Summary
Счетчик скипетр сотовый представляет собой портативный автоматизированные устройства, которые можно использовать для подсчета клеток, контролировать диаметр клетки и объема, а быть использована для проверки состояния здоровья и качества клеточных популяций от одной культуры к другой.
Abstract
Подсчет клеток часто необходимо, но утомительный шаг в культуре клеток лабораторных условиях. В соответствии концентрации клетка обеспечения экспериментальной воспроизводимости и точности. Клеток очень важны для мониторинга здоровья клеток и скорость пролиферации, оценки увековечение или преобразования, посев клеток для последующих экспериментов, трансфекции или инфекции, и подготовка к клеточной анализов. Важно, чтобы количество клеток быть точной, последовательной и быстро, в частности для количественных измерений клеточных ответов.
Несмотря на это необходимо для обеспечения скорости и точности подсчета клеток, 71% опрошенных 400 исследователей, которые считают 1 клеток с использованием гемоцитометра. Хотя hemocytometry стоит недорого, это трудоемкий и с учетом смещения пользователя и неправильного использования, что приводит к неточным рассчитывает. Hemocytometers изготовлены из специального оптического стекла, на котором клеточные суспензии, которые загружаются в указанных объемах и подсчитывали под микроскопом. Источники ошибок в hemocytometry относятся: неравномерное распределение ячейку в образце, слишком много или слишком мало клеток в образце, субъективных решений, является ли данная ячейка находится в пределах определен подсчета области, загрязнение гемоцитометра, пользователь-пользователь изменения , и изменение гемоцитометра скорость наполнения 2.
Чтобы облегчить скуку, связанных с ручным подсчетом, 29% исследователей подсчет клеток с использованием автоматизированного подсчета клеток устройств, сюда относятся видения основе счетчиков, системы, которые обнаруживают клетки, используя принцип Coulter, или проточной цитометрии 1. Для большинства исследователей, основным препятствием к использованию автоматизированной системы цен, связанных с этими большими настольный документами 1.
Счетчик скипетр ячейка автоматизированных портативное устройство, которое предлагает автоматизации и точности подсчета Coulter при относительно низкой стоимости. Система использует принцип Coulter импеданса основе регистрации частиц 3 в миниатюрном формате, используя сочетание аналогового и цифрового оборудования для измерения, обработки сигналов, хранения данных и графическим дисплеем. Одноразовые наконечник спроектирован с microfabricated, клеточно-зону обнаружения, которая позволяет дискриминацию по размеру клеток и их объем на суб-микронных и суб-пиколитра разрешения. Расширенный с точностью обработки жидких каналов и электроники, счетчик скипетр ячейки отчеты клеточной популяции статистику графически отображаются в виде гистограммы.
Protocol
1. Важность подсчета клеток
- Подсчет клеток необходимы, но утомительный шаг в культуре клеток лабораторных условиях.
- В соответствии концентрации клетка обеспечения экспериментальной воспроизводимости и точности.
- Клеток очень важны для мониторинга здоровья клеток и скорость пролиферации, оценки увековечение или преобразования, посев клеток для последующих экспериментов, трансфекции или инфекции, и подготовка к клеточной анализов.
- Несмотря на потребность в скорости и точности подсчета клеток, 71% из 400 опрошенных исследователями подсчет клеток с использованием гемоцитометра. Хотя hemocytometry стоит недорого, это трудоемкий и с учетом смещения пользователя и неправильного использования, что приводит к неточным рассчитывает.
- Источники ошибок в hemocytometry относятся: неравномерное распределение ячейку в образце, слишком много или слишком мало клеток в образце, субъективных решений, является ли данная ячейка находится в пределах определен подсчета области, загрязнение гемоцитометра, пользователь-пользователь изменения , и изменение гемоцитометра скорость наполнения.
- Чтобы облегчить скуку, связанных с ручным подсчетом, 29% исследователей подсчет клеток с использованием автоматизированного подсчета клеток устройств. Однако для большинства исследователей, цена, связанные с этими большими настольный инструментов препятствием для их использования.
- Счетчик скипетр ячейка автоматизированных портативное устройство, которое предлагает автоматизации и точности подсчета Coulter при относительно низкой стоимости.
- Система использует принцип Coulter импеданса основе регистрации частиц в миниатюрном формате, используя сочетание аналогового и цифрового оборудования для измерения, обработки сигналов, хранения данных и графическим дисплеем.
