Gryllus bimaculatus의 실험실 문화 유지, 곤충 농업 및 무척추 동물 생리학을위한 다목적 orthopteran 모델

상징적 인 곤충 인 초파리 초파리 멜라노 가스터 (Drosophila melanogaster )에 의해 대표되는 바와 같이, 곤충을 실험실 모델 유기체로 사용하면 유전학, 독성학 및 생리학¹ 연구에 뚜렷한 이점을 제공합니다. 곤충의 크기가 작을수록 배양에 필요한 공간과 필요한 사료 및 소모품 재료의 양이 줄어 듭니다. 많은 곤충들이 빠르게 번식하여 전문화 된 유전 라인의 생성과 여러 세대의 평가가 필요한 연구에 독특하게 적합합니다.

많은 연구가 완전한 변형과 번식을 나타내는 Drosophila와 같은 홀로 대사 곤충에 중점을 둡니다. 그러나 Gryllus bimaculatus (De Geer), 두 개의 반점이있는 필드 크리켓을 포함한 다른 모델을 사용할 수 있습니다. G. bimaculatus 는 성적 성숙에 도달하기 전에 7 ~ 11 개의 님프 인스타를 겪는 paurometabolous 곤충입니다². 이 크리켓은 stridulation, 영토 전시 및 배우자 보호³을 포함하여 성적 선택과 관련된 광범위한 행동을 보여줍니다. 미성숙 귀뚜라미는 많은 paurometabolous 청소년과 유사하게 ecdysis 동안 손실되고 손상된 팔다리를 재생할 수 있다는 점에서 홀로 대사 성 곤충 종의 유충과^{다릅니다 4}. 또한, G. bimaculatus 의 완전히 서열화 된 게놈은 2021⁵에 발표되었습니다. 이러한 특성으로 인해이 귀뚜라미는 기본 연구의 대상으로 호소력을 발휘합니다.

두 개의 발견 된 들판 귀뚜라미는 인간의 음식과 동물 사료를 위해 널리 사육됩니다. 이러한 작업의 규모는 종종 실험실 연구 ^6,7보다 훨씬 큽니다. 규모의 차이에도 불구하고, 연구원들이 직면 한 도전은 상업용 크리켓 농부들이 직면 한 도전과 크게 겹칩니다. 이러한 고려 사항은 식용 곤충 생산을 개선하기위한 실험실 기반 연구의 맥락에서 수렴됩니다. 식용 곤충 산업이 계속 진화하고 성장함에 따라 사료 투입량과 생산의 무수한 다른 측면을 최적화하는 것이 주요 목표입니다⁸. 이 귀뚜라미의 양육 효율성, 생존 또는 생성 시간의 측정 된 개선을 보여주는 실험실 연구는 귀뚜라미 농업 운영의 수익성을 장기적으로 높이는 데 도움이 될 가능성이 있습니다.

표준화 된 양육 프로토콜은 양육 최적화를 조사하는 연구 간의 면밀한 비교를 가능하게합니다. 현재까지 실험실에서 G. bimaculatus를 양육하기위한 심층적 인 프로토콜은 거의 발표되지 않았습니다. 이상적인 프로토콜은 실제 귀뚜라미 농업 운영에서 직면 한 조건을 반영하는 동시에 실험 치료로 인한 성장 성과의 변화를 정확하게 측정하고 위험 완화 전략을 강조하는 데 필요한 엄격하게 통제 된 조건을 유지합니다. 이 논문에 설명 된 방법은 광범위한 실험실 및 상업 생산 규모 2,9,10,11,12에서 다양한 크리켓 종을 양육하는 데 사용되는 공개 된 프로토콜^, 기술 및 장치를 기반으로 개발되었습니다. 이러한 방법은 또한 출판되지 않은 기술 게시판 및 북미의 상업용 크리켓 농민과의 개인적인 의사 소통을 포함하여 여러 비 동료 검토 출처에 의해 통보됩니다. 이 프로토콜은 곤충 농업과 관련된 시험에서 사용하기 위해 특별히 G. bimaculatus의 실험실 문화의 확립을 촉진하려는 의도로 개발되었습니다.

1. 산란 기질 준비

참고 : 코코넛 열매는 G. bimaculatus에 이상적인 산란 기질입니다. 압축 된 coir 벽돌과 coir를 분리하는 방법에 대한 자세한 방법과 호흡기 안전에 대한 참고 사항은 보충 자료 단계 1.1을 참조하십시오.

1. 비누와 물로 손을 씻으십시오.
2. 균형에 깨끗한 용기를 꽂고 인간의 주먹 크기의 마른 코코넛 열매 덩어리의 무게를 측정하십시오.
3. 코일을 밀봉 가능한 깨끗한 용기에 넣어 원래 부피의 최대 6배까지 확장할 수 있습니다.
4. 깨끗한 손으로 더 큰 블록에서 제거 된 조각에서 coir 덩어리를 부드럽게 분해하십시오.
5. 50 mL 점진적 실린더를 사용하여, 탈이온화된(DI) 물의 정확한 부피를 측정하여, 5 부의 물을 1 부분 건조 코아에 대한 5:1 질량비로 달성한다.
6. 측정 된 DI 물을 천천히 넣고 모든 coir 입자를 고르게 수화시킵니다. 수동으로 덩어리를 침지하여 균일 한 수분 공급을 보장합니다.
7. 이전에 coir의 무게를 재측정 한 컨테이너를 다시 타십시오.
8. 젖은 coir 75g의 무게를 측정하십시오.
9. 젖은 coir 75g을 깨끗한 플라스틱 숟가락을 사용하여 100mm x 15mm 페트리 접시에 옮겨 coir가 접시 바닥에 고르게 퍼지고 덩어리가 없는지 확인하십시오.
10. 페트리 접시의 측면에 실험실 테이프에 출생 식민지와 계란 수집 행사 날짜를 나타내는 라벨이 붙어 있습니다.
11. 눈금 실린더에서 45mL의 DI 물을 추가로 측정합니다.
12. 페트리 접시에 포장 된 coir의 표면에 고르게 물을 넣어 수분을 공급하십시오. 물이 컨테이너의 측면으로 약 1/4 정도 풀링되는 지점까지 coir가 포화되어 있는지 확인하십시오.
13. 페트리 접시가 포장되면, 남아있는 젖은 열매를 밀폐 용기에 밀봉하여 -20°C에서 보관한다.
    참고 :이 기사에서 규정 한 방법에 따라 G. bimaculatus 개인은 산란 후 평균 58 일 후에 성적 성숙에 도달합니다.
14. 계란 수집
    1. 수화 된 산란 기질을 귀뚜라미가 산란 기질 상으로 사료의 과립을 기계적으로 옮길 가능성 때문에 가능한 한 사료에서 멀리 떨어진 귀뚜라미의 원하는 부모 주식을 포함하는 케이지에 넣으십시오.
    2. 날짜와 시간을 문서화합니다.
       참고 : 이러한 방법에 따라 양육 된 생식 귀뚜라미 식민지의 표준화 된 작업 밀도는 n = 150 성인 개체입니다. 그 밀도에서 24 시간 산란 창은 식민지 나이, 이전의 산란 노력 및 부모 케이지 성비에 따라 800 ~ 1,500 개의 알을 낳습니다.
    3. 계란이 풍부한 산란 기질을 취급하고 청소함으로써 야기되는 봉쇄 위험을 고려하여 작업 표면에 작은 오토클레이브 가능한 쓰레기 수거통을 놓습니다.
    4. 깨끗하고 빈 29.3L 플라스틱 케이지를 쓰레기 수거통 옆의 벤치에 놓아 계란이 풍부한 산란 기질의 수령인 케이지 역할을합니다.
    5. 모 귀뚜라미 스톡과 산란 기질이 들어있는 29.3 L 케이지를 빈 케이지에서 쓰레기 수거통의 반대편에 놓습니다.
