동물 모자 overexpressing 유전자 제품 (들)은 개발의 측면에 이식 아르 Xenopus laevis 배아는 순서대로 조직이 결정 여부를 설정합니다.
이 콘텐츠를 보려면 JoVE 구독이 필요합니다. 로그인하거나 오늘 무료 평가판을 시작하세요.
이 논문에서
요약
초록
많은 단백질은 배아 발달의 이중 역할을한다. 특정 조직의 세포 운명 결정을 규제 이들은 또한 배아의 큰 지역의 발전에 영향을 줄 수 있습니다. 이것은 분석하기 어려운 특정 조직에서의 역할을 정의합니다. 예를 들어,
프로토콜
부 I.는 ACT 분석을위한 셋업
- 클로로포름 정화 방법 (; 응용 Biosystems / 앰비온, 오스틴, TX 예 mMessage mMachine 키트) : 자신의 페놀을 사용하는 것과 제조 업체에 의해 제안 주사 뒤덮인 RNA를 생성합니다. 형광 단백질을 인코딩 RNA는 추적으로 사용됩니다. 우리도 노란색 형광 단백질 (YFP) 또는 pCS2 + 발현 벡터에 cDNA mCherry 5, 고쳐 쓰다.
- micropipette의 풀러를 사용하는 테이퍼 유리 도움말을 형성 borosilicate 유리 모세관 튜브를 당겨. 우리는 서터 Micropipette 풀러, P - 97 (셔터 인 스트 루먼트 주식 회사, 노바토, CA)를 사용하는 등 이전에 6 설명했다.
- KCl 20 MM,, 20 MM CaCl 2; 50 MM의 HEPES, 1 M NaCl, 산도 7.5 조정, autoclaved과에 저장된 10 X 마크의 수정 링거스 (MMR) 솔루션 주식 (10 MM MgCl 2 표 1에서 살균 솔루션을 확인하십시오 RT).
- 남자 개구리에서 testes 격리하고 1X MMR / gentamicin (50 μg / ML의 gentamicin 황산, B....
액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
토론
이 비디오에서는, 우리는 동물 캡 이식 분석을 만들 재배열 Xenopus의 생물학 자에 의해 사용 고전 기법, 우리의 버전을 증명하고있다. 상온에서, Xenopus의 배아는 단계 9 15 매우 신속하게 개발할 수 있습니다. 14에 그들을 배치함으로써 ° C, 배아의 발달 속도가 느려졌되고 더 많은 이식 한 실험에서 수행할 수 있습니다. 이 세 단계 (> 43분의 42)에 배아를 성장하기 위해 필요한 경우, 우리는 나이 tadpoles에서 주입된 형광 단백질 신호 페이드 때문에, 유전자 변형 비너스 YFP 동물을 사용하는 것이 좋습니다. 우리는 EFTFs 또는 노긴은 눈 같은 조직 형태 지정을 표현하는 것을 동물 모자 조직을 수립하는 분석를 사용합니다. 이 분석은 관심의 유전자가 (S) 특정 세포의 운명을 결정하는 필요 여부를 설정하는 간단한 테스트로 사용할 수 있습니다.
....액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
감사의 글
이 작품은 실명 (경력 개발 MEZ 및 ASV로 수상 및 안과의학과에 제한 부여), E. 마틸다 지글러 재단 (MEZ 및 ASV)와 국립 안과 연구소 / NIH (MEZ 방지 연구의 교부금에 의해 지원되었다 , 보조금 R01EY015748 및 R01EY017964).
....액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| mMessage mMachine SP6 키트 | Applied Biosystems | AM1340 | |
| 붕규산염 모세관 튜브 (1.0mm OD x 0.5mm ID) | FHC, Inc. | 27-30-1 | |
| Sutter 마이크로피펫 풀러 | Sutter Instrument Co. | P-97 | |
| Gentamicin sulfate [50 mg/ml] | Fisher Scientific | BW17-528Z | |
| Sylgard/elastomer 키트 1.1lb | Fisher Scientific | NC9644388 | |
| 60 x 15 mm 폴리스티렌 페트리 접시 | USA Scientific, Inc. | 8609-0160 | |
| 인성 융모성 성선 자극 호르몬 | Intervet Inc. | 22219 | |
| Pico-Injector 미세주입 시스템 | Harvard Apparatus | 650003 | |
| Torrey Pines Scientific ECHOtherm 배양기 | Fisher Scientific | 11-680-21 | |
| 전이 피펫 | Krackeler Scientific, Inc. | 6290-20635A | |
| Dumostar #5 포셉 | Fisher Scientific | 11295-10 |
참고문헌
- Smith, W. C., Harland, R. M. Expression cloning of noggin, a new dorsalizing factor localized to the Spemann organizer in Xenopus embryos. Cell. 70, 829-840 (1992).
- Lamb, T. M. Neural induction by the secreted polypeptide noggin. Science. 262
액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
재인쇄 및 허가