- Одноразовый датчик спроектирован с microfabricated, клеточно-зону обнаружения, которая позволяет дискриминацию по размеру клеток и их объем на суб-микронных и суб-пиколитра разрешения.
- Расширенный с точностью обработки жидких каналов и электроники, счетчик скипетр клетка графически отображает статистику клеточной популяции в виде гистограммы.
2. Подготовка одной клеточной суспензии для подсчета
- Чтобы использовать счетчик скипетр клетке, начинают путем разбавления суспензии отдельных клеток, клеток, в фосфатным буферным раствором. Концентрация 10,000-500,000 клеток на мл является оптимальным.
- Передача 100 мкл разбавленного клетки 1,5 трубки микроцентрифужную мл.
3. Выполнение клеток использованием скипетр
- Включите счетчик ячейки скипетр, нажав и удерживая переключатель на задней панели прибора и ждать инструкциям на экране появится.
- В ответ на запрос, прикрепите датчик к концу скипетра блок с электродами зондирования панель была обращена к передней части прибора.
- Скипетр датчики состоят из литой точность выборки камера, с электронным зоны зондирования и интегрированные ячейки зондирования электродами. Датчики позволяют различать размер ячейки на суб-микронного разрешения и объема клеток на суб-пиколитра разрешения.
- В соответствии инженерных датчика гарантирует, что равные объемы образца подсчитываются и точные измерения размера сделаны.
- Как только датчик подключен, выполнить каждый шаг процесса подсчета согласно инструкциям на экране следующим образом:
- Когда на экране гласит: "Удерживая поршень, чтобы начать", нажмите поршень. Экран будет читать "погрузить датчик". Погрузите датчик в раствор суспензии клеток и отпустите поршень для аспирации клеточной суспензии в датчик.
- Поршень действует как электрический сигнал и будет опираться образца плюс мертвый объем в датчик. Скорость и точность погружения не имеет значения, как это происходит с пипеткой. Этот процесс займет несколько секунд. Когда все будет готово, прибор подаст звуковой сигнал, и "Sample загружен" будет отображаться на экране.
- Как только образец загружается в датчик она проходит через зону обнаружения для оценки размеров клеток и их объема, то через микроканалов. После 50 мкл образца считается датчик сообщает инструмент, чтобы остановить подсчета.
- После отсчета завершения экране прибора будет читать "Граф Complete. Удалите датчик и выбросить". Следуйте строки, а также удалить датчик.
- Прибор будет отображать гистограмму размера ячейки и диаметра на экране, а также концентрации клеток на мл.
4. Анализ данных
- После отсчета, является полной и гистограмма отображается на инструмент, применяется ворота, нажав переключатель. Выберите "авто стробирования" или "использование последнего" либо автоматически установить ворота на основе гистограммы профиль, или использовать ворота от предыдущего кол-ва.
- Независимо от выбора, ворота можно вручную переместить на тонкой настройки данных. Нажмите на переключатель еще раз для выбора левого ворота и прокрутки, чтобыggle двигаться ворот по желанию.
- Затем нажмите переключатель еще раз для включения права ворота и прокрутки переключения на место правой ворот. Нажмите кнопку еще раз; новые концентрации клеток, средний объем клетки и диаметр будут отображаться.
- Переключение может быть перемещена в любую сторону, чтобы переключить дисплей между датой, временем, средний размер ячейки, и средний объем клеток.
- До 72 гистограммы могут быть сохранены на сам инструмент. Для загрузки данных в персональный компьютер, приложите прибор через порт USB кабель на экране дисплея.
- На компьютере, дважды щелкните на Прикладное программное обеспечение скипетр, чтобы запустить программу нажмите кнопку "подключиться". Все считается автоматически порт к программному обеспечению.
- Программное обеспечение скипетр приложение отображает гистограмму подробно распределение населения по культуре в любом объеме или диаметра. Скачанные файлы могут быть экспортированы в Microsoft Excel, где исходные данные будут отображаться в бункерах указанных диаметров ячейку или томов.
5. Представитель Результаты
- Девятнадцать различных клеточных линий были подготовлены для подсчета и теоретические начала концентрации определяется с помощью счетчика Coulter. Эти клеточные суспензии, затем разбавить для получения клеточных суспензий на теоретических концентрации клеток.
- Счетчик скипетр ячейка затем используется для определения концентрации клетка. На рисунке 1 показаны 5 разведения, которые были измерены в течение 5 представителем клеточных линий наряду с теоретической концентрации клеток.
