HIVに対する遺伝子操作免疫を持つヒト化マウスモデルの構築

麻酔をかけた重度の免疫不全レシピエントマウスを調製します。

腎臓を露出させる切開を行い、腎臓カプセルに穴を開

ゼラチン状のタンパク質混合物に懸濁されたヒト胎児胸腺組織と胎児肝由来細胞を含むインプラント針を取ります。

細胞には、HIVを標的とするキメラ抗原受容体(CAR)を発現する操作造血幹細胞(HSC)が含まれます。

細胞懸濁液と胸腺組織をカプセルの下に移植し、切開部を閉じます。

次に、CAR発現HSCを経眶に注入し、マウスを回復させます。

腎臓では、ゼラチン状のタンパク質混合物がマトリックスに重合し、移植部位に HSC を保持します。

マトリックスHSCは胸腺に移動し、機能的なヒトT細胞に分化します。

一方、眼窩後部に注射された HSC は骨髄に到達し、機能的なヒト B 細胞、単球、および NK 細胞に分化します。

HIVに対するヒト免疫系を持つマウスモデルが完成しました。

フラスコから胸腺片と培地を60ミリメートルの皿に注ぎます。容積式ピペットチップを氷上の開いた1.5ミリリットルの滅菌スクリューキャップチューブに入れて冷やします。また、細胞ペレットとマトリゲルなどのゼラチン状タンパク質混合物を氷の上に置きます。

承認された動物プロトコルに従って、レシピエントマウスを注射可能な麻酔薬で麻酔します。マウスの麻酔レベルを足を絞って確認します。ピンチに対する反応がないことは、麻酔の外科的面を示しています。

各マウスの左側を腰から肩まで、背中の中心とお腹の間で剃ります。皮下投与で、希釈したカルプロフェン1キログラムあたり6ミリグラムを動物の肩または鼠径部の三角形に注射します。トロカールのカニューレを60ミリメートルの皿にPBSで洗い流します。鈍く湾曲した鉗子を使用して、カニューレの開口部のすぐ内側に60ミリメートルの皿から胸腺の一部を置き、トロカールを引き戻して組織をカニューレに吸引します。

次に、容積式ピペットとチルドチップを使用して、5マイクロリットルの冷たいゼラチン状タンパク質混合物を細胞ペレットの入ったチューブに加え、穏やかに撹拌して細胞懸濁液を生成します。細胞懸濁液をカニューレの開口部にピペットで入れ、トロカールをゆっくりと引き戻して針をロードします。

マウスの剃毛部位をポビドンヨードで拭き取り、続いてイソプロパノールを3回拭きます。脾臓の位置を示す皮膚の下の最も暗い場所を決定します。腎臓は脾臓の背側約5ミリメートルにあります。

足をつまむのに反応がなく、適切なレベルの麻酔を確保した後、湾曲した鉗子を使用して皮膚を持ち上げ、手術用はさみを使用して脾臓と平行に皮膚に15ミリメートルの切開を行います。次に、下の腹膜層にも同様の切り込みを入れます。

男性では、腎臓は簡単に見えるため、腹部を押すだけで押し出されます。止血剤または湾曲した鈍い鉗子のペアで腎臓をサポートします。女性では、卵巣が腎臓を簡単に摘出できないようにする傾向があります。止血剤を使用して、卵巣を持ち上げ、慎重に腎臓を露出させます。

針先の鉗子を使用して、腎臓カプセルの後端にある小さな穴を摘み取ります。カニューレの開口部が腎臓カプセルで完全に覆われるまで、トロカールをこの穴にスライドさせ、腎臓に沿って滑り込ませます。腎臓カプセルの下の組織をそっと押し出し、トロカールを引き出します。湾曲した鉗子を使用して、胸腺片が針と一緒に出ないようにします。

次に、鉗子で腹膜を持ち上げ、止血剤をそっと使用して腎臓を元の位置に押し戻します。腹膜に外科用縫合糸で二重結び目を1本結びます。また、2つのオートクリップ巻きクリップを配置して、皮膚を閉じます。

次に、形質導入されたCD34陽性細胞を混合し、0.5 x 10⁶細胞を100マイクロリットルの容量でインスリン注射器に吸引します。これらの細胞を眼窩後静脈注射によってマウスに注射します。

注射後、目の潤滑剤を両目に少量垂らし、マウスをケージの中に横向きに寝かせます。すべてのマウスを移植した後、動物が意識を取り戻し、歩行可能であることを確認してから、住宅室に戻します。