엑소좀이 함유된 콜라겐 패치 및 오프 펌프 관상동맥 우회술로 치료한 만성 심근 허혈의 외과적 돼지 모델

전 세계적으로 중증 CAD는 1억 명 이상의 환자에게 영향을 미치고 있으며, 사망률은 감소했지만 여전히 주요 사망 원인^{중 하나입니다 1,2}. CAD는 심근경색(MI)에서 생존력이 보존된 허혈에 이르기까지 광범위한 임상 스펙트럼을 가지고 있습니다. 대부분의 전임상 연구는 MI에 초점을 맞추고 있으며, 소동물 및 대형 동물 모델에서 연구할 수 있기 때문에 경색 조직의 존재를 특징으로 합니다. 그러나 이 모델은 생존력이 보존되고 혈관재생술이 가능한 환자를 다루지 않습니다. CABG를 받는 대부분의 환자는 혈액 공급이 감소하고 기능이 제한되는 반면 수축 예비력과 생존력의 변동성은 유지된다³. 이러한 환자들은 치료를 받지 않으면 진행성 심부전과 돌연사로 진행될 수 있으며, 특히 업무량이 증가할 경우^{더욱 그렇다 4}. 이러한 환자들 중 관상동맥우회술(CABG)은 효과적인 치료법이지만 완전한 기능적 회복을 가져오지 못할 수 있다⁵. 중요한 것은 더 나쁜 임상 결과의 지표인 이완기 기능 장애가 혈관 재생술 후 회복되지 않는다는 것인데, 이는 CABG ^6,7 동안 새로운 보조 요법의 필요성을 시사한다. 현재 심근세포를 완전한 기능 능력으로 회복시키기 위해 CABG와 함께 사용되는 임상적으로 이용 가능한 보조 중재는 없습니다. 이는 많은 환자들이 적절한 혈관재생술에도 불구하고 진행성 심부전으로 진행된다는 점을 감안할 때 중요한 치료적 격차이다⁸.

CABG에 순응할 수 있는 만성 심근 허혈의 혁신적인 돼지 모델이 만들어졌고, 임상 CAD 경험을 모방했다⁹. 돼지는 심외막 가교 측부가 없기 때문에 다른 대형 동물에 비해 심장 질환의 좋은 모델을 제공하므로 LAD의 협착만으로도 국소 허혈이 발생한다¹⁰. 이 연구에서는 16주 된 암컷 요크셔-랜드레이스 돼지를 사용했습니다. 이 모델에서, LAD는 좌측 내유방동맥(LIMA) 이식편을 사용하여 오프 펌프 CABG로 혈관재생되었다(보충표 1). 경피적 관상동맥 중재술(PCI)은 수축근이 단단한 장치이기 때문에 협착을 열 수 없습니다. 심장 자기 공명 영상(MRI)은 전체 및 지역 기능, 관상 동맥 해부학 및 조직 생존율을 평가하는 데 사용됩니다. 심장 MRI 분석 결과, CABG⁶에도 불구하고 최대 포만율(PFR)을 특징으로 하는 이완기 기능은 여전히 손상된 것으로 나타났다. 이완기 기능 장애의 기전은 CABG¹¹ 이후에도 지속되는 HIB의 손상된 미토콘드리아 생체 에너지 및 콜라겐 형성과 관련이 있을 수 있습니다.

중간엽줄기세포(MSC)는 엑소좀을 통해 치료 신호를 전달하여 CABG 중에 적용할 때 심근 회복을 개선합니다. 이 돼지 모델과 병행 시험관 내 연구에서, CABG 동안 심외막 MSC vicryl 패치를 배치하면 주요 미토콘드리아 단백질, 즉 미토콘드리아 에너지 대사의 중요한 조절자인 PGC-1α¹²가 증가함에 따라 수축 기능이 회복되는 것으로 나타났습니다¹³. in vitro 모델을 통해 손상된 미토콘드리아 기능에 대한 MSC의 신호 전달 메커니즘을 조사할 수 있었습니다. 엑소좀은 microRNA(miRNA)를 포함한 단백질 또는 핵산을 포함하는 안정적인 미세소포(50-150nm)를 분비합니다¹⁴. 최근 in vitro 데이터에 따르면 MSC 유래 엑소좀은 미토콘드리아 호흡 회복에 필요한 중요한 신호 전달 메커니즘입니다.