- Высокой линейности, как указано R2 ценностей, показывает, что скипетр подсчета надежный метод клеточных линий испытания, через широкий линейный диапазон.
- Общей относительной точностью скипетр подсчета показано на рисунке 2, в которой данные, полученные из подсчета скипетр сравниваются с рассчитывает получить из подсчета Коултер.
- Журнал считает скипетр ячейка заговор против журнала насчитывает Coulter, и показывает, что, по всем клеточных линий испытания, скипетр рассчитывает матча Coulter рассчитывает.
- Графы 19 клеточные линии были проведены с использованием Z2 Coulter Counter, счетчик скипетр клетки, автоматизированных видение основе счетчика, таких как Vi-Cell или Бесчисленные системы, и hemocytemeter.
- Графы были выполнены в соответствии с инструкциями производителя, используя те же ячейки, начиная подвески и одинаковые разведений. Результаты, показанные на рисунке 3, показывают, что клетка концентрации измеряется скипетр подсчета точно соответствовать теоретической концентрации клетка с высокой линейности.
- Процентов коэффициент вариации, или CV, была рассчитана для каждого разведения каждой клеточной линии для каждой системы подсчета. Рисунок 4 показывает среднее резюме% по сравнению с 19 клеточных линий по концентрации клеток и метод подсчета.
- В рабочем диапазоне, счетчик скипетр ячейка более точным, чем видение, основанное подсчета гемоцитометра, отображения небольших стандартных отклонений и меньшие средние коэффициенты вариации.
- Скипетр подсчета в десять раз быстрее, чем hemocytometry и быстрее, чем другие автоматические счетчики тоже. В рис. 5, SF9, MCF7, и HEK293 насчитывалось используя методы, описанные в этом видео.
- Среднее время, необходимое для измерения концентрации клеток был записан. Обратите внимание, что hemocytometry был выполнен только один раз за образец.
- Скипетр делает измерений на основе размера ячейки. Таким образом, любые изменения в клеточной морфологии могут быть захвачены в гистограмме. Здоровый культур дисплей хорошо колоколообразной гауссовского распределения, в то время нездоровых клеток, лизировать, и вызывают сдвиг гистограммы влево (рис. 6, слева).
- Аналогичным образом, когда население 50% мертвых клеток были смешаны с 50% живых клеток, гистограмма сдвиги наблюдались (рис. 6, справа).
Discussion
Сравнение производительности счетчик ячейки скипетр с результатами других методов подсчета, приходим к выводу, что этот новый портативный, автоматизированные счетчик клетка обеспечивает точный, быстрый и надежный телец в широком диапазоне. Функциональность скипетр подсчета является результатом точных инженерных технологий встроена в наконечник датчика и сложные приборы подсчета основанного на принципе Коултер. Качества работы предполагает скипетр учета, как метод для увеличения скорости и повышения воспроизводимости клеточных анализов. Карманный формат позволяет быстро скуки свободного подсчета прямо на капот культуре клеток.
Disclosures
Кэтлин Ongena, Chandreyee Дас, Джанет Л. Смит, Соня Гиль, и Грэйс Джонстон работает на Millipore, которая производит инструменты, используемые в этой статье.
Materials
Name | Company | Catalog Number | Comments |
Scepter 2.0 Handheld Automated Cell Counter with 40 μm Scepter Sensors | EMD Millipore | PHCC20040 | |
Scepter 2.0 Handheld Automated Cell Counter with 60 μm Scepter Sensors | EMD Millipore | PHCC20060 | |
Scepter Sensors, 60 μm | EMD Millipore | PHCC60050 | 50 Pack of sensors |
Scepter Sensors, 40 μm | EMD Millipore | PHCC40050 | 50 Pack of sensors |
Universal Power Adapter | EMD Millipore | PHCCPOWER | |
Scepter O-Ring Kit | EMD Millipore | PHCCOCLIP | 2 O-rings and one filter cover |
References
- Barghshoon, S. Cell Counting Survey. , Millipore. (2009).
- Tucker, K. G., Chalder, S., al-Rubeai, M., Thomas, C. R. Measurement of hybridoma cell number, viability, and morphology using fully automated image analysis. Enzyme Microb Technol. 16 (1), 29-35 (1994).
- Houwen, B. Fifty years of hematology innovation: the Coulter principle. , Medical Laboratory Observer. (2003).