펄프 조직 문화와 공동 암 세포와 그들의 상호 작용을 공부 하에서 중간 엽 줄기 세포 분리

요약

우리 치과 펄프에서 격리 된 중간 엽 줄기 세포와 공동 문화를 직접 및 간접 방법에 따라 전립선 암 세포 상호 작용의 평가 대 한 프로토콜을 제공 합니다. 조건 매체 및 트랜스-잘 막 간접 paracrine 활동 분석에 적당 하다. 차동 시드 직접 셀 상호 작용에 대 한 적절 한 모델입니다 함께 셀 스테인드.

초록

다단계 프로세스와 복잡 한 질병으로 암은 개별 세포 증식 및 성장 뿐만 아니라 또한 종양 환경과 세포 세포 상호 작용에 의해 제어. 암 및 줄기 세포 상호 작용, 세포 외 환경, 물리적 상호 작용 및 분 비 요소에 변화를 포함 하 여 새로운 치료 옵션의 발견을 사용 수 있습니다. 우리는 시스템을 만들 모델 중간 엽 줄기 세포 (MSCs)와 암 세포 상호 작용 알려진된 공동 문화 기술을 결합 한다. 현재 연구에서 치과 펄프의 줄기 세포 (DPSCs) 및 PC 3 전립선 암 세포 상호 작용은 직접 및 간접 공동 문화 기술에 의해 시험 되었다. 조건 매체 (CM) DPSCs에서 얻은 고 0.4 µ m 기 공 크기의 트랜스-잘 막 paracrine 활동을 연구 하는 데 사용 했다. 다른 세포 유형의 공동 문화 함께 직접 셀 상호 작용을 연구 수행 되었다. 결과 공개 CM 세포 증식을 증가 하 고 전립선 암 세포 배양에 있는 apoptosis를 감소. CM 및 트랜스-잘 시스템 PC-3 셀의 셀 마이그레이션 용량을 증가 했다. 다른 막 염료와 스테인드 셀 같은 문화 혈관으로 시드 했다 고 DPSCs PC-3 셀이 직접 공동 문화 조건 자체 조직된 구조에 참가 했다. 전반적으로, 결과 표시 공동 문화 기술 모델 시스템으로 암 및 MSC 상호 작용에 대 한 도움이 될 수 있습니다.

서론

차별화와 같은 뼈, 연골, 근육, 인 대, 힘 줄, 그리고 지방, 간 엽 조직의 재생에 기여의 능력을 가진 중간 엽 줄기 세포 (MSCs),¹ 성인 신체에서 거의 모든 조직에서 분리 되어 ^{, 2}. 조직의 항상성 만성 염증 또는 상해 거주 셀을 생산 하 여 제공 하는, 다른 그들은 중요 한 cytokines 및 통합 하는 신생, 면역 체계, 그리고 조직³개장을 성장 요인 생산. 암 조직으로 MSCs의 상호 작용은 잘 이해 하지만 축적 증거 나왔다 MSCs가 종양 개시, 진행, 전이⁴를 홍보 수 있습니다.

부상 또는 만성 염증이 지역 MSCs의 귀환 능력은 그들이 줄기 세포 기반 요법에 대 한 귀중 한 후보. 그러나, 암 조직, "상처를 치유 하지", 또한 염증 성 cytokines, 프로-신생 분자, 그리고 cancerogenous 지역⁵MSCs를 유치 하는 중요 한 성장 요인 풀어. 그러나 거기에 제한⁷, 그들의 암 진행과 전이 홍보 효과 광범위 하 게 되어 암 성장

프로토콜

환자 서 면된 동의 기관 윤리 위원회에서 승인 후 얻은 것입니다.

