각막은 혈관 조직이 부족한다는 점에서 고유합니다. 그러나, 강력한 혈관의 성장과 생존은 강력한 angiogenic 요인에 의해 각막에 유도된 수 있습니다. 따라서 각막이 우리와 함께 angiogenic 연구 가치있는 도구를 제공할 수 있습니다. 이 프로토콜은 각막 포켓 분석 방법과이 모델을 사용 angiogenic 요인에 의해 유발 angiogenesis을 평가의 마우스 모델을 수행하는 방법을 보여줍니다.
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이 논문에서
요약
초록
정상 각막은 혈관 조직이 분명하다. 그러나 혈관이 강력한 angiogenic 요인이 1을 투여하는 각막의 성장과 생존을 유도하실 수 있습니다. 이 독특한는 각막 포켓 분석 angiogenesis 연구에 대해 가장 많이 사용되는 모델 중 하나가되었다. 각막은 세포의 여러 레이어를 작곡. 그것은 angiogenic 효과 2,3를 조사하기 위해 각막에 대한 관심의 angiogenic 요인을 포함한 펠렛를 포함하는 것이 가능합니다. 여기, 우리는 (I)는 angiogenic 요인 함유 펠렛 (II)을 (III)의 관심 angiogenic 요인에 의해 유발 angiogenesis를 분석 각막에 펠렛을 포함을 생산하는 방법의 단계 시범에 의해 단계를 제공합니다. 기본 fibroblast의 성장 인자 (bFGF)가 가장 강력한 angiogenic 요인 4의 하나로 알려져 있기 때문에, 그것은 각막에 angiogenesis를 유도 여기에 사용됩니다.
프로토콜
사용된 모든 장비와 시약이 멸균됩니다. 프로토콜은 동물 케어 승인 및 (동물 연구 프로토콜 네이 - 553) 네이 / NIH에서위원회 (ACUC)를 사용하고, NIH의 지침과 규정에 따라 수행였습니다.
1. angiogenic 요인 함유 알약을 생산
이 부분에 관심 angiogenic 요인을 포함하고있는 알약을 준비하고 있습니다.
- 10 % (W / V) PBS로 sucralfate 솔루션을 확인하십시오. 실온 하에서 보관하십시오.
- 12% (W / V) 절대 에탄올과 쓰임새 HEMA하십시오. 실온 하에서 보관하십시오.
- 1 μg / μl bFGF 솔루션을 확인하십시오. -80에 저장 ° C.
- 50 알약을 만들기 위해 sucralfate와 bFGF 주식 솔루션 4 μl의 1μl 폴리 - HEMA 5 μl, 철저하게 소용돌이를 섞는다.
- 배양 접시에있는 깨끗한 parafilm 조각을 장소, 조직 문화 후드에서 15 분 자외선 아래로 노출. 한 펠렛에 대한 parafilm에 솔루션 혼합물의 0.2 μl를 버려라. 따라서 솔루션 혼합물의 10 μl 50 알약을 얻을 것입니다. 1-2시간 위해 상온에서 산탄이 건....
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토론
마우스 각막 포켓 분석 모델을 먼저 Muthukkaruppan VR 및 아우어 바흐 R 6 1979 년에 설명했다. 자세한 프로토콜은 다른 실험실 2,3,7,8에 의해 공개되었습니다. 저희 연구실은 몇 년 4 수정 및 우리의 연구에이 방법을 사용하고 있습니다. 마우스 각막 포켓 검정 좋은 재현성있는 비교적 간단한 모델입니다. 이 모델의 또 다른 장점은 각막이 정상적으로 혈관 부족 때문에,이 분석의 배경 최소 금액이있다는 것입니다. 따라서,이 모델은 일반적으로 다른 요소와 분자의 angiogenic 효과를 연구하기 위해 필드로 사용됩니다. 이러한 쥐 및 토끼 같은 큰 동물의 눈으로 비교, 마우스 눈은 작고 다루기 어렵습니다. 특히 각막의 주머니를 만들고 펠렛을 삽입의 과정 동안,이 모델을 수행할 때 특별한주의가 따라서 필요합니다. 나이프는 정확하게 제어 방식으로 처리되어야 그것이 소중히 각막을되지 않습니다.
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공개 사항
관심 없음 충돌 선언하지 않습니다.
감사의 글
우리의 연구는 NIH, 국립 안과 연구소의 교내 연구 프로그램에 의해 지원됩니다.
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재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| 장비 | 회사 | 카탈로그 번호 | |
| 해부 현미경 | 세계 정밀 계측기 | PZMIV - BS | |
| 본 Graefe 백내장 나이프 (1.5x25mm 블레이드, 평면) | 앰블러 외과 | 3401E | |
| 더몬트 # 5 포셉 | 파인 과학 도구 | 11252-50 | |
| 슬릿 램프 | 자이스 혈구 | 30 SL - M |
표 1. 장비
| 시약 | 회사 | 카탈로그 # | 댓글 |
|---|---|---|---|
| bFGF (기본 fibroblast의 성장 인자) | PEPROTECH (주) | 100 - 18B | |
| Sucralfate (자당 octasulfate - 알루미늄 복합) | 시그마 | S0652 | PBS에서 10 % |
| 폴리 - HEMA (폴리 (히드록시 에틸 메타 크릴 레이트 2)) | 시그마 | P3932 | 에탄올에 12% |
표 2. 시약 및 재료
참고문헌
- Cao, Y., Linden, P., Shima, D., Browne, F., Folkman, J. In vivo angiogenic activity and hypoxia induction of heterodimers of placenta growth factor/vascular endothelial growth factor. The Journal of clinical investigation. 98, 2507-2511 (1996).
- Rogers, M. S., Birsner, A. E., D'Amato, R. J.
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