이 논문은 간 이식 후 허혈 재관류 손상에 대한 기본 연구를 용이하게하기 위해 쥐에서 간 형 편 (간 허혈)의 동물 모델을 구축하는 방법에 대한 자세한 설명을 제공합니다.
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이 논문에서
요약
초록
쥐의 직소 간 이식 (OLT)은 수술 전, 수술 내 및 수술 후 연구에 사용되는 시도되고 입증 된 동물 모델이며, 비형 기관의 허혈 재관류 손상 (IRI)을 포함합니다. 이 모델에는 수많은 실험과 장치가 필요합니다. 간 단계의 기간은 이식 후 IRI를 개발하는 시간과 밀접한 관련이 있습니다. 이 실험에서, 우리는 쥐에 있는 외간 기관 손상을 유도하기 위하여 혈역학 변경을 사용하고 최대 허용 오차 시간을 결정했습니다. 가장 심한 장기 손상까지 의 시간은 다른 장기에 대 한 변화. 이 방법은 쉽게 복제 될 수 있으며 간 이식 후 외간 장기의 IRI를 연구하는 데 사용할 수도 있습니다.
서론
허혈 -재관류 부상 (IRI) 간 이식 후 일반적인 합병증이다. 간 IRI는 허혈 매개 세포 손상 및 간 재관전의 비정상적인 악화를 관련시키는 병리학적인 과정입니다. 간 IRI 및 국천성 면역 반응은 임상 환경 의 차이에 따라 뜨겁고 차가운 IRI로 나눌 수 있습니다1. 뜨거운 IRI는 줄기 세포 손상에 의해 유도되며, 일반적으로 간 이식, 충격 및 외상2의결과로. 감기 IRI는 내피 세포 및 말초 순환에 의한 간 이식의합병증이다 3. 임상 보고는 간 IRI가 초기 장기 실패의 10%와 연관되고 급성 및 만성거부4,5의부각을 증가시킬 수 있다는 것을 보여주었습니다. 또한, IRI간 은 또한 높은 사망률6을가진 다중 장기 기능 장애 증후군 또는 전신 염증 반응 증후군을 유도할 수 있다. 간 장기 에 관여하는 환자는 병원에서 더 오래 머물고, 더 많은 돈을 지출하고, 더 나쁜 예후7이있는경향이 있다. 합병증의 발달은 간 이식8의간 절단 단....
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프로토콜
동물윤리위원회는 광시의과대학(No20190920)의 실험을 승인했다. 모든 동물은 광시 의과 대학의 동물 실험 센터에 의해 공급되었다. 우리는 SPF 남성 스프라그 Dawley 쥐 (200-250 g, 10-12 주)를 사용했으며, 25 ± 2 ° C의 실온 과 습도 50 ± 10 %를 사용했습니다. 수유는 작동 24시간 전에 중단되었습니다. 그러나 물이 제공되었습니다.
참고: 한 운전자는 미세 수술 기초 또는 수술 현미경 없이 모든 수술을 수행할 수 있습니다.
1. 작동
- 계량 후, 이소플루란으로 쥐를 마취 (5%) 동물 마취 기계를 사용 하 여.
- 1-2분 후, 쥐의 발가락을 핀셋으로 부드럽게 고정합니다. 쥐가 꼬집은 후에 반응하지 않으면 마취 상태에 들어갔습니다. 눈에 수의사 연고를 사용하여 건조함을 방지하십시오. 동물 가열 램프를 사용하여 쥐의 체온을 37-38 °C에서 유지하십시오.
- 복부 소독 (povidone 요오드 용액)에 따라 동물 해부 테이블에 쥐를 고정하십시오. 집게와 가위를 사용하여 xiphoid 프로세스 보다 3cm 의 중앙분리를 합니다.
- 복강을 열고, 리트랙터를 사용하여 간을 노출하고, 간위 인대를 동원....
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결과
간 허혈에 쥐의 내성
이 동물 모델에서는 수술 중에 혈관이 결찰된 부위가 도 1에도시되어 있다. 쥐는 무작위로 15 분 동안 허혈을 위한 5 개의 그룹으로 분할되었다 (I15 그룹), 30 분 (I30 그룹), 45 분 (I45 그룹), 60 분 (I60), 그리고 샴 그룹, 각 그룹에 10 쥐와. 각 군의 생존율은 수술 후 14일 후에 관찰되었다. 모든 쥐는 I15 그룹, I30 그룹, 그리고 가짜 그룹에서 살아남았다. I45 그룹에서 14일 동안 8명이 살아남았고, I60 그룹에서는 단 2명만이 살아남았습니다. 이러한 결과는 쥐가 최대 45분 동안 간항제 상을 견딜 수 있음을시사한다(표 1).
