Summary
הטכניקה המבוססת לחסן xenografts orthotopic פולשנית העיקרית לסרטן שלפוחית השתן דורשת laparotomy והתגייסות של שלפוחית השתן. הליך זה גורם תחלואה משמעותית בעכברים, הוא מאתגר מבחינה טכנית ודורש זמן רב. לפיכך, אנו פיתחנו דיוק גבוה, בגישה מלעורית ניצול הנחיית אולטרסאונד.
Abstract
xenografts סרטן שלפוחית השתן Orthotopic הן סטנדרטי ללמוד מניפולציות מולקולריות תאיות וסוכנים טיפוליים חדשים בvivo זהב. שורות תאים מתאימות מחוסנות או על ידי החדרת שלפוחית (מודל של צמיחה פולשנית nonmuscle) או הזרקת ביצוע עצמית לתוך קיר שלפוחית השתן (מודל של צמיחה פולשנית). שני ההליכים מורכבים ומאוד זמן רב. בנוסף, יש לו את המודל השטחי חסרונותיו בשל החוסר של שורות תאים, כי הם החדרה הבאה tumorigenic. הזרקת ביצוע עצמי, ומצד שני, הוא נפגמה על ידי הפולשנות של ההליך והתחלואה הקשורים לעכבר המחשב המארח.
עם החסרונות האלה בחשבון, שינינו שיטות קודמות לפתח גישה פולשנית ליצירת xenografts סרטן שלפוחית השתן orthotopic. באמצעות הדרכת אולטרסאונד יש לנו לבצע חיסון מלעורית של שורות תאי סרטן שלפוחית השתן UM-UC1, UM-UC3 וUM-בהצלחהUC13 ל50 עירום athymic. אנחנו כבר הצלחנו להוכיח כי גישה זו היא זמן יעיל, מדויק ובטוח. בעזרת טכניקה זו, תחילה נוצר מרחב מתחת לרירית שלפוחית השתן עם PBS, ולאחר מכן תאים סרטניים מוזרקים לתוך החלל הזה בשלב שני. צמיחת גידול מנוטרת במרווחי זמן קבועים עם הדמיה פליטת אור ואולטרסאונד. כרכי הגידול הממוצע גדלו בהתמדה בכל אבל אחד 50 העכברים שלנו לאורך תקופת המחקר.
במוסד שלנו, זו גישה חדשנית, המאפשרת חיסון xenograft סרטן שלפוחית השתן באופן מינימאלי פולשנית, מהיר ומדויק ביותר, החליפה את המודל המסורתי.
Introduction
מחקר הסרטן תלוי במודלים של בעלי חיים של סרטן אנושי באמצעות שורות תאים שמקורם בגידולי מטופל על מנת להעמיק את ההבנה של ביולוגיה של גידול שלנו. לin vivo ניתוח צמיחה באסטרטגיות שונות לטיפול בסרטן שלפוחית השתן מודלים העכברי orthotopic יישארו סטנדרטי 1,2 ההתייחסות. החיסון של תאי סרטן שלפוחית השתן אנושיים בעכברי מדוכאי חיסון (מודל xenograft) מסתמך על החדרת שלפוחית ("מודל שלפוחית") 3,4,5 או הזרקה ישירה לתוך קיר שלפוחית השתן ("מודל בין חומות") 6,7. יכולות גם להתבצע בשתי טכניקות בחולדות 8,9.
