Name: 麻酔下ラットの中枢神経系の操作への応答での腎交感神経活動の急性変化の定量 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-09-11T14:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 30 s
Description: 学ぶ麻酔下ラットの腎交感神経活動（RSNA）と平均動脈圧の測定法。中枢神経系操作による交感神経出力への影響を評価し、血圧と腎機能の制御機構を解明する基礎的手法です。

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本研究は、看護研究 (K99/R00NR014369) の国立研究所によって支えられました。

<ol><li>Mancia, G., Grassi, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+autonomic+nervous+system+and+hypertension%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation+Research%22%5BJournal%5D)">The autonomic nervous system and hypertension.</a> Circulation Research. 114 (11), 1804-1814 (2014).</li>
<li>Kannan, A., Medina, R. I., Nagajothi, N., Balamuthusamy, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Renal+sympathetic+nervous+system+and+the+effects+of+denervation+on+renal+arteries%5BTitle%5D)+AND+%22World+Journal+of+Cardiology%22%5BJournal%5D)">Renal sympathetic nervous system and the effects of denervation on renal arteries.</a> World Journal of Cardiology. 6 (8), 814-823 (2014).</li>
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<li>Fink, A. M., Dean, C., Piano, M. R., Carley, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+pedunculopontine+tegmentum+controls+renal+sympathetic+nerve+activity+and+cardiorespiratory+activities+in+Nembutal-anesthetized+rats%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">The pedunculopontine tegmentum controls renal sympathetic nerve activity and cardiorespiratory activities in Nembutal-anesthetized rats.</a> PLoS One. 12 (11), e0187956(2017).</li>
<li>Dean, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endocannabinoid+modulation+of+sympathetic+and+cardiovascular+responses+to+acute+stress+in+the+periaqueductal+gray+of+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology%2C+Regulatory%2C+Integrative+and+Comparative+Physiology%22%5BJournal%5D)">Endocannabinoid modulation of sympathetic and cardiovascular responses to acute stress in the periaqueductal gray of the rat.</a> American Journal of Physiology, Regulatory, Integrative and Comparative Physiology. 300 (3), R771-R779 (2011).</li>
<li>Seagard, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anandamide+content+and+interaction+of+endocannabinoid%2FGABA+modulatory+effects+in+the+NTS+on+baroreflex-evoked+sympathoinhibition%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology-Heart+and+Circulatory+Physiology%22%5BJournal%5D)">Anandamide content and interaction of endocannabinoid/GABA modulatory effects in the NTS on baroreflex-evoked sympathoinhibition.</a> American Journal of Physiology-Heart and Circulatory Physiology. 286 (3), H992-H1000 (2004).</li>
<li>Ferreira, C. B., Cravo, S. L., Stocker, S. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Airway+obstruction+produces+widespread+sympathoexcitation%3A+Role+of+hypoxia%2C+carotid+chemoreceptors%2C+and+NTS+neurotransmission%5BTitle%5D)+AND+%22Physiological+Reports%22%5BJournal%5D)">Airway obstruction produces widespread sympathoexcitation: Role of hypoxia, carotid chemoreceptors, and NTS neurotransmission.</a> Physiological Reports. 6 (3), (2018).</li>
<li>Stocker, S. D., Muntzel, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recording+sympathetic+nerve+activity+chronically+in+rats%3A+Surgery+techniques%2C+assessment+of+nerve+activity%2C+and+quantification%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology-Heart+and+Circulatory+Physiology%22%5BJournal%5D)">Recording sympathetic nerve activity chronically in rats: Surgery techniques, assessment of nerve activity, and quantification.</a> American Journal of Physiology-Heart and Circulatory Physiology. 305 (10), H1407-H1416 (2013).</li>
<li>Miki, K., Kosho, A., Hayashida, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Method+for+continuous+measurements+of+renal+sympathetic+nerve+activity+and+cardiovascular+function+during+exercise+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Physiology%22%5BJournal%5D)">Method for continuous measurements of renal sympathetic nerve activity and cardiovascular function during exercise in rats.</a> Experimental Physiology. 87 (1), 33-39 (2002).</li>
<li>Huetteman, D. A., Bogie, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+blood+pressure+monitoring+in+laboratory+rodents+via+implantable+radio+telemetry%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">Direct blood pressure monitoring in laboratory rodents via implantable radio telemetry.</a> Methods in Molecular Biology. 573, 57-73 (2009).</li>
<li>Jespersen, B., Knupp, L., Northcott, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Femoral+arterial+and+venous+catheterization+for+blood+sampling%2C+drug+administration+and+conscious+blood+pressure+and+heart+rate+measurements%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Femoral arterial and venous catheterization for blood sampling, drug administration and conscious blood pressure and heart rate measurements.</a> Journal of Visualized Experiments. (59), 3496(2012).</li>
<li>Paxinos, G., Watson, C. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aPaxinos%2C+G+%22The+rat+brain+in+stereotaxic+coordinates%22">The rat brain in stereotaxic coordinates</a>. , Academic Press. Sydney/New York. (2014).</li>
<li>Scislo, T. J., Augustyniak, R. A., O'Leary, D. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+arterial+baroreflex+regulation+of+renal%2C+lumbar%2C+and+adrenal+sympathetic+nerve+activity+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology%22%5BJournal%5D)">Differential arterial baroreflex regulation of renal, lumbar, and adrenal sympathetic nerve activity in the rat.</a> American Journal of Physiology. 275, R995-R1002 (1998).</li>
<li>Kopp, U. C., Jones, S. Y., DiBona, G. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Afferent+renal+denervation+impairs+baroreflex+control+of+efferent+renal+sympathetic+nerve+activity%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology%2C+Regulatory%2C+Integrative+and+Comparative+Physiology%22%5BJournal%5D)">Afferent renal denervation impairs baroreflex control of efferent renal sympathetic nerve activity.</a> American Journal of Physiology, Regulatory, Integrative and Comparative Physiology. 295 (6), R1882-R1890 (2008).</li>
<li>Guild, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantifying+sympathetic+nerve+activity%3A+problems%2C+pitfalls+and+the+need+for+standardization%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Physiology%22%5BJournal%5D)">Quantifying sympathetic nerve activity: problems, pitfalls and the need for standardization.</a> Experimental Physiology. 95 (1), 41-50 (2010).</li>
<li>Stocker, S. D., Hunwick, K. J., Toney, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hypothalamic+paraventricular+nucleus+differentially+supports+lumbar+and+renal+sympathetic+outflow+in+water-deprived+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Physiology%22%5BJournal%5D)">Hypothalamic paraventricular nucleus differentially supports lumbar and renal sympathetic outflow in water-deprived rats.</a> Journal of Physiology. 15 (563 Pt 1), 249-263 (2005).</li>
<li>Stocker, S. D., Gordon, K. W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glutamate+receptors+in+the+hypothalamic+paraventricular+nucleus+contribute+to+insulin-induced+sympathoexcitation%5BTitle%5D)+AND+%22Neurophysiology%22%5BJournal%5D)">Glutamate receptors in the hypothalamic paraventricular nucleus contribute to insulin-induced sympathoexcitation.</a> Neurophysiology. 113 (5), 1302-1309 (2015).</li>
<li>Saponjic, J., Radulovacki, M., Carley, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Injection+of+glutamate+into+the+pedunculopontine+tegmental+nuclei+of+anesthetized+rat+causes+respiratory+dysrhythmia+and+alters+EEG+and+EMG+power%5BTitle%5D)+AND+%22Sleep+and+Breathing%22%5BJournal%5D)">Injection of glutamate into the pedunculopontine tegmental nuclei of anesthetized rat causes respiratory dysrhythmia and alters EEG and EMG power.</a> Sleep and Breathing. 9 (2), 82-91 (2005).</li>
<li>DiBona, G. F., Jones, S. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dynamic+analysis+of+renal+nerve+activity+responses+to+baroreceptor+denervation+in+hypertensive+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Hypertension%22%5BJournal%5D)">Dynamic analysis of renal nerve activity responses to baroreceptor denervation in hypertensive rats.</a> Hypertension. 37 (4), 1153-1163 (2001).</li>
<li>Kunitake, T., Kannan, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Discharge+pattern+of+renal+sympathetic+nerve+activity+in+the+conscious+rat%3A+spectral+analysis+of+integrated+activity%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neurophysiology%22%5BJournal%5D)">Discharge pattern of renal sympathetic nerve activity in the conscious rat: spectral analysis of integrated activity.</a> Journal of Neurophysiology. 84 (6), 2859-2867 (2000).</li>
