Name: サンプリング戦略とブタの生物医学的モデルからバイオバンク組織サンプルの処理 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-03-06T14:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 7 s
Description: 学ぶ ブタの生物医学的モデルからの組織サンプリングとバイオバンク処理法。浸漬法による体積推定とオリエンテータ法による無作為等方性切片作成を通じて、定量的形態学解析の精度向上を実現する。

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著者はリサの都市の優秀な技術的な支援をありがちましょう。

<ol><li>Aigner, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transgenic+pigs+as+models+for+translational+biomedical+research%5BTitle%5D)+AND+%22J+Mol.+Med%22%5BJournal%5D)">Transgenic pigs as models for translational biomedical research.</a> J Mol. Med. 88, 653-664 (2010).</li>
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ブタの動物モデルからのバイオバンク サンプル コレクションの生成臓器ボリュームによる冗長な組織サンプルの広い範囲に適しています代表者の再現可能な世代堅牢な技術とプロトコルが必要です。異なる分析方法と薬剤の定量分析のためのサンプル セクションの方向のランダム化のため。本稿で説明する方法は、ブタの臓器や組織のサイズに合わせられるし、これら要求2,7を効果的に満たすために開発されています。彼らはよく認識されている方法論的原則に基づいているし、以前別研究発表2,7,12,21の実用性を証明しています。注目のメソッドは、さまざまな種類の代表的なサンプルの生成のため、さまざまな可能性がありますは決定しないパラメーターの取得に基礎を提供するので、組織・臓器のサンプルを調べる研究にと...

大動物モデル1,2,3,4、5、ブタの間いくつかの有利な類似のために医学の豚用ますます一般的なものと人体解剖学と生理学との生成を可能にする確立された分子生物的方法の可用性は、合わせて、豚モデル疾患条件1,4の広い範囲のための遺伝子組換え。
しかし、齧歯動物モデルと比較して、いつでも実験のため提供することができますそれぞれの豚のモデルの動物の数は限られています。これは約 1 年と世代の豚のモデルおよび動物飼育のために必要な金融と時間のかかる努力のブタの世代間隔が原因です。したがって、これらの豚から生成することができますサンプルと同様に、ブタのモデルの個々 の動物、遺伝子組み換え豚モデルおよび/または長期の実験問題 (例えば、晩期合併症の場合は特に、非常に貴重です高齢者2,6,7慢性疾患) について説明します。
後で関連性の高いことが判明して可能性がありますいない研究の初期の実験的設計で予定されていた追加解析のパフォーマンス任意の研究の過程で例えば、以前から生じる個別の質問を発見したアドレスに意外な発見。このような追加実験のための適切なサンプルが利用できない disproportionally 高いコストと時間のかかる支出は、追加の豚や組織サンプルを生成する必要あります。そのような事態に備えてするには、バイオバンクのさまざまな器官、組織、またはバイオ液体、量的そして質的幅広い以降の解析に適した保存バックアップ サンプル集の生成、重要と考えられる2,6,7に近づきます。ブタの動物モデルからの最適の利点を派生する、適切なバイオバンク サンプルの可用性で多臓器レベルで同一のサンプル素材にさまざまな分析方法の広範なスペクトルを実行する独自の可能性を提供しています、非常に同じ個々 の動物、例えば、さまざまなワーキング ・ グループの科学者にサンプルの分布によって組織された研究ネットワーク2,6,7。さらに、biobanking の「将来」のサンプリング戦略研究に必要な動物数削減にも貢献しています。ブタのモデル biobanking の利点は、最近多臓器、臓器を調べる multiomics 研究で実証されているミュンヘン MIDY 豚バイオバンクから試験片を使用して、長期的な糖尿病の遺伝子組み換えブタモデルにおけるクロストーク2。
実行後の分析の結果の解釈可能性と信頼性を確立する一般的に遵守しなければならないバイオバンク サンプルいくつかの必須要件があります。サンプルを再現性をもって発生する必要があります、彼らは十分に代表、すなわちをある必要があります7から採取した組織・臓器の興味の形態学的および分子機能を反映しています。下流解析のタイプの広い範囲に適していること、サンプルする必要があります十分な量での撮影、説明を含む様々 な分析方法の要求 (時間と温度条件を含む) に従って処理されます。cryohistology、パラフィン、プラスチック組織学、免疫組織化学の in situハイブリダイゼーション、微細構造の電子顕微鏡解析、臨床検査診断分析、同様に分子などの病理組織学的解析DNA、RNA、蛋白質、および代謝物の分析。
番号、ボリューム、長さ、表面積の異なる組織構造など個別の定量形態学的パラメーターの広い範囲の評価定量的薬剤分析できるように、ランダム化されたセクションの平面、それぞれの臓器・組織の組織サンプルは、7、8,9,10,11を準備する必要があります。(すなわち、空間参照) から撮影されたサンプルの定量形態学的研究、組織や臓器、器官のコンパートメントの合計量の精密測定は、決定的に重要な7,9,12それぞれの臓器、組織、または有機体内の興味がパラメーターの絶対的な数量を計算します。最終的には、組織切片の作製中に埋め込みに関連する組織収縮効果が決定しアカウント13に。したがって、定量的な薬剤試料の分析、特にアーカイブ (組織サンプル、埋め込まれたティッシュのブロック、標本等を固定) 前の調査から、時々 厳しく制限あるいは不可能12、します。数と利用可能な個々 のサンプルの量が十分な場合、代表的なサンプルを保証する十分なサンプリングのデザインが適用されていない場合、それぞれの臓器・組織の超高速を実行しなかった場合に特にまたは場合の処理、サンプルは、関心の定量形態学的パラメーターの推定と互換性がありません。マニホールドの可能な要因による個別の定量形態学的パラメーターの解析アーカイブ サンプル材料の適合性ははっきりと答えることができない、個々 のケースごとの慎重な評価によります。
したがって、場所、サイズ、数、処理、トリミング方向、およびサンプルの向きが可能性があります以降の解析の結果に影響を与える、これらの要因は非常に重要なは、任意の研究の実験の設計で考慮する必要があります。これらの側面およびブタの解剖学、ブタに適応の動物モデルが確立されている最近の包括的な, 詳細な, 大規模なサンプリング ガイドラインの特徴に関して標準化された、再現性のある堅牢な参照を提供します。、および 50 を超える異なるブタ臓器や組織6,7から冗長、適切に処理された、高品質のサンプルの効率的な生成。
方法論の説明と本稿で示すビデオ チュートリアルを提供様々 な超高速、技術の実用性能の手順詳細、説明でわかりやすくの手順でブタ組織のサンプリングと臓器と異なる下流解析のための組織サンプルの処理。関連組織の三次元収縮寸法の測定を含む注目のテクニックは臓器のボリュームとアルキメデスとカヴァリエーリの9の原則に基づいて密度の定量方法など、病理検査の処理中に別の埋め込みメディア14に埋め込み、実用的な出来高で加重された体系的なランダム サンプリングのアプリケーションに近づくと、サンプリングされた組織検体の処理別以降分析7,8,9,15と世代の適切な指向し、潜在的な薬剤の定量的解析7、8のサンプルを処理 9,10,11。ブタ バイオバンクのプロジェクトで彼らのアプリケーションの横に示されたメソッドは、一般的にすべての臓器・組織の病理組織形態の定量的なプロパティを調べることの研究の適切です。さらに、体系的なランダム サンプリングのデザインが世代の豊富な変化、例えばRna、蛋白質、または代謝産物を検出する分子の解析手法を用いた実験の代表的なサンプルのため特に有益ですさまざまな臓器や組織。
次の段落は、その実用性能がプロトコル」に記載されている間にこれらのメソッドを簡単に紹介を提供します。
臓器ボリュームの定量 器官の重量とボリュームの決定は、いくつかの実験的設定の重要な可能性がありますこれらの要因として実験的に関連する可能性のある変更を調べた関心の要因臓器・組織の総量もよく絶対定量的なパラメーター (例えば、総セル数)、stereologically 推定数値ボリューム密度 (すなわち、ボリューム単位セルの数からの計算に必要な組織) の7,12。コンピューター断層撮影などの複雑な技術的な装置を使用してのテクニックとは別に基本的に器官またはティッシュの絶対量を決定するために一般的に使用される 3 つの実用的な方法があります。器官のボリュームは、「直接体積測定」すなわち、アルキメデスの原理によると、水または完全に浸漬した場合の構造によって転置された生理食塩水の量を測定して決定できます。ただし、対等に大きいブタ器官のこれらのアプローチは非現実的であり、不正確さをしやすい非常に大きい容積測定フラスコを要求するので。便利に、臓器・組織のボリュームはその密度と重量7,12,16、「水没法」7,12 を使用して効率的に判断できます。 から計算できます ,16 (プロトコル手順 1.1)。(1598-1647)「カバリエリの原理」に基づく超高速アプローチを使用しても、臓器・組織ボリュームを推定できます。簡単に言えば、カヴァリエリの原理の状態、地面に平行平面の区分である 2 つのオブジェクトと対応するで 2 つのオブジェクトをセクションのプロファイルをカットする場合、地面からの距離で 2 つのオブジェクト、同じエリアがあります。同じボリュームを持っています。したがって、並列、等しく遠く離れている断面平面と断面平面間の距離で、プロファイル断面の製品として任意形状オブジェクトのボリュームを推定できます。これは次の類推で理解できる: 同じ硬貨の同じ数から成る 2 つのスタックは、サイドバイ サイド、コイン整然としたコイン スタック等の円筒形の降伏、互いの上に積み上げ、1 つのスタックの配置検討します。オフセンターの硬貨のスタックには、コイン (図 3 a) が配置されます。両方のコイン スタックの形状が異なる、ボリュームが同じで、両方のスタックの対応するレベルでコインの区域以来 (すなわち、並列セクションのプロフィールの部分はから同じ距離で両方のコイン スタックを介してカット、地面) と同じです。ブタの臓器や組織は、カヴァリエリの原理7,12,15を使用してのボリュームの推定、1.2 の手順で説明します。
組織学的埋め込みに関連する組織の収縮の程度の決定 組織切片で測定するいくつかの定量的形態学的パラメーターの解析では、ティッシュの組織学のための処理中に発生した埋め込みに関連する組織収縮効果決定し、考慮しています。埋め込みに関連する組織の収縮の範囲変数、組織、その処理と埋め込み中8,13,17,18,19に依存します。一般的に、埋め込み関連組織サンプル (すなわち、ほとんど収縮) の容積の変化領域、および、したがって、すべての 3次元パラメーター推定定量化薬剤分析8 に影響を与えるすべての 3 つの次元で.基本的には、手順 1.3 に示すように埋め込みに関連する組織の収縮は、線形組織収縮因子 (fS) として表現の程度を推定できます。(収縮に敏感な) 定量的形態パラメーター14の補正のために使用されます。
出来高で加重された臓器・組織の体系的なランダム サンプリング ブタ臓器試料のバイオバンク コレクションの構築、手順 2 で説明したように出来高で加重された体系的なランダム サンプリングの手法が代表者の世代の実用的な時間の節約と効率的なテクニックをあることを証明します。多目的組織サンプル7,8,9,15です。
薬剤の定量解析の等方性均一ランダム セクションおよび均一ランダム垂直セクションの生成 バイオバンク組織サンプルは、適切に準備された標本なしできなかったパラメーターの最大値の推定のための異なる定量的解析方法の広い範囲に適している必要があります。「等方性 (独立) 均一ランダム (フェース) セクション「8,9を使用して、ほぼすべての定量的な主パラメーターを決定できます。フェース セクションで組織サンプルの断面平面の 3次元配向がランダムします。これは、断面平面の位置を基準にして組織サンプルの位置のランダム化が適用されると"Isector"法11 (プロトコル手順 3.1)、相対的な断面平面の方向のランダム化に実現、組織サンプルは、"Orientator"法10 (プロトコル手順 3.2) のように。皮膚または粘膜標本自然存在または定義され適切に識別垂直軸、「垂直一様ランダム (VUR) セクション」の準備を表示するなどの組織サンプルの (プロトコル手順 3.3) は厳密の平面内断面の縦軸は有利な8,20です。フェース/VUR サンプリングの理論的基礎と潜在的な下流定量化薬剤分析の包括的な議論の完全な談話、興味を持った読者定量的ステレオロジー人生の教科書に呼びます科学8,9。

<table><tbody><tr><td>Agar</td><td>Carl Roth GmbH, Germany</td><td>寒天(粉末), Cat.: 5210.3</td> 約<td>1gの寒天を10mlの冷水にガラスまたはプラスチックビーカーで溶かし、電子レンジで700Wで加熱し、溶液を2回沸騰させながら厳密に攪拌します。温まったまま型に流し込み、固めます。注意:高温の液体寒天で取り扱うときは、保護メガネと手袋を着用してください。</td></tr><tr><td>キャリパー</td><td>Hornbach Baumarkt GmbH, Bornheim, Germany</td><td>Schieblehre Chrom/Vernickelt 120 mm Cat.: 3664902</td><td>どんな種類のキャリパー(機械式または電子式)でも構いません。</td></tr><tr><td>鋳造金型(金属)</td><td>Engelbrecht Medizin &Labortechnik、Ederm&uuml;nde, ドイツ</td><td>Einbettsch&auml;lchen aus Edelstahl, 14 x 24 x 5 mm, Cat.: 14302b</td><td>パラフィン包埋に使用される他の種類の金属鋳造金型でも十分です。</td></tr><tr><td>クロスグリッド(5mm-6cm)のコピーテンプレート</td><td>n.a.n.a</td><td>.</td><td>クロスグリッド(5mm-6cm)のコピーテンプレートは、Albl et al.&nbsp;の補足データファイルで提供されています。トキシコールパトール。44, 414-420, doi: 10.1177/0192623316631023 (2016)</td></tr><tr><td>等角円と余弦強調円のコピーテンプレート</td><td>n.a.n.a</td><td>.</td><td>等角円と余弦重み円のコピーテンプレートは、Nyengaard &ガンダーセン</ストロング>。Eur Respir Rev. 15, 107-114, doi: 10.1183/09059180.00010101 (2006) and in Gundersen et al. Stereological Principles and Sampling Procedures for Toxicologic Pathologists.で:ハシェックとルソー&acute;毒物学病理学ハンドブック。第3版、215-286、ISBN:9780124157590(2013)。</td></tr><tr><td>フォールドバッククランプ(YIHAIバインダークリップ、15 mmおよび19 mm)</td><td>Ningbo Tianhong Stationery Co ltd.、中国</td><td>Y10006およびY10005</td><td>他のタイプの標準オフィスフォールドバッククランプも同様に機能します。</td></tr><tr><td>鉗子(解剖学的)</td><td>NeoLab Migge GmbH、ハイデルベルク、ドイツ</td><td>neoLab スタンダード -Pinzette 130 mm, anatomisch, rund, Cat.: 1-1811</td><td>どんなタイプの解剖学的鉗子でも大丈夫です。</td></tr><tr><td>ホルムアルデヒド溶液 4%</td><td>SAV-Liquid Produktion GmbH, Flintsbach, Germany</td><td>ホルムアルデヒド 37/40 %, Cat.: 1000411525005</td><td>濃縮溶液から 4% に希釈します。中性pHに緩衝液。適切な目、手、呼吸用保護具を着用してください。ホルムアルデヒド溶液に固着した組織サンプルを排気フードの下に処理し、保護メガネと実験用手袋を着用してください。</td></tr><tr><td>方眼紙(校正用)</td><td>B&uuml;ロマルクトB&ouml;ttcher AG、イェーナ、ドイツ。www.bueromarkt-ag.de</td><td>Penig Millimeterpapier A4, Cat.: 2514</td><td>どんな種類の方眼紙でもかまいません(ミリメートル単位で拡大縮小)。</td></tr><tr><td>実験室のビーカー(5ml、10のml、50のml、100のml)</td><td>NeoLab Migge GmbH、ハイデルベルク、</td><td>ドイツBecherglas SIMAX&reg; 、niedrige Form、Borosilikatglas 3.3 Cat.:E-1031、E-1032、E-1035、E-1036</td> 5 <td>&ndashのガラスまたはプラスチックビーカーの任意の種類;100のml容量はする。</td></tr><tr><td>ラボスケール(s)</td><td>Mettler Toledo GmbH, Gie&szlig;en, Germany</td><td>PM6000</td><td>測定範囲が0.1 mgから約20 g、それぞれ100 mgから約500 gの測定範囲を持つ標準的な実験室スケールは</td></tr><tr>、Sartorius AG, G&ouml;<td></td><td>ttingen、ドイツ</td><td>BP61S</td><td></td></tr><tr><td>ミクロトームブレード</td><td>Engelbrecht Medizin &Labortechnik、Ederm&uuml;nde, ドイツ</td><td>FEATHER Microtome blasdes S35, Cat.:14700</td><td>どんな種類の使い捨てミクロトームブレードでも大丈夫です。