Waiting
로그인 처리 중...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Neuroscience

Fiberforbindelser af det supplerende motorområde revideret: Metodik for fiberdissektion, DTI og tredimensionel dokumentation

Published: May 23, 2017 doi: 10.3791/55681

Summary

Formålet med denne undersøgelse er at vise hvert trin i fiberdissektionsteknikken på humane kadaveriske hjerner, 3D-dokumentationen af ​​disse dissektioner og diffusionstensorbilleddannelsen af ​​de anatomisk dissekerede fiberbaner.

Abstract

Formålet med denne undersøgelse er at vise metoden til undersøgelse af de hvide stofforbindelser i SMA-komplekset (før SMA og SMA) ved hjælp af en kombination af fiberdissektionsteknikker på kadaveriske prøver og magnetisk resonans (MR ) Traktografi. Protokollen vil også beskrive proceduren for en hvid materionsdissektion af en human hjerne, diffusion tensor-traktografi billeddannelse og tredimensionel dokumentation. Fiberdissektionerne på menneskelige hjerner og 3D-dokumentationen blev udført ved University of Minnesota, Microsurgery og Neuroanatomy Laboratory, Department of Neurochirurgia. Fem postmortem humane hjerneprøver og to hele hoveder blev fremstillet i overensstemmelse med Klinglers metode. Hjerne halvkugler blev dissekeret trin for trin fra lateral til medial og medial til lateral under et operationsmikroskop, og 3D-billeder blev taget i hvert trin. Alle dissektionsresultater blev understøttet af diffusion tensorbilleddannelse. Undersøgelser af forbindelserne i overensstemmelse med Meynert's fiberkanalklassifikation, herunder associeringsfibre (korte, overlegne langsgående fasciculus I og frontal aslantkanaler), projektionsfibre (corticospinal-, claustrocortical-, cingulum- og frontostriatale kanaler) og kommissoriske fibre (callosalfibre) blev Også udført.

Introduction

Blandt de 14 frontarealer, der er afgrænset af Brodmann, er det premotoriske og præfrontale område, der ligger foran den precentrale motoriske cortex, blevet betragtet som et stille modul, på trods af at frontalbenen spiller en vigtig rolle i kognition, adfærd, læring, Og talebehandling. Udover SMA-komplekset, der består af før SMA og SMA (Brodmann Area, BA 6), der udvider medialt, omfatter præmotor / frontmodulet den dorsolaterale præfrontale (BA 46, 8, Og 9), frontopolar (BA 10) og ventrolaterale præfrontale (BA 47) cortices samt en del af den orbitofrontale cortex (BA 11) på hjernens 1 , 2 laterale overflade.

SMA-komplekset er et væsentligt anatomisk område, som er defineret af dets funktioner og dets forbindelser. Resektionen og beskadigelsen af ​​denne region forårsager betydelige kliniske underskud kendt som SMAsyndrom. SMA syndromet er en vigtig klinisk tilstand, der især observeres i frontal gliom-tilfælde, der indeholder SMA-komplekset 3 . SMA-komplekset har forbindelser med det limbiske system, basalganglia, cerebellum, thalamus, kontralaterale SMA, overlegne parietallobe og dele af de frontale lobes via fiberkanaler. Den kliniske effekt af beskadigelse af disse hvide stofforbindelser kan være mere alvorlig end for cortex. Dette skyldes, at konsekvenserne af skader på cortex kan forbedres over tid på grund af høj kortikal plasticitet 4 , 5 , 6 , 7 , 8 , 9 , 10 , 11 , 12 ,. Derfor bør SMA's regionale anatomi og de hvide stofbaner være dybeI forstod, især for gliomoperation.

En omfattende forståelse af anatomien af ​​hvide stofbaner er vigtig for bredspektret behandling af neurosurgical læsioner. Nylige undersøgelser af den tredimensionelle dokumentation af de anatomiske resultater, der blev opnået i mikrokirurgi, blev brugt til at få en bedre forståelse af topografisk anatomi og sammenhængen mellem hjernehvide stofspor 13 , 14 . Formålet med dette studie var derfor at undersøge de hvide stofforbindelser af SMA-komplekset (før SMA og SMA) ved hjælp af en kombination af fiberdissektionsteknikker på cadaveric-prøver og magnetisk resonansbilleddannelse (MRT) og forklare alle metoderne Og principper for begge teknikker og deres detaljerede dokumentation.

Studieplanlægning og strategi

Forud for at udføre forsøgene, en literAture søgning på de grundlæggende principper for fiber dissektioner, procedurerne, der skal anvendes på prøver før og under dissektioner, og alle forbindelser mellem SMA regioner, der er blevet afsløret med dissektion og DTI blev gennemført. De tidligere undersøgelser vedrørende anatomisk lokalisering og adskillelse af præ-SMA og SMA-egnede regioner og om topografisk anatomi af deres forbindelser blev gennemgået.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

Den afdøde er medtaget her som en befolkning, selv om afdøde personer ikke er teknisk menneskelige emner; Menneskelige emner er defineret af 45 CF 46 som "levende mennesker 15 , 16. "

1. Fremstilling af prøver

  1. Undersøg 5 formalin-faste hjerner (10 halvkugler) og 2 hele menneskelige hoveder.
  2. Fastgør prøverne i en 10% formalinopløsning i mindst 2 måneder ifølge Klinglers metode 17 .
  3. Frys alle prøver ved -16 ˚C i 2 uger i overensstemmelse med Klingers metode 17 .
  4. Tøde prøverne under vand fra vandet.
  5. Udfør en udvidet frontotemporal craniotomi på cadaveric hovedet for at afsløre hjernen.
    1. Placer cadaveric hovedet i en tre-pin kraniet klemme (Materialebord).
    2. Lav en frontotemporal hudindsnit med en skalpel.
    3. Fjern hud og muskler ved hjælp af en skalpel, tang og saks.
    4. Lav et eller flere burrhuller i kraniet, indtil dura materen er nået; Brug en boremaskine med en kompakt hastighedsreduktion og en 14 mm kranial perforator vedhæftning ved 79.000 omdrejninger pr. Minut (Materialebord).
    5. Skær knoglens klap og åbn kraniet med en 2 mm x 15,6 mm rillet router med en 2,1 mm pinformet burrfodring med en borehastighed på 80.000 rpm (Materialebord).
  6. Fjern dura-, arachnoid- og pia mater og dissekere ved hjælp af en mikrodissektor under et mikroskop ved 6X til 40X forstørrelse 5 , 18 (Materialebord).