줄기세포 유래 엑소좀은 쉽게 구할 수 있고, 상업적으로 생산할 수 있으며, 윤리적 갈등이 없기 때문에 유망한 보조 치료제입니다. 임상적 해석을 고려하여 MSC 유래 엑소좀이 내장된 콜라겐 패치를 만들어 심근의 동면부위에 수술로 봉합할 수 있도록 하였습니다. 이 패치를 이용하면 엑소좀이 지속적으로 전달되는 것으로 나타났으며, 미토콘드리아 회복을 표적으로 하고 미토콘드리아 생물발생을 강화하는 파라크린 신호전달 기전을 가진 cell-free 재생 치료제를 제공한다¹⁵. 이 절차는 혈관재생시 미토콘드리아 기능을 강화하고 염증을 감소시킴으로써 심장 기능을 개선하고 만성 허혈에 대한 근세포 적응을 역전시키는 MSC 파생 요법의 영향을 연구하기 위한 전임상 모델을 제공합니다.

이 연구에서는 CAD 환자의 표준 치료를 모방한 근위 LAD 협착 부위를 우회하기 위해 LIMA에서 LAD 문합을 사용하는 오프 펌프 CABG의 수술 방법을 보여줍니다. CABG를 병행한 보조 요법으로 MSC 유래 엑소좀 내장 콜라겐 패치를 심근 허혈성 부위에 외과적으로 적용하는 방법을 시연하였습니다. 이 수술 모델은 엑소좀 패치를 사용하여 나타나는 파라크린 효과에 대한 생리학적 반응과 회복 분자 메커니즘을 연구하는 데 사용할 수 있습니다.

미니애폴리스 VA 메디컬 센터(Minneapolis VA Medical Center)와 미네소타 대학교(University of Minnesota)의 기관 동물 관리 및 사용 위원회(IACUC)는 모든 동물 연구를 승인했습니다. 실험실 동물의 사용 및 관리에 대한 현재 NIH(National Institutes of Health) 지침을 따랐습니다.

1. 중간엽줄기세포의 분리와 엑소좀의 준비 및 특성분석

1. 골수 유래 중간엽 줄기세포(MSC) 분리
   1. 20주 된 암컷 요크셔 랜드레이스 돼지의 흉골 또는 경골에서 30-50mL의 멸균 골수를 얻습니다. 이를 위해 25mm 15G 골간 바늘을 흉골 또는 경골에 삽입하고 10mL의 헤파린이 포함된 60mL 주사기에 샘플을 채취합니다.
      참고: 골수 수집에 대한 자세한 내용은 Pittenger et al. 및 Hocum-Stone et ^al.12,16을 참조하십시오.
   2. 간단히 말해서, 골수 검체를 헤파린이 포함된 Vacutainer CPT 튜브를 통해 1800 x g에서 30분 동안 통과시킵니다.
   3. 단핵 세포가 들어있는 버피 코트를 제거하고 Hank의 균형 잡힌 소금 용액으로 씻으십시오. 원심분리에 의한 단핵 세포를 펠릿화하고 성장 배지(10% 소 태아 혈청[FBS])에서 재현탁합니다.
   4. 부착 성장을 위해 단핵 세포를 세포 배양 플라스크로 옮깁니다. MSC를 부착 특성에 따라 단핵 분획에서 분리합니다.
   5. 24시간 이내에 모든 비 MSC를 세척하고 조직 배양 플라스크에 MSC의 단층을 남깁니다. 유세포 분석으로 MSC 표현형을 확인하여 조혈 마커인 CD45에 대한 음성과 MSC의 마커인 CD90 및 CD105에 대한 양성을 보장합니다.
2. 돼지 중간엽 줄기세포에서 엑소좀의 준비 및 특성 분석
   1. 1x 10⁴ H9C2 쥐 심근 세포를 파종하고 1x DMEM + 10 % FBS 및 1x Pen / strep에서 배양합니다. 고급 DMEM + 5% FBS 및 1x Pen/strep에 2 x 10⁴ 돼지 MSC를 파종합니다.
   2. 두 세포주가 80% 이상 합류하면 배지를 엑소좀 고갈된 H9C2 및 MSC 배지로 변경합니다.
   3. H9C2 심근세포를 경미한 저산소증(24시간 동안 1%_O2 )에 노출시킵니다. 24시간 후 저산소증에서 플라스크를 제거하고 H9C2 배지를 피펫으로 꺼냅니다.
   4. MSC 플라스크에서 MSC 매체를 제거하고 폐기합니다. 정제된 H9C2 배지를 MSC 플라스크에 추가합니다. 플라스크를 정상 산소 조건 (5 % CO₂, 20 % O₂ 및 37 ° C)에서 6 시간 동안 배양합니다.
   5. 제조업체의 지침에 따라 Total Exosome Isolation Reagent를 사용하여 공동 배양된 컨디셔닝된 배지에서 엑소좀을 추출합니다.
   6. CD-63에 대한 항체가 있는 일반적인 엑소좀 단백질의 웨스턴 블롯 검출을 통한 엑소좀 식별을 검증합니다(1:1000)¹⁷).
   7. 나노입자 추적 분석(NTA)을 수행하여 엑소좀을 정량화하고 나노입자 크기 및 분포를 평가합니다. 이를 위해 엑소좀의 총 단백질(50μg)을 PBS 500μL에 용해시켜 나노입자 추적 분석기를 이용하여 엑소좀의 농도 및 크기 분포를 측정합니다.
   8. 나노 입자 추적 소프트웨어를 사용하여 데이터를 분석합니다.