<li>Machado, B. H., Bonagamba, L. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microinjection+of+L-glutamate+into+the+nucleus+tractus+solitarii+increases+arterial+pressure+in+conscious+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Research%22%5BJournal%5D)">Microinjection of L-glutamate into the nucleus tractus solitarii increases arterial pressure in conscious rats.</a> Brain Research. 576 (1), 131-138 (1992).</li>
<li>Murakami, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhalation+anesthesia+is+preferable+for+recording+rat+cardiac+function+using+an+electrocardiogram%5BTitle%5D)+AND+%22Biological+and+Pharmaceutical+Bulletin%22%5BJournal%5D)">Inhalation anesthesia is preferable for recording rat cardiac function using an electrocardiogram.</a> Biological and Pharmaceutical Bulletin. 37 (5), 834-839 (2014).</li>
<li>Nakamura, T., Tanida, M., Niijima, A., Hibino, H., Shen, J., Nagai, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Auditory+stimulation+affects+renal+sympathetic+nerve+activity+and+blood+pressure+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience+Letters%22%5BJournal%5D)">Auditory stimulation affects renal sympathetic nerve activity and blood pressure in rats.</a> Neuroscience Letters. 416 (2), 107-112 (2007).</li>
<li>Bardgett, M. E., McCarthy, J. J., Stocker, S. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glutamatergic+receptor+activation+in+the+rostral+ventrolateral+medulla+mediates+the+sympathoexcitatory+response+to+hyperinsulinemia%5BTitle%5D)+AND+%22Hypertension%22%5BJournal%5D)">Glutamatergic receptor activation in the rostral ventrolateral medulla mediates the sympathoexcitatory response to hyperinsulinemia.</a> Hypertension. 55 (2), 284-290 (2010).</li>
<li>Brozoski, D. T., Dean, C., Hopp, F. A., Seagard, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Uptake+blockade+of+endocannabinoids+in+the+NTS+modulates+baroreflex-evoked+sympathoinhibition%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Research%22%5BJournal%5D)">Uptake blockade of endocannabinoids in the NTS modulates baroreflex-evoked sympathoinhibition.</a> Brain Research. 1059 (2), 197-202 (2005).</li>
<li>Barman, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((What+can+we+learn+about+neural+control+of+the+cardiovascular+system+by+studying+rhythms+in+sympathetic+nerve+activity%3F%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Psychophysiology%22%5BJournal%5D)">What can we learn about neural control of the cardiovascular system by studying rhythms in sympathetic nerve activity?</a> International Journal of Psychophysiology. 103, 69-78 (2016).</li>
<li>Charkoudian, N., Wallin, B. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sympathetic+neural+activity+to+the+cardiovascular+system%3A+integrator+of+systemic+physiology+and+interindividual+characteristics%5BTitle%5D)+AND+%22Comprehensive+Physiology%22%5BJournal%5D)">Sympathetic neural activity to the cardiovascular system: integrator of systemic physiology and interindividual characteristics.</a> Comprehensive Physiology. 4 (2), 825-850 (2014).</li>
<li>Malpas, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sympathetic+nervous+system+overactivity+and+its+role+in+the+development+of+cardiovascular+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Physiological+Reviews%22%5BJournal%5D)">Sympathetic nervous system overactivity and its role in the development of cardiovascular disease.</a> Physiological Reviews. 90 (2), 513-557 (2010).</li>
<li>Chen, W. W., Xiong, X. Q., Chen, Q., Li, Y. H., Kang, Y. M., Zhu, G. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiac+sympathetic+afferent+reflex+and+its+implications+for+sympathetic+activation+in+chronic+heart+failure+and+hypertension%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Physiologica%22%5BJournal%5D)">Cardiac sympathetic afferent reflex and its implications for sympathetic activation in chronic heart failure and hypertension.</a> Acta Physiologica. 213 (4), 778-794 (2015).</li>
<li>Linz, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modulation+of+renal+sympathetic+innervation%3A+Recent+insights+beyond+blood+pressure+control%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Autonomic+Research%22%5BJournal%5D)">Modulation of renal sympathetic innervation: Recent insights beyond blood pressure control.</a> Clinical Autonomic Research. , Epub ahead of print (2018).</li>
</ol>

アン M. Fink データ科学国際顧客諮問委員会のメンバーであります。

RSNA を測定するための重要な手順が含まれます: (1) 傍脊柱筋から腎臓を分離するときに腎動脈と神経のストレッチと腎神経線維 (2) 慎重に解剖記録電極の神経セグメントを配置するときの回避周囲の組織/船から (3) 電極ワイヤーを確保する、組織、血液、またはリンパ液、および腎神経と神経電極ユニットをシリカゲルに鉱物油を適用することによって完全に乾くことから神経を防止 (4) 無料です。トラブルシューティングは、記録システムが適切に接地されていることを確認することが重要です。RSNA の明確なシグナルを得るためには、電極の位置を可視化とシリカゲルに埋め込む前に、生の RSNA 聴取しながら慎重に調整できます。いくつかの時間を持続させる実験のための中枢神経系の操作によって変調することができます RSNA 信号で手術結果が正常に完了します。
結果を解釈する際、調査官は平均動脈圧と RSNA に麻酔の影響を検討してください。このプロトコルは、バルビツ レート麻酔 (ペントバルビ タール ナトリウム)、平均動脈圧を減らすことができます自律応答21</s...

心血管系の自律神経の制御に関する前臨床発見は、高血圧、心不全、慢性腎臓病などの疾患を管理するための作戦を知らせます。高血圧 (BP)1に貢献する交感神経と減少の迷走神経心臓の緊張の過活動。慢性的な高架腎交感神経カテコールアミン分泌を強化し、心血管・腎システム2,3有害な結果と、腎血流量を減少させます。自律神経機能障害につながる神経生物学の経路を定義するには、齧歯動物の研究、中枢神経系 (CNS) ニューロンが交感神経のパラメーターを調整する方法を決定するため重要です。このプロトコルの目的は腎交感神経活動 (RSNA) 測定に関する技術情報を提供するためと BP と麻酔下ラットの中枢神経系の操作への応答に急性の交感神経変化の定量化手法を概説します。
科学者がプローブ中枢神経系の薬理学的、電気的、または麻酔ラットの特定の核関数を決定するに生じる急性 (非生存) RSNA 測定 (h に永続的な分) が便利です。これらのメソッドは、孤束核、中脳中心灰などの構造を使用して脚蓋と腹吻側の延髄を行った交感神経パラメーター4を調節する神経生物学の経路を定義するには 5,6,7。このアプローチは調査する中枢神経系のターゲットを識別するために重要な自律神経機能障害8,9慢性モデルでさらに。これらの実験を完了するには、研究室には、はんだごて、手術顕微鏡、脳定位固定装置フレーム、電極アンプ、オーディオ モニターが必要です。電気的なノイズに寄与する要因研究室で現在、によって手術/記録領域は RSNA 記録における電気ノイズを低減するファラデーおり/接地ストラップを必要があります。脳解析がティッシュの固定を必要とする場合、灌流ポンプとヒューム フードが必要です。データがデジタル化することができを使用して複数生理ソフトウェア/データ集録 (アナログ デジタル コンバーター) 単位4,5、異なる解析オプションとテレメトリ信号を組み込むための互換性を記録.