    6. 24 시간 후, 부모 귀뚜라미 케이지에서 산란 기질을 제거하고 오토 클레이브 가능한 폐기물 용기 위에 놓습니다.
    7. 산란 기질의 꼭대기에서 귀뚜라미가 누룩의 표면에 걷어차 렸을 수도있는 frass 또는 사료 입자가 있는지 검사하십시오.
       참고 : 달걀 덩어리 또는 누에 고아가 아닌 물질은 배양 중에 기질에 곰팡이가 형성 될 수 있습니다.
    8. 깨끗한 스쿠풀라 또는 플라스틱 숟가락으로 폐기물 용기에 누아르 오염 물질을 제거하십시오.
    9. 플라스틱 숟가락을 폐기물 용기에 넣으십시오.
    10. 청소 된 산란 기질을 깨끗한 29.3L 케이지에 넣으십시오.
    11. 케이지를 12 h D/12 h L 광주기에서 60% 상대 습도에서 27°C로 설정된 인큐베이터에 놓는다.
    12. 번식 재고가 들어있는 케이지를 원래 위치로 되돌리고 작업 표면에서 모든 항목을 지우십시오.
    13. 폐기물 저장소를 귀뚜라미 달걀로 잠재적으로 오염 된 물품을 보관하는 데 전념하는 시설 내 냉동고에 넣으십시오.
    14. 10 % 표백제로 작업 표면을 소독하고 60 초 동안 그대로 두십시오.
    15. 깨끗한 종이 타월로 작업 표면을 닦으십시오. 냉동실을 열고 종이 타월을 폐기물 용기에 버리십시오.
15. 매일 계란 기질을 미스트 및 모니터링
    참고: 스프레이 병에서 전달되는 미스트의 부피를 보정하는 데 사용되는 방법은 보충 재료 단계 1.2를 참조하십시오.
    1. 산란 기질 위에 스프레이 병을 올려 놓고 표현된 물이 기판의 표면에 고르게 분포되도록 합니다.
    2. 보충 재료 단계 1.2에서 계산된 펌프 작동 수를 매일 11일 연속 각 산란 기질에 대해 수행합니다.
    3. 매일 각 산란 기질을 점검하고 누에 뜨개질 표면의 필라멘트 곰팡이 성장을 모니터링하십시오.
    4. 곰팡이 성장이 관찰되면 깨끗한 숟가락이나 스쿠풀라를 사용하여 표면 곰팡이의 반점을 제거하십시오.
    5. 공구와 제거된 열매를 시설 냉동고에 저장된 오토클레이브 가능한 폐기물 용기에 폐기하십시오.
       참고 : 곰팡이가 크리켓 개발에 악영향을 미치는지 여부는 분명하지 않습니다.
    6. 산란 후 11 일째에 청소년 귀뚜라미의 기질을 면밀히 살펴보기 시작하십시오.
       참고 : 27 °C에서 G. bimaculatus 의 알은 부화하는 데 11-13 일이 필요합니다.
16. 출생 케이지 설치
    1. 사용하지 않는 30.8cm x 30.8cm(12인치 x 12인치) 상업용 달걀 카톤 플랫 두 개를 선택합니다. 유틸리티 나이프 또는 강한 가위로 동일한 크기의 여섯 개의 분리 된 10.1cm (4 ") 너비의 스트립으로 자릅니다. 손으로 잘린 가장자리를 닦아 매달려있는 판지 입자를 제거하십시오.
    2. 6개의 개별 10.1cm x 30.8cm(4인치 x 12인치) 조각의 카톤을 29.3L 케이지의 좁은 수평축에 걸쳐 있는 카톤의 긴 축을 사용하여 케이지 바닥에 세로로 놓습니다. 일곱 번째 판지 조각을 여섯 개의 직립 조각의 꼭대기에 평평하게 놓습니다.