2. 오프 펌프 관상동맥 우회술 이식편

1. 동물 준비
   1. 수술 예정일 3일 전에 동물(16주 된 암컷 요크셔-랜드레이스 돼지)의 무게를 잰다. 수술 전 12시간 동안 동물을 단식시키고 단식 중에는 물을 마실 수 있습니다.
   2. 수술 2-4시간 전에 근육 주사를 통해 부프레노르핀 0.18mg/kg을 투여합니다.
2. 동물의 유도
   1. 6.6mg/kg의 틸레타민-졸라제팜/자일라진을 근육 주사하여 동물을 진정시킵니다.
   2. 턱 톤을 평가하여 적절한 진정을 보장하기 위해 15분 동안 기다린 다음 중앙 귀 정맥에 22G 카테터를 삽입합니다.
      알림: 귀 정맥이 부적절하면 다른 말초 정맥(즉, 두부 정맥)을 고려할 수 있습니다.
   3. 안과 연고를 각 눈에 국소적으로 투여합니다. 1-2mg/kg의 프로포폴을 정맥 주사로 투여하여 전신 마취를 유도합니다. 턱 긴장도는 마취의 깊이를 가장 확실하게 반영하므로 시술 전반에 걸쳐 평가해야 합니다.
   4. 적절한 크기의 기관내 튜브로 동물을 삽관합니다.
3. 외과
   1. 수술 준비를 위해 동물의 흉골과 사타구니를 면도하십시오.
   2. 수술을 위한 깊은 마취를 유지하기 위해 필요에 따라 기계적 환기를 분당 10-15회, 산소 1-4L/분, 이소플루란 1.0-3.0%로 설정합니다. 눈이나 턱의 반사가 없는지 확인하여 깊은 마취를 확인합니다.
   3. 동물에 모니터링 장비(심전도, 호기말 CO₂, 심박수, 산소 포화도, 혈압 및 체온)를 배치합니다.
   4. IV 카테터를 생리식염수 또는 젖산 링거 용액 백에 연결하여 유지 수액을 지속적으로 투여합니다.
   5. 적절한 멸균 상태를 유지하고 수술 부위 감염의 위험을 최소화하기 위해 포비돈 요오드 스크럽 및 용액 3배로 무균 기술을 사용하여 피부를 준비합니다.
   6. 부정맥을 예방하기 위해 혈관 내 경로(2mg/kg의 로딩 용량 또는 50mcg/kg/min의 용량으로 연속 주입)를 통해 리도카인을 투여합니다.
   7. 동물을 등쪽에 배치하고 멸균 수건으로 덮습니다.
   8. Seldinger 기법으로 동맥선 배치를 위해 왼쪽 또는 오른쪽 대퇴 동맥을 절제한 다음 수술 시 지속적인 혈압 모니터링을 위해 카테터를 변환기에 연결합니다.
   9. 단극 전기소작술을 사용하여 흉골 노치에서 원위부로 자이푸스 돌기까지 20cm를 절개하고 근육, 피하 지방 및 결합 조직의 층을 흉골까지 절개합니다.
   10. 진동 톱을 사용하여 정중 흉골 절개술을 수행합니다.
       알림: 표준 톱은 LAD 수축기를 배치하기 위해 수행된 왼쪽 흉곽 절개술 절차에서 이전 심낭 유착으로 인한 심근 부상의 위험이 더 높기 때문에 반복적인 흉골 절개술에는 피합니다.
   11. 가위를 사용하여 후방 흉골판을 나눕니다. 종격동의 적절한 시각화를 위해 특수 흉부 견인기를 사용하십시오.
   12. 단극 전기 소작 또는 Metzenbaum 가위를 사용하여 유착을 해부합니다. 흉골 주위 근육과 지방을 조심스럽게 절개하여 좌측 내유선동맥(LIMA)을 노출시킵니다.
