクリックしてください。

補足表1:ブタ臓器最適化灌流。 最適化フェーズで実施されたブタ灌流実験は、25の部分肝臓、2つの腎臓、8つの全肝臓を含む。灌流の期間と終了の理由が含まれています。 このファイルをダウンロードするには、ここをクリックしてください。

補足表2:ヒト肝臓の検証と適用灌流。 14 のヒト部分肝灌流 (正式な左右肝切除術から単一セグメントの灌流実験まで)。これには、病理学、実験目的、灌流期間、および終了の理論的根拠が含まれます。 このファイルをダウンロードするには、ここをクリックしてください。

補足表3:灌流液のみの最適化。 種の種類、実験の目的、実験の期間、終了の理由など、22回の灌流液のみの最適化実行。 このファイルをダウンロードするには、ここをクリックしてください。

ディスカッション

固形臓器移植の前に一般的に採用されていたノーマジック灌流装置は、生体外灌流の大幅な進歩を可能にしました。部分臓器での使用は、場合によっては^技術的に実現可能ですが^、コスト^{が高く、入手可能}性が限られているため、研究者はアクセスできません。この研究では、容易に入手できるコンポーネントと自由にアクセス可能なコードを使用して、幅広い研究エンドポイントに対してシステムを実行することにより、より大きな研究コミュニティに匹敵するオープンソースの代替手段を提供することを目指しました。

プロトコル内のいくつかのステップは、安定した臓器灌流を達成するために不可欠です。最も重要なステップの1つは、実質の崩壊と正弦波の拡張を防ぐための効果的な圧力オフロードです。これは、振動する横隔膜で支えられたメモリーフォームを実装して、臓器の重量を均等に分散し、適切なドレナージのために大気圧に近い門脈圧を維持することによって達成されました。肝臓を支えるために金属格子を最初に使用したところ、灌流中の組織学的分析や超音波画像診断で観察されたように、実質の虚脱と正弦波のうっ血が生じました。これは、穴あきシリコンハンモックに移行することで部分的に解決しました。肉眼的圧力壊死は解決されましたが、48時間の灌流後に高い門脈圧と標本が著しく混雑したことからも明らかなように、実質崩壊の顕著な証拠がまだありました。肝臓を生理食塩水または血液に浸すことも試みられ、うっ血と門脈圧亢進症の緩和に成功しました。しかし、大量の灌流液が必要であり、無菌性を維持することが困難であり、リザーバーへの効率的な排水ができないため、実現可能ではありませんでした。フローティング技術と比較すると、振動する横隔膜を備えたメモリーフォームクッションに肝臓を置いて体重をより均等に分散させたとき、同じ大気に近い門脈圧が観察されました(図1B および 図3I)。この設計により、より柔らかく、より灌流されたセグメントが得られ、検体からの血液流出を簡単かつ効率的に排出することができます。

2つ目の重要なステップは、溶血を防ぐために赤血球にせん断応力を与える回路抵抗を最小限に抑えることです。これは、灌流液に不必要な圧力をかけることなく生理学的流れを促進するために、制限部品を備えたサイド回路を導入することによって達成されました。溶血は、機械灌流中の避けられない継続的なプロセスです。システムの初期の反復では、広範な溶血が早期終了に大きく貢献していました。システムが赤血球に与えるせん断応力は、主にポンプに起因し、灌流液の停滞と再循環、およびチューブとメンブレンの直径が狭くなります。現在使用されているポンプは、ある程度の溶血を引き起こし、それは時間の経過とともに増加します。ポンプ効率は溶血の重要な要素であり、血液のリサイクルと二次の流れの速度が低いため、流量が多いと有益であり、灌流液の量が増えたり、ポンプ速度が遅くなったりすることで緩和されます。大量のpRBCを取得することはしばしば困難であるため、私たちは、より低いポンプ速度で生理学的流量を提供するようにシステムを再設計することに力を注ぎ、回路全体に低い抵抗を与える³¹。回路の固有の抵抗をさらに低減するために、サイド回路を並列に統合した結果、時間の経過とともに乳酸とカリウムのレベルが低下し、ヘマトクリットとヘモグロビンのレベルが上昇しました(補足図3)。最後に、電流ヘモフィルターは門脈側回路に統合され、血液は蠕動ポンプによって推進され、フィルターとそのポンプの両方によって与えられる顕著な抵抗とせん断応力により、かなりの量の溶血をもたらします。現在の最適化の取り組みの1つは、血液透析チューブのリザーバーへの実装の可能性を調査することにより、この側回路を取り外すことに焦点を当てています。臨床グレードの血液フィルターを取り外すと、その後の蠕動ポンプの取り外しが可能になり、溶血がさらに最小限に抑えられ、システムの全体的なコストが削減されます。