1. DPSC 격리와 문화

1. 17 ~ 20 15 mL 튜브 포함 하는 완전 한 Dulbecco의 수정이 글 중간 (DMEM) 세 젊은 성인에서 얻은 사랑니 전송 [낮은 포도 당 DMEM 미디어, 10% 태아 둔감 한 혈 청 (FBS)와 1% 페니실린/스 보충 / 암포 (PSA) 솔루션], 절제 후 8 시간 이내. 잠재적인 세포 죽음을 방지 하는 전송 하는 동안 조직 자료 감기 (4 ° C)를 보관.
2. 신중 하 게 치아의 중심에서 무 균 추출 겸 자 펄프 조직 제거, 펄프 조직 10cm 조직 문화 요리, 감기 완전 한 DMEM 매체에 놓고 메스로 작은 조각 (2-3 m m)으로 그들을 말하다.
   참고: 모든 실험 절차 수행 되어야 합니다 밖으로 층 류 후드에서 무 균 조건 하에서. 이 비 효소 기술 이전에 사용한^21,,2223되었습니다.
3. 내부 조직 문화 장소 작은 펄프 조직 6 잘 플레이트 취급 하 고 커버 각 작은 펄프 조직 조각에 완전 한 DMEM 미디어의 ....

결과

그림 1 문화 조건 하에서 DPSCs의 일반적인 MSC 특성 묘사. DPSCs (그림 1B) 도금 후 구와 같은 세포 형태학을 발휘 한다. MSC 표면 항 원 (CD29, CD73, CD90, CD105, 및 CD166)은 매우 조 혈 마커 (CD34, CD45, 및 CD14) 동안 표시는 부정적인 (그림 1C). 형태학 및 분자 수준에서 변경 내용을 관련 osteo-chondro-, 그리고 adipo genic 차별화는 DPSCs 문화 차별화 칵테일 응용 (그림 1D)뒤에서 관찰 된다.

전립선 암 세포 증식 및 마이그레이.......

토론

종양 환경 MSCs의 기여는 하이브리드 세포 생성을 통해 세포 융해, 줄기 세포와 암 세포²⁸사이 entosis 또는 cytokine 및 chemokine 활동을 포함 한 여러 가지 상호 작용에 의해 통제 된다. 구조 조직, 세포 세포 상호 작용 및 분 비 종양 승진, 진행, 및 주위 조직 전이 암 셀 동작을 결정 합니다. 적절 한 비보 전 모델 시스템 상주 세포 인구의 상호 작용의 뒤에 기계 장치를 조사 하는 암 진행과 전이 대 한 셀룰러 통신을 이해 해야 합니다.

우리는 전립선 암과 치과 줄기 세포 상호 작용에 대 한 모델 시스템을 만드는 DPSCs를 사용. 성체 줄기 세포의이 유형의 장점은 조직 소스와 쉽게 격리 단계 접근입니다. 다른 한편으로, 잘 알려진 성인 줄기 세포 종류와 비교 하지 않고 DPSCs만을 사용 하 여이 프로토콜의 한계입니다. 현재 공동 문화 방법 paracrine 신호 수용 성 .......

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
DMEM	Invitrogen	11885084	세포 배양용
FBS	Invitrogen	16000044	세포 배양용
PSA	Lonza	17-745E	세포 배양용
Trypsin	Invitrogen	25200056	세포 해리용
PBS	Invitrogen	10010023	세척용
Dexamethasone	Sigma	D4902	분화 매체의 구성
요소&베타;-글리세로인산	시그마	G9422	골형성 분화 매체의 구성
아스코르브산	시그마	A4544	골 및 연골 분화 매체의 구성
요소 인슐린-트랜스페린-셀레늄(ITS &마이너스; G)	Invitrogen	41400045	연골 생성 분화 매체
TGF-&beta	Sigma	SRP3171	연골 분화 매체의 구성
인슐린	Sigma	I6634	지방 생성 분화 매체의 구성
이소 부틸 -1- 메틸 크 산틴 (IBMX)	Sigma	I7018	지방 생성 분화 매체의 구성
Indomethacin	Sigma	I7378	지방 생성 분화 매체의 구성
MTS 시약	Promega	G3582	세포 생존율 분석
TUNEL 분석	Sigma	11684795910	Apoptotic 분석
24웰 플레이트 인서트	Corning	3396	트랜스웰 이동 분석용
PKH67	Sigma	PKH67GL	공동 배양 세포 염색용
PKH26	Sigma	PKH26GL	공동 배양 세포 염색용
파라포름알데히드	Sigma	P6148	세포 고정용
von Kossa Kit	BioOptica	04-170801.A	세포 염색(분화)
Alcian blue	Sigma	A2899	세포 염색(분화)용

염 요소 의 구성 요소; 요소 요소 요소 요소