<table><tbody><tr><td>ステンレス鋼線</td><td>AMシステム;スクイム、WA</td><td>791000</td><td>RSNA電極</td></tr><tr><td>ポリエチレン(PE-50)チューブ</td><td>VWR;Radnor, PA</td><td>63019-048</td><td>RSNA 電極; 容器カニューレ挿入</td></tr><tr><td>ミニチュア ピン コネクタ</td><td>A-M Systems;スクイム、WA</td><td>520200</td><td>RSNA電極</td></tr><tr><td>圧着工具</td><td>ダニエルズマニュファクチャリングコーポレーション;フロリダ州オーランド</td><td>M22520</td><td>RSNA 電極</td></tr><tr><td>コネクタ ストリップ</td><td>アンフェノール;クリントンタウンシップ、ミシガン州</td><td>221-2653</td><td>RSNA電極</td></tr><tr><td>JB Kwikエポキシ</td><td>JB溶接、硫黄スプリングス、テキサス州</td><td>8270</td><td>RSNA電極</td></tr><tr><td>シリコーン</td><td>Permatex;ハートフォード、コネチカット州</td><td>2222</td><td>RSNA電極</td></tr><tr><td>ヘパリンナトリウム;注射用(10 mLバイアル、1000 U / mL)</td><td>KV獣医用供給;デビッドシティ、NE</td><td>P03466静脈</td><td>線開存性</td></tr><tr><td>フェニレフリンHCl;注射剤(1 mLバイアル; 10 mg / mL)</td><td>ACE Surgical Supply;マサチューセッツ州ブロックトン</td><td>950-6312</td><td>腎交感神経抑制のテスト</td></tr><tr><td>シングルフック弾性外科用ステー</td><td>ハーバード装置;マサチューセッツ州ホリスト</td><td>72-2595</td><td>切開</td></tr><tr><td>シルク手術用テープ</td><td>3M, ミネアポリス,</td><td>MN 1538-0</td><td>安全な手術用ステー</td></tr><tr><td>針, 20 G</td><td>Sigma-Aldrich; ミズーリ州セントルイス</td><td>Z192554-100EA</td><td>血管カニューレ挿入</td></tr><tr><td>デュモン #7 湾曲した鉗子</td><td>ファインサイエンスツール;カリフォルニア州フォスターシティ</td><td>11274-20</td><td>血管カニューレ挿入</td></tr><tr><td>5-0 シルク縫合糸 Braintree</td><td>Scientific;マサチューセッツ州ブレインツリー</td><td>SUT-S 106</td><td>血管カニューレ挿入</td></tr><tr><td>繊細な止血鉗子</td><td>Roboz Surgical Instrument Co.;メリーランド州ゲイサーズバーグ</td><td>RS-7117</td><td>血管カニューレ挿入およびRSNA手術</td></tr><tr><td>Crile止血鉗子</td><td>ファインサイエンスツール;フォスターシティ、カリフォルニア州</td><td>13004-14</td><td>針曲げ</td></tr><tr><td>テレメトリ送信機</td><td>データサイエンスインターナショナル。ミネソタ州ミネアポリス</td><td>PA-10</td><td>平均動脈圧モニタリング (テレメトリー)</td></tr><tr><td>Re-gel syringe</td><td>Data Sciences International;ミネソタ州ミネアポリス</td><td>276-0038-001</td><td>送信機の再利用 (テレメトリー)</td></tr><tr><td>使い捨て圧力トランスデューサ</td><td>Transpac;カリフォルニア州サンクレメンテ</td><td>MI-1224</td><td>平均動脈圧モニタリング</td></tr><tr><td>Clear-Cuff 圧力注入器</td><td>MILA International Inc.;ケンタッキー州フローレンス</td><td>2281339</td><td>平均動脈圧モニタリング</td></tr><tr><td>血管カニューレ挿入鉗子</td><td>Fine Science Tools;フォスターシティ、カリフォルニア州</td><td>00574-11</td><td>カテーテル挿入</td></tr><tr><td>ブラックモノフィラメントナイロン4-0逆切断針の縫合</td>糸<td>McKesson Medical-Surgical;カリフォルニア州サンフランシスコ</td><td>S661GX</td><td>セキュアテレメトリー送信機</td></tr><tr><td>テレメトリー受信機</td><td>Data Sciences International;ミネソタ州ミネアポリス</td><td>RPC-1</td><td>平均動脈圧モニタリング (テレメトリー)</td></tr><tr><td>LabChart Pro (ソフトウェア)、PowerLab (取得ハードウェア)</td><td>AD Instruments;コロラドスプリングス、コロラド州</td><td>ML846、MX2マトリックス2.0(Data Science Internationalテレメトリーと互換性あり)</td><td>ソフトウェア/取得ハードウェアの3つのオプション</td></tr><tr><td>SciWorks(ソフトウェア)、DataWave(取得ハードウェア)</td><td>DataWave Technologies、Loveland、CO</td><td>N / A</td><td></td></tr><tr><td>Spike 2(ソフトウェア)、Micro1401-3</td><td>Cambridge Electronic Design Ltd.、ロンドン、英国</td><td>1401-3</td><td></td></tr><tr><td>マイクロドリル</td><td>ロボズ外科用器具株式会社;メリーランド州ゲイサーズバーグ</td><td>RS-6300</td><td>CNS手術</td></tr><tr><td>脳定位固定装置手術フレーム</td><td>Stoelting;ウッドデール、イリノイ州</td><td>51600</td><td>CNS手術</td></tr><tr><td>微小電極アンプ、10倍プリアンプ</td><td>AMシステム付き。スクイム、WA</td><td>1800-2</td><td>RSNAレコーディング</td></tr><tr><td>リトラクターファイン</td><td>サイエンスツール;フォスターシティ、カリフォルニア州</td><td>17009-07</td><td>RSNA手術</td></tr><tr><td>マイクロ解剖ピンセットファイン</td><td>サイエンスツール;フォスターシティ、カリフォルニア州</td><td>11251-10</td><td>RSNA手術</td></tr><tr><td>マイクロフック</td><td>ファインサイエンスツール;フォスターシティ、カリフォルニア州</td><td>10064-14</td><td>RSNA手術</td></tr><tr><td>鉱油</td><td>フィッシャーサイエンティフィック;マサチューセッツ州ウォルサム</td><td>8042-47-5</td><td>RSNA 手術</td></tr><tr><td>オーディオ モニター</td><td>AMシステム;スクイム、WA</td><td>3300</td><td>RSNA手術</td></tr><tr><td>シリカゲル</td><td>ワッカー、ミュンヘン;ドイツ</td><td>RT601A-B</td><td>RSNA手術</td></tr><tr>電気<td>クリップ</td><td>タイコエレクトロニクス;スイス、シャフハウゼン</td><td>EB0283-000</td><td>灌流針の接地または固定</td></tr><tr><td>ボンはさみ、ストレート/シャープポイント</td><td>Roboz Surgical Instrument Co;メリーランド州ゲイサーズバーグ</td><td>RS-5840</td><td>灌流</td></tr><tr><td>強制針</td><td>ハーバード装置;マサチューセッツ州ホリストン</td><td>75-0286</td><td>灌流</td></tr><tr><td>マスターフレックス灌流ポンプ</td><td>コールパーマー;イリノイ州バーノンヒルズ</td><td>7524-10</td><td>灌流</td></tr><tr><td>マスターフレックスプラチナ硬化シリコーンチューブ</td><td>コールパーマー。Vernon Hills, IL</td><td>96410-15</td><td>Perfusion</td></tr><tr><td>Formalin (10% buffered solution; 4 L)</td><td>Sigma-Aldrich; St. Louis, MO</td><td>HT501128</td><td>Perfusion</td></tr><tr><td>Sucrose</td><td>Sigma-Aldrich; St. Louis, MO</td><td>S0389</td><td>Cryoprotection</td></tr> (ミズーリ州バーノンヒルズ 96410-15 灌流ホルマリン (10% 緩衝液; 4 L)Sigma-Aldrich; St. Louis, MO S0389 Cryoprotection</tbody></table>

麻酔下ラットの中枢神経系の操作への応答での腎交感神経活動の急性変化の定量

Quantifying Acute Changes in Renal Sympathetic Nerve Activity in Response to Central Nervous System Manipulations in Anesthetized Rats

腎交感神経活動 (RSNA) および平均動脈圧は、心血管疾患や自律神経研究の重要なパラメーターしかし、限られた資源の科学者を測定し、これらの変数を分析するための技法で演出があります。このプロトコルは、RSNA と麻酔下ラットにおける平均動脈圧を測定する方法を説明します。プロトコルには、中枢神経系 (CNS) を操作する RSNA 録音中に脳にアクセスする方法も含まれています。RSNA 録音テクニックは、光遺伝学的、薬理学的、または中枢神経系の電気的刺激。アプローチは、捜査官は中枢神経核と解剖学的相関する非生存実験で短期 (h 分) 自律神経応答を測定する場合に役立ちます。アプローチは、RSNA のラットの慢性 (サバイバル) 録音を取得するためのものではありません。RSNA、平均放電整流、RSNA と平均動脈圧は、定量化を行い, さらにパラメトリック検定を用いたします。静脈アクセス、telemetrically、平均動脈圧を記録、将来の組織学的解析のための脳の固定を取得する方法は、資料に記載も。

図 1は、ネンブタール麻酔下のラットからサンプルの RSNA および BP の録音を示しています。平均動脈圧が増加し、圧受容器反射と過渡の sympathoinhibition4,6を呼び起こすフェニレフリンの静脈注射が使用されました。RSNA を定量化するには、生の RSNA だった整流および非重複 10 s セグメントの平均ノイズ推定された各セグメントから差し引かれます。
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58205/58205fig1.jpg"> 図 1: RSNA およびフェニレフリン注入 IV への応答に BP 。(A</stro...