   13. LIMA가 흉골 가장자리 측면으로 노출되면 전기 소작 팁으로 둔한 절개를 사용하여 흉벽에서 부드럽게 분리합니다. LIMA를 골격 이식편으로 사용하십시오.
   14. 3^번째 늑간 공간 수준에서 절개를 시작합니다. 최적의 시각화를 위해 왼쪽 흉골 경계를 부드럽게 들어 올립니다.
   15. 외막에 부드러운 견인을 사용하여 LIMA의 동맥 및 정맥 가지를 노출시킵니다. 헤모클립을 사용하여 가지의 LIMA 쪽을 자르고 가지의 흉벽 쪽을 소작합니다.
       알림: 도관이 좁아질 수 있으므로 LIMA의 클립을 소작하지 않도록 주의해야 합니다.
   16. LIMA의 초기 분절이 동원되면 쇄골하 정맥 수준으로 근위부로 그리고 LIMA 분기가 있을 때까지 원위부로 절개를 계속합니다.
   17. 해부가 끝나면 100-300 U/kg의 용량으로 정맥 주사를 통해 헤파린을 투여합니다. 헤파린을 투여한 후 3분 동안 기다립니다.
   18. 3 분 후 LIMA 분기 레벨 바로 앞에있는 LIMA의 말단 끝을 자르고 도관을 나눕니다. 무료 2-0 실크 봉합사 넥타이로 말단 끝을 꿰매십시오.
   19. 접목을 위해 근위 끝을 준비합니다. 이식편에서 몇 초 동안 블리딩을 하여 유동 품질을 육안으로 검사합니다.
   20. 부드럽게 clamp 출혈을 방지하기 위해 비외상성 불독 클램프로 LIMA 도관의 말단부를 고정합니다. 약 5-6cm를 절개하여 거꾸로 된 T로 심낭을 엽니다. 슬릿의 양쪽을 견인하기 위해 심낭에 3-0 크기의 봉합사를 놓습니다.
   21. 흉골 견인기에 고정된 실리콘 수축 테이프와 조직 안정제로 LAD를 안정화합니다. 11개의 날로 협착증(수축 밴드로 인한)의 원위부에 LAD 동맥의 동맥 절제술을 만들고 홍채 가위로 확장합니다.
   22. LAD에 적절한 크기의 관상 동맥 션트를 놓습니다. 오프 펌프 바이패스 기술을 사용하여 7-0 실행 비흡수성 봉합사로 LIMA에서 LAD까지 문합을 수행합니다. LIMA에서 불독 오클루더를 해제하고 지혈을 확인합니다.
4. 중간엽줄기세포(MSC) 유래 엑소좀 패치의 제조
   1. MSC에서 엑소좀을 성공적으로 분리한 후 약 3 x 10⁸ 엑소좀을 3mL의 생리식염수에 현탁시키고 콜라겐 스펀지에 첨가합니다.
   2. 엑소좀 현탁액 3mL를 약 22°C의 실온에서 10분 동안 가열합니다. 흡수성 콜라주 스폰지 2개(각 1.27cm x 2.54cm)를 중간 크기의 페트리 접시에 담습니다.
   3. 5mL 주사기에 18G 바늘을 사용하여 엑소좀 현탁액을 부드럽게 섞습니다. 각 콜라겐 스펀지에 1.5mL 현탁액을 천천히 피펫팅하고 완전히 흡수될 때까지 5분 동안 기다립니다.
5. 엑소좀 패치 배치
   1. 엑소좀이 함유된 스펀지를 LAD의 분포에서 전중격 부위의 심외막인 심장의 동면 부위에 거꾸로 놓습니다.