2. Fiber Dissection Teknik

BEMÆRK: Udfør alle dissektioner under 6X til 40X forstørrelse på et kirurgisk mikroskop.

  1. Udfør fiberdissektionerne trinvis på hver hemispheRe, fra lateral til medial og medial til lateral.
    1. Afkort hjernebarken ved hjælp af en paneldissor (Materialebord) og fjern alle frontale kortikale væv for at afsløre de korte association fibre kanaler, som er U-fibre eller intergyrale fibre, der forbinder nærliggende gyri 5 , 13 .
    2. Fjern de korte associeringsfibre med en paneldissektor og en kirurgisk mikrokrog ved forsigtigt at trimme under mikroskopet (Materialebord) for at nå og udsætte de lange associationsfibre, der forbinder fjerne områder på samme halvkugle.
    3. Gå dybt ind i de lange association fibre for at fjerne overfladiske association fibre ved hjælp af en kirurgisk mikro krog og en panfield dissektor; Fjern hver fiberbundt under et mikroskop (Materialebord) for at udsætte projektionsfibre.
    4. Se hver af forbindelserne til SMA-kompleksetIfølge den topografiske anatomi, der tidligere blev defineret i litteraturen 2 , 8 , 18 , 19 , 20 , 21 .
  2. Opbevar alle prøver (hele hoveder og hjerner), der blev anvendt under dissektionerne i 10% formaldehydopløsning (Materialebord) mellem dissektionsperioderne.

3. 3D fotograferingsteknik

  1. Brug en sort farveplatform under fotograferingen af ​​prøverne.
  2. Følg en 3D fotograferingsteknik 22 .
    1. Placer hver prøve i en designet sort farveplatform.
    2. Vælg en scene med en fuld front-visning af prøven og tag et skud ved at fokusere kameraet på et hvilket som helst punkt på prøven tæt på midterpunktet på kameraskærmen (instrumentfanenle). Brug en 18- til 55 mm f / 3.5-5.6 SLR-linse eller en 100 mm f / 2.8L makroobjektiv og indstil blænderen til F29, ISO 100.
    3. Drej kameraet lidt til venstre, indtil det højeste punkt på kameraskærmen er det samme som fokuspunktet ovenfor. Skub kameraet til højre, indtil midtpunktet på skærmen overlapper det oprindelige fokuspunkt på prøven. Fokuser kameraet på dette punkt og tag et nyt skud.
    4. Vedligehold kameraets afstand og akse til prøven, der fotograferes ved konstante værdier.
  3. Opret et 3D-billede ved hjælp af et 3D-billedgeneratorprogram (Materialebord).
    1. Åbn 3D-softwareprogrammet.
    2. Vælg "Åbn stereobilleder fra Fil."
    3. Vælg de to billeder (venstre og højre) og sørg for, at venstre billede er i venstre slot og højre billede er i højre slot.
    4. Vælg alternativet "Halvfarve anaglyph RL / 2" og generer anaglyphen i jpeg-format.

    4. DTI Teknik

    1. Acquire pre-processed diffusion data ved hjælp af Human Connectome Project diffusion data 23 ved at downloade den fra den refererede hjemmeside.
      BEMÆRK: Dataene downloades færdigbehandlet og bestod af følgende procedurer: Diffusionsdataene blev erhvervet hos normale frivillige ved brug af en modificeret 3 T MRI-enhed (instrumentbord) ved anvendelse af en spin-echo echo planar imaging (EPI) sekvens med multi- Båndbilledacceleration 24 , 25 , 26 , 27 , 28 . Relevante sekvensparametre indbefatter: TR = 5.520 ms; TE = 89,5 ms; FOV = 210 x 180 mm; Matrix = 168 x 144; Skive tykkelse = 1,25 mm (voxel størrelse 1,25 x 1,25 x 1,25 mm); Multiband faktor = 3; Og b-værdier = 1.000 s / mm2 (95 retninger), 2.000 s / mm2 (96 retninger) og 3.000 s / mm2 (97 retninger). Dataene blev derefter behandlet under anvendelse af FreeSurfer 29 og FSL 30 ; Processen omfattede eddy-strømkorrektion, bevægelseskorrektion, normalintegration af b0-intensitet, modtagelsesforvrængningskorrektion og korrigering af gradient-nonlinearitet 28 , 31 , 32 , 33 . Tilsvarende T1-vægtede MP-RAGE-billeder er også inkluderet i downloadpakken. Procedurer er dokumenteret i manual manual 23 for Human Connectome Project.
    2. Efterbehandling af diffusionsdata ved hjælp af Diffusion Spectrum Imaging (DSI) Studio 34 for at generere en estimeret voxel-wise diffusionsorienteringsfordelingsfunktion (ODF), der anvender en generaliseret q-sampling imaging (GQI) algoritme 35 .
      1. Indlæs det downloadede datasæt i softwaren af ​​selEcting "STEP1: Open source images" og vælg filen data.nii.gz.
      2. Vælg knappen "STEP2: Reconstruction". Efter at have verificeret hjernemasken, fortsæt til "Trin 2" og vælg "GQI" som genopbygningsmetode. Vælg "r ^ 2 vægtning" med et "længdeforhold" på "1.0". Forlad de resterende valg som standard.
      3. Vælg "Kør rekonstruktion."
    3. Placer passende frø til regioner af interesse for at strømline fibersporing.
      1. I "Regionvinduet" skal du klikke på "Atlas" -knappen for at placere frø til den overordnede langsgående fasciculus (SLF) I. Vælg "Brodmann" og tilføj "Region 6" og "Region 7." I regionvinduet skal du indstille typen "Region 6" til "frø" og "Region 7" til "region-of-inclusions" (ROI).
        1. Vælg "Ny region" i regionvinduet, og træk et ROI manueltI det mest bageste aspekt af den overlegne frontale gyrus i koronalplanet. Udfør fibersporing som beskrevet i trin 4.4.
      2. Placer frø til SLF II på lignende måde ved at bruge "Ny region" i regionvinduet og tegne "frø" -regionen i det bageste aspekt af den midterste frontale gyrus hvide stof i koronalplanet. Vælg et afkast ved brug af "Atlas" (som i trin 4.3.1) og Brodmann-regionerne 9, 10, 46, 39 og 19. Udfør fibersporing som beskrevet i trin 4.4.
      3. Placer frø til SLF III med en "frø" region ved at bruge "Atlas" (som i trin 4.3.1) i regionvinduet og vælge "Region 40" på Brodmann-atlaset og afkastet fra "Atlas ..." i "Region 40 "Og" Region 44. " Udfør fibersporing som beskrevet i trin 4.4.
      4. Placer frø til callosalfibre ved brug af "Ny region" i regionvinduet og tegne et "frø" i sagittalplanet, der omfatterE corpus callosum. Udfør fibersporing som beskrevet i trin 4.4.
      5. Placer frø til cingulatfibre ved hjælp af "Ny region" i regionvinduet og tegne en "frø" -region i mid-cingulate gyrus på coronal-visningen. Brug "Ny region" til at tegne to ROI'er, en i den mere anterior cingulate og en i den posterior cingulate gyrus under coronal view. Udfør fibersporing som beskrevet i trin 4.4.
      6. Placer frø til claustrocortical fibre ved hjælp af "New Region" i region vinduet og tegne en "frø" i klaustrummet med et ROI i corona radiata ved hjælp af "Atlas ..." funktionen. Vælg atlaset som "JHU-WhiteMatter-labels-1mm."
        1. Vælg og tilføj "Anterior_corona_radiata", "Posterior_corona_radiata" og "Superior_corona_radiata". Tegn en region for undgåelse for alle fibre, der passerer gennem et plan, der ligger under niveauet af klaustrummet i aksialplanet ved hjælp af "Ny region"I regionvinduet. Udfør fibersporing som beskrevet i trin 4.4.
      7. Placer frø til kortikospinalkanalen ved at anvende en "frø" fra funktionen "Atlas ..." i regionvinduet; Vælg "JHU-WhiteMatter-labels-1mm" og tilføj "Corticospinal_tract" regionen. Udfør fibersporing som beskrevet i trin 4.4.
      8. Placer frø til frontal aslantkanalen (FAT) ved hjælp af en "frø" region fra funktionen "Atlas ..." i regionvinduet og vælg Brodmann-atlaset og "Region 6" ROI'erne i "Region 44" og "Region 45". " Udfør fibersporing som beskrevet i trin 4.4.
      9. Placer frø til frontostriatale kanaler (FST) med et "frø" i "Region 6" ved hjælp af funktionen "Atlas ...". Indsæt nye regioner i "caudate", "putamen" og "globus pallidus" fra "HarvardOxfordSub" atlaset og indstil typen i regionvinduet til "ende"."
        BEMÆRK: Fibersporing for FST udføres ved at vælge Region 6-frøet og kun et af de subkortiske frø per sporingssession ( dvs. region 6 og kaudat, efterfulgt af region 6 og putamen og endelig region 6 og globus pallidus).
        1. Udfør fiberopfølgning som beskrevet i trin 4.4 for hver kombination.
    4. Udfør fibersporing for hver af de ovennævnte kombinationer.
      1. I vinduet "Indstillinger" skal du indstille sporingsparametrene som: terminationsindeks på qa på 0,08, vinkelgrænse på 75, trinstørrelse på 0,675, udglatning på 0,2, minimumslængde på 20 mm og maksimal længde på 200 mm. Vælg frøretningen som "Alle", frøpositionen som "Subvoxel", og randomiser såning som "On". Brug trilinearretningsinterpolation med en strømlinjeformet (Euler) sporingsalgoritme. For hver kombination af regioner ovenfor vælger du "Kør tracking" i & #34; Fiber Tracts "vindue.
        BEMÆRK: På grund af sporingenes randomiserede karakter er det klart, at "falske fibre" er identificeret og fjernet selektivt, hvor regionerne undgås med hånden som en "Ny region".
    5. Affine registrerer den hjerneekstraherede T1-vægtede 3D MP-RAGE scanning, der leveres i Human Connectome Project-datasættet til diffusionsdataene ved hjælp af funktionen "Skiver -> Insert T1 / T2 Images" i DSI-Studio. Generér en overfladegengivelse af hjernen ved at vælge "Skiver -> Tilføj Isosurface." Brug en "tærskel" på 665.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

SMA-komplekset er beliggende i den bageste del af den overlegne frontale gyrus. Grænserne for SMA-komplekset er præcentral sulcus posteriorly, den overlegne frontal sulcus inferior-lateralt og cingulate sulcus inferior-medially 18 . SMA-komplekset består af to dele: Pre-SMA anteriorly og SMA'en korrekt posterior 18 . Der er forskelle i forhold til hvide stofforbindelser og funktion mellem disse to dele 18 ( figur 1A og B ). Vi undersøgte kortikale og subkortiske forbindelser af disse to dele ved hjælp af fiberdissektion og DTI-teknikker og viste dem i 3D-billeder.

SMA-sammenslutningens sammenslutningsfibre

Fjernelse af cortex af frontal lobe udsatte de korte association fibre, tHan såkaldte U-fibre, der forbinder nabo gyri 18 ( figur 1C ). De korte associeringsfibre i SMA-komplekset tilvejebringer forbindelser mellem SMA-komplekset og motorcortexen bagved og mellem SMA-komplekset og den for-frontale cortex anteriorly 18 ( Figur 2B ). De giver også forbindelser mellem SMA'en og SMA'en i SMA-komplekset. De mest overfladiske lange association fibre er den overordnede langsgående fasciculus II (SLF II) og den frontale operative del af SLF III 13 , 36 ( Figur 2A ). Vi fjernede SLF II og SLF III lige foran præcentral sulcus for at eksponere frontal aslantkanalen (FAT), som forbinder den overlegne frontale gyrus og den nedre frontale gyrus ( figur 2B ). FAT er overfladiske association fibre, der stammer fra pre-SMA og pars opercularis.

Under FAT dissektion er det afgørende at anatomisk skelne FAT fra corona radiata fibre, som løber parallelt i lodret plan. Som litteraturen angiver, flyder FAT-fibre skråt fra SMA-regionen til den nedre frontale gyri og bliver overfladisk i pars opercularis 2 . Imidlertid løber andre corona radiata og claustrocortical fibre dybt til de basale ganglier uden at være overfladiske 18 ( Figur 2C , 3C og 3D ).

