マウスモデルにおける静脈内自己投与方法

こんにちは、私の名前はエリザベス・コティックで、マギル大学ヘルスセンターの依存症ユニットにあるキャサリン・ギル博士の研究室から来ました。本日は、静脈内自己投与試験を行うために必要なカテーテル挿入手術の方法をご紹介します。カテーテルの挿入方法と、カテーテルの開存性を維持するためのヒントをいくつか紹介します。

ニコチン静脈内自己投与セッション中、動物はプラスチックチューブでTaiに接続され、ニコチン注入は取り付けられた注入ポンプによって送達されます。オペラントボックスは、医療関係者から購入しました。各ボックスには、2つの超高感度マウスレバーが装備されています。

カテーテルを静脈に挿入するために、手術前に準備する必要があるアイテムがいくつかあります。20ゲージの針は、チューブを静脈にスライドさせるように適合させる必要があります。針のシャフトの上部を約2センチ剃り、カテーテルチューブを静脈に導くために使用されるチャネルを作成します。

次に、カテーテルを洗い流してチェックするためのシリンジを準備します。12センチメートルのチューブがシリンジの26ゲージの針に一端で取り付けられ、もう一方の端が23ゲージの針に張られています。チューブをカテーテルカニューレに取り付けやすくするためには、ヘパリン化Tカルシン溶液を充填した注射器と生理食塩水を入れた注射器の2つが必要になります。

最後に、カテーテルカニューレキャップを準備します。カテーテルカニューレは、破片が入るのを防ぐためにキャップをする必要があります。これらのキャップは、23ゲージの針にプラスチックチューブを伸ばすことによって作られています。

チューブを針先から1センチメートル切断し、開放端を溶かします チューブを密封するために、生理食塩水を針に押し込み、キャップに漏れがないことを確認します。マウスカテーテルは、英国のCam Csから入手しました。カテーテルの球根の端から1.2センチメートルのところに空くように、カテーテルから余分なチューブを切り取ります。

次に、生理食塩水の入ったシリンジをカテーテルの外側の金属カニューレに取り付け、フラッシュして漏れがないか検査します。ミスは、酸素を混合したアイソフッ素ガスを使用して麻酔をかけ、手術中は麻酔下で維持されます。呼吸チューブを使用して、酸素とイソフッ素の両方のレベルを動物の体重に基づいて設定し、手術中に必要に応じて調整し、鉗子で後ろ足をつまんで動物が適切に麻酔されていることを確認し、手術中はマウスの呼吸困難と麻酔の深さを監視します。

手術は20分から30分ほどですので、両目にアイローションを塗ります。マウスは手術前に剃毛されます。動物の背中にカテーテルベース用のスペースを用意します。

動物の背中の皮膚をそっと引き上げ、肩甲骨中央部の縦方向に約2センチメートルの長さの小さな切開を行います。背中の途中から始まり、首のすぐ下まで伸びています。結合組織を無理に引き離してカテーテルベース用のスペースを確保し、切開部に生理食塩水を塗布します。

切開部の両側の皮膚をそっと引っ張り、動物を裏返します。右被蓋静脈は首の皮膚の下に表面的に見られ、S浅く切開することで露出させることができます。右鎖骨の周りから動物の顎に向かって上に向かって伸びる、長さが約1〜2センチメートルの斜めの切り込みを入れます。

カテーテルの基部からのチューブは、静脈に挿入するためにアクセスできるように、首の腹側切開部を通して運ぶ必要があります。鉗子を肩の皮膚の下に導き、結合組織を突破します。背中の切開部に到達するには、チューブを皮膚を通して動物の首の周りの腹側の開口部まで引っ張ります。

チューブの端を動脈クランプでつかみ、動物の右側に固定したままにします。切開部に生理食塩水を適用し、右頸静脈を分離します。視界を遮っている可能性のある結合組織や脂肪組織を非常にそっと離し、静脈を特定します。