</td></tr><tr><td>形態計測/面積測定ソフトウェア/システム</td><td>National Institute of Health (NIH)</td><td>ImageJ</td><td>https://www. imagej.nih.gov/ij/ (1997) からダウンロード。</td></tr><tr><td>Zeiss-Kontron, Eching, Germany</td><td>VideoplanTM 画像解析システム</td><td>在庫</td><td></td>切れ</tr><tr><td>フォトカメラ</td><td>Nikon</td><td>D40</td><td>三脚に取り付けられるデジタルフォトカメラなら何でもOKです。</td></tr><tr><td>プラスチック透明フィルム</td><td>Avery Zweckform GmbH, Oberlaindern, Germany</td><td>Laser Overhead-Folie DINA4 Cat.:&nbsp; 3562</td><td>(レーザー)印刷可能なプラスチックの透明性であれば何でも構いません。</td></tr><tr><td>乱数テーブル</td><td>n.a.n.a</td><td>.</td><td>乱数テーブルは、次のような乱数発生器を使用して(定義された数の乱数を使用し、定義された間隔内で)便利に生成できます：</td></tr><tr><td>https://www.random.org/ Razor blades</td><td>Plano GmbH, Wetzlar, Germany</td><td>T5016</td><td>あらゆる種類のかみそりの刃で十分です。</td></tr><tr><td>定規</td><td>B&uuml;ロマルクトB&ouml;ttcher AG、イェーナ、ドイツ。www.bueromarkt-ag.de</td><td>Office-Point Lineal 30 cm, Kunststoff, 透明, Cat.: ln30</td><td>cm-mmスケールの定規なら何でも大丈夫です。</td></tr><tr><td>生理食塩水 (0.9%)</td><td>Carl Roth GmbH, Germany</td><td>Natriumchlorid, >99% Cat.: 0601.1</td><td>0.9% 生理食塩水を調製するには、9 g NaCl を 1000 ml の蒸留水に 20°C で溶解します。</td></tr><tr><td>メス用刃</td><td>Aesculap AG &Co KG、Tuttlingen、ドイツ</td><td>BRAUN 外科用ブレード N&deg;22</td><td>どんな種類のメスの刃でもかまいません。</td></tr><tr><td>スキャナー</td><td>ヒューレット・パッカード</td><td>hp scanjet 7400c</td><td>150-600 dpiの解像度でスキャンできる標準的なオフィススキャナーなら何でも大丈夫です。</td></tr><tr><td>Slicing devices</td><td>n.a.n.a</td><td>.</td><td>自作のスライシングデバイスの例は、Knust, et al. Anatomical record. 292, 113-122, doi: 10.1002/ar.20747 (2009) および Albl et al.&nbsp; Toxicol Pathol. 44, 414-420, doi: 10.1177/0192623316631023 (2016)の補足データファイルで見つけることができます。</td></tr><tr><td>球形鋳造金型(例:直径25.5 mm)</td><td>Pralinen-Zutaten.de、Windach、ドイツ</td><td>Pralinen-Hohlkugeln Vollmilch、25.5 mm</td><td>球形鋳造金型は、自己構築することも、他の菓子メーカーから入手することもできます(プラリネの場合)。ここに示されている鋳造金型は、実際には中空プラリネ本体のパッケージ/ラッピングです(最初にプラリネを食べてから、iセクターセクションの生成にパッケージを使用します)</td></tr><tr><td>細い</td><td>ワイヤーBasteln&ホビーショーベス、Stra&szlig;furth、ドイツ。www,bastel-welt.de</td><td>Messingdraht (0.3 mm) Cat.: 216464742</td><td>他の種類の細いワイヤーでもかまいません。</td></tr><tr><td>ティッシュ</td><td>ペーパーNeoLab Migge GmbH、ハイデルベルク、ドイツ</td><td>Declcate Task Wipes-White、Cat.:1-5305</td>他の<td>種類の実験用ティッシュペーパーも同様に機能します。</td></tr><tr><td>防水ペン</td><td>Staedler Mars GmbH &共同KG、N&uuml;rnberg, Grmany</td><td>Lumocolor permanent 313, 0.4 mm, S, black, Cat.: 313-2</td><td>他の種類の防水ペンでも大丈夫です。</td></tr></tbody></table>