    3. 거친 갈색 종이 타월 약 25cm x 25cm 세 개를 선택하십시오. 각각을 반으로 접습니다. 카톤 구조의 근위 측면의 상단을 덮을 수 있도록 두 개를 놓습니다. 원위 측의 카톤 스택 위에 하나를 놓습니다.
    4. 산란 후 11 일째에 산란 기질을 케이지의 근위 오른쪽 모서리로 옮깁니다.
17. 초기 인스타를 돌보는 일
    참고 : 산란 후 14 일째에 대부분의 생존 가능한 알이 부화하고 초기 단계의 귀뚜라미 님프는 사료와 물이 필요합니다. 어린 귀뚜라미는 물방울의 표면 장력을 깨뜨릴 수 없으며 물이 환경에 풀링되면 익사 할 수 있습니다. 그러나 그들은 또한 건조에 민감합니다. 이 발달 단계에서 약 60 %의 일관된 상대 습도를 제공하는 것은 생존을 보장하는 데 중요합니다.
    1. 해치가 관찰되면 1.4.3 단계에서 판지 상단에 놓인 종이 타월을 젖게하지만 물을 적극적으로 흘리지 않을 때까지 안개를 낀다.
    2. 100mm 페트리 접시 뚜껑의 양쪽을 70% 에탄올로 완전히 닦아내고 말리십시오. 크리켓 사료가 배달 될 콘센트로 사용하십시오.
       참고 : 첫 번째 스타 귀뚜라미는 개발 후속 단계에서 귀뚜라미보다 작은 사료 입자가 필요합니다. 이 더 미세한 사료는 출현 후 처음 20 일 동안 귀뚜라미에게 투여해야합니다.
    3. 사료 50g을 60와트 단일 서빙 블렌더에 넣고 10,000rpm에서 1분 동안 분쇄합니다.
    4. 사료 1g을 측정하고 케이지의 페트리 접시 뚜껑에 흔들어 넣으십시오. 숟가락이나 스쿠풀라의 깨끗한 끝을 사용하여 가능한 한 균일하게 사료를 접시 바닥에 퍼뜨립니다.
    5. 2일마다 피드를 교체합니다. 숟가락의 끝을 사용하여 귀뚜라미를 제거하기 전에 사료 접시에서 귀뚜라미를 닦으십시오. 오토클레이브 가능한 폐기물 용기에 오래된 사료를 버리십시오.
    6. 피드의 곰팡이 성장을 모니터링합니다. 사료가 흰색이나 녹색으로 보이기 시작하면 페트리 접시를 버리고 즉시 먹이십시오.
    7. 산란 후 14 일 후에 2.54cm (1 인치) 페인트 브러시를 사용하여 페트리 접시의 누룩 표면과 측면에서 모든 귀뚜라미를 새장에 닦아 출생 열매 기질에 달라 붙는 귀뚜라미를 제거하십시오.
    8. 제거된 산란 기질을 오토클레이빙 가능한 폐기물 용기에 넣고 오토클레이빙될 때까지 냉동실에 보관한다.
    9. 출생 기질을 1.1.5-1.1.9 단계에 따라 준비된 수화를 위해 신선한 coir 접시로 교체하십시오.
    10. DI 물 세척 병을 사용하여 coir의 표면이 반짝이지만 풀링되지 않을 때까지 물을 넣으십시오.
        참고 : 크리켓 밀도는 G. bimaculatus¹³의 성장 성과에 큰 영향을 미칩니다. 번식 재고를 과도한 밀도로 유지하면 원치 않는 혼잡 유발 후성 유전 학적 효과를 자손이 사용되는 실험에 도입 할 위험이 있습니다⁹. 귀뚜라미는 산란 기질에서 나오는 고밀도에서 "얇아지고"0.005 귀뚜라미 / cm³ 의 공간에 부합하는 밀도로 분산되어야합니다.