En anden sammenslutning fiberkanal i SMA komplekset er SLF I, der forbinder den overlegne parietal lobe til den overlegne frontal lobe (SMA kompleks) og den forreste cingulate cortex på medisin side af halvkuglen 18 , 36 . Spaltningen af ​​SLF I blev udført medial til latEral efter dekortikationen af ​​den midterste overflade på halvkuglen ( figur 2A , 3A og 3B ).

Kommercielle fibre i SMA-komplekset

Den store kommissoriske fiberbane er callosalfibrene, som forbinder SMA-komplekset med kontralaterale SMA-komplekset. Callosalfibrene er anbragt mellem corona-strålen, cingulumet og SLF I-fibre og krydser til midterlinien via corpus callosum for at nå det kontralaterale SMA-kompleks ( figur 2A , 4A og 4B ).

Projektionsfibre af SMA-komplekset

Fremspringsfibrene består af 4 forskellige fibergrupper, der er relateret til SMA-komplekset: cingulumfibrene, claustrocortical fibre, frontocitriatalum ogCorticospinalkanalen. De cingulære fibre stammer fra den midterste overflade af halvkuglen til dannelse af cingulumet og løber inden for det cingulære gyrus. Funktionen af ​​disse fibre er at tilvejebringe forbindelser mellem SMA-komplekset og det limbiske system 18 ( figur 2A og 4C ).

Fordelingen af ​​de claustrocortical fibre grænser er den forreste kant af før-SMA anteriorly og den bageste del af parietal lobe posteriorly ( Figur 2D og 4D ). Derfor slutter fibrene stammer fra klaustrummet i alle SMA komplekse områder (før SMA og SMA korrekt) 37 .

Frontostriatale kanaler (FST) forbinder SMA-komplekset og dorsalstriatumet ( dvs. caudate-kernen og putamen) og rejser mellem det ydre og det indre cApsules 18 ( figur 3C og 3D ). Det er vanskeligt at skelne FST fra andre interne kapselfibre ( fx thalamiske peduncler, frontopontinfibre osv.) Samt fra andre fibre i lodret plan ( f. Eks. FAT og andre corona radiata fibre) ved anvendelse af Fiber dissektionsteknik. Ikke desto mindre, Grande et al. Anvendte DTI-teknikken til at demonstrere, at FST-fibre, som opstår fra SMA-komplekset, ophører i både de eksterne og interne kapsler 18 . Ca. 10% af de kortikale ryggradsfibre stammer fra SMA'en, der er korrekt og ophører i rygmarven, men disse fibre stammer ikke fra præ-SMA 38 ( figur 4E ).

figur 1
Figur 1: Lateral ogMedial overflade af venstre frontal lobe visning. Mærkede 2D-illustrationer ledsager hver 3D-illustration på venstre side. Venstre halvkugle sidebillede: SMA korrekt (lilla) og før SMA (grøn); SMA-komplekset er beliggende i den bageste del af den overlegne frontale gyrus, lige foran præcentral gyrus ( A ). Venstre halvkugle medial visning. En imaginær lodret linie på niveauet af den forreste kommission, vinkelret på linien mellem anterior og posterior kommisser, er grænsen mellem SMA'en (lilla) og præ-SMA'en (grøn) ( B ) 39 . Efter dekortikationsvisning. Dekortikationen udsætter korte association fibre, kaldet "U fibre." U-fibre forbinder nabo-gyri med hinanden, f.eks. SMA'en til SMA'en, og SMA'en er korrekt til motorcortexen ( C ). Venligst klik herFor at se en større version af denne figur.

figur 1
Figur 2: Lateral-til-medial fiberdissektion. Mærkede 2D-illustrationer ledsager hver 3D-illustration på venstre side. Sidebillede SLF II strækker sig mellem den vinklede gyrus og den midterste frontale gyrus og slutter ved pars opercularis og pars triangularis. SLF III forbinder supramarginal gyrus og pars triangularis i frontoparietal operculum. Medial visning; SLF'en forbinder den overordnede parietallobe med den forreste cingulære cortex og medialoverfladen på den overlegne frontale gyrus, som omfatter SMA-komplekset ( A ). Efter fjernelse af en del af SLF II på koronalt niveau blev FAT udsat ( B ). FAT-fibre rejser skråt fra SMA-regionen til den nedre frontale gyri og bliver overfladiskeI pars opercularis. Andre corona radiata fibre løber dybt til de basale ganglier uden at være overfladiske ( C ). En anden prøve, der viser den eksponerede grænse for den claustrocortical fiberfordeling på det kortikale område, som ligger mellem den forreste del af præ-SMA og den bageste del af parietalloben ( D ). Klik her for at se en større version af denne figur.

figur 1
Figur 3 : DTI-undersøgelse af SMA-forbindelser. SLF fibre ses på en sagittal skive ( A ) og et koronal skive ( B ) på DTI. SLF I (gul); SLF II (orange); SLF III (turkis). Forholdet mellem FAT (grøn) og FST (blå) sagittal ( C ) og koronal ( D Klik her for at se en større version af denne figur.

figur 1
Figur 4 : DTI-undersøgelse af SMA-forbindelser. Callosal fibre ses på en koronal skive ( A ) og en sagittal skive ( B ) på DTI. De cingulære fibre (rød) ( C ), de claustrocortical fibre (orange) ( D ) og corticospinalkanalen (lilla) ( E ), som set på sagittale skiver på DTI. Klik her for at se en større version af denne figur.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Betydningen af ​​og undersøgelsesteknikkerne for de hvide spørgsmål

Den cerebrale cortex accepteres som en primær neurale struktur forbundet med 2,5 millioner år af menneskeliv. Ca. 20 mia. Neuroner er adskilt i forskellige dele baseret på morfologisk og cellulær specifikation 40 . Arkitekturen af ​​hver af disse kortikale dele har været funktionelt undergrupperet, såsom sensorimotorisk sans og bevægelse, følelsesmæssig oplevelse og kompleks ræsonnement. Det blev fastslået, at alle former for adfærd i primater er dannet af unikke anatomofunktionelle forbindelser og regioner, der er topografisk fordelt gennem de kortikale og subkortiske områder af neurale systemet. Selvom cerebral cortex er blevet undersøgt i detaljer, er der stadig mangel på viden om de hvide stofbaner i det neurale system, som forbinder forskellige områder. Områder som centrum semiovale og corona radiata har været sTudied før under en makroskopisk visning. I løbet af 1800'erne udførte forskere bruttespredningen af ​​aber ved hjælp af myelinfarvningsmaterialer og autoradiografimetoder, der blev anvendt ved hjælp af aminosyrer for at forstå det hvide stoffibersystem. Nogle vigtige associeringsfibre, såsom cingulum og uncinate fasciculus, er blevet identificeret og navngivet med disse undersøgelser. På den anden side er identifikationen af ​​andre hvide stofbaner, såsom den bueformede fasciculus / overlegen langsgående fasciculus og den nedre langsgående fasciculus, stadig modstridende i litteraturen 41 , 42 , 43 , 44 , 45 .

En forståelse af hvide stofstrukturer er meget vigtigt at give detaljer om de anatomiske processer af højt niveau adfærd og struktur og funktion af cerebrum. ENDybere forståelse af de hvide stofbaner er også afgørende for kliniske mål. Mange sygdomme er forårsaget af læsioner, der påvirker de hvide stofbaner. Tidligere var der ingen unik og korrekt teknik, der kunne bruges til at beskrive fiberbanerne, på trods af forbedringer i radiologiske billeddannelsesteknikker. Den cadaveric fiber dissektionsteknik, som er den ældste teknik, var den ideelle metode til neuroanatomisk uddannelse af unge neurokirurger og den bedste standard blandt traktorteknikkerne baseret på diffusionstensorafbildning, MR-traktografi, diffusionsspektrumtraktografi og autoradiografi. Fiberbanerne kan visualiseres in vivo med MRI; Ulempen ved denne teknik er imidlertid vanskeligheden med at bestemme termineringen og oprindelsen af ​​fiberbanerne. Den autoradiografiske teknik kan kun anvendes i forsøgsdyr. Kendskab til fiberkanalanatomi er afgørende for at opnå en bedre forståelse af kognitive, psycHiatric og motor manifestationer efter hvide stof lidelser som multipel sklerose.

Plasticitet findes i grå materiale, men ikke i hvidt stof; Enhver perioperativ skade på hvidt stof forårsager uoprettelige underskud i patienten (Schmahmann et al. ). Dette gør fiberbanernes anatomi mere værdifuld i neurokirurgi 46 . Under præoperativ kirurgisk planlægning til fjernelse af intraaksiale læsioner bør placeringen og forskydningen af ​​de vigtige fiberbaner, såsom den bueformede fasciculus, optiske strålinger og kortikospinalkanalen tages i betragtning for en vellykket operation. Den anatomiske viden, sammen med præoperativ MR-traktatografi, giver lyd evaluering og kirurgisk planlægning for hver patient. I mellemtiden hjælper udførelse af kadaverisk fiberdissektion under operationsmikroskopet at forbedre kirurgens håndkundskaber og giver en dybere forståelse for den komplekse brAnatomi i tre dimensioner. For at opnå disse gevinster bør kirurgen bruge tid i et mikrokirurgi laboratorium. Han / hun bør kun fokusere på fiberkanalerne under dissektionen, snarere end hvad han / hun gerne vil se. På den anden side har forbedringer i DTI-billedteknikker i dag gjort det muligt at identificere vigtige fiberbaner in vivo både i normal hjerne og i kliniske situationer, hvor fibersystemet er påvirket. Denne metode gav oprindeligt ingen oplysninger om start- og termineringsområderne af store fiberbundt og var kun effektive i definitionen af ​​udvidelser. Men med udviklingen af ​​MR-traktografi og diffusionsspektrumbilleddannelse (DSI) er der taget store skridt for at forstå normal hjerneanatomi i in vivo og kliniske studier 47 , 48 , 49 . I de senere år er det blevet foreslået at kortlægge hvide stofbanerEr meget kritisk for at forhindre postoperative underskud. Det er også nyttigt at udføre intraoperativ elektrisk kortlægning af det hvide stof for at beskytte betydelige subkortiske strukturer og deres funktioner 50 , 51 . Derfor skal anatomien i frontalområdet og de hvide stofbaner forstås grundigt for frontal-gliomoperation.

Anatomiske egenskaber og den kliniske betydning af SMA Complex

Den makro-anatomiske grænselinie mellem pre-SMA og SMA'en er accepteret som en vertikal imaginær linje, der passerer gennem niveauet af den forreste kommission 18 , 39 . Også før SMA og SMA har forskelle i forhold til deres funktioner. Selvom SMA'en har somatotopiske opgaver, har præ-SMA en somatosensorisk organisation 19 . Dybest set er SMA'en ansvarlig for thE aktivering, kontrol og generering af bevægelse, mens præ-SMA er ansvarlig for kognitive og ikke-motoriske opgaver 8 .

Patienter med læsioner af præ-SMA til stede med forskellige grader af taleangivelse, lige fra en total manglende evne til at indlede tale ( dvs. mutisme) til mild ændret flydende 52 . Som forudsagt ved neurokirurgisk elektrisk stimuleringsdata frembringer resektion eller beskadigelse af SMA-komplekset negativt motorrespons i motor- og talefunktioner og resulterer til sidst i SMA-syndrom. SMA syndrom er et komplekst neurokirurgisk syndrom ved indvielse, der spænder fra et totalt tab af motor- og taleproduktion, såsom akinetisk mutisme, til reducerede spontane bevægelser og tale 18 , 53 . Derfor spiller de subkortiske fiberkanalforbindelser af SMA-komplekset en vigtig rolle i kirurgisk planlægning.

SMA-kompleksets fiberbaner

I denne undersøgelse studerede vi alle forbindelser af SMA-komplekset, såsom FAT, FST, korte association fibre, SLF I, callosal fibre, cingulum fibre og claustrocortical fibre ved anvendelse af cadaveric fiber dissektion og DTI teknikker, der blev defineret i litteraturen i De seneste år 8 , 13 , 18 . Vi viste og støttede vores fiber dissektion resultater via DTI. Imidlertid er det vanskeligt at adskille nogle fremspring hvide stofbaner, såsom FST og kortikospinalkanalen (CST) fra andre corona-strålefiberbundter via anatomisk dissektion. Derfor var vi i stand til at vise topografisk anatomi af disse to fiberbundne mere effektivt via DTI. Derudover er evnen til at studere in vitro og at vise dybfiberbundler i detaljer de andre fordele ved DTI-undersøgelsen.