   2. 두 개의 스폰지를 부드럽게 놓아 심장의 동면 부위를 덮습니다. 3.5cm x 1.0cm 폴리글락틴 메쉬 하나를 사용하여 각 콜라겐 스폰지를 덮습니다.
   3. 미세한 7-0 중단 봉합사로 심외막에 메쉬를 꿰매십시오.
6. 흉관 배치
   1. 흉골 절개 부위의 아래쪽 부근에 별도의 찔러 절개를 통해 흉관을 삽입합니다. 흉관을 심장의 앞쪽에 조심스럽게 놓습니다.
   2. 튜브가 제자리에 있으면 튜브를 제거할 때 상처를 봉합할 수 있도록 수평 매트리스 스티치를 사용하여 3-0 봉합사가 있는 지갑 끈 봉합사를 놓습니다.
   3. 흉관은 흉부를 완전히 닫을 때까지 유지됩니다.
7. 가슴 여밈
   1. 비흡수성 봉합사로 흉골을 근사화하여 8자 패턴을 사용합니다. 절개 부위 전체를 따라 근육 내 경로를 통해 1mg/kg 부피바카인을 투여합니다.
      알림: MRI 영상과의 간섭을 피하기 위해 와이어 대신 봉합사를 사용합니다.
   2. 각각 2-0 및 3-0 흡수성 봉합사를 사용하여 표준 방식으로 근육과 피부층을 닫습니다.
   3. 숨을 참고 흡입하여 흉강에서 모든 공기를 배출합니다. 인공호흡기의 기도 압력을 주의 깊게 모니터링하고 압력을 15-22mmHg 사이로 유지하고 완료되면 해제합니다.
   4. 공기가 모두 빠져나가면 흉관을 제거하고 지갑 끈 봉합사를 사용하여 상처를 봉합합니다. 흉골 절개 부위를 덮기 위해 접착 접착제를 국소적으로 바릅니다.
8. 수술 후 관리
   1. 피부 절개 부위가 봉합되는 동안 인공호흡기에서 동물을 서서히 떼어냅니다. 동물을 마취 장비에서 분리하기 전에 동물이 자발적으로 숨을 쉬고 반사 신경을 보호할 수 있는지 확인하십시오.
   2. 동물이 기도를 보호할 수 있는지 확인한 후 기관내관을 제거합니다. 수술 부위 감염을 최소화하기 위해 항생제 연고가 삽입된 멸균 및 비부착성 드레싱으로 절개 부위를 덮습니다.
   3. 동물이 도움 없이 자세를 유지할 수 있을 때까지 15분마다 심박수, 호흡수, 체온을 포함한 활력 징후를 계속 모니터링합니다.
   4. 동물이 머리를 들어 올릴 수 있고 도움 없이 설 수 있을 때까지 방치하지 않도록 하십시오. 동물을 회복 병동으로 이송하기 전에 피하 경로를 통해 0.2mg/kg의 용량으로 멜록시캠을 투여합니다.
   5. 동물이 안정되면 동물을 회수 시설로 이송하십시오. 수술 후 3일까지 절개 부위 드레싱을 유지합니다. 드레싱이 더러워지면 교체하십시오.
   6. 수술 후 처음 5일 동안 동물의 통증 수준, 피부 절개 및 전반적인 웰빙을 계속 모니터링하십시오. 돌발성 통증에 대해 필요에 따라 멜록시캠(0.1mg/kg)의 절반을 하루에 한 번 투여합니다.
   7. 다른 동물에 의한 수술 부위 감염의 위험을 줄이기 위해 절개 부위가 치유되는 동안 수술 후 처음 5일 동안 동물을 단독으로 수용합니다. 5일 후에 동물을 집단 수용장으로 돌려보냅니다.
   8. 동물의 합병증이나 상태 변화(발열, 복수, 체중 감소, 식욕 부진 등)가 있으면 수의사나 해당 직원에게 보고하십시오.

