新規オブジェクト認識と行動の予算上のマウスでテスト オブジェクトの場所
November 20th, 2018
ここでデザイン、コスト、必要な設備の建設などマウス オブジェクトの位置と新規オブジェクト認識行動テストの経済的な確立のための包括的な指示を含むプロトコルを提供だけでなく行動実験、データ収集、および分析を実行します。
この方法は、メモリの規制に関する重要な質問に答える手助けとなります。例えば、これらのタスクでトランスジェニックノックアウトマウスをテストすることにより、メモリ内の特定のタンパク質の役割を決定します。この手法の主な利点は、あらゆるラボでメモリ テストを実施するための迅速かつコスト効率の高い方法です。
溶剤溶接は注意して行うと強力な結果が得られるため、アリーナ建設の実証が重要です。アクリル、アクリルセメント、16ゲージの仮説アプリケータを5枚取得します。アクリルシートから保護紙のコーティングを取り外します。
その後、すべての材料を乾かして、サイズが正しいことを確認します。次に、アクリルセメントでシリンジを組み立てて積み込みます。外壁の長いエッジをベースの上端に合わせ、組み合わせまたは機械加工用四角形を使用して互いに垂直になるようにします。
その後、結合されている2つの部分の隅に直接セメントの小さく、安定したビーズを適用するために注射器を使用しています。2つの部分を5分間保持し、最初に設定します。同じ手順を繰り返して、もう一方の外壁をベースにアタッチします。
次に、2つの内壁を取り付け、一度に1つずつ、ベースにアクリルセメントを付けます。最後に、シリンジを使用して、外壁と内壁によって形成されている角にセメントの小さく安定したビーズを直接適用します。マウスを4人のグループに分けて習慣化セッションを開始し、個々のクリーンホールディングケージに収容します。
次に、1組のマウスを試験室に持ち込み、少なくとも30分間順応させます。順応した後、ビデオの録画を開始します。リリースコーナーの壁に面したアリーナに各マウスを置き、マウスが6分間自由にアリーナを探索できるようにします。
その後、ビデオの録画を停止し、試験間間隔中にマウスを清潔なケージに戻します。嗅覚の手掛かりを最小限に抑えるために70%エタノールで拭くなど、動物施設推奨の洗浄方法ですべてのアリーナを清掃してください。最後に、合計3回の習慣セッションを完了した後、すべてのマウスを自宅のケージに戻します。
24時間後、同じマウス群を試験室に持ち込み、前日の習慣セッションの前に行ったように、少なくとも30分間試験室に順応できるようにします。アリーナに配置された2つのオブジェクトを使用してトレーニングトライアルを実施します。2つの非リリースコーナーから6センチメートル離れた両面テープを持つオブジェクトを貼り付け、アリーナでバランスが取れています。
マウスがアリーナとオブジェクトを10分間自由に調査できるようにします。その後、ビデオ録画を停止します。マウスを清潔なケージに20分間戻し、エタノールでエリアをきれいにします。
次に、オブジェクトロケーションタスクOLTを実行するには、トレーニングトライアルで使用されているオブジェクトの1つを新しい非リリースコーナーに移動し、そのコーナーの各壁から6センチメートル離れたところで、両面テープでオブジェクトを貼り付けます。前述のように、領域内のマウスの同じビデオ録画を10分間繰り返します。最後に、新しい物体認識タスクNORTを実行するには、OLT中に移動されなかったオブジェクトを新しいオブジェクトに置き換え、角の2つの壁から6センチメートルの新しい物体を両面テープで貼り付けます。
前述のように、領域内のマウスの同じビデオ録画を10分間繰り返します。OLTの間、オブジェクトの位置のメモリは、移動後の平均で、オブジェクトとの時間が大幅に長いマウスのグループによって反映されます。これは、差別指数の増加としても表すことができます。
NORTでは、物体の位置の記憶は、マウスの支出のグループによって反映され、平均して、新しい対象物を用いた調査時間の50%を大幅に超える、または0より有意に大きい差別指数を示す。マウスが固有の優先を持たないオブジェクトを選択することが重要です。例えば、サンプルサイズが4のパイロットテストでは、マウスはオブジェクトBと対比した場合、オブジェクトAとの調査時間の50%未満を費やす傾向を示しました。の間に、すべてのオブジェクトとアリーナを徹底的に清掃することを忘れないでください。
この方法では、研究者が手動で採点したり、商用ソフトウェアを使用してオブジェクト調査を行うことができます。ソフトウェアは先行コストが高くなりますが、一度調整すると、長期的に時間と財源を節約できます。
概要
この記事では、マウスの物体位置と新しい物体の認識行動テストを実施するための詳細なプロトコルを提示します。効果的なデータ収集と分析のために必要な機器と手順の設計、構築、および実行について説明しています。
主要な研究構成要素
科学分野
- 神経科学
- 行動テスト
- 記憶研究
背景
- 記憶の調節を理解することは神経科学において重要です。
- トランスジェニックノックアウトマウスは、記憶における特定のタンパク質の役割を研究するために使用されます。
- 費用対効果の高い方法は、広範な研究室での使用に不可欠です。
- 適切なテストアリーナの構築は、信頼できる結果を得るために重要です。
研究目的
- マウスの記憶テストのためのプロトコルを確立すること。
- 記憶を評価するための行動タスクの有効性を評価すること。
- テスト機器の構築のためのガイドラインを提供すること。
使用方法
- アクリルシートとセメントを使用してテストアリーナを構築すること。
- テスト環境にマウスを順応させるための順応セッション。
- 記憶評価のための物体位置タスク（OLT）と新しい物体認識タスク（NORT）。
- テスト中のマウスの行動のビデオ録画を通じたデータ収集。
主な結果
- マウスはOLTで移動した物体に対して調査時間を増加させます。
- NORTでは、マウスは新しい物体に対して馴染みのある物体と比較してより多くの時間を費やします。
- 有効な結果を得るためには、物体とアリーナの適切な清掃が重要です。
- ソフトウェアを使用して物体調査を採点し、分析時間を節約できます。
結論
- このプロトコルは、マウスの記憶を評価するための信頼できる方法を提供します。
- テスト機器の慎重な構築と清掃は結果の妥当性を高めます。
- この方法は様々な研究室にとってアクセス可能で費用対効果が高いです。
よくある質問
Executive Industry Relevance
Cost-effective behavioral assays enable scalable memory phenotyping in mouse models, supporting early-stage target validation for CNS therapeutics. By reducing financial barriers to robust cognitive testing, this method enhances predictive confidence in preclinical de-risking strategies. It facilitates translational continuity from target engagement to functional outcomes in discovery pipelines.
Strategic Applications in Biopharma R&D
Early Discovery & Target Validation
- Scientific Value: Interrogates therapeutic hypotheses regarding memory-related protein function in transgenic models.
- Operational Value: Enables rapid, low-cost assessment of cognitive phenotypes across multiple genetic backgrounds.
- Predictive Value: Supports target de-risking by linking molecular perturbations to measurable memory deficits.
Screening & Assay Development
- Assay Readiness: Provides standardized, reproducible arenas for consistent object exploration metrics.
- Quantitative Output: Generates discrimination indices and investigation time ratios for objective data analysis.
- Scalability: Compatible with video tracking software for high-throughput behavioral scoring.
Translational & Preclinical Research
- Disease Relevance: Evaluates hippocampal-dependent spatial learning and prefrontal/cortical non-spatial memory systems.
- Translational Continuity: Bridges target validation with phenotypic assessment in preclinical models.
- Risk-Adjusted Decisions: Informs go/no-go criteria based on memory performance in genetic or pharmacological models.
Pipeline & Workflow Integration
This method integrates into discovery biology workflows as a functional readout following target modulation, enabling hypothesis-driven screening before lead optimization.
- Discovery Biology: Tests memory-related hypotheses by assessing spatial and object recognition memory after genetic or pharmacological intervention.
- Screening: Delivers standardized, quantifiable behavioral outputs suitable for assay validation and compound screening readiness.
- Analytics: Produces discrimination indices and time-based metrics that support comparative condition analysis and effect size determination.
- Translational Research: Aligns with biomarker strategies by linking behavioral outcomes to neural circuit function in disease-relevant systems.
- Enterprise Reuse: Establishes a reusable, cost-efficient platform for longitudinal memory assessment across multiple projects.
Operational & Enterprise Impact
- Scientific Value: Reduces mechanistic ambiguity in memory-related target validation through ethologically relevant behavioral phenotyping.
- Operational Value: Ensures standardization, reproducibility, and low per-assay cost via accessible materials and straightforward construction.
- Strategic Value: Improves go/no-go decision confidence by providing reliable cognitive endpoints early in the discovery process.
- Portfolio Impact: Enables risk-adjusted prioritization of targets based on validated memory phenotypes in mouse models.
Implementation Considerations
- Requires expertise in behavioral neuroscience and proper handling of mice to minimize stress and bias.
- Depends on acrylic fabrication skills, video recording equipment, and cleaning protocols to control olfactory cues.
- Necessitates cross-team standardization of object selection, arena setup, and scoring methods for reproducible results.
- Involves adaptation considerations when translating protocols across different mouse strains or environmental conditions.
- Limited by manual scoring variability unless paired with calibrated tracking software for objective, long-term analysis.
