분할 Ubiquitin 기반 막 효모 두 하이브리드 (신화) 시스템 : 단백질 단백질 상호 작용을 확인을위한 강력한 도구

요약

신화는 모델 유기체 Saccharomyces cerevisiae의 표현 단백질 사이의 과도 안정적인 상호 작용의 민감한 감지 수 있습니다. 그것은 성공적으로 높은 처리량 방법으로 상호 작용하는 파트너를 식별하기 위해 외인성 및 효모 필수 막 단백질 연구에 적용되었습니다.

초록

통합 멤브레인 단백질의 기본적인 생물 학적 및 임상 중요성은 전체 길이 transmembrane 단백질에 대한 단백질 - 단백질 상호 작용 (PPI)의 높은 처리량을 확인을위한 효모 기반 시스템의 개발을하라는 메시지가 나타납니다. 이를 위해 우리 실험실 분할 - ubiquitin 기반 막 효모 두 하이브리드 (신화) 시스템을 개발했습니다. 이 기술을 사용 일시적 안정 단백질 상호 작용의 민감한 검출을 허용

프로토콜

1. 참고 자료

단백질 - 단백질 상호 작용 (PPIs)는 모든 세포 공정을 적용에 관련된 기본 빌딩 블록입니다. 따라서, 그것은 모든 상호 작용이 긴밀이 생물 학적 균형의 변화는 일반적으로 질환과 암 세포 변환의 역할을 같이 세포 항상성을 유지하기 위해 규제하는 것이 필수적입니다. 그들은 복잡한 신호 폭포를 시작하고, 관련된 문제와 같은 의료 분야의 최근 의의되었습니다 의약품 등 다양한 분자의 수출입을 모두 중재 수있는 멤브레인 관련 단백질은 단백질의 가장 생물학적으로 중요한 클래스 사이 아르 약물 저항은 점점 일반지고 있습니다. 이 단백질 클래스의 복잡도에 대한 통찰력을 확보하는 것은 그들의 상호 작용하는 파트너의 확인이 필요합니다. 같은 파트너를 발견하는 것은 도전 입증되었습니다, 자주 그것이 각 막 - 바운드 단백질에 최적화된해야 거친 조건을 필요로 [1].

통합 멤브레인 단백질의 기본적인 생물 학적 및 임상 중요성은 전체 길이 transmembrane 단백질에 대한 PPI의 높은 처리량을 확인을위한 효모 기반 시스템의 개발을하라는 메시지가 나타납니다. 이를 위해, 우리는 분할 - ubiquitin 기반 막 효모 두 하이브리드 (신화) 시스템 [2-4]을 개발했습니다. 이 도구는 일시....

토론

신화는 전체 길이 막 단백질과 cytosolic 또는 멤브레인 - 바운드 파트너 간의 상호 작용의 신분을 허용 최초의 높은 처리량 시스템입니다. 그것은 생물 [3-7]의 범위에서 막 단백질을 연구하는 데 사용되었습니다. 단백질의 - 관심이 신화에서 공부 의무가되도록하기 위해 시시콜콜 따지는해야 할 수 있습니다 구체적인 내용은, 그러나,있다.

대부분의 멤브레인 - 바운드 단백질은 이후 성숙 단백질을 생산하기 위해 죽습니다 신호 순서를 통해 플라즈마 막로 이동합니다. 이 시퀀스는 유기체 특정이며 신호 순서는 알 수없는 남아 있기 때문에 그것은 누룩으로 표현 때 원시 신호 순서는 단백질의 - 관심 잘못 지방화를 발생시킬 수 있습니다. 이 문제를 회피하기 위해, 우리는 암컷의 팩터 알파 (MATα)에서 파생된 효모 신호 시퀀스에 융합되는 이러한 특정 단백질을 설계. 이 펩티드 순서 (MFα - SS 소위) 효모 플라스마 막에 단백질을 다시 localizes 그리고 중요한 것은, 효모.......

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
폴리에틸렌 글리콜 (PEG3350)	BioShop Canada	PEG335
리튬 아세테이트 이수화물	BioShop Canada	LIA001
X-Gal (5-Bromo-4-Chloro-3-Indolyl-b-D-galactopyranoside)	BioShop Canada	XGA001
N',N-dimethyl formamide	BioShop Canada	DMF 451
3-amino-1,2,4-triazole (3-AT)	BioShop 캐나다	ATT124
인산나트륨 이염기성	BioShop 캐나다	SPD307
인산나트륨 일염기	성 Fisher Scientific	BP329-500
연어 정자 DNA	VWR 국제	CA80601-120
D-Glucose	BioShop 캐나다	GLU501
LB 육수 LENOX	BioShop 캐나다	LBL405
효모 질소 기반	BioShop Canada	YNB406
효모 추출물	BioShop Canada	YEX401
펩톤	BD Biosciences	211677
Bio-Tryptone	BioShop Canada	TRP402
아데닌 황산염	BioShop Canada	ADS201
L-Uracil	BioShop Canada	URA241
L-트레오닌	BioShop 캐나다	THR002
L-히스티딘	BioShop 캐나다	HIS200
L-메티오닌	BioShop 캐나다	MET222
L-발린	BioShop 캐나다	VAL201
L-페닐알라닌	BioShop 캐나다	PHA302
L-이소류신	BioShop 캐나다	ISO910
L-티로신	BioShop 캐나다	TYR333
L-루신	BioShop 캐나다	LEU222
L-아르기닌	BioShop 캐나다	ARG006
L-트립토판	Fisher Scientific	BP395-100
L-라이신	BioShop 캐나다	LYS101
L-알라닌	Fisher Scientific	BP369-100
Agar	BioShop Canada	AGR001
소다 라임 Galss 구슬	Biospec 제품	11079105
염화나트륨	BioShop 캐나다	SLD002