3. 대퇴골 접근을 이용한 관상동맥 조영술

1. 등쪽 누운 자세로 수술대에 동물을 고정합니다. 분당 10-15회 호흡으로 기계적 환기를 시작합니다. 산소를 2-4L/min으로, 이소플루란을 1%와 4%로 설정하여 깊은 마취면을 유지합니다.
2. 심장 박동을 모니터링하기 위해 동물의 팔다리에 ECG 리드를 놓습니다. 동물의 마취 깊이를 평가하십시오. 눈이나 턱 반사가 없을 때 동물을 깊이 마취한다고 생각하십시오.
3. 포비돈 요오드 스크럽으로 가슴과 목 부위를 닦은 다음 수건으로 동물을 덮습니다.
4. 외과적 절개를 통해 대퇴 동맥에 접근하고 대퇴 동맥과 정맥을 노출시킵니다. 대퇴 동맥에 11번 칼날로 1-2mm를 세로로 절개하고 혈관 내강에 11 Fr 도입기 덮개를 사용하여 동맥을 캐뉼레이션합니다.
5. 접근 권한을 얻은 후 카테터를 전진시켜 관상 동맥 조영술을 수행하여 LIMA-LAD 이식편의 해부학적 개통성을 평가합니다.

혈관재생술 후 관상동맥조영술을 시행하여 LAD 협착증(80% 이상)과 LIMA-LAD 이식편의 개통성을 평가합니다(그림 1). 혈관재생술 및 엑소좀이 함유된 콜라겐 패치 부착 후 4주 후, 심장 MRI를 실시하여 휴식 시 및 스트레스 상태에서 5μg/kg/min의 저용량 도부타민 주입을 사용하여 심장의 수축기 및 이완기 기능을 평가합니다. 수축기 기능은 벽 두께 백분율(수축기 말단의 벽 두께 - 이완기 말단의 벽 두께)을 측정하여 분석합니다. 이완기 기능은 말단 이완기 용적(PFR/EDV; 그림 2). 지연 조영제 영상은 LAD 영역에서 심근 경색이 없음을 확인하기 위해 수행되었습니다. LAD 부위에 경색이 있는 경우, 수축근에 의한 혈전증에 이차적으로 동맥이 막혔기 때문일 수 있습니다. 국소 벽 운동 이상이 없다는 것은 동면 표현형이 없음을 나타냅니다.

저용량의 도부타민 주입에서 HIB 동물은 대조군에 비해 PFR/EDV로 측정한 이완기 기능의 현저한 감소를 보여줍니다(각각 5.5 ± 0.8 대 6.9 ± 1.5, p < 0.05). CABG 그룹은 HIB 그룹에 비해 PFR/EDV가 개선되는 경향을 보였다(각각 6.3 ± 0.9 vs. 5.5 ± 0.8, p = 0.06). 그러나, CABG+MSC 그룹은 HIB 그룹과 비교했을 때 PFR/EDV의 유의한 증가를 보였다(각각 6.6 ± 1.1 대 5.5± 0.8, p = 0.03; 그림 3). 협착 부위 원위부의 좌측 내유방동맥(LIMA)에서 좌측 전방 하행동맥(LAD) 우회 이식편으로 괴사 및 개통을 확인하기 위해 심장 MRI를 사용하였다18.

휴식 시 CABG + MSC 그룹은 CABG 단독에 비해 국소 수축기 기능(벽 두께 백분율로 측정)에 변화가 없습니다(26.3% ± 7.0% vs. 34.9% ± 6.3%; p = 0.19). 스트레스를 받은 경우 CABG + MSC 그룹은 CABG 단독요법에 비해 국소 수축기 기능이 유의하게 개선되었습니다(78.3% ± 19.6% vs. 39.2% ± 5.6%; p=0.05)12).