החדרת שלפוחית גורמת להיווצרות של גידולים על פני urothelial של שלפוחית השתן אשר לאחר מכן ניתנים להחדרת שלפוחית הבאה של סוכני טיפול חדשניים. עם זאת, מספר שורות תאים אשר באופן מהימן tumorigenic כאשר מועברים באמצעות שיטה זו מוגבלד אחד של שורות תאים אלה, KU7, לאחרונה הוכח להיות הלה 4,10. החדרת שלפוחית היא גם זמן רב בשל צורך להתעכב פעמים, וזה לעתים קרובות גורם לצמיחת גידולים באלמנטים הסמוכים של דרכי השתן, כולל שופכה, שופכן, ואגן הכליה 11. יתר על כן, החדרת שלפוחית לעתים קרובות מובילה לצמיחה של גידול על רצפת השלפוחית בי השופכנים להיכנס לשלפוחית השתן, וזה יכול לגרום לחסימה בדרכי עליונה ואי ספיקת כליות במקביל.
xenografts סרטן שלפוחית השתן פולשנית העיקרית אשר מתאימות לטיפולים מערכתיים נוצרות על ידי הזרקה ישירה של תאי גידול לדופן שלפוחית 12. למרות ששורות תאים רבות לגדול כראוי במודל זה, הגבלתה היא הפולשנות של המודל הנוגע לצורך בחתך בבטן 13. המודל הוא גם מאתגר ללמוד בשל הקושי הטכני של הזרקת תאים בדיוק לקיר השרירשל שלפוחית השתן.
גישה חדשנית להקמת xenografts פולשנית העיקרית orthotopic סרטן שלפוחית השתן בעכברים פותחה במחלקה שלנו על מנת לטפל בליקויים קיימים של "המודל בין החומות". הצלחנו לייעל את ההזרקה של תאי סרטן שלפוחית השתן מלעורית, אולטרסאונד מונחה לדופן השלפוחית הקדמי וכתוצאה מכך טכניקה חדשנית זו כדי להחליף את המודל פולשנית הוקם בהצלחה. יתר על כן יש לנו פוטנציאל משופר הדיוק ושחזור של "המודל בין החומות".
Protocol
נהלי כל החיה המבוצעים על פי ההנחיות של המועצה הקנדית על טיפול בבעלי חיים (CCAC). הפרוטוקול אושר על ידי ועדת הטיפול בבעלי חיים של אוניברסיטת קולומביה הבריטית (מספר פרוטוקול: A10-0192).
1. הכנה של שורות תאים
- לאשר את זהותו של שורות תאי סרטן שלפוחית השתן אנושית המתאימות על ידי טביעת אצבע DNA 7.
- לניתוח צמיחה של גידולי xenograft ידי פליטת אור, transfect שורות תאים עם מבנה lentiviral נושא את גן גחלילית בלוציפראז 3.
- הפשירו ולהרחיב את הקווים הקיימים של תאים במדיום של הנשר שונה Dulbecco (DMEM) עם 10% בסרום שור העובר (FBS) על 37 מעלות צלזיוס באווירת humidified 5% CO 2. מעבר התאים 3x לפחות פעמים, אך להימנע תרבות עולה על 3 חודשים.
2. הכנת תרחיף תא
- הפשירו Matrigel. שמור על הטמפרטורה מתחת4 מעלות צלזיוס, כדי למנוע צמיגות מוגברת של ג'ל.
- Trypsinize התאים בנקודת מפגש של 70% ולהשעות בתקשורת צמיחה נורמלית.
- לספור את המספר הסלולרי עם hemocytometer או דלפק תא אוטומטי.
- ספין ההשעיה תא דקות 5 ב 200 x גרם. הסר את supernatant.
- הוספת הנפח המתאים של DMEM (10% FBS) וMatrigel (1:1) כדי להגיע לריכוז התא הרצוי שהוא תלוי בשורת התאים מנוצל וקינטיקה צמיחה רצויה (8-15 x 10 6 / מיליליטר). הנפח המוזרק של השעיה תא הסרטני יהיה 40 μl.
- מערבבים היטב על ידי pipetting למעלה ולמטה (P1000), להימנע מיצירת בועות אוויר בהשעיה.
3. הכנת בעלי חיים
שים לב: בשל צורך הפוטנציאל לצנתור דרך שופכה בשלב 4.7, נקבות עכברים הם המין המועדף במודל חיה זו.
- עכברי בית לפי gu המוסדי וטיפול בבעלי חיים לאומיidelines. לקבל את אישור ועדת אתיקה לכל הניסויים מעורבים עכברים.