交感神経と心血管中枢神経系 (CNS) の操作レスポンスを測定する方法、神経科学を進めるために重要です。このプロトコルは、測定と腎交感神経活動 (RSNA) 麻酔下ラット (非生存) の急性変化の定量科学者を支援するために開発されました。

Renal sympathetic nerve activity (RSNA) and mean arterial pressure are important parameters in cardiovascular and autonomic research; however, there are ...

この方法は、自律神経系、特に腎臓への交感神経の流出を調節する中枢神経系のメカニズムに関する重要な質問に答えるのに役立ちます。この手法の主な利点は、中枢神経系の操作が腎臓への腎交感神経流出に与える影響を測定できることです。動脈カニューレ挿入の前に、圧力感知カテーテルを高倍率で検査して、カテーテルに気泡や破片がなく、液体とゲルで満たされたコンポーネントの間に無傷の半月板があることを確認します。各埋め込みの前に、カテーテルの遠位先端でゲルを補充し、磁石を使用して送信機の電源を入れます。近位縫合糸に緩いオーバーハンドハーフノットを配置して、大腿動脈を短時間閉塞します。また、カテーテルイントロデューサーを利き手ではない手で持ち、血管カニューレ鉗子を使用してテレメトリーユニットのカニューレの先端をつかみ、ゲルが先端からずれないようにします。曲がった22ゲージの針先を使用して動脈に穴を開け、カニューレを動脈にできるだけ挿入します。次に、圧力カテーテルを近位および遠位の縫合糸タイで固定します。そして、テレメトリーインプラントの本体を切開部に隣接する側面の内側に押し込みます。脳へのアクセスのためには、ラットを脳定位固定術フレームの腹臥位にそっと動かし、頭を耳のバーの間に置き、切歯バーを調整してラムダとブレグマの高さを等しくします。次に、頭皮の正中線から2センチメートルの吻側尾側切開を行い、綿の先端のアプリケーターを使用して、頭蓋骨表面から結合組織をしっかりと取り除きます。露出した頭蓋骨に過酸化水素を塗布して、ブレグマ、ラムダ、正中線縫合糸の視覚化を支援します。ラットの脳のアトラスを使用してターゲティングをガイドし、頭蓋骨からの電極アクセス用のサイズのバーホール骨切り術をドリルします。腎交感神経を分離するには、10Xプリアンプと微小電極アンプにワイヤー型腎交感神経活動またはRSNA電極を接続し、肋骨の下4〜5センチメートルから脊椎の少し外側の尾方向にメスを切開します。傍脊髄筋を視覚化するために鈍く解剖し、脂肪が筋肉と出会う場所で非常に表面的な1〜2センチメートルの吻側尾側切開を行います。綿の先端のアプリケーターを使用して、脂肪を筋肉から広げて、腹膜腔に入らずに腎臓を視覚化します。また、リトラクターを使用して腎臓を傍脊髄筋から優しく分離し、腎動脈と腹部大動脈を視覚化します。また、高倍率を使用して、切開ポケット内の腎神経を特定します。神経束は、大動脈と腎動脈が大動脈から腎臓までの腎動脈に密接に続く直角に形成される直角で最も容易に見えます。次に、マイクロダイセングピンセットを使用して、記録電極に配置する神経束の一部を周囲の組織から穏やかに解剖します。ワイヤーRSNA電極をホルダーに固定し、電極を神経セグメントのレベルまで下げます。神経フックを使用して、神経を伸ばさずに腎神経の一部を電極上にそっと持ち上げます。そして、露出した腎交感神経を水分補給するために、切開部にミネラルオイルを充填します。接地クリップを動物に取り付け、もう一方の端をファラデーケージに取り付け、ハイパスフィルターとローパスフィルターを使用して信号をに向けます amplifiers。次に、オーディオモニターを含めてゲインを最大10キロヘルツに調整し、RSNAのバーストパターンを評価します。RSNA記録の品質を評価するには、血圧を上昇させ、腎交感神経活動を阻害するために、100マイクロリットルのボーラス静脈内注射で圧反射を呼び起こします 10マイクログラム/ミリリットルのフェニレフリンの静脈内注射 必要に応じて電極の位置を調整して信号を改善します。明確な信号が得られたら、鉱物油を吸引し、電極をシリカゲルで所定の位置に固定します。この代表的な実験では、フェニレフリンの静脈内注射を使用して、平均動脈圧の上昇を誘発し、圧反射と一過性交感神経阻害を誘発しました。RSNAを定量化するために、生のRSNAを整流し、重複しない10秒のセグメントについて平均化し、ノイズ推定値を各セグメントから減算しました。この手順を実行するときは、ラットが適切に麻酔されていること、ラットが定位固定装置フレームに適切に配置されていること、およびシステムが電気的ノイズを減らすために適切に接地されていることを確認することを忘れないでください。この手順と脳組織の収集に続いて、組織学法を適用して、交感神経刺激反応を制御する中枢系核のタイプを特徴付けることができます。この技術により、神経科学者は麻酔をかけたラットの自律神経調節メカニズムを探求することができ、血圧と腎機能の制御を理解するための動物での将来の研究に情報を提供します。少なくとも15分ごとに麻酔面を評価することが重要であることを忘れないでください。そして、必要に応じて補助麻酔を提供すること。

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Research

JoVE Journal

Neuroscience

神経科学

手術のシンプルかつ堅牢な行動の結果により、坐骨神経の慢性収縮は、神経因性疼痛の卓越した動物モデルの一つです。手術後24時間以内に、疼痛過敏症は、von...

ラットの坐骨神経と疼痛過敏テストの慢性的なくびれ

このビデオは、ラットの動脈圧の変化に応答した腎交感神経(RSN)の活動を研究する技術を示しています。大腿動脈に感圧カテーテルを装着すると、腎交感神経が露出します。次に、神経は記録電極上に持ち上げられ、その電気的活動が記録されます。次に、血管収縮薬を注射して血圧を上昇させ、対応するRSN活性の変化を監視します。...

ラットにおける動脈圧応答性腎交感神経活動の変化の記録

このビデオでは、アンジオテンシンII誘導高血圧マウスモデルで、フェノールを使用して交感神経機能を破壊し、血圧を下げる腎動脈交感神経除神経の手順を示しています。...

アンジオテンシンII誘発高血圧マウスモデルにおける腎動脈の交感神経除神経

麻酔下のマウスを表わす非生理的全身血圧血圧と自律神経の密接な関係を与え自律神経の調子の意味のある評価を排除します。したがって、同時に腎交感神経活動と意識下マウスにおける静脈内投与による血圧の新しい手法を説明します。...

腎交感神経活動と意識、持続静脈内投与による血圧の同時記録への新しいアプローチ気ままなマウス。

本研究は、手術手順の簡略化と神経電極の絶縁の海綿状の神経刺激を実行する方法について説明します。...

海綿神経刺激とラットの海綿静脈洞部の圧力の記録

ここでは、アンジオテンシンII注入によって誘発された高血圧マウスにおける腎交感神経除神経(RDN)のプロトコルを提示します。この手順は再現性があり、便利であり、高血圧および心肥大に対するRDNの調節メカニズムを研究することを可能にする。...

腎除神経の改善により、アンジオテンシンII注入による高血圧が軽減されました。

ラットの坐骨神経痛を誘発するために、慢性狭窄損傷モデルでFuの皮下ニードリングを使用するためのプロトコルを提示します。...

坐骨神経痛に対するフー皮下ニードリングの有効性:慢性狭窄損傷ラットモデルにおける行動的および電気生理学的変化

心機能の記録と心臓にロックされた脊髄後角ニューロンの分析と並行して、脊椎マルチチャネル細胞外記録のプロトコルについて説明します。この方法は、鍼治療によって誘発される胸部内臓機能変化の根底にある脊椎メカニズムを研究するための時間的に同期したフレームワークを提供します。...

ラット脊髄背角における心臓ロックニューロン応答に対する体細胞刺激のコードプロファイルの研究

ここでは、急性麻酔下のin vivo...

麻酔ラットにおける末梢疼痛ブロックを評価する電気生理学的手法

視神経切断は、成体中枢神経系の損傷の広く使用されているモデルです。軸索は完全に軸索切断後14日以内に死亡する（軸索切断）transectedされる網膜神経節細胞（RGCs）の90％。このモデルは、実験操作に簡単に従順し、再現性の高いです。...

視神経切断：中枢神経系における成人ニューロンのアポトーシスのモデル

学ぶ麻酔下ラットの腎交感神経活動（RSNA）と平均動脈圧の測定法。中枢神経系操作による交感神経出力への影響を評価し、血圧と腎機能の制御機構を解明する基礎的手法です。

麻酔下ラットの中枢神経系の操作への応答での腎交感神経活動の急性変化の定量

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