サンプリング戦略とブタの生物医学的モデルからバイオバンク組織サンプルの処理

バイオバンク プロジェクトの下流解析の広範なスペクトルのブタの動物モデルの代表的な組織サンプルの生成法の性能と実用を実証、超高速を含む体系的なランダム サンプリング定性・定量形態学上および分子分析型の組織サンプルの差分処理。

このビデオでは、バイオバンクブタ組織標本のサンプリングと処理のための2つの主要な手法を紹介しています。水没技術は、臓器と組織の総体積を確実に推定し、オリエンテーター技術は、定量的な形態学的パラメータを偏りなく推定するためにランダムな等方性組織切片を生成します。組織密度測定のための浸漬技術の主な利点は、あらゆる種類の組織に適用でき、小さなサンプルから大きなサンプルまで信頼性の高い結果が得られることです。

オリエンテーター技術の利点は、非常に効率的であり、大きな組織サンプルにも対応できることです。大きな臓器のボリューム測定を開始するには、臓器から適切なサイズの組織片を切除します。ペーパータオルでサンプルを慎重に綿棒で拭き取り、余分な血液と組織液を取り除きます。

次に、精密スケールでサンプルを計量し、サンプルの重量を記録します。適切なサイズのビーカーに0.9%生理食塩水を加えます。組織放出時のオーバーフローを防ぐために、ビーカーを完全に埋めないでください。

ビーカーをスケールに置き、鉗子またはサンプルホルダーのマークが液体に達するまで、鉗子または自作のサンプルホルダーを生理食塩水に浸します。次に、スケールの表示をゼロにリセットします。組織サンプルを鉗子またはサンプルホルダーに慎重に取り付け、マークされた位置に達するまでサンプルを生理食塩水に完全に浸します。

信頼性の高い密度測定を記録するには、サンプルが完全に水没していることを確認し、水没したサンプルがビーカーの内壁や底に接触しないようにすることが重要です。サンプルを所定の位置に保持した状態で、スケールに表示された重量を記録します。この測定値と室温での生理食塩水の密度を使用して、サンプルの体積を計算します。

次に、サンプルの重量とその体積から組織サンプルの密度を計算します。この腎臓のような大きな臓器や組織の場合は、複数のサンプルで測定を繰り返し、1回の測定値から平均密度を計算します。小さなサンプルや下垂体などの合計で測定された小さな臓器の場合は、測定を3回繰り返してから、単一の測定値から平均臓器密度を計算します。

最後に、臓器、組織、または臓器コンパートメントの総体積を、その重量と密度から計算します。固定組織標本を、片方の端が0度から180度の方向に平行な等角円のプリントに置きます。次に、乱数テーブルを使用してランダムな角度を決定します。

等角円のスケールで対応するマークを見つけます。これらのマークを使用して、正三角形の円のスケールで示されたランダム角度の方向に平行に向けられた断面平面と、サンプルの静止面に対して垂直に向けられたサンプルを通るセクションを切り取ります。組織ブロックを、断面表面を下に向けてコサインウェイト円上に置きます。

静止面の端を 1 対 1 の方向に平行に配置します。次に、乱数テーブルを使用して決定されたランダムな角度でサンプルを通る新しいセクションを切り取ります。結果として得られる断面平面は、等方性の均一なランダム断面です。

この表は、水没技術を使用して決定されたいくつかのブタ組織および臓器の代表的な密度を示しています。ほとんどのブタ組織は、水の密度を示すものよりもわずかに高い密度値を示します。一方、脂肪組織など、生理食塩水で泳いでいる組織は、密度が1未満を示します。

この図は、オリエンテーター技術で調製されたブタの左心室心筋の4つの代表的なIUR切片を示しています。異なるIURセクションで変更された切断角度に注意してください。一度習得すれば、組織密度測定のための水没技術は数分で行うことができます。

適切に実行されている場合。オリエンテーター法で生成された等方性の均一なランダム組織切片は、適切な立体解析法を使用して任意の定量的形態学的パラメータを推定するのに適しています。デジタル音楽。