SLF I er en lang association fiber, som forbinder precuneus (superior parietal lobe) til SMA komplekse og cingulate cortex. SLF Jeg har funktioner i forbindelse med både det limbiske system ved at forbinde med den forreste cingulære cortex og motorsystemet ved at forbinde med den overlegne parietallobe 13 , 18 , 36 , 54 .

De bakre dele af den overlegne og den nedre frontale gyrus forbinder med et direkte system, der består af FAT, som blev nyligt defineret ved anvendelse af DTI teknikker 2 og derefter med fiberdissektionsteknikker 18 . Fremspringen af ​​denne vej er i før SMA og SMA korrekt i den overlegne frontale gyrus og pars opercularis i den nedre frontale gyrus 18 . Ford et al. Demonstreret strukturel forbindelse mellem SMA ogBroca Center for første gang, der understøtter SMA's funktionelle rolle som talebearbejdning cortex 55 . Foruden SLF I er FAT en direkte vej, der forbinder pars opercularis med anterior cingulate og pre-SMA, som indikeret af resultaterne i denne undersøgelse. Catani et al. Definerede FAT gennem DTI og rapporterede, at cortical atrofi af FAT-forbindelseszoner på SMA-komplekset (før SMA og den forreste del af SMA'en) og den forreste cingulat hos patienter med primær progressiv afasi kan resultere i verbale flydende lidelser 46 . Tidligere undersøgelser har vist, at FAT også kan være forbundet med taleinitiationsvanskeligheder og talevirkningsdysfunktioner 22 .

FST består af projektionsfibre, der forbinder pre-SMA og striatum ( dvs. caudate nucleus og putamen). I tidligere undersøgelser er FST'ens opsigelsespunkter i basal gaNglia var ikke helt klart. Det blev imidlertid også vist i de seneste omfattende DTI undersøgelser, at FST stammer fra pre-SMA og slutter i den indre kapsel og i lateraloverfladen af ​​putamen 20 , 21 , 22 . Hertil kommer, at i et andet DTI-studie har det vist sig, at FST'en afslutter både i sidens og medialoverfladerne af putamen 18 . Funktionelt, Duffau et al. Demonstreret anartria og / eller ophør af bevægelse under intraoperativ direkte elektrisk stimulering af putamen, hvis mekanisme højst sandsynligt er gennem FST 21 's putaminalforbindelser.

Kortikospinalkanalen forbinder SMA'ens korrekte og primære motorcortex til rygmarven, men præ-SMA'en har ingen fibre i kortikospinaltanken 24 . I et elektrostimuleringsstudie af Duffao > Et al. , Blev en arrestation af bevægelse observeret ved at stimulere SMA-regionen i den kontralaterale øvre del. Det blev antaget, at dette kan forekomme på grund af forbindelsen mellem SMA'en med rygmarven af ​​kortikospinalkanalen og den kontralaterale SMA af callosalfibre 18 , 56 .

De claustrocortical fibre forbinder imod klaustrummet i den centrale kerne og et bredt område mellem den forreste kant af før-SMA og den bageste del af parietal-klappen 13 . Funktionelt antages de claustrocortical fibre at spille en rolle i bevidstheden og i koordinering af information, der kommer fra den visuelle kortikale region, det limbiske system og somatosensoriske og motoriske kortikoser 27 . Derfor blev claustrocortical fiberbundt mellem SMA-komplekset og claustrum tænkt at kunne spille en rolle i udførelsen af ​​højere motor- og talekontrol> 18.

Selv om det i tidligere undersøgelser er blevet fastslået, at forbindelsen af ​​SMA kompleks med cingular gyrus er via korte associeringsfibre, blev det i en nylig anatomisk undersøgelse fundet, at disse forbindelser tilvejebringes direkte af cingulære fibre 18 . Funktionelt blev det hævdet, at denne vej har en rolle i motorbearbejdning af negativ følelsesmæssig stimulering mellem SMA og limbicorte 18 .

I de seneste år blev den kliniske betydning af SMA-komplekset ( fx SMA-syndrom og negativt motorrespons) afsløret af et stigende antal elektrostimulationsundersøgelser. Derfor blev betydningen af ​​topografiske anatomi og subkortikale forbindelser af SMA gradvist fremhævet. Det er afgørende at få en bedre forståelse af topografisk anatomi, især gennem 3D anatomiske studier, og at anvende kliniske egenskaber ved disse forbindelser til at planlægge kirurgi.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Forfatterne erklærer ingen konkurrerende finansielle interesser og ingen finansieringskilder og støtte, herunder alt for udstyr og medicin.

Acknowledgments

Dataene blev til dels leveret af Human Connectome Project, WU-Minn Consortium (Hovedforskere: David Van Essen og Kamil Ugurbil; 1U54MH091657), finansieret af de 16 NIH Institutter og Centre, der støtter NIH Blueprint for Neuroscience Research; Og af McDonnell Center for Systems Neuroscience ved Washington University. Figur 2A og 2D blev gengivet med tilladelse fra Rhoton-samlingen 57 (http://rhoton.ineurodb.org/?page=21899).

Materials

Name Company Catalog Number Comments
%4 Paraformaldehyde Solution AFFYMETRIX, Inc. 2046C208 used to fixation
Freezer INSIGNA NS-CZ70WH6 used to freez
Panfield Dissector AESCULAP FD305 used to dissection
Surgical Micro Scissor W. Lorenz 04-4238 used to miscrodissection
Surgical Micro Hook V. Mueller NL3785-009 used to miscrodissection
MICRO VESSEL STRETCHER/DILATOR W. Lorenz 04-4324 used to miscrodissection
Emax2 SC 2000 Electric Console Anspach Companies SC2102 used to craniatomy
Drill Set Anspach Companies NS-CZ70WH6 used to craniatomy
20-1000 operating microscope Moeller-Wedel,Germany FS 4-20 used to miscrodissection
Canon EOS 550D 18 MP CMOS APS-C Digital SLR Camera Canon Inc. DS126271 used to take photos
EF 100 mm f/2.8L IS USM Macro Lens Canon Inc. 4657A006 used to take photos
MR-14EX II Macro Ring Lite (Flash) Canon Inc. 9389B002 used to take photos
Tripod Lino Manfrotto 322RC2 used to take photos
MAYFIELD Infinity Skull Clamp Integra Inc. A0077 used to fix the head
Modified Skrya 3T "Connectome" Scanner Siemens Company, Inc. A911IM-MR-15773-P1-4A00 used to scan DTI
XstereO Player Yury Golubinsky Version 3.6(22) used to create anaglyphs
EF-S 18-55mm f/3.5-5.6 IS II SLR Lens Canon Inc. 2042B002 used to take photos
Scalpel 6B INVENT 7-104-L used to make incision
Compact Speed Reducer Anspach Companies CSR60 used to make burr hole
14 mm Cranial Perforator Anspach Companies CPERF-14-11-3F used to make burr hole
2 mm x 15.6 mm Fluted Router Anspach Companies A-CRN-M used to make craniotomy
2.1 mm Pin-shaped Burrs Anspach Companies 03.000.130S used to make craniotomy