2. 성인에게 세 명의 별을 돌보는 것

1. 케이지 설정
   참고: 선별된 뚜껑을 구성하는 기술에 대한 자세한 내용은 보충 재료 단계 1.3.1을 참조하십시오.
   1. 1.4.1단계를 반복합니다.
   2. 케이지의 원위 끝에 다섯 개의 자른 달걀 판지 조각을 설치하여 달걀 모양의 concavities가 바깥쪽을 향하게하십시오. 짧은 끝이 케이지의 측면에 관한 것이고, 긴 면이 바닥에 평평하게 놓여 있는지, 그리고 각 판지 사이에 약 3cm의 공간이 있는지 확인하십시오.
   3. 마지막 컷 카톤 조각을 보충 그림 S1과 같이 지붕과 같은 직립 판지 조각 위에 올려 놓습니다.
   4. 단계 1.1.8-1.1.13에 따라 수화 기판을 제조하였다.
   5. 보충 그림 S2와 같이 귀뚜라미 케이지의 근위 오른쪽 모서리에 수화 기질을 놓습니다.
   6. 세척 병을 사용하여 누에 고치 표면이 젖고 반사되는 것처럼 보이지만 열매가 완전히 잠기지 않을 때까지 DI 물 6-10 mL를 첨가하십시오.
      참고 : 표면은 가볍게 딤플 된 것처럼 보여야 하며, 표면 장력으로 인해 물이 코아의 윤곽을 따라야합니다.
   7. 100mm 페트리 접시의 뚜껑을 뒤집어 케이지의 근위 왼쪽에 놓습니다. 보충 그림 S2와 같이 표준 귀뚜라미 사료 2-3g을 첨가하십시오.
2. 콜로니 밀도 수정
   참고 : 부화 후 20 일 또는 귀뚜라미가 평균 질량 0.01g에 도달 할 때이 단계를 수행하십시오.
   1. 작업 표면에 나란히 서있는 세 개의 29.3 L 케이지의 평면도를 수용 할 수있는 대형 컨테이너를 놓습니다.
      참고 : 이것은 보조 격리이며 한 식민지에서 다른 식민지로 이동하는 동안 탈출하는 귀뚜라미를 통제 할 것입니다.
   2. 사육 선반에서 원래 식민지를 제거하고 작업 표면에 놓습니다.
   3. 원래 식민지의 오른쪽에 같은 크기의 빈 새장을 놓습니다.
   4. 빈 케이지의 오른쪽에 2.1.1-2.1.7단계에 따라 설정된 케이지를 놓습니다.
   5. 귀뚜라미가 귀뚜라미가 들어있는 새장의 선별 된 뚜껑 아래쪽에 달라 붙지 않았는지 확인하십시오. 관찰되면 케이지의 상단을 탭하여 제거하십시오.
   6. 귀뚜라미가 들어있는 새장의 스크린 된 뚜껑을 엽니 다.
   7. 부드럽고 부드러운 움직임으로 "지붕"판지와 윤곽선에 부착 된 모든 귀뚜라미를 중간 케이지로 옮깁니다.
   8. 카톤이 중간 케이지 안에 있으면 골판지를 측면에 부드럽게 흔들어 모든 귀뚜라미를 제거합니다.
   9. 나머지 귀뚜라미가 판지에 부착 될 수 있도록 판지 조각을 원산지 케이지의 근위 측으로 반환하기 전에 모든 귀뚜라미가 자유롭게 흔들렸는지 육안으로 검사하십시오.
   10. 케이지의 모든 카톤 조각으로 2.2.8-2.2.9 단계를 반복하고 모든 귀뚜라미가 중간 케이지로 옮겨질 때까지 원래 케이지의 앞면에서 뒤쪽으로 순차적으로 작업합니다.