부검 시, LAD 협착증과 LIMA 개통을 보장하기 위해 적절한 크기의 관상동맥 확장기를 사용했습니다. 심근은 조직 생존력이 모든 영역, 특히 허혈성 영역에 존재하는지 확인하기 위해 엄격하게 검사되었습니다. 트리페닐테트라졸륨 클로라이드(TTC) 염색에서 흉터가 없는 것으로 확인되었습니다.

그림 1. 해부학을 보여주는 심장 혈관 조영술. 관상동맥 조영술은 근위 LAD 동맥의 >80% 협착증과 특허 LIMA-LAD 이식편 문합을 보여줍니다. 약어: LIMA= 좌측 내유방동맥, LAD= 좌측 전방하강 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.

그림 2. 심장 MRI를 사용한 이완기 이완, 전반적인 수축 기능 및 생존력 평가. (A) 이완기 이완: 심장 주기 동안 좌심실(LV) 부피의 관계. x축은 s의 시간입니다. y축은 좌심실의 부피(mL)입니다. 빨간색 선은 피크 충전 속도(LV가 볼륨을 증가시키는 가장 빠른 속도)를 나타냅니다. PFR은 동물의 크기 차이를 설명하기 위해 동물의 이완기 말기 용적(PFR/EDV)으로 정규화됩니다. (B) 전체 수축 기능: 심장 주기 동안 분절 원주 변형률(Circ strain)(x축: 시간(ms), y축: 이완기 말기 측정과 비교한 좌심실 분절의 원주 길이의 백분율 변화). 피크 원주 변형률은 사이클의 가장 음의 값으로 표시됩니다. (C) LAD 분포의 대표적인 심장 MRI 이미지: LAD 분포는 전중격벽을 나타내는 빨간색으로 강조 표시되어 있습니다. 4 챔버 (D) 장축 및 (E) 단축 보기에서 향상된 가돌리늄 대비에 근거한 경색의 증거는 없었다. 약어: LV= 좌심실/심실; LAD= 왼쪽 전방 내림차순; MRI= 자기공명영상(MRI) 이 수치는 6에서 수정되었습니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.

그림 3. 최대 충전 속도/말단 이완기 용적에 대한 MRI 평가. PFR/EDV로 측정한 이완기 기능은 4개 그룹(대조군, HIB, CABG 및 CABG + MSC)에서 비교되었습니다. 휴식 시 PFR/EDV는 4가지 동물 그룹에서 비슷합니다. 그러나 저용량 도부타민 주입(5μg/kg/min)을 사용한 스트레스 하에서 HIB 투여군은 대조군에 비해 PFR/EDV가 유의하게 감소했으며(p < 0.05), CABG 투여군(p=0.06)은 개선 경향을 보였고, CABG+MSC 투여군은 유의한 증가 경향을 보였다(p < 0.05). 통계 분석은 일원 분산 분석(ANOVA) 검정을 사용하여 수행되었습니다. 데이터는 SD± 수단으로 제공됩니다. 약어: CABG= 관상동맥우회술, PFR= 피크 충전율, EDV= 말단 이완기 용적; MRI = 자기 공명 영상, MSC = 중간엽 줄기 세포, SD = 표준 편차. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.

그림 4. 벽 비후화 %에 의한 국소 수축기 기능의 MRI 평가. MSC 패치로 치료하면 가짜 패치에 비해 국소 심장 기능이 개선됩니다. (A) 벽 비후화 비율로 측정한 국소 수축기 기능은 MSC 패치 치료(n=6)가 가짜(n=6)에 비해 안정 시 유의하게 개선되지 않습니다. (B) 저용량 도부타민 주입(5μg/kg/min)을 사용하여 스트레스를 받으면 가짜 동물에 비해 MSC 패치로 처리한 후 국소 수축기 기능이 크게 개선되었습니다(P<.05). 통계 분석은 Mann-Whitney 검정을 사용하여 수행되었습니다. 가로 막대는 평균 표준 편차를 나타냅니다. *P<.05. 약어: MSC= 중간엽 줄기세포. 이 수치는 12에서 수정되었습니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.

보충표 1. 절차 및 각 절차의 일정에 대한 개요입니다. 이 파일을 다운로드하려면 여기를 클릭하십시오.

저자는 공개할 것이 없습니다.