- הרדימי עכברים עם 3% תערובת isoflurane / חמצן. לאשר הרדמה תקינה של בעלי חיים (למשל חוסר תגובה לצובט הבוהן).
4. ניסיוני התקנה
- חותכים את ייצוב שלפוחית מכל סוג של חומר פלסטי קשיח שטוח [איור 2]. בזהירות לבדוק את הרצועה ולהסיר את כל קצוות חדים לפני הבקשה לעכברים.
- הר את בעלי החיים על שולחן ההדמיה המחומם [איור אני 1] של פלטפורמת ההדמיה חיה הקטנה עם ניטור רציף של סימנים חיוניים. תקן את הגפיים התחתונים עם גומייה [איור 1 ג].
- לחטא את הבטן עם 2% כלורהקסידין גלוקונאט ולנגב את העור עם קצה צמר גפן סטרילי.
- לשתק את שלפוחית השתן עם רצועת ייצוב שלפוחית [איור 2 ב ']. לפיכך, התחמקותשל שלפוחית השתן במהלך הזרקת ביצוע עצמית בשלב 5.6 יהיה להימנע מכך.
- החל ג'ל אולטרסאונד סטריליים לבטן התחתונה.
- לאט לאט מתקרב לscanhead אולטרסאונד (תדר 40 MHz) [איור 1 IV] לעור (אורכי עם זווית גולגולת של 45-70 °) ולדמיין את השלפוחית על מסך אולטרסאונד [איור 3].
- אם השלפוחית ריקה, למלא אותו עם 50 μl תמיסת מלח סטרילית, חמה שנאגרו פוספט (PBS) דרך angiocatheter G שופכת 24.
5. הפרדה של שלפוחית השתן וול שכבות
- צרף מזרק 1.0 מיליליטר מלא PBS ומחובר ל30 G, ¾ במחט (פוע מופנה anteriorly) למהדק המזרק.
- מקם את המחט לכיוון העור בדיוק מעל עצם הערווה בזווית 30-45 מעלות (80-90 ° ביחס לציר האורך של scanhead אולטרסאונד [איור 1]).
- לזהות את המחטעל מסך אולטרסאונד.
- לאט לנקב את העור ואת שרירי דופן בטן [איור 3 ב '].
- סובב את השיפוע של ° המחט 180 (כיום מופנה בדיעבד).
- הכנס את קצה המחט לתוך קיר שלפוחית השתן בלי לחדור לרירית [איור 3 ג]
- לאט לאט להזריק 50 μl של PBS בין השכבה הרירית והרירית על מנת ליצור מרחב מלאכותי [איור 3 IV].
הערה: אם הרירית מחוררת בטעות במהלך שלב 5.6, לאט למשוך חזרה את המחט ולהזריק 50 μl של PBS לאחר השכבה הרירית שהתהפכה לאחור על קצה המחט. - לשלוף את המחט.
6. ביצוע עצמי הרכבה של תאי סרטן שלפוחית השתן
- צרף מזרק שני 1.0 מיליליטר (מלאים בתאי הסרטן התלויים בMatrigel) עם 30 G, ¾ במחט למהדק המזרק.
- להנחות את קצה המחט לאותוחלל PBS המלא שיצר בשלב 5.7.
- הזרק 40 μl של ההשעיה התא לתוך החלל הזה [איורים 3 V ו-VI].
- לשלוף את המחט.
7. טיפול תומך שלאחר התערבותית
- לבטל את טעינת העכבר מפלטפורמת ההדמיה.
- לשמור על בעלי החיים בסביבה חמימה ונוחה תחת מעקב רציף בזמן שהתאושש מההרדמה.
- לאחר שהשיב את התודעה וחידוש ניידות רגילה, למקם את בעלי החיים בחזרה בכלוב בבית שלה.
Representative Results
הזרקה עירונית של שלושה קווים שונים של תאי גידול (לוק UM-UC1, לוק UM-UC3 ולוק UM-UC13) בוצעה ב50 חיות תחת אולטרסאונד הדרכה על שלושה ימים רצופים. החיסון בוצע ביעילות רבה (זמן ממוצע 5.7 דקות / בעלי חיים) ולא היה קשור לכל סיבוכי התוך או פוסט התערבותית.
ניטור של גידול בוצע על ידי ההדמיה אולטרסאונד ופליטת אור. ביום # 3 גידול יכול להיות מזוהה על ידי אולטרסאונד בשלפוחית הקדמית של כל 50 חיות [איור 4]. 98% מעכברים הראו את צמיחת גידול מתמדת במהלך תקופת המעקב [איורים 4 ו -5]. בעקבות החיסון של לוק UM-UC3, עכבר אחד פיתח הפצת גידול intraperitoneal והגידול involuted אחרי היום # 7 בבעלי חיים שני [טבלת 1]. זו הייתה הקבוצה הראשונה של עכברים מחוסן עם טכניקה חדשה זו.
NT "> העכברים הוקרבו ביום # 24, # 28, ו# 37 לאחר החיסון של לוק UM-UC3, לוק UM-UC1 ולוק UM-UC13, בהתאמה. גידולי xenograft נקצרו ונבדקו על hematoxylin ו eosin (H & E סעיפים). כל הגידולים היו שריר פולשני וכמה חדרו לשומן perivesical, אבל אין פלישה לאיברים סמוכים נצפתה [איור 6]. 60% מעכברי נושאי גידולי לוק UM-UC13 ו20% מעכברי נושאי לוק UM-UC3 גידולים פיתחו גרורות לימפה צומת retroperitoneal אשר אושרו על ידי H & E [איור 6 ב '] מכתים.
איור 1. תמונה ואיור סכמטי של הגדרת הניסוי. העכבר הוא רכוב על שולחן הניתוח המחומם (אני) והחזיק תחת הרדמה (<strong> השני) עם 3% תערובת isoflurane / חמצן. הגפיים התחתונים קבועים עם גומייה (III). לאחר מתקרב scanhead אולטרסאונד (IV) לעור (יישור אורכי עם זווית גולגולת של 45-70 °) בשלפוחית השתן (V) הוא מדמיין על מסך אולטרסאונד. מזרק עם מחט G 30 (VI) מונחה על העור בזווית של 30-45 מעלות (80-90 ° ביחס לציר האורך של scanhead אולטרסאונד).
איור 2. חוסר תנועה של שלפוחית השתן. ממדים והמחשה לבנות את רצועת ייצוב שלפוחית השתן (אני) הרצועה מחוברת לבטן התחתונה ומשתקים את שלפוחית השתן (השני). כך התחמקות שלפוחית השתן במהלך הזרקת ביצוע עצמית הוא נמנע.
איור 3. חיסון ביצוע עצמי של תאים סרטניים. ויזואליזציה של שלפוחית השתן על מסך אולטרסאונד (אני). ניקוב של העור ושרירים דופן בטן (השני). החדרת מחט לדופן השלפוחית ללא חדירה של הרירית (III). PBS (50 μl) בין השכבה הרירית והרירית לאחר הזרקה איטית (IV). תאים סרטניים התלויים בMatrigel בחלל שנוצר באופן מלאכותי העצמי (V, VI).
1123fig4.jpg "/>
איור 4. . מעקב על ידי אולטרסאונד מעקב רציף על ידי אולטרסאונד הראה גידול משמעותי בנפח גידול (אני: יום # 3, השני: יום # 7, III: יום # 13).
איור 5. מעקב על ידי פליטת אור. מעקב רציף על ידי פליטת אור הראה עלייה מתמדת בהארה לאורך תקופת המחקר.
איור 6. היסטולוגיה של גידול xenograft וגרורות לימפה. בטוטו הסעיף H & E של xenograft נציג tu מור מפגין צמיחה חודרנית לתוך השריר ללא פלישה לאיברים סמוכים (אני). 60% מעכברי נושאי גידולי לוק UM-UC13 ו20% מעכברי נושאי גידולי לוק UM-UC3 גרורות הציגו retroperitoneal בלוטות לימפה (השנייה).
| שורת תאים מחוסנת | לוק UM-UC1 | לוק UM-UC3 | לוק UM-UC13 | |
| מספר העכברים | 20 | 15 | 15 | |
| נפח מוזרק, μL | idth: 64px; ">40 | 50 | 50 | |
| ספירת תאים, מוחלט | 3.6 x 10 5 | 6 x 10 5 | 5.5 x 10 5 | |
| זמן לכל בעל חיים, דקות | 3.4 (± 1.6) | 7.7 (± 3.7) | 6.8 (± 2.9) | |
| שיעור מקרים של הסרטן | 49 (98%) | |||
| 20 (100%) | 14 (93%) | 15 (100%) | ||
| גרורות בלוטות לימפה | 0 | 3 (20%) | 9 (60%) | |
| מעקב (ימים) | 28 | 22 [לפני הטיפול] | 28 [לפני הטיפול] | |
| נפח גידול (μL) | יום 4 | 11.6 (± 1.3) | 12.5 (± 1.7) | 14.4 (± 1.3) |
| סוף | 394.6 (± 72.4) | 288.7 (± 66.1) | 78.3 (± 13.4) | |
| מעקב | ||||
| הארה גידול (פוטונים / sec) | יום 4 | 4.6 x 10 8 | 2.0 x 10 8 | 5.8 x 10 8 |
| (± 9.4 x 10 7) | (± 3.7 x 10 7) | (± 1.3 x 10 8) | ||
| סוף | 1.9 x 10 10 | 1.4 x 10 10 | 1.5 x 10 10 | |
| מעקב | (± 4.0 x 10 9) | (± 2.3 x 10 9) | (± 1.9 x 10 9) | |
טבלת 1. הזרקת תאים סרטניים מונחה אולטראסאונד - הליך ותוצאות.
Discussion
כמעט כל התקדמות גדולה בטיפול בסרטן תדרוש בדיקות במודלים של בעלי חיים לפני ביצוע ניסויים קליניים. מודלים של בעלי החיים של הסרטן הם כלים חיוניים המאפשרים לחוקרים ללמוד ביולוגיה גידול in vivo. המודלים xenograft Orthotopic יישארו הזהב סטנדרטי 1,2 וימשיכו להציע את הגמישות ביותר (במונחים של בחירה של שורות תאים) ויש להם את הכלי הכי הפרקטי.
ההליך המאויר הוא שינוי פולשנית של מודל orthotopic תואר בעבר על ידי Dinney et al. 12 הקמנו גידולי xenograft בזריקה מלעורית אולטרסאונד המודרך של שלוש שורות תאים שונות עם שיעור הצלחה טכני של 100%. במהלך תקופת המעקב רציף, 98% מעכברים הראו עלייה מתמדת בנפח גידול.
על ידי ביצוע טכניקה מינימאלית פולשנית היינו יכול לטפל במגבלות קיימות של מודל החומות. חוץ מrespecting רווחת בעלי חיים, הפולשנות מופחתת של הליך זה גם תורמת לשחזור של ניסויי in vivo על ידי הפחתת מספר הסיבוכים ניתוחיים. זה מאוד זמן יעיל, כדי למנוע laparotomy בטן וצורך הקשורים לסגירת פצעים. היינו יכול להקטין באופן משמעותי את זמן הליך לכל בעל חיים ל3.4 דקות (± 1.6). עם זאת, היתרון העיקרי של הגישה החדשנית שלנו הוא הדיוק שלה. אולטרסאונד ברזולוציה גבוהה מאפשר לנו לדמיין את החלל שנוצר על ידי הזרקה מי מלח מתחת לרירית של דופן השלפוחית. הזרקת הצעד ראשונה זה מקלה על הזרקת תאים סרטניים בשלב שני וממזערת את הסיכון של דליפה של תאים הסרטניים. זאת בניגוד לטכניקה של הזרקת ביצוע עצמית לאחר פיום בטן, שבו אי אפשר לדמיין מיקום מחט ותמיד יש אלמנט של חוסר ודאות לגבי עומק ההזרקה המדויק. כמו כן,, growt גידול כפי שאנו inoculating תאים סרטניים אך ורק לדופן השלפוחית הקדמישעות על קיר שלפוחית השתן האחורי הוא התחמק. כתוצאה מכך שיעור סיבוכים חסימתית בשל צמיחת גידול בקרבה של הפתחים בשופכן הוא נדיר ביותר. אפקט נלווה זה מאפשר תקופות גידול וטיפול ארוכות יותר.