   11. 귀뚜라미가 들어있는 중간 케이지를 부드럽게 기울여 들어있는 모든 귀뚜라미가 하단 모서리쪽으로 향하게하십시오.
   12. 귀뚜라미가 들어있는 케이지를 수령인 케이지 위로 들어 올립니다.
   13. 귀뚜라미가 측면에서 구매되기 시작하고 보충 그림 S3에 표시된 것처럼 하단 모서리의 질량에서 통제 된 방식으로 움직일 수 있도록 기증자 케이지를 천천히 기울이십시오.
   14. 귀뚜라미가 너무 빨리 전진하면 중간 케이지가 잡히는 각도를 조정하여 귀뚜라미가 뒤로 떨어지게하십시오.
   15. 케이지가 기울어지는 동안 2.54cm (1 인치) 페인트 브러시를 사용하여 귀뚜라미를 수령인 케이지로 향하게하고 총 카운트가 150 명이 될 때까지 각각을 계산하십시오. 브러시를 사용하여 정확한 카운트를 위해 너무 빨리 전진하는 사람들을 막으십시오.
   16. 새로 비축된 크리켓 케이지에 날짜, 부모 주식 및 포함된 귀뚜라미의 수를 표시하십시오.
   17. 전체 용기를 최소 30분 동안 -20°C의 냉동고에 넣음으로써 중간 및 원래 용기의 바닥에 여전히 남아 있는 과도한 귀뚜라미를 인간적으로 안락사시킨다.
   18. 모든 귀뚜라미가 옮겨 졌는지 확인하기 위해 원산지 케이지를 검사하십시오.
   19. 크리켓 케이지를 12시간 L/D 광주기를 유지하도록 프로그래밍된 주거용 실외 타이머로 설정된 전체 스펙트럼 형광등이 포함된 조명 후드 아래 25cm 아래의 식물 재배 랙에 놓습니다. 보충 그림 S4를 참조하십시오.
   20. 원산지 케이지에 남아있는 모든 프래스, 소비 된 수화 기질 및 사료, 종이 타월, 삼출물 및 죽은 귀뚜라미를 오토 클레이브 가능한 폐기물 용기로 옮깁니다.
   21. 폐기물이 즉시 오토클레이브되지 않는 한, -20°C의 시설 내 냉동고에 보관한다.
   22. 바닥, 작업자 의류, 보조 격리 케이지 및 작업 표면에서 탈출 한 귀뚜라미를 검사하십시오.
   23. 작업 표면과 보조 격리 케이지를 10 % 표백제 용액으로 소독하고 종이 타월을 오토 클레이브 가능한 폐기물 용기에 버립니다.
3. 먹이와 급수
   1. 밀폐 된 사료 저장 용기를 열고 빈 100 mL 샘플 컵에 크리켓 사료를 채 웁니다. 각 식민지에 도달하고 컵에 보관 된 사료의 분기를 사료를 담고있는 Petri 접시 뚜껑에 보관하십시오.
   2. 귀뚜라미에 물을 주려면 1.1.9-1.1.13 단계에 따라 푸아르의 페트리 접시를 준비하십시오.
   3. Ad libitum 피드 가용성을 보장하기 위해 소비율에 상응하는 공급 속도를 높입니다.
      참고 : 크리켓 사료 수요는 개발 전반에 걸쳐 변화합니다.
4. 귀뚜라미를 깨끗한 새장으로 옮기기
   1. 귀뚜라미를 2 주마다 깨끗한 새장으로 옮기십시오. 2.2.1-2.2.4 단계에서 케이지의 배열을 복제하십시오.