ここで説明するシステムの有用性と適応性にもかかわらず、制限を認識する必要があります。特に、生存可能な灌流の持続時間は3〜4日間再現可能です。溶血は、上述したように、灌流寿命を制限する中心的な要因であることに変わりはありません。しかし、灌流液の総量を大幅に増やすと、より長い灌流時間が必要な場合に灌流時間を大幅に延長できることがわかりましたが、これにより、ここで説明する以上にリソースの利用が増加します。最適な灌流時間は、最終的には、システムに対して問われる特定の実験問題に依存します。例えば、薬物送達速度論または経路阻害を調査する研究は、2〜12時間にわたって効果的に実施され得るが、一方、腫瘍微小環境への細胞動員を含む問題は、48時間³²を必要とするかもしれない。現在の期間を超えて生存率を延長することは、細胞外マトリックスのリモデリング(すなわち、線維化)などのアプリケーションにとって重要かもしれませんが、ほとんどのがん関連のアプリケーションは、追加のリソース支出を必要としないと考えています。主な焦点は腫瘍学指向のトランスレーショナルアプリケーションであり、制御されたex vivo環境でヒト腫瘍を維持することを目指しており、無傷の実質と腫瘍血管系を通じて治療を行うことができ、in vivoシナリオの複雑さをより忠実に再現する条件である²⁵。このシナリオでは、システムは、薬物送達、腫瘍の不均一性、および薬物代謝に関連する現在の前臨床腫瘍学モデルにおける長年の問題に対処しており、前臨床の成功を臨床効果に変換することが頻繁に失敗する理由を説明している可能性があります^33,34。

既存の商用マシンと比較して、このシステムは大幅なコスト上の利点、モジュール式のスケーラビリティ、および実験の柔軟性を提供します。市販のデバイスは、多くの場合、独自のもので高価で、移植環境での全臓器灌流に最適化されています。このシステムは、商用マシンにはない方法でスケーラブルであるため、その適用性を広く想定できます。ここで紹介するシステムは最終製品ではなく、さまざまな研究関心や実験的な問題に合わせて変更、適応、再利用できる青写真であり、多くの分野の科学者の空白を埋めることができます。

このプラットフォームの将来の方向性には、サブセグメントの肝臓セグメントへのスケールダウンと灌流液の量が含まれ、免疫腫瘍学アプリケーションをサポートするための自家血液製剤の使用を可能にします。また、マルチオミクスプラットフォームとリアルタイムイメージングを統合して、治療反応のダイナミックなモニタリングを提供し、詳細な薬理学的研究への道を開くことにも取り組んでいます。このシステムが、トランスレーショナルサイエンスの複数の分野にわたる新たな知識の深さを築くためのコラボレーションとイノベーションを促進することを願っています。

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
1/4インチ内径×外径3/8インチ×1/16インチウォールVersilon C-219-A フレキシブル PVC チューブ	USプラスチックコーポレーション	57682
10 ccシリンジ、BDルアーロックチップ付き	BDの	302995
BDルアーロックチップ付き1ccシリンジ	BDの	309628
25 Fr ポータルカニューレ	XVIVOの	11.01.520
3Dプリントフローセンサーホルダー	該当なし	該当なし	SDL ファイルについては GitHub を参照してください。
3Dプリントマグネットホルダー	該当なし	該当なし	SDL ファイルについては GitHub を参照してください。
48インチ高さ x 24 インチW ホワイトペグボード	ホームデポ	109099
4ウェイ活栓、黄色、2メスルアーロック、スピンロック付きオスルアー	世界の精密機器	14057-10
50 ccシリンジ、BDルアーロックチップ付き	BDの	309653
ACF00023 タイゴン S3 by サンゴバン |5/16インチ内径x 1/2インチ外径x 3/32インチ壁|E-3603 非 DEHP |フタル酸エステルフリーのラボ用チューブ |50フィートパッケージの長さ	ホース倉庫	ACF00023
アムホテリシン	動物薬局	該当なし	https://mms.mckesson.com/product/505635/Xgen-Pharmaceuticals-39822105505
バーブフィッティング、Yコネクタ、3/8インチチューブID、PP、5/PK	VWRの	MFLX06368-24	材料タイプは重要ではない
CDI 540校正器	テルモ	540CLの
CDIケーブルヘッドブラケット	テルモ	CDI519CL
CDIモニター	テルモ	500AVHCTCL
CDIポールクランプ	テルモ	CDI517CL
Clave IV チューブコネクタニードルレス 100/Ca	ヘンリー・シャイン・デンタル	1097422
電解質を含むクリニミックス	バクスター	2B7721	アミノ酸側のみを使用し、ブドウ糖側と混合しないでください
CO2 USP グレード 50 LB	ロバートの酸素	R25
GUI  用のコンピューター モニター;	該当なし	該当なし	GUIを表示するためのあらゆるタイプの画面
データ収集装置	計測コンピューティング	USB-202	機械の接続方法に応じて、2つまたは3つ必要
ポンプ用デスクトップ電源	レビトロニクス	100-40015	2 つが必要、1 つは HA 用、1 つは PV 用です
Eagle 1662 ドラムファンネル、真鍮スクリーン付き、直径 18 インチ x 高さ 7 インチ、イエロー	グローバル産業	WB440139
エポプロステノール	動物薬局	該当なし	https://mms.mckesson.com/product/1239813/Sun-Pharmaceuticals-62756005940
メスルアー¼「天然ナイロンクリーンルームで製造されたバーブ。10パック	VWRの	MFLX40314-26	材料タイプは重要ではない
フィッティング、ポリプロピレン、ストレート、メスルアー-ホースバーブアダプター、1/8インチ内径。25/PK	VWRの	MFLX30800-08	材料タイプは重要ではない
フィッティング、ポリプロピレン、ストレート、オスルアーロック-ホースバーブアダプター、1/8インチ内径。25/PK	VWRの	MFLX30800-18	材料タイプは重要ではない
フィッティング、PVDF、ストレート、ホースバーブレデューサー、5/16インチ ID x ¼" ID;10/PK	VWRの	MFLX40614-62	材料タイプは重要ではない
フローマウント	該当なし	該当なし	SDL ファイルについては GitHub を参照してください。
流量センサークランプ	キーエンス	FD-XC20R1
フローセンサーコントローラー	キーエンス	FD-XA1
流量センサーヘッド	キーエンス	FD-XS20
流量センサー電源	キーエンス	MS2-H50
ガスブレンダー	MCQの	GB100+2	2 つが必要、1 つは HA 用、1 つは PV 用です
ガスボトルA、CDI 500	テルモ	CDI506
ガスボトルB、CDI 500	テルモ	CDI507
グルカゴンキット、グルカゴン1mg、滅菌水1mL、バイアル	フレゼニウス	0593-03
H / Sキュベット1 / 4x1 / 4 W / 6 "EXT 1CA = 10EA 70-2006-4298-4	テルモ	6934
150 & micro のハードシェル リザーバー。Mフィルター	ヘモネティクス株式会社	00205-00
ヒートコールドパッド、Mul-T-Pad、TP12E パッドサイズ 13 インチ x 18 インチ Gaymar TP700 ポンプ用	マルチ T パッド	8002-062-012	https://www.amazon.com/Heat-Cold-Mul-T-Pad-Gaymar-TP700/dp/B00HFF7876。の ストライカーは、「Mul-T-Pad C2Dx 8002-062-012」と同様の加熱ウォータージャケットも提供していることに注意してください
インスリン	動物薬局		https://mms.mckesson.com/product/294668/Novo-Nordisk-Pharmaceutical-00169183311
イスマテック エコラインポンプ VC-280 II	イスマテック	ISM1078B-115
LTV 1200 小児用人工呼吸器	ケアフュージョン		https://coastbiomed.com/product/carefusion-ltv-1200-ventilator/?srsltid=AfmBOopSCKwTLmKhZXcI CgGQHfiKwj__78jNWxVaznJCS aq3RjXw2E-H. このモデルの小児用人工呼吸器は、病院の余剰から再利用されたものであり、購入されませんでした。市販の間欠ポンプまたは曝気機は適切な代替品です。
メインポンプケーブル	レビトロニクス	190-10331	2 つが必要、1 つは HA 用、1 つは PV 用です