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Nieuwenhuys, R., Voogd, J., Huijzen, C. V. The Human Central Nervous System. , 4th edi, 620-649 (2008).
  2. Catani, M., Acqua, F., Vergani, F., Malik, F., Hodge, H. Short frontal lobe connections of the human brain. Cortex. 48, 273-291 (2012).
  3. Duffau, H., Capelle, L. Preferential brain locations of low-grade gliomas. Cancer. 100 (12), 2622-2626 (2004).
  4. Yasargil, M. G., Türe, U., Yasargil, D. C. Impact of temporal lobe surgery. J Neurosurg. 101 (05), 725-738 (2004).
  5. Türe, U., Yasargil, M. G., Friedman, A. H., Al-Mefty, O. Fiber dissection technique: lateral aspect of the brain. Neurosurgery. 47 (2), 417-427 (2000).
  6. Burger, P. C., Heinz, E. R., Shibata, T., Kleihues, P. Topographic anatomy and CT correlations in the untreated glioblastoma multiforme. J Neurosurg. 68 (5), 698-704 (1998).
  7. New concepts in surgery of WHO grade II gliomas: Functional brain mapping, connectionism and plasticity-a review. J Neurooncol. 79 (1), 77-79 (2006).
  8. White matter connections of the supplementary motor area in humans. J Neurol Neurosurg Psychiatry. 85 (12), 1377-1385 (2014).
  9. Luppino, G., Matelli, M., Camarda, R., Rizzolatti, G. Corticocortical connections of area F3(SMA-proper) and area F6(pre-SMA)in the macaque monkey. J. Comp.Neurol. 338, 114-140 (1993).
  10. Akkal, D., Dum, R. P., Strick, P. L. Supplementary motor area and presupplementary motor area: targets of basal ganglia and cerebellar output. J. Neurosci. 27, 10659-10673 (2007).
  11. Behrens, T. E. Non-invasive mapping of connections between human thalamus and cortex using diffusion imaging. Nat. Neurosci. 6, 750-757 (2003).
  12. Potgieser, A. R. E., de Jong, B. M., Wagemakers, M., Hoving, E. W., Groen, R. J. M. Insights from the supplementary motor area syndrome in balancing movement initiation and inhibition. Frontiers in Human Neuroscience. 28 (8), 960 (2014).
  13. Yagmurlu, K., Vlasak, A. L., Rhoton Jr, A. L. Three-Dimensional Topographic Fiber Tract Anatomy of the Cerebrum. Neurosurgery. 2, epub 274-305 (2015).
  14. Fernández-Miranda, J. C., Rhoton Jr,, L, A., Álvarez-Linera, J., Kakizawa, Y., Choi, C., de Oliveira, E. P. Three-dimensional microsurgical and tractographic anatomy of the white matter of the human brain. Neurosurgery. 62 (6 Suppl 3), 989-1026 (2008).
  15. Couzin, J. Crossing a frontier: Research on the dead. Science. 299 (5603), 29-30 (2003).
  16. University of Minnesota. Research Ethics. , Available from: https://www.ahc.umn.edu/img/assets/26104/Research Ethics/pdf (2016).
  17. Ludwig, E., Klingler, J. Der innere Bau des Gehirns dargestellt auf Grund makroskopischer Präparate. The inner structure of the brain demonstrated on the basis of macroscopical preparations. Atlas cerebri humani. , 1-36 (1956).
  18. Bozkurt, B. The Microsurgical and Tractographic Anatomy of the Supplementary Motor Area Complex in Human. J World Neurosurg. 95, 99-107 (1956).
  19. Lehericy, S. 3-D diffusion tensor axonal tracking shows distinct SMA and pre-SMA projections to the human striatum. Cereb Cortex. 14, 1302-1309 (2004).
  20. Duffau, H. Intraoperative mapping of the cortical areas involved in multiplication and subtraction: an electrostimulation study in a patient with a left parietal glioma. J Neurol Neurosurg Psychiatry. 73 (6), 733-738 (2002).
  21. Kinoshita, M. Role of fronto-striatal tract and frontal aslant tract in movement and speech: an axonal mapping study. Brain Struct Funct. 220 (6), 3399-3412 (2015).
  22. Shimizu, S. Anatomic dissection and classic three-dimensional documentation: a unit of education for neurosurgical anatomy revisited. Neurosurgery. 58 (5), E1000 (2006).
  23. Connectome Database. , Available from: https://db.humanconnectome.org (2016).
  24. Moeller, S. Multiband multislice GE-EPI at 7 tesla, with 16-fold acceleration using partial parallel imaging with application to high spatial and temporal whole-brain fMRI. Magn Reson Med. 63 (5), 1144-1153 (2010).
  25. Feinberg, D. A. Multiplexed Echo Planar Imaging for sub-second whole brain fMRI and fast diffusion imaging. PLoS One. 5, e15710 (2010).
  26. Setsompop, K. Blipped-controlled aliasing in parallel imaging for simultaneous multislice echo planar imaging with reduced g-factor penalty. Magn Reson Med. 67 (5), 1210-1224 (2012).
  27. Xu, J. Highly accelerated whole brain imaging using aligned-blipped-controlled-aliasing multiband EPI. In Proceedings of the 20th Annual Meeting of ISMRM. 20, 2306 (2012).
  28. Glasser, M. F. The minimal preprocessing pipelines for the Human Connectome Project. Neuroimage. 80, 105-124 (2013).
  29. Free Surfer Software Suite. Harvard University. , Available from: http://surfer.nmr.mgh.harvard.edu (2016).
  30. FSL. Software Library. , Available from: http://fsl.fmrib.ox.ac.uk (2016).
  31. Jenkinson, M., Bannister, P. R., Brady, J. M., Smith, S. M. Improved optimization for the robust and accurate linear registration and motion correction of brain images. NeuroImage. 17 (2), 825-841 (2002).