      참고 : 상당한 양의 frass가 달걀 판지의 concavities에 축적 될 것입니다.
   2. 귀뚜라미를 깨끗한 케이지로 옮기고 2.2.5-2.2.23 단계를 따르십시오.
   3. 대부분의 frass가 원산지 케이지에 떨어지도록 상자를 부드럽게 조종하면서 귀뚜라미가 2.2.7-2.2.10 단계를 반복하는 동안 카톤에 달라 붙을 수 있도록하십시오.
   4. 브러시 또는 플라스틱 숟가락을 사용하여 frass에 갇힌 귀뚜라미가 중간 케이지에서 깨끗한 케이지로 이동하도록 권장합니다.
   5. 모든 귀뚜라미가 옮겨 졌는지 확인하기 위해 원산지 케이지를 검사하십시오.
   6. 원산지 케이지에 남아있는 모든 프래스, 소비 된 수화 기질 및 사료, 종이 타월, 삼출물 및 죽은 귀뚜라미를 오토 클레이브 가능한 폐기물 용기로 옮깁니다.
   7. 폐기물이 즉시 오토클레이브되지 않는 한, -20°C의 시설 내 냉동고에 보관한다.
   8. 바닥, 작업자 의류, 보조 격리 케이지 및 작업 표면에서 탈출 한 귀뚜라미를 검사하십시오.
   9. 작업 표면과 보조 격리 케이지를 10 % 표백제 용액으로 소독하고 오토클레이브 가능한 폐기물 용기에 종이 타월을 버리십시오.
5. 실험 케이지 설정
   참고 : 실험 케이지는 귀뚜라미를 적게 담고있는 플라스틱 용기입니다. 그들의 설정은 번식 주식을 포함하는 29.3 L 케이지와 동일하지만 물, 사료의 작은 접시가 갖춰진 7.1 L 용기에 의존하며 감소 된 달걀 상자 표면적을 포함합니다.
   1. 6개의 10.1cm x 15.4cm(4인치 x 6인치) 카톤 조각을 케이지의 좁은 치수의 너비와 뚜껑과 바닥을 향하게 하는 카톤의 짧은 축에 걸쳐 있는 카톤의 긴 축을 사용하여 각 실험 케이지의 원위 끝에 놓습니다.
   2. 수화된 코아 작업 믹스 10g을 페트리 접시에 포장합니다.
   3. DI 물이 들어있는 세척 병을 사용하여 약 15mL의 DI 물을 첨가하거나 코아의 표면에 반월판이 형성 될 때까지 사용하십시오.
   4. 60mm x 15mm 페트리 접시의 뚜껑을 뒤집어 피드를 고정시킵니다.
      참고: 수유 속도는 시험 기간에 따라 달라질 수 있습니다. 실험 케이지 크리켓 무작위화 및 스타킹 절차에 대해서는 보충 재료 단계 1.4를 참조하십시오.
6. 곤충 종료
   1. 귀뚜라미가 번식이나 실험적 사용에 더 이상 필요하지 않은 경우 2.2.17 단계를 따르십시오.
   2. 귀뚜라미가 죽었을 때, 냉동실에서 새장을 제거하십시오. 뚜껑을 제거하고 포함 된 모든 재료를 오토 클레이브 가능한 폐기물 용기로 옮깁니다. 오토클레이빙이 될 때까지 폐기물을 냉동실로 다시 옮기십시오.
   3. 빈 케이지를 10 % 표백제 용액에 담그고 최소 5 분 동안 앉히십시오.
   4. 빈 케이지를 차가운 수돗물로 트리플 헹구어 표백제 잔류 물을 제거하고 용기 바닥의 채널에주의를 기울이십시오.