המגבלה העיקרית של חיסון גידול אולטרסאונד מונחה היא הצורך בציוד טכני מתאים. לכן הביצועים של הליך זה צפוי להיות מוגבל למרכזים המתמחים במודלים של בעלי חיים של סרטן אנושי. זה צריך לעודד שיתופי פעולה בין קבוצות מחקר מחוץ למוסדות אלה והקבוצות עם התמחות בדוגמנות בעלי חיים רומן כזה.
אמנם תלוי בהיכרות עם ההדמיה אולטרסאונד וחלק מיומנות ידנית, מודל זה הוא קל ללמוד תחת הדרכה מוסמכת. צעד מפתח בתהליך הוא היצירה של submucosally מרחב מלאכותי בדופן השלפוחית עם מי מלח. ברגע שהמרחב הזה נוצר בלי o הניקובf השכבה הרירית, הוא נשאר יציב במשך כמה דקות. הדרכתו של המחט השנייה לתוך המרחב הזה כדי לחסן את התאים הסרטניים היא יחסית פשוטה. הסיבוך העיקרי ביצירתו של מרחב Submucosal הוא ניקוב של המחט לתוך לומן שלפוחית השתן. יצירת מרחב Submucosal, לעומת זאת, נשארת ריאלי. המחט צריכה להיות נסוגה לאט אל תוך קיר שלפוחית השתן והמלוח מוזרק רק כאשר השכבה הרירית מתהפכת קצה המחט. לאחר תרגיל זה השטח Submucosal הוא פחות יציב (מלוח יברח ללומן השלפוחית בתוך 30-60 שניות) וההזרקה של תאי גידול צריכה להתבצע במהירות. דליפה של תאים סרטניים לתוך לומן שלפוחית השתן יכולה להתרחש במקרים אלה עם ניקוב של הרירית. למרות האובדן של תאים סרטניים ממקום ביצוע העצמי עלול להוביל לירידה בגידול במהלך מעקב נפח, יש לנו מעולם לא נצפה כל ספיגת גידול שלפוחית.
אחר ג הפוטנציאליomplication היא דליפה של תאים סרטניים לחלל הצפק דרך ערוץ ההזרקה. אנו נצפו רק אחד הפצת תאים הסרטני intraperitoneal ב50 בעלי חיים, וזה קרה באחד מהניסיונות הראשונים שלנו. אנו מייחסים את זה לזריקה של גדול מדי תאים סרטניים השעיה נפח. זה נתמך על ידי העובדה שהקטנת הנפח 50-40 μl לא גרמה לדליפת intraperitoneal נוספת.
חיסון פולשנית זו של xenograft סרטן שלפוחית השתן orthotopic העכברית מייצג שינוי חדשני של "מודל ביצוע העצמי" הקיים, benefitting גם החוקר ובעלי החיים באותה מידה. היתרונות של מודל זה מעודדים את ההסתגלות שלה לאיברים אחרים כגון כליות, ערמונית וכבד על מנת לבסס גידולי xenograft orthotopic באופן מינימאלי פולשנית.