上部の静脈をそっと持ち上げ、湾曲鉗子を使用して脂肪をバラバラにし、静脈の周囲と下の結合組織にします。湾曲した鉗子を静脈の下に置き、空いている手で開きます。静脈の下に滅菌プラスチックバーを通します。

静脈が浮き上がったら、静脈の視界が遮るものなくはっきり見えるように、十分な脂肪を取り除きます。露出した静脈に生理食塩水を定期的に滴下して、濡れた状態に保ちます。静脈の周りに縫合糸の結び目を準備して、カテーテルチューブを頸静脈に挿入したら所定の位置に固定できるようにします。

両端の静脈の下に縫合し、両端で単一の非常に緩い開いた結び目を作ります。カテーテルチューブを上部の結び目に通し、縫合糸で右肩の残りの部分にループします。生理食塩水をカテーテルに通してチューブの重さを量り、カテーテルチューブを頸静脈に挿入します。

変更された20ゲージの針は、静脈を突き刺し、静脈と挿入針の両方を生理食塩水で濡らして挿入中の摩擦を減らし、プラスチックバーをそっと引き戻し、針を静脈の底部に近づけるために使用されます。針の半センチが入る程度です。カテーテルチューブを針から静脈にスライドさせます。

抵抗があってはならない。抵抗は、結合組織にいることを示します。静脈内にいることを確認するために、カテーテルシリンジを引いてみて、採血できるかどうかを確認してください。

チューブが所定の位置に配置されたら、針を取り外し、カテーテルバルブを挿入ポイントに押し込みます。下部の結び目を結び、カテーテルチューブがバーと同じ高さにあることを確認してから、2番目の結び目を電球の真上で結びます。これにより、カテーテルが所定の位置に固定されます。

バーを取り外し、両端に2番目の結び目を作ります。カテーテルチューブと縫合糸を縫合する前に皮膚の下に押し込みます。動脈クランプを使用して縫合針を皮膚に導き、切開部を閉じます。

ステッチの数は、切開のサイズによって異なります 動物を胃に乗せて。カテーテルベースを動物の背中に配置します。切開部に生理食塩水を塗布し、カテーテルベースを皮膚の下にスライドさせます。

チューブが穴を開けられる可能性を最小限に抑えるために、チューブが最小限にループし、ベースの下にあることを確認してください。カテーテルベースの周りの皮膚を縫い合わせます。ステッチの数は、切開部のサイズによって異なります。

通常、3〜4針で十分です。カテーテルから血液が取り出せることを確認してください。最後に、カテーテルをヘパリン化したテイン溶液で洗い流し、感染や血栓の形成を防ぎます。

カテーテルのカニューレに接続されているチューブを緩めます。次に、生理食塩水チューブを取り外し、ヘパリン化Tカリン溶液が入ったシリンジのチューブとすばやく交換します。0.03〜0.05ccの溶液でカテーテルを洗い流します。.

再度、カニューレに接続されているチューブを緩めます。鉗子でカテーテルキャップをつかみ、動きながら一度でチューブをカニューレから取り外し、カテーテルキャップと交換します。この手順は、血液が上がらないように迅速に行う必要があります。

白いカテーテルカバーをねじ込み、カニューレの先端を突き刺さずにカバーがしっかりと固定されていることを確認します。マウスに鎮痛薬と抗生物質の皮下注射をします。片側に鎮痛剤ケトプロフェンを1キログラムあたり5ミリグラムの用量で注射し、反対側に抗生物質アミカシンを1キログラムあたり10ミリグラムの用量で注射します。.

麻酔を中止した後、マウスが食物と水に簡単にアクセスできる清潔なケージで回復させます。信頼性の高い静脈内自己投与データは、このビデオで紹介されている手法に従うことで取得できます。ただし、カテーテルの開存性を維持することが重要です。

これは、カテーテルを右心房に慎重に配置し、オペラセッションの前後にカテーテルを毎日洗い流し、カテーテルカニューレが常にキャップされ、破片の侵入を防ぐことによって達成されます。