  32. Andersson, J. L., Skare, S., Ashburner, J. How to correct susceptibility distortions in spin-echo echo-planar images: application to diffusion tensor imaging. NeuroImage. 20 (2), 870-888 (2003).
  33. Andersson, J., Xu, J., Yacoub, E., Auerbach, E., Moeller, S., Ugurbil, K. A comprehensive Gaussian process framework for correcting distortions and movements in diffusion images. In Proceedings of the 20th Annual Meeting of ISMRM. 20, 2426 (2012).
  34. DSI Sudio. , Available from: http://dsi-studio.labsolver.org (2016).
  35. Yeh, F. C., Wedeen, V. J., Tseng, W. Y. Generalized q-sampling imaging. IEEE Trans Med Imaging. 29 (9), 1626-1635 (2010).
  36. Makris, N. Segmentation of subcomponents within the superior longitudinal fascicle in humans: a quantitative, in vivo DT-MRI study. Cereb Cortex. 15 (6), 854-869 (2005).
  37. Fernández-Miranda, J. C., Rhoton, A. L. Jr, Kakizawa, Y., Choi, C., Alvarez-Linera, J. The claustrum and its projection system in the human brain: a microsurgical and tractographic anatomical study. J Neurosurg. 108 (4), 764-774 (2008).
  38. Maier, M. A., Armand, J., Kirkwood, P. A., Yang, H. W., Davis, J. N., Lemon, R. N. Differences in the corticospinal projection from primary motor cortex and supplementary motor area to macaque upper limb motoneurons:an anatomical and electrophysiological study. Cereb. Cortex. 12, 281-296 (2002).
  39. Picard, N., Strick, P. L. Imaging the premotor areas. Curr. Opin. Neurobiol. 11, 663-672 (2001).
  40. Pakkenberg, B., Gundersen, H. J. G. Neocortical neuron number in humans: effect of sex and age. Journal of Comparative Neurology. 384 (2), 312-320 (1997).
  41. Geschwind, N. Disconnexion syndromes in animals and man. Brain. 88 (3), 237-294 (1965).
  42. Geschwind, N. Disconnexion syndromes in animals and man. Brain. 88 (3), 585-644 (1965).
  43. Goldman-Rakic, P. S. Topography of cognition: parallel distributed networks in primate association cortex. Annu Rev Neurosci. 11 (1), 137-156 (1988).
  44. Mesulam, M. M. From sensation to cognition. Brain. 121 (6), 1013-1052 (1998).
  45. Mesulam, M. Large-scale neurocognitive networks and distributed processing for attention, language, and memory. Ann Neurol. 28 (5), 597-613 (1990).
  46. Schmahmann, J. D., Pandya, D. N. Fiber pathways of the brain. 8, Oxford University Press. Oxford. 393-409 (2006).
  47. Bammer, R., Acar, B., Moseley, M. E. In vivo MR tractography using diffusion imaging. Eur J Radiol. 45 (3), 223-234 (2003).
  48. Catani, M., Howard, R. J., Pajevic, S., Jones, D. K. Virtual in vivo interactive dissection of white matter fasciculi in the human brain. Neuroimage. 17 (1), 77-94 (2002).
  49. Lin, C. P., Wedeen, V. J., Chen, J. H., Yao, C., Tseng, W. Y. I. Validation of diffusion spectrum magnetic resonance imaging with manganese-enhanced rat optic tracts and ex vivo phantoms. Neuroimage. 19 (3), 482-495 (2003).
  50. Bello, L., Acerbi, F., Giussani, C., Baratta, P., Taccone, P., Songa, V. Intraoperative language localization in multilingual patients with gliomas. Neurosurgery. 59 (1), 115-125 (2006).
  51. Bernstein, M. Subcortical stimulation mapping. J Neurosurg. 100 (3), 365 (2004).
  52. Ackermann, H., Riecker, A. The contribution(s) of the insula to speech production: a review of the clinical and functional imaging literature. Brain Struct Funct. 214, 419-433 (2010).
  53. Krainik, A. Role of the healthy hemisphere in recovery after resection of the supplementary motor area. Neurology. 62, 1323-1332 (2004).
  54. Ford, A., McGregor, K. M., Case, K., Crosson, B., White, K. D. Structural connectivity of Broca's area and medial frontal cortex. Neuroimage. 52, 1230-1237 (2010).
  55. Catani, M., Mesulam, M. M., Jakobsen, E., Malik, F., Martersteck, A., Wieneke, C., Thompson, C. K., Thiebaut de Schotten, M., Dell'Acqua, F., Weintraub, S., Rogalski, E. A novel frontal pathway underlies verbal fluency in primary progressive aphasia. Brain. 136, 2619-2628 (2013).
  56. Rech, F., Herbet, G., Moritz-Gasser, S., Duffau, H. Disruption of bimanual movement by unilateral subcortical electrostimulation. Human Brain Mapping Annual Meeting. 35 (7), 3439-3445 (2014).
  57. The Rhoton Collection. Login page. , Available from: http://rhoton.ineurodb.org/?page=21899 (2016).

Tags

Neurovidenskab udgave 123 supplerende motorområde fiber dissektion diffusion tensor tractography tredimensionel dokumentation hvid stof baner associeringsfibre commissural fibre projektion fibre
Fiberforbindelser af det supplerende motorområde revideret: Metodik for fiberdissektion, DTI og tredimensionel dokumentation
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Bozkurt, B., Yagmurlu, K.,More

Bozkurt, B., Yagmurlu, K., Middlebrooks, E. H., Cayci, Z., Cevik, O. M., Karadag, A., Moen, S., Tanriover, N., Grande, A. W. Fiber Connections of the Supplementary Motor Area Revisited: Methodology of Fiber Dissection, DTI, and Three Dimensional Documentation. J. Vis. Exp. (123), e55681, doi:10.3791/55681 (2017).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter