Microsphere Polymerase Chain Reaction to Amplify single-stranded DