細胞間の高分子輸送アッセイプランタで微粒子銃砲撃を活用
Summary
植物細胞の間に高分子の人身売買は、一過性の関心の蛍光タグ融合タンパク質を発現し、共焦点顕微鏡によるその内および細胞間の分布を分析することによって評価することができます。
Abstract
ここで、我々は、 植物体中の細胞間の高分子輸送の範囲を検出し、評価するために簡単かつ迅速にプロトコルを提示する。このプロトコルでは、関心の蛍光標識タンパクが一時的にそのエンコーディングのDNA構築物の遺伝子銃送達後の植物組織に発現しています。タグタンパク質の内と細胞間の配布は、共焦点顕微鏡で分析される。我々は、アッセイにステップバイステップのプロトコルを提供する、詳細にこの技術を説明し三植物種のsymplasticタンパク質輸送の範囲、 シロイヌナズナ 、 タバコbenthamianaとNを評価するアナタバカム （タバコ）。
Protocol
背景植物細胞間の接続を介して高分子のSymplastic輸送、原形質連絡は、多くの植物病理学者と生物学者のためのものです。例えば、いくつかのウイルスタンパク質は、ウイルスの動き1-3を有効にするplasmodesmalサイズ排除限界を調節することが知られている。また、それらの重要な発達の規制当局の間でいくつかの内在性タンパク質は、非細胞自律的に4を機?…
Discussion
symplastic輸送アッセイの成功の鍵は、統計的に有意かつ容易に検出可能信号クラスターの生産を可能にする高い形質転換効率を、得ることである。これは健康な、堅牢な植物から収穫された葉を使用して、そして純粋な、そして濃縮したDNAの調製により被覆された金粒子を準備達成することができます。
同じ成長段階で葉を使用しても、アッセイの信頼性にとって不可欠…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
私たちの仕事は、NIH / NIGMS、NSF、USDA / NIFA、とBARDからVCへの補助金によってサポートされています。
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Gold microparticles, 1.0 μm in diameter | Bio-Rad | 165-2262 | ||
| Gold microparticles, 0.6 μm in diameter | Bio-Rad | 165-2263 | ||
| Spermidine | Sigma | S0266-1G | ||
| Tefzel tubing | Bio-Rad | 165-2441 | ||
| Helios cartridge preparatory station | Bio-Rad | 165-2420 | ||
| Tubing cutter | Bio-Rad | 165-2422 | ||
| Helios gene gun | Bio-Rad | 165-2432 | ||
| Helium gas regulator | Bio-Rad | 165-2413 |
References
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Cite This Article
Ueki, S., Meyers, B. L., Yasmin, F., Citovsky, V. A Cell-to-cell Macromolecular Transport Assay in Planta Utilizing Biolistic Bombardment. J. Vis. Exp. (42), e2208, doi:10.3791/2208 (2010).