쥐의 순환에 혈관 결찰의 효과
실험 도중, Biosystems는 심박수 및 혈압 (오른쪽 내부 경동맥 삽관)을 간 단계 전후에 기록.......
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토론
쥐의 OLT는 간 이식, IRI, 이식 거부, 면역 내성, 이식 병리학 및 약리학, 균동 이식 및 외국인 이식에서 장기 보존을 연구하기위한 이상적인 모델입니다. 현재, 그것은 널리 간 이식의 실험 연구에 사용.
파일럿 연구 도중 우리는 먼저 pentobarbital 나트륨 내 성소 마취를 관리하고 이것이 높은 수술 후 사망률 및 혈역학 변화에 짧은 내성으로 이끌어 낸다는 것을 것을을 발견했습니다. 따라서, 우리는 행동의 급속한 개시 및 체외 특성의 급속한 배제를 위한 후속 예심에서 흡입 마취를 이용했습니다. 흡입 마취로의 전환은 쥐의 허용 오차 시간과 수술 후 생존을 크게 향상시게 했습니다. 수사관은 마취제를 과다 하는 것을 방지하기 위하여 쥐의 호흡 그리고 심박수에 주의를 기울여야 합니다. 생체 시스템은 심박수와 혈압을 모니터링하는 데 사용할 수 있습니다. 우리는 또한 혈관의 결찰에 외과 봉합사 두께의 충격을 관찰했습니다. 3-0보다 작은 선이 혈관을 완벽하게 .......
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공개 사항
이 원고의 저자는 공개 할 이해상충이 없습니다.
감사의 글
우리는 광시의과 대학의 제 2 부속 병원의 원타오 리 박사와 Ji-hua 우 박사가 준 유용한 제안을 인정하고 싶습니다. 저자는 유용한 의견과 토론에 대한 우리의 팀 동료에게 감사드립니다. 저자는 또한 그들의 의견에 대한 익명의 검토자와 편집자에게 감사드립니다. 특별한 감사는 그들의 지속적인 지원과 격려에 대한 박사 위안의 부모에게 가야한다. 이 작품은 닝보 자연과학 재단(2014A610248)의 지원을 받았습니다.
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재료
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| 공기 건조 오븐 | Shanghai Binglin Electronic Technology Co., Ltd. | BPG | |
| 알라닌 아미노전이효소(ALT)키트 | Elabscience Biotechnology Co., Ltd | E-BC-K235-S | |
| 암모니아 | Sinopharm Chemical Reagents Co., Ltd | 10002118 | |
| Amylase Kit | Elabscience Biotechnology Co., Ltd | E-BC-K005-M | |
| 무수 에탄올 | Sinopharm Chemical Reagents Co., | Ltd 100092183 | |
| Animal 마취 기계 | Shenzhen Ruiwode Life Technology Co., Ltd. | R640 | |
| 아스파르테이트 아미노전이효소(AST) 키트 | Rayto Life and Analytical Sciences Co., Ltd. | S03040 | |
| 자동 생화학 분석기. | 지멘스 AG FWB:SIE, NYSE:SI Co., Ltd. | 2400 | |
| Biosystems (when nessary) | Chengdu Taimeng Electronics Co., Ltd. | BL-420F | |
| 원심분리기 | Baiyang Medical Instrument Co., Ltd. | BY-600A | |
| 커버 유리 | Jiangsu Shitai Experimental Equipment Co., Ltd. | 10212432C | |
| 크레아티닌 키트 | , Rayto Life and Analytical Sciences Co., Ltd. | S03076 | |
| 탈수기 | 헝가리 3DHISTECH Co., Ltd | Donatello 시리즈 2 | |
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| 크실렌 | Sinopharm 화학 시약 유한 회사 | 1330-20-7 |
참고문헌
- Dar, W. A., Sullivan, E., Byon, J. S., Eltzschig, H., Ju, C. Ischaemia reperfusion injury in liver transplantation: Cellular and molecular mechanisms. Liver International. 39 (5), 788-801 (2019).
- Qiao, P. F., Yao, L., Zhang, X. C., Li, G. D., Wu, D. Q.
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재인쇄 및 허가
