Name: 干渉反射イメージングセンサー（IRIS）を用いた生体分子の検出 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-05-03T15:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 4 s
Description: 学ぶ干渉反射イメージングセンサー（IRIS）を用いたラベルフリー生体分子検出法。シリコン二酸化膜上の抗体・抗原結合を高感度に定量化し、カスタムアルゴリズムでリアルタイム解析を実現する革新的な光学センシング技術です。

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1。基板の準備<ol><li>コート層状シリコンのSiO自己吸着コポリ（DMA - NAS - MAPS）2基板： <ol><li>共重合体の合成、化学構造、およびコーティングプロセスは、で公開されています：G. Pirri、F.達民、M.キアリ、E. Bontempi、LE Deperoを。 DNAマイクロアレイスライドガラス用高分子吸着コーティングの特性評価。アナル。化学。 2004年、76、1352から1358。 </li><li>簡単に言うと、脱イオン（DI）水5 mLにポリマーの100 mgを追加することにより、ポリマー溶液を調製し、0.92 Mの最終濃度に達するために40％飽和硫酸アンモニウム（（NH 4）2SO 4）溶液5mlを追加</li><li>シェーカーで30分間溶液中とその後水没のチップは、DI水ですすぐ。アルゴン/ N 2ガ ​​スで十分に乾燥させます。 </li><li> 80焼くチップ℃で15分間。 </li></ol></li><li>ストアポリマーで被覆したプローブのスポッティング手順まで、最大3ヶ月間乾燥した環境（真空デシケーター）における基板/チップ。 </li></ol> 2。プローブアレイの作製：抗体、抗原、SS /二本鎖DNA、RNAなど<ol><li>目的のバッファで適切な濃度にプローブ（複数可）を希釈する。このステップはかなり変動することができますが、典型的な実験はpH≈7.4で緩衝生理食塩水（PBS）、リン酸で0.5 mg / mLの濃度（0.1 -1 mg / mLの範囲）で抗原またはIgGを使用しています。 </li><li>または384ウェルプレート（または使用中のスポッターのための標準的なソースプレート） - 96の場所のソリューション</li><li>希望のプリントされた配列のパラメータをスポッティングセットアップ：（回、アプローチ速度、等の滞留）使用されている面とソリューションのために適切なスポッティングのパラメータを決定する。グリッド、グリッドレイアウト、複製グリッドの数、およびチップ上の任意のスポットの位置ごとにそれぞれの条件の複製の数を決定します。適切な場所に配置基板とソースのプレートは、廃棄物と供給ボトルの準備ができたら、と印刷の実行を開始する確認してください。 </li><li>スポッティングは、固定化および非アクティブ化プロセスの続行を許可する（4-18時間）、高湿度環境での場所の基質は一晩終了後。 </li><li>基板を洗浄してください：0.1％のTween（PBST）を含むPBS、PBS、そして最後に脱イオン（DI）水：3つの別々の洗浄のための3分間は、次のソリューションでそれらを置く。実験の種類に応じて（湿式対乾式）、アルゴンガスで十分にチップを乾燥し、インキュベーションを開始するか、フローチャンバー内にチップを置いて、組み立てる。 </li><li>シェーカーのプレート上にしながら30分間7.4に調整pHを持つエタノールアミンの50 mM溶液にチップを沈めることによって共重合体の表面上の残りのNHS基を無効にします。調製した溶液は、タンパク質で安全に使用できる限り、そのようなヒドロキシルアミンまたはTrisのような一級アミン含有化合物はまた、使用することができます。徹底的にPBS次にDI水を使用して非活性化のソリューションをすすぐ。 </li><li>オプションのステップ（採用されている表面の化学的性質に応じて）：BSA、カゼイン、の溶液または30分間再水和した牛乳を使用してブロックの表面。ポリマー骨格は、非特異的タンパク質の結合を防ぐために働くように私たちが使用する現在のポリマー表面の化学的性質のために、我々は、この手順を実行しないでください。 </li></ol> 3。データ収集とインキュベーション手順：エンドポイントの形式<ol><li>希望するバッファへの関心の対象のソリューションとなります。ここで、それはPBSで抗BSAの適切な濃度（10 ngの/ PBSで抗BSAのmL溶液1-10 mLを加えるEX）のソリューションとなります。また、ネガティブコントロールのインキュベーション用緩衝液の相当額を（対象なし）を持っていることを確認してください。 </li><li>すべての後に収集したデータを正規化するためのシリコンミラースキャンしてください。 </li><li>各スポットでの初期の光の高さ（質量）を決定する前に、インキュベーションのステップへIRISシステムを持つ準備されたプローブの配列をスキャンします。これは表面上の質量の変化を適切に分析を可能にする、インキュベーション後、結合のレベル、すなわち。ここで、いくつかのパラメータは、現在のような露出時間などの実験、、視野、繁栄泳動、等のために調整されます。 </li><li>シェーカーのプレート上で1時間、調製した溶液に浸すのチップ（S）。インキュベーション時間は、フローチャンバーの撹拌、ターゲットの濃度が検出され、輸送特性（リアルタイム検出モードが使用されている場合）、ターゲット - プローブペアの親和性、などのレベルに応じてかなり異なることがあります。 </li><li>インキュベーション後、ステップ2.5で説明した洗浄手順を繰り返します） </li><li> IRISシステムを使用して、同じプローブアレイをスキャンし、プレインキュベーションの比較のためのポストインキュベーションの画像を得る。 </li><li>二次抗体が使用されているサンドイッチアッセイ形式の例については、必要に応じて別のインキュベーションステップのためにこのプロセスを繰り返します。 </li></ol> 4。データ解析<ol><li>プロにラボが開発したソフトウェアを使用して、それぞれの虹彩スキャン（強度イメージのシーケンス）のために収集された画像を合わせる光学的厚さ情報を含むプローブアレイのイメージを首領。結合の迅速な定性分析は、（登録）後、プレインキュベーションの画像を減算することによって行うことができます。結合は質量の変化が観察されたそれらのスポットの強度の変化として表示されます。定量分析の場合は、スポットとスポットの環状の外側内の各ピクセルの光学的厚さの情報を平均化し、これらの2つの領域の直接比較を行うことによって、バックグラウンドと比較して各スポットの質量密度を決定する。 </li></ol> 5。代表的な結果： 図1は、代表的な抗体アレイをスポットしたレイヤーのSi - SiO 2の IRISの基板の例の回路図を示します。各抗体のアンサンブルは、異なるタンパク質をターゲットと異なるエピトープに対する特異性と複製にスポットする。二つの異なる全ウイルスおよびウイルスタンパク質は、例えばターゲットとして表されます。ネガティブコントロール抗体は、アッセイに依存し、非特異的および/またはウイルス特異的であることができる。 図2は、ヒト血清アルブミンの結合（HSA）特有の斑点HSAとウサギIgG（コントロール）スポットの配列に対する抗体を示しています。ここに見られるように、光のフィッティングと決定した後、プリとポストインキュベーションイメージのために厚さ、結合配列のための差分画像を定性的に結合評価するために作成することができます。定量分析は、500 ng / mLの抗HSAインキュベーションの濃度に対して、それぞれ、HSAおよびウサギIgGのスポットを観察された2.05と0.13ナノメートルの光の高さの変化を意味することが明らかになった。 図3は、タンパク質濃度とdsDNAのオリゴマーの長さに毛皮のタンパク質結合依存のIRISの測定を示しています。上のグラフは、初期固定化オリゴマープローブの高さとポストインキュベーションの毛皮の結合のための絶対的な光学式高さ測定を示しています。毛皮の増加する濃度（50、100、200 nm）はDNAプローブに増加した結合をもたらした。オリゴマーの長さは、またより多くの結合の結果より長い配列を持つ毛皮の結合に影響を与えます。ここで、エラーバーは平均値から一つの標準偏差を表しています。下のプロットは、dsDNAの鎖あたりの結合計算された毛皮のタンパク質二量体を示しています。二量体の結合が著しく非特異的結合の高レベルを示唆する200nMの毛皮のタンパク質濃度で増加した。 <img src="/files/ftp_upload/2694/2694fig1.jpg" alt="図1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="図1"> 図1通常IRISシステムと多重化方式で特定のウイルスやウイルスの成分を検出する実験で使用したサンプルプローブアレイの回路図。 <img src="/files/ftp_upload/2694/2694fig2.jpg" alt="図2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="図2"> 図2斑点のHSAへのヒト血清アルブミン特異的抗体の結合のためのポストインキュベーションの差分画像は、500 ng / mLの濃度でこのラベルフリーシステムで収集。各スポットのための生体材料の質量密度は、スポット内で光学的厚さの情報を平均化してから、バックグラウンドを代表するスポットの周囲に環状の平均でこれを比較することによって決定されます。 <img src="/files/ftp_upload/2694/2694fig3.jpg" alt="図3" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="図3"> 図3。オリゴマーの長さ、オリゴマー内のコンセンサス配列の位置、および毛皮のタンパク質濃度に基づいて、既知のコンセンサス配列と斑点のある二本鎖オリゴマーと毛皮のタンパク質相互作用のためのデータバインディングのプロット。各斑点のシーケンス（上部）にバインドされている毛皮のタンパク質の絶対量に関する情報は、オリゴマー（底部）の各タイプにバインドされている毛皮の二量体の数を推定するために使用することができます。

<ol><li>Özkumur, E., Needham, J. W., Bergstein, D. A., Gonzalez, R., Cabodi, M., Gershoni, J. M., Goldberg, B. B., Ünlö, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Label-free+and+dynamic+detection+of+biomolecular+interactions+for+high-throughput+microarray+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences%22%5BJournal%5D)">Label-free and dynamic detection of biomolecular interactions for high-throughput microarray applications.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 105, 7988-7992 (2008).</li>
<li>Özkumur, E., Ahn, S., Yalcin, A., Lopez, C. A., Cevik, E., Irani, R. J., DeLisi, C., Chiari, M., Ünlö, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Label-free+microarray+imaging+for+direct+detection+of+DNA+hybridization+and+single-nucleotide+mismatches%5BTitle%5D)+AND+%22Biosensors+and+Bioelectronics%22%5BJournal%5D)">Label-free microarray imaging for direct detection of DNA hybridization and single-nucleotide mismatches.</a> Biosensors and Bioelectronics. 25, 1789-1795 (2010).</li>
<li>Özkumur, E., Lopez, C. A., Yalcin, A., Bergstein, D. A., Connor, J. H., Chiari, M., Ünlö, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spectral+reflectance+imaging+for+a+multiplexed%2C+high-throughput%2C+label-free%2C+and+dynamic+biosensing+platform%5BTitle%5D)+AND+%22IEEE+Journal+of+Selected+Topics+in+Quantum+Electronics%22%5BJournal%5D)">Spectral reflectance imaging for a multiplexed, high-throughput, label-free, and dynamic biosensing platform.</a> IEEE Journal of Selected Topics in Quantum Electronics. 16, 635-646 (2010).</li>
<li>Lopez, C. A., Daaboul, G. G., Vedula, R. S., Özkumur, E., Bergstein, D. A., Geisbert, T. W., Fawcett, H. E., Goldberg, B. B., Connor, J. H., Ünlö, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Label-free+multiplexed+virus+detection+using+spectral+reflectance+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Biosensors+and+Bioelectronics%22%5BJournal%5D)">Label-free multiplexed virus detection using spectral reflectance imaging.</a> Biosensors and Bioelectronics. , (2011).</li>
</ol>

利害の衝突は宣言されません。

IRISプラットフォームは、マイクロアレイのフォーマットで高スループットのデータバインディングを収集するために使用するのは簡単で迅速なシステムです。共有結合的に表面に別の機能性タンパク質やDNAプローブを固定化することによって、標的抗原/バイオマーカーの/ etc。イムノアッセイのように、解から取り込むことができます。 IRISシステムを持つエンドポイントまたはリアルタイム形式のプローブの条件で、これらの相互作用の測定は、それぞれの相互作用のために収集するための高感度と定量的な情報が可能になります。ここに詳述する、代表的な実験は、この手法で調査することができる相互作用の種類の一例にすぎません。転写因子、ウイルス抗原、および全体のウイルスの検出は、以前は明らかにし、IRISが容易に扱うことができる解析の​​種類のほんの一例を表している。

<ol><li>熱成長二酸化ケイ素、シリコンバレーマイクロエレクト​​ロニクス、カスタムオーダーの500ナノメートルのシリコンウェーハ<li>硫酸アンモニウムの粉末、シグマアルドリッチの猫。 ＃A5132 <li>リン酸緩衝生理食塩水（PBS）10X準備濃縮物、フィッシャーサイエンティフィック猫をバッファ。 ＃BP665 - 1 <li>ヒト血清アルブミンに対する抗体（抗HSA）、シグマアルドリッチの猫。 ＃A0433 <li>ヒト血清アルブミン（HSA）、シグマアルドリッチの猫。 ＃A9511 <li>アルゴンまたは窒素ガス（超高純度）、Airgasの猫。 ＃AR UHP300または＃NI UHP300 <li>ペトリ皿は、60ミリメートル× 15ミリメートル、フィッシャーサイエンティフィック猫。 ＃0875713A <li> Scienceware ®真空デシケーター、シグマアルドリッチの猫。 ＃Z119016 <li>マイクロ遠心チューブ、フィッシャーサイエンティフィック猫。 ＃05-408-120 <li> 96ウェルプレート、低細胞結合、Nalgeneヌンクインターナショナルの猫。 ＃145399 <li> BioOdyssey書家MiniArrayer、Bio - Rad社<li>のTween - 20、シグマアルドリッチ＃P1379 <li>エタノールアミン、シグマアルドリッチ＃398136 <li>ヒドロキシルアミン、サーモサイエンティフィック猫。 ＃26103 <li>多目的ローテータ、サーモサイエンティフィック（バーンズテッドインターナショナル）、モデル＃2314、猫。 ＃2314Q <li> Retiga 2000Rカメラ、QImaging猫。 ＃01 - RET - 2000R - FM - 12 <li> ACULED光源、パーキンエルマー、カスタムオーダー<li>光学部品（レンズ、目標、開口部、レール、ポスト、等）、Thorlabs </ol>

干渉反射イメージングセンサー（iris）を用いた生体分子の検出

Biomolecular Detection employing the Interferometric Reflectance Imaging Sensor (IRIS)

生体分子の相互作用の高感度測定は、このような基本的な生物学や微生物学、環境/農業/生物兵器防衛監視、ナノバイオテクノロジー、など多くの分野や産業で使用されています。診断アプリケーション、監視（検出）のために存在、非存在、または患者検体で検出されたターゲットプロテオームやゲノムバイオマーカーの異常発現は、治療法や治療法の有効性を決定するために使用することができます。研究の分野では、分子の親和性と特異性については十分に調査中のシステムを特徴付けるのに有用です。 分子の濃度や親和性を決定するために、現在のシステムの多くは、ラベルの使用に依存しています。これらのシステムの例とし​​ては、酵素免疫測定法（ELISA）、ポリメラーゼ連鎖反応（PCR）法、ゲル電気泳動アッセイ、および質量分析（MS）のようなイムノアッセイが含まれています。一般に、これらのラベルは、蛍光放射線、または自然の中で比色であり、直接または間接的に関心の分子標的に添付されています。ラベルの使用は広く受け入れられ、いくつかの利点を持っているものの、これらの相互作用を測定するための新しいラベルフリー法の開発を刺激している欠点があります。これらの欠点は、そのような増加アッセイコスト、試薬の寿命とユーザビリティ、ストレージおよび安全性の懸念など、実用的な側面、ラベリングの無駄な時間と労力、およびラベリングのプロセスまたはラベルの自分自身のために別の試薬間のばらつきが含まれています。科学研究に基づいて、これらのラベルの使用はまた、添付されたラベルと直接リアルタイムに相互作用を測定することができないの存在に起因するタンパク質の機能/構造への影響に対する懸念などの困難を導入することができます。 ここで紹介するマイクロアレイ研究に従順である新しいラベルフリー光バイオセンサーの使用は、タンパク質、DNA、抗原性物質、全体の病原体（ビリオン）及びその他の生物材料を検出するため、干渉反射イメージングセンサー（IRIS）と呼ばれる。 IRISシステムは、高感度、精度、およびさまざまな生体分子の相互作用[1-3]の再現性を持つことが実証されている。利点は、多重画像の容量、リアルタイムおよびエンドポイントの測定機能、およびそのような削減試薬の消費量と分析時間の短縮など、他の高スループットの属性が含まれています。また、IRISのプラットフォームが使用するのは簡単です、安価な機器を必要とし、多くの現代の界面化学的アプローチと互換性がシリコンベースの固相アッセイ成分を利用しています。 ここでは、プローブアレイの準備からインキュベーションおよびエンドポイントの形式で結果の分析にバインディングターゲットの測定にIRISシステムを使用することを提示。モデルシステムはHSA -斑点の基板上にヒト血清アルブミン（HSA）に特異的な標的抗体のキャプチャーになります。

定量的な、高スループット、リアルタイム、及びSiO上にラベルフリー生体分子の検出（DNA、タンパク質など）<sub&gt; 2</sub&gt;表面はLED照明、最小限の光学部品、およびカメラに依存する単純な干渉技術を用いて達成することができます。干渉反射イメージングセンサー（IRIS）は、安価な使用が簡単、そしてフォーマットをマイクロアレイに適している。

干渉反射イメージングセンサー（IRIS）を用いた生体分子の検出

生体分子相互作用の高感度な測定は、基礎生物学や微生物学などの多くの分野や産業で利用されています。

本実験の全体的な目的は、Irisと呼ばれる高感度でラベルフリーなセンシングプラットフォームを用いて、表面に固定化された抗原への抗体の結合を定量化することである。これは、まず化学的に機能化された均一な二酸化ケイ素表面上に、溶液中から標的タンパク質を捕捉するためのテストプローブおよびコントロールプローブのアレイを調製することによって達成される。固定化されるプローブは、抗体または抗原、DNAまたはRNA、あるいは機能化されたポリマー表面やその他の表面化学と適合するあらゆる種類の高分子であることができる。調製したマイクロアレイを、目的のタンパク質を含むサンプルとともにインキュベートし、研究者が指定した条件下で結合させます。次に、センサーアレイ全体を異なる波長の光で撮像します。IRISシステムでは、各ピクセルの反射強度がカスタムコード化されたアルゴリズムによって処理されます。各試験条件または対照条件に結合したバイオマテリアルの量を定量するために、本システムの干渉計を用いたラベルフリー測定に基づき、複合混合物中の抗体の効果的な検出および絶対定量を示すインキュベーション後の結果を取得します。光学干渉および樹脂キャビティデバイスに関する10年以上の研究開発に基づき、従来のラベルフリーバイオセンサーシステムで直面した多くの混乱を招く問題を克服できるこの新しい手法を開発しました。データ収集ステップにおいて正しい正規化が必要であり、正確で再現性のあるデータ取得を確実にするための品質管理手順に従う必要があるため、この手法を視覚的に実演することが不可欠です。二酸化ケイ素基板を自己吸収性copo dmma NASマップでコーティングするために、まず100 mgのポリマーを5 mLの脱イオン水に加えてポリマー溶液を調製します。次に、最終的な硫酸アンモニウム濃度が0.92 Mとなるように、40%飽和硫酸アンモニウムを5 mL加えます。その後、チップをポリマー溶液に浸し、シェーカーを用いて30分間インキュベートします。チップを脱イオン水で十分にすすぎ、アルゴンまたは窒素ガスで乾燥させた後、80 °Cで15分間ベークします。ポリマーコートされた基板チップは、プローブのスポット操作まで、真空デシケーターなどの乾燥した環境で最大2〜3ヶ月間保存してください。まず、希望する最終濃度にするために、プローブストック溶液と緩衝液の適切な量を決定します。典型的な実験では、抗原またはIgGを0.5 mg/mLの濃度でリン酸緩衝生理食塩水に調製し、所定量のPBSバッファーを入れた小型エッペンドルフチューブに、各プローブストック溶液の計算量を加えて混合します。次に、これらのプローブ溶液を、スポッターのソースプレートとして使用する96ウェル低タンパク吸着プレートにピペッティングします。続いて、グリッドあたりの各条件の反復回数を決定し、プリントアレイのスポッティングパラメータを設定します。グリッドにより、繰り返しグリッドの数とチップ上の希望のスポット位置が決定されます。基板とソースプレートをスポッターにセットし、廃棄ボトルと供給ボトルを確認してください。その後、プリンティングを開始します。スポッティング終了後、基板を高湿度環境に一晩置き、インキュベーション後の固定化および不活性化プロセスを進行させます。チップを0.1% tween含有PBSに3分間浸し、この操作を計3回繰り返して、撹拌しながら基板を洗浄します。続いて、PBSで3分間のインキュベーションを3回行い、最後に脱イオン水で同様に3分間のインキュベーションを3回行います。ドライ測定を行う場合は、アルゴンガスでチップを十分に乾燥させてください。シェーカープレート上で、pH 7.4に調整した50 millimolarのエタノールアミン溶液にチップを30分間浸し、共重合体表面に残っているNHS基を失活させます。インキュベーション手順を開始する前に、PBSおよび脱イオン水を用いてエタノールアミンを十分に洗浄してください。本デモンストレーションのために、PBSを用いて適切な濃度の標的タンパク質溶液を調製します。ここでは500 ng/mLの抗ヒト血清アルブミンを使用し、陰性対照のインキュベーション用には標的を含まない同量のバッファーを用意します。アイリスシステムは、光源、センサープローブアレイを適切に照射するための光学部品、反射光強度を記録するためのカメラ、および測定のためにサンプルを設置するステージなどの基本的な要素で構成されています。スキャンを行う前に、その後収集されるすべてのデータを正規化するため、まず洗浄済みのベアシリコンチップを用いてシリコンミラーのスキャンから開始します。実験に合わせてパラメータを調整し、アイリスシステムを準備します。これには、カメラが記録する光強度のヒストグラムを測定し、最適な強度が得られるよう露光時間を設定することが含まれます。ノーマライゼーションスキャン後、準備したプローブアレイをirisシステムにロードし、前述と同様にセットアップを行い、基板表面を正しく結像するようにフォーカスを調整します。反射光強度の記録されたヒストグラムを確認し、サンプルステージが水平であることを確認してください。最後に、データを保存するためのファイル名を選択します。ソフトウェアを初期化してアレイをスキャンします。これにより、異なる波長で表面を何度も照射し、収集した画像を平均化します。まず、ティーチスポットの初期光学的な高さが決定され、これにより初期スキャンの後のインキュベーションに伴う表面上の質量変化を適切に分析することが可能になります。初期スキャンの後、チップを調製したインキュベーション溶液に浸し、シェーカープレート上で1時間置きます。インキュベーション時間は、植生レベル、検出対象の濃度、およびターゲットとプローブのペアの親和性によって大きく異なります。インキュベーション後、前述した洗浄手順を繰り返します。irisシステムを用いて同じプロアレイをスキャンし、インキュベーション前の状態と比較するためのインキュベーション後の画像を取得します。必要に応じて、この工程を異なるインキュベーションステップで繰り返すことができます。例えば、二次抗体を用いるサンドイッチアッセイ形式では、市販のソフトウェアを使用して各アイリススキャンの収集画像をフィッティングし、光学的厚さの形成を含むプローブの画像を生成します。インキュベーション後と前の画像を差し引くことで、結合の簡易的な定性分析を行うことができます。結合は、質量の変化が観察されたスポットにおける強度の変化として現れます。定量分析を行うには、スポット内の各ピクセルの光学厚さの情報と、スポット外の環状領域（アニュラス）の情報を平均化することにより、背景と比較した各スポットの質量密度を決定します。次に、ここに示すこれら2つの領域を直接比較します。例として、代表的な抗体アレイがスポットされた、層状のシリコンおよび二酸化ケイ素アイリス基板の概略図を示します。各抗体アンサンブルは、異なるタンパク質を標的とする異なるエピトープへの特異性を持ち、重複してスポットされています。例として、2種類の全ウイルスと1種類のウイルスタンパク質を示しています。ターゲットについて。陰性対照抗体はアッセイによって異なり、非特異的、あるいはウイルス特異的である場合があります。ヒト血清アルブミン（HSA）特異的抗体と、ここに示されているスポット済みのHSAおよびコントロールのウサギIgGスポットとの結合に関する定性的結果の例を以下に示します。インキュベーション前後の画像についてフィッティングを行い、光学的厚さを決定した後、結合アレイの差分画像を作成することで、結合状態を迅速に評価できます。さらに定量的な解析を行うと、抗HSA抗体のインキュベーション濃度 500 nanograms per milliliter において、HSAスポットでは 2.05 nanometer、ウサギIgGスポットでは 0.13 nanometer の平均光学的高さの変化が観察されました。この棒グラフは、irisによる測定で得られる定量データの例を示しています。この例では、タンパク質結合のタンパク質濃度および二本鎖リガメント長への依存性が示されています。この棒グラフは、初期の固定化リガメントプロープの高さ、および結合後のインキュベーション後の絶対光学的高さの測定値を示しています。furタンパク質の濃度を5、100、200 nanomolarに増加させると、DNAプローブへの結合が増加しました。ここでは、二本鎖DNAリガメントあたりの計算されたfurタンパク質二量体の結合量を示します。furタンパク質濃度が200 nanomolarにおいて二量体結合が有意に増加しており、これは高レベルの非特異的なリガメント間相互作用、あるいは複数の二量体の凝集などの異なるfurタンパク質結合メカニズムを示唆しています。この手順を行う際は、適切な酸化膜厚を持つ、清潔で均一な基板から開始すること、およびピンセットを用いて慎重に取り扱い、サンプルの清潔さを維持することが重要です。また、適切に保存され、機能することが確認されている試薬を使用することも極めて重要です。このビデオを視聴することで、二酸化ケイ素表面への機能性プローブアレイの作製を通じた、ラベルフリー形式でのバイオ分子挙動の測定方法に加え、干渉反射イメージングセンサー（IRIS）を用いたデータ収集および解析方法について十分に理解できるはずです。

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