Disclosures
הגישה פתוחה למאמר וידאו זה היא בחסות FUJIFILM VisualSonics, Inc
Acknowledgments
המחברים רוצים להכיר אליאנה Beraldi לביצוע התמרה ויראלית של שורות תאים סרטניים ובן Deeley להוראתו על שימוש בפלטפורמת ההדמיה אולטרסאונד בעלי החיים הקטנה.
פרויקט זה נתמך על ידי מערכת הגרמנית הקרן (DFG; JA 2117/1-1: 1), האגודה למלחמה בסרטן הקנדית מכון המחקר ופרס מדען רופא המורה רוחני מונקובר חוף בריאות מכון מחקר. פלטפורמת ההדמיה אולטרסאונד מומנה על ידי הקרן הקנדית עבור חדשנות.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Chlorhexidine gluconate (2%) | Aplicare | 82-319 | |
| Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium (DMEM) | Thermo Scientific | SH3008101 | |
| Fetal bovine serum (FBS) | Thermo Scientific | SH3007103 | |
| Isoflurane | Baxter Corporation | 402-069-02 | |
| Trypsin (0.25%) | Thermo Scientific | SH3004202 | |
| Syringe (1 ml) | BD Bioscience | 309659 | |
| Hypodermic needle (30 G; ¾ in) | Kendall | 830340 | |
| Angiocatheter (24 G) | BD Bioscience | 381112 | |
| Vevo 770 small animal imaging platform | VisualSonics | ||
| RMV 706 ultrasound scanhead | VisualSonics | ||
| IVIS Lumina III | Caliper Life Science |
References
- Chan, E., Patel, A., Heston, W., Larchian, W. Mouse orthotopic models for bladder cancer research. BJU Int. 104, 1286-1291 (2009).
- Kubota, T. Metastatic models of human cancer xenografted in the nude mouse: the importance of orthotopic transplantation. J. Cell. Biochem. 56, 4-8 (1994).
- Hadaschik, B. A., et al. A validated mouse model for orthotopic bladder cancer using transurethral tumour inoculation and bioluminescence imaging. BJU Int. 100, 1377-1384 (2007).
- Kang, M. R., et al. An Orthotopic Bladder Tumor Model and the Evaluation of Intravesical saRNA Treatment. J. Vis. Exp. (65), (2012).
- Dobek, G. L., Godbey, W. T. An Orthotopic Model of Murine Bladder Cancer. J. Vis. Exp. (48), (2011).
- Dinney, C. P., et al. Isolation and characterization of metastatic variants from human transitional cell carcinoma passaged by orthotopic implantation in athymic nude mice. J. Urol. 154, 1532-1538 (1995).
- Fu, C., Apelo, C. A., Torres, B., Thai, K. H., Hsieh, M. H.
- Xiao, Z., et al. Characterization of a novel transplantable orthotopic rat bladder transitional cell tumour model. Br. J. Cancer. 81, 638-646 (1999).
- Iinuma, S., Bachor, R., Flotte, T., Hasan, T. Biodistribution and phototoxicity of 5-aminolevulinic acid-induced PpIX in an orthotopic rat bladder tumor model. J. Urol. 153, 802-806 (1995).
- Jäger, W., et al. Hiding in plain view: Genetic profiling reveals decades old cross-contamination of bladder cancer cell line KU7 with HeLa. J. Urol. (13), (2013).
- Horiguchi, Y., Larchian, W. A., Kaplinsky, R., Fair, W. R., Heston, W. D. Intravesical liposome-mediated interleukin-2 gene therapy in orthotopic murine bladder cancer model. Gene Ther. 7, 844-851 (2000).
- Dinney, C. P., et al. Isolation and characterization of metastatic variants from human transitional cell carcinoma passaged by orthotopic implantation in athymic nude mice. J. Urol. 154, 1532-1538 (1995).
- Black, P. C., et al. Validating bladder cancer xenograft bioluminescence with magnetic resonance imaging: the significance of hypoxia and necrosis. BJU Int. 106, 1799-1804 (2010).