サンプリング戦略とブタの生物医学的モデルからバイオバンク組織サンプルの処理

Sampling Strategies and Processing of Biobank Tissue Samples from Porcine Biomedical Models

医学トランスレーショナルリサーチのブタのモデルはより人気となって着実にいます。モデル、およびこれらのモデルの使用可能な動物の多くの場合限られた数の遺伝子組み換え豚を中心に、個々 の動物の高い値を考慮した、適切に処理された組織サンプル集 (バイオバンク) の確立に最適、以降の解析方法、サンプリングの時点で指定されていない解析などの広範なスペクトルを表すモデルの直線移動の値をフル活用する意味のあるアプローチ。ブタの解剖学の特性に関して包括的なガイドラインは標準化された世代代表、異なるブタの臓器や組織からの質の高いサンプルの最近確立されています。これらのガイドラインは、結果および比較可能性さまざまな研究と研究者間の再現性の重要な前提条件です。臓器重量とボリューム、生成される定量サンプリング場所および組織サンプルの番号と同様に自分の向き、サイズ、処理およびトリム方向などの基本的なデータの記録、関連する要因一般化と分子、定性的手法と定量的形態解析用の標本の有用性を決定します。ここでは、代表の世代の最も重要な技術の説明、実用的なステップバイ ステップ サンプル、ブタの組織から多目的バイオバンク検体が提示されます。ここで説明した方法があります決定臓器のボリュームと密度の実質臓器組織収縮の範囲のポイントを数える測定による出来高で加重された体系的なランダム サンプリング プロシージャのアプリケーションサンプル、および垂直な制服と"Orientator"と"Isector"メソッドが生成された等方性一様ランダム (フェース) セクションなど、定量的な薬剤分析ランダム配向試料の世代の組織学的埋め込みに関連ランダム (VUR) セクション。

水没組織・臓器密度の測定法
図 12A-Bは、1.1 (図 1図 2) のステップで説明されている水没を用いたブタ腎臓のボリュームと密度の代表決定を示しています。追加豚の臓器や組織の密度測定の代表的な結果は、表 2に掲載されています。「組織サンプリング ガイドのブタ生体モデル」7で多様なブタの組織や臓器の参照密度のより包括的な一覧が表示されます。独立した標本の同一試料の繰り返し測定による水没メソッドを使用して取得した組織密度測定値の妥当性を見積もることができます。最もブタ組織水 (ρ水≈ 1.0) よりわずかに高い密度の値を表示...

バイオバンク プロジェクトの下流解析の広範なスペクトルのブタの動物モデルの代表的な組織サンプルの生成法の性能と実用を実証、超高速を含む体系的なランダム サンプリング定性・定量形態学上および分子分析型の組織サンプルの差分処理。

In translational medical research, porcine models have steadily become more popular. Considering the high value of individual animals, particularly of ...

このビデオでは、バイオバンクブタ組織標本のサンプリングと処理のための2つの主要な手法を紹介しています。水没技術は、臓器と組織の総体積を確実に推定し、オリエンテーター技術は、定量的な形態学的パラメータを偏りなく推定するためにランダムな等方性組織切片を生成します。組織密度測定のための浸漬技術の主な利点は、あらゆる種類の組織に適用でき、小さなサンプルから大きなサンプルまで信頼性の高い結果が得られることです。オリエンテーター技術の利点は、非常に効率的であり、大きな組織サンプルにも対応できることです。大きな臓器のボリューム測定を開始するには、臓器から適切なサイズの組織片を切除します。ペーパータオルでサンプルを慎重に綿棒で拭き取り、余分な血液と組織液を取り除きます。次に、精密スケールでサンプルを計量し、サンプルの重量を記録します。適切なサイズのビーカーに0.9%生理食塩水を加えます。組織放出時のオーバーフローを防ぐために、ビーカーを完全に埋めないでください。ビーカーをスケールに置き、鉗子またはサンプルホルダーのマークが液体に達するまで、鉗子または自作のサンプルホルダーを生理食塩水に浸します。次に、スケールの表示をゼロにリセットします。組織サンプルを鉗子またはサンプルホルダーに慎重に取り付け、マークされた位置に達するまでサンプルを生理食塩水に完全に浸します。信頼性の高い密度測定を記録するには、サンプルが完全に水没していることを確認し、水没したサンプルがビーカーの内壁や底に接触しないようにすることが重要です。サンプルを所定の位置に保持した状態で、スケールに表示された重量を記録します。この測定値と室温での生理食塩水の密度を使用して、サンプルの体積を計算します。次に、サンプルの重量とその体積から組織サンプルの密度を計算します。この腎臓のような大きな臓器や組織の場合は、複数のサンプルで測定を繰り返し、1回の測定値から平均密度を計算します。小さなサンプルや下垂体などの合計で測定された小さな臓器の場合は、測定を3回繰り返してから、単一の測定値から平均臓器密度を計算します。最後に、臓器、組織、または臓器コンパートメントの総体積を、その重量と密度から計算します。固定組織標本を、片方の端が0度から180度の方向に平行な等角円のプリントに置きます。次に、乱数テーブルを使用してランダムな角度を決定します。等角円のスケールで対応するマークを見つけます。これらのマークを使用して、正三角形の円のスケールで示されたランダム角度の方向に平行に向けられた断面平面と、サンプルの静止面に対して垂直に向けられたサンプルを通るセクションを切り取ります。組織ブロックを、断面表面を下に向けてコサインウェイト円上に置きます。静止面の端を 1 対 1 の方向に平行に配置します。次に、乱数テーブルを使用して決定されたランダムな角度でサンプルを通る新しいセクションを切り取ります。結果として得られる断面平面は、等方性の均一なランダム断面です。この表は、水没技術を使用して決定されたいくつかのブタ組織および臓器の代表的な密度を示しています。ほとんどのブタ組織は、水の密度を示すものよりもわずかに高い密度値を示します。一方、脂肪組織など、生理食塩水で泳いでいる組織は、密度が1未満を示します。この図は、オリエンテーター技術で調製されたブタの左心室心筋の4つの代表的なIUR切片を示しています。異なるIURセクションで変更された切断角度に注意してください。一度習得すれば、組織密度測定のための水没技術は数分で行うことができます。適切に実行されている場合。オリエンテーター法で生成された等方性の均一なランダム組織切片は、適切な立体解析法を使用して任意の定量的形態学的パラメータを推定するのに適しています。デジタル音楽。

sampling-strategies-processing-biobank-tissue-samples-from-porcine

Research

JoVE Journal

Medicine

医学

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ソフトバイオマテリアルの高ひずみ速度機械的応答を評価するための結合実験、有限要素モデリング手法

これは、野生で捕獲されたコウモリのゲノム、トランスクリプトーミクス、およびプロテオミクス分析のための最適な組織調製のためのプロトコルです。これは、コウモリの捕獲および解剖、組織保存、およびコウモリ組織の細胞培養のためのプロトコルを含む。...

-オミクス分析と原発細胞培養のためのコウモリの組織採取

本プロトコルでは、ブタ特異的プライマーを設計し、プラスミド含有ブタ特異的DNA断片を構築し、定量のための標準的な曲線を確立した。種特異的プライマーを用いて、cpsDNAを、豚からマウスへの細胞移植モデルおよびブタからサルへの動脈パッチ移植モデルにおいてqPCRによって定量化した。...

異種移植モデルの血液中の循環性豚特異的DNAの定量化

このプロトコルは、神経科学で一般的に研究されているいくつかの脳領域の完全および解剖における豚の脳の除去のための技術を詳述する。...

家畜豚脳の抽出と解剖

以下の研究では、大腸癌および膵臓癌の大型バイオバンクの確立に必要な連続したステップについて述べています。...

生きたバイオバンクの創造と維持 - 私たちはそれを行う方法

The endothelium is a dynamic integrated structure that plays an important role in many physiological functions such as angiogenesis, hemostasis, ...

ブタ末梢血からの血液伸長内皮細胞(BOEC)の特性評価

バイオバンクは生物医学研究にとって重要なリソースであり、欧州腫瘍学研究所のトランスレーショナルおよびデジタルメディシンユニットのバイオバンクはこの分野のモデルです。ここでは、さまざまな種類のヒト生体サンプルを管理するためのバイオバンクの標準操作手順について詳しく説明します。...

トランスレーショナルメディシンのためのバイオバンク:最適なサンプル管理のための標準操作手順

このプロトコルは、根治的前立腺全摘除術標本からのサンプルの収集を容易にする方法を説明しています。目標は、バイオバンクに保存する前に、解剖病理学的基準に基づいて標本から組織サンプルをマッピング、特性評価、およびミクロマクロで解剖することです。...

改善されたサンプリング技術と組織学的特性評価による前立腺腫瘍バイオバンキングの信頼性の向上

このプロトコルでは、生後3か月のデンマークランドレース豚に高速空気圧ドリルを使用して頭蓋切除術を行う方法について説明します。アクセスは前頭骨を介して行われ、腹側硬膜とその下にある大脳半球が明らかになります。この手順により、ブタの脳の大部分にアクセスできます。...

高速空気圧ドリル頭蓋切除術によるブタ脳へのアクセス

ここでは、処理時間&gt;90%短縮、高い細胞生存率、広範な適合性を特徴とする、脂肪由来幹細胞および脂肪細胞を効率的に単離する標準的な方法を提示します。...

豚脂肪組織から脂肪由来幹細胞および脂肪細胞の効率的な単離

学ぶ ブタの生物医学的モデルからの組織サンプリングとバイオバンク処理法。浸漬法による体積推定とオリエンテータ法による無作為等方性切片作成を通じて、定量的形態学解析の精度向上を実現する。

サンプリング戦略とブタの生物医学的モデルからバイオバンク組織サンプルの処理

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