MaPerSol 臓器保存液、1L袋	保存ソリューション	PS005
マスターフレックス アダプターフィッティング、ルアーからルアー、ティー、Avantor	VWRの	MFLX45508-56	材料タイプは重要ではない
マスターフレックス メスルアー 3/16 インチ ID バーブ、天然 PVDF クリーンルーム製造	VWRの	MFLX40314-22	材料タイプは重要ではない
Masterflex Ismatec Reglo デジタルポンプ、MasterflexLive、4チャンネル、8ローラー付き。115/230 VACの	マスターフレックス	MFLX78018-22	https://www.avantorsciences.com/us/en/product/NA5139147/masterflex-ismatec-reglo-digital-multichannel-pumps-avantor
Masterflex オスルアー 1/4 インチ ID バーブ、天然 PVDF クリーンルーム製造、10/PK	VWRの	MFLX40318-27	材料タイプは重要ではない
Masterflex オスルアー 3/16 インチ ID バーブ 天然 PVDF クリーンルーム製造	VWRの	MFLX40318-22	材料タイプは重要ではない
Medline プラセンタ ベイスン スタンダード トレイ	メドライン	DYNJSPLACENTA
メドトロニックDLP 2インチベッセルカニューレ、3MMベベルチップ	縫合糸	MDT30007
低反発	ベストプライスマットレス		https://www.amazon.com/Best-Price-Mattress-Twin-Topper/dp/B07999TQWB/ref=sr_1_2_sspa?crid=17LQXX80WX5FK&dib=eyJ2Ijo iMSJ9.oRyEE5KwmKy1pb-VvY9MOJg _MF3wr0PmXqKcOrSEbeJWS2X 5BkFs_WSfuE1OU8GS0u_T1qM IJbsoy3omRv1wfBCy2sw2fOUIX JMqAO6BSb7t_D3j745MoXjedLbo BYypyi6_Qgoc32N8bpVcmoT_k9b LECWdi_KpEmxQx2PEok1fjlK3ywO yBXwqPnXefMt5JeW5H1R7RO3fD g4tidmRoEJ-YxfU3d_iprpFpm7A3zi 7CG_BMUAaGpBcRitwqb9Q4TB5bM 1i-GcMhSFKbzaGNd76CoVVVkZRjib c9Ix-CvY.t7xCkzB81vNhO9gYLxoNen WHEwC6JJpw9T4G6iIa5N4&dib_tag =se&キーワード=メモリ%2Bfoam&qid =1748632609&プレフィックス=メモリ%2Bfoam %2Caps%2C133&SR=8-2-スポンス&sp_csd =d2lkZ2V0TmFtZT1zcF9hdGY&th=1
ネジ穴のないストレート付きネオジム磁石	マクマスター・カー	336K834
窒素、125 CU FTGrade 4.5 高純度	ロバートの酸素	R32
酸素、255 CU FTGrade 4.5 高純度	ロバートの酸素	R5
PDMSXA-2500:パームセレクト 2500センチメートル平方メートルのメンブレンモジュール-MCCなしのバーブフィッティング	パーマセレクト	PDMSXA-2500型	ルアーまたはとげのあるフィッティングはできますが、接続は変更されます
フェニレフリンHCI注射液、USP 10mg/mL 1mLバイアル	健康第一	1000520
ORS流体加温システム用ポリウレタン加温ドレープ、滅菌、44インチ x 66インチ	メドライン	ORS-300H
豚の血	ランピア	7204911
圧力センサーモニター	ペンドーテック	PMAT2HR
PRISMAFLEX M60セット	バクスター・ヘルスケア・コーポレーション	106696
PrismaSol BGK0/2.5 連続腎代替療法用置換液、非PVC	バクスター	110240秒
ポンプ取り付けベースプレート	レビトロニクス	190-10313	2 つが必要、1 つは HA 用、1 つは PV 用です
ポンプUSBアダプター	レビトロニクス	100-30391	2 つが必要、1 つは HA 用、1 つは PV 用です
PuraLevドライバーシステム	レビトロニクス	100-91025	2 つが必要、1 つは HA 用、1 つは PV 用です
PuraLev IPアダプターケーブル	レビトロニクス	190-10475	2 つが必要、1 つは HA 用、1 つは PV 用です
シャントセンサ SYS500 - CA = 20EA 98-0702-1541-7	テルモ	CDI510H	縫合糸から期限切れのものを購入できます - 同じように機能しますが、pHが少しドリフトすることがあります
シングルユース圧力センサー、非滅菌、ポリスルホン1/4インチホースバーブ	ペンドーテック	プレップス-N-025
シングルユース圧力センサ	ペンドーテック	プレップス-N-025	滅菌で再利用できますが、使用前にセンサーをテストします。
重炭酸ナトリウム 8.4% 溶液ラボグレード	ラボアレー	144-55-8
タウロコール酸ナトリウム水和物	ミリポアシグマ	86339-25G
ソルメドロール	動物薬局	該当なし	https://mms.mckesson.com/product/1212228/Dr-Reddys-Laboratories-43598013074
ストライカー加熱パッド	アマゾン	B01M74Y8DI
SUポンプヘッド、PP、バーブ3/8インチ、ガンマ線>25kGy、DCP-30.2-G25、PuraLev	レビトロニクス	100-91071	滅菌後に再利用可能
シリンジポンプ(ポンプ11エリート)	ハーバード大学装置	70-4504	注入された薬剤ごとに1つ必要
シリンジチューブ	GSSの	ME2020
給湯器とサーキュレーター	グラントサイエンティフィック	TC120
ゾシン	動物薬局	該当なし	https://mms.mckesson.com/product/1009456/Auromedics-Pharmaceuticals-55150011930