부화에서 65 일까지 성공적인 크리켓 사육을 보여주는 데이터는 2021 년 9 월 사료 시험 중에 수집되었습니다. 귀뚜라미는 이러한 프로토콜의 1.1.1-2.6.1 단계에 따라 알에서 자랐으며, 6 개의 복제 케이지에는 위의 2.7 단계에 따라 22 일 된 무작위 (세 번째 인스타) 귀뚜라미가 24 개 있습니다. 귀뚜라미는 주변 실내 조건에서 양육되었습니다. 그러나 시설 공기 처리 장치의 오작동으로 인해 평균 실내 온도는 제안 된 27 °C가 아닌 20 % 상대 습도에서 25 ± 1 °C였습니다. 크리켓 질량은 부화 후 22 일에서 65 일 사이에 매주 두 번 측정되었습니다. 이 실험의 결과는 아래에 요약되어 있으며 표준 편차를 더하기 또는 뺀 값으로 표시됩니다.

도 1 및 도 2 에 도시된 데이터는 이 프로토콜에 설명된 표준 사료를 투여한 여섯 개의 복제 케이지를 나타낸다. 귀뚜라미는 평균 질량이 21 ± 9mg인 개체군으로부터 비축되었다. 실험이 끝날 때, 모든 결합 된 청소년 및 성인 귀뚜라미의 평균 질량은 0.724 g ± 0.190 g이었다 (그림 1). G. bimaculatus 는 성적으로 이형적이기 때문에, 우리는 또한 성적으로 성인 질량을보고합니다. 수확시 성비는 51 %의 여성이었다. 실험이 종료되었을 때 생후 65일에 존재하는 30명의 성인 남성 중에서, 평균 질량은 0.721 g± 0.123 g이었다. 생후 65일에 존재하는 58명의 성인 여성 중에서, 평균 질량은 0.841 g ± 0.112 g이었다(도 2). 스타킹과 수확 사이의 생존률은 89 %였으며 매주 모든 케이지에있는 모든 개별 귀뚜라미의 총 수로 측정되었습니다. 65일째에 모든 귀뚜라미의 68.2%가 성인 인스타에 도달했습니다(그림 2).

그림 1 : 부화 후 22-65 일 동안 개별 귀뚜라미의 평균 질량. 막대는 케이지, n = 6 케이지에 의한 평균 크리켓 질량의 사분위수를 나타냅니다. 모든 귀뚜라미는 실험의 1 주일을 제외하고 일주일에 2 배로 계산되고 무게가 나갔으며 무게는 한 번만 측정되었습니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.

그림 2: 실험 말미에 성별에 의한 평균 성인 귀뚜라미 질량. 수컷 귀뚜라미 n = 30, 암컷 귀뚜라미 n = 58. 막대는 평균 질량의 분위수를 나타냅니다. 'x'는 성별에 의한 평균 크리켓 질량을 나타냅니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.

보충 재료 : (1) 코코넛 열매 및 호흡기 안전, (2) 코코넛 열매 재료 제거, (3) 안개 전달 교정, (4) 뚜껑 구성, (5) 실험 케이지 스타킹, (6) 귀뚜라미를 케이지에 무작위 배정, (7) 사료 분석에 사용되는 방법. 이 파일을 다운로드하려면 여기를 클릭하십시오.

보충 그림 S1 : 골판지 카톤 refugia, 사료 및 코코넛 열매의 올바른 배열을 포함하는 크리켓 케이지의 측면도. 이 파일을 다운로드하려면 여기를 클릭하십시오.

보충 그림 S2 : 코코넛 열매와 크리켓 사료가 들어있는 페트리 요리의 상단보기가 케이지 바닥에 위치합니다. 이 파일을 다운로드하려면 여기를 클릭하십시오.

보충 그림 S3: 귀뚜라미는 2.2.11-2.2.13 단계에 설명된 대로 천천히 기울어짐으로써 케이지의 바닥에서 새 케이지로 옮겨집니다. 이 파일을 다운로드하려면 여기를 클릭하십시오.

보충 그림 S4 : 조명이 켜진 사육 랙에 위치한 귀뚜라미가 들어있는 케이지. 이 파일을 다운로드하려면 여기를 클릭하십시오.

보충 표 S1 : (1) 상업용 사료의 영양 분석, (2) 제조업체의 사료 성분 목록. 이 테이블을 다운로드하려면 여기를 클릭하십시오.

저자는 선언 할 이해 상충이 없습니다.