Inducible Tet-On 조절 가능한 시스템 기반 유전자 발현 In Vivo: 마우스 모델에서 표적 유전자 전사 활성화를 위한 테트라사이클린 유도 유전자 발현 시스템

테트라사이클린-온(tetracycline-On) 또는 테트온(Tet-On) 시스템은 테트라사이클린 또는 그 유사체인 독시사이클린(doxycycline)의 존재 하에 관심 유전자의 발현을 활성화하는 조건부 유전자 발현 시스템입니다.

간 세포 또는 간세포의 간 특이적 프로모터에 의해 구동되는 역 테트라사이클린 제어 전사 활성화 단백질(rtTA)을 암호화하는 유전자를 포함하는 변형된 게놈을 가진 유전자 조작 마우스로 시작합니다. 또한, 마우스는 업스트림에 위치한 테트라사이클린 오퍼레이터 또는 tetO 서열의 제어 하에 있는 관심 유전자를 포함하고 있으며 최소 프로모터에 선택적으로 융합됩니다. tetO 및 promoter는 tetracycline-responsive element 또는 TRE라고 합니다.

발현된 rtTA(tet repressor, tetR 및 바이러스 단백질 VP16 transactivation domain을 포함하는 융합 단백질)는 비활성 상태이며 TRE의 tetO 서열에 결합할 수 없는 이량체를 형성하여 표적 유전자 발현의 활성화를 방지합니다.

독시사이클린과 자당을 함유한 용액을 준비합니다. 자당을 첨가하면 기호성이 증가합니다. 여과 후 독시사이클린-자당 용액을 마우스에 식수로 제공합니다. 투여된 독시사이클린은 간에 축적됩니다.

간세포에서 독시사이클린은 rtTA에 결합하여 구조적 변화를 일으키고 tetO DNA 결합 부위에 대한 친화력을 증가시킵니다. 독시사이클린 결합 rtTA의 tetR DNA 결합 도메인은 TRE 요소의 tetO 서열에 결합합니다. VP16 도메인은 RNA 중합효소를 추가로 모집하여 전사를 유도하고 mRNA를 형성하며 후속 리포터 표적 유전자의 발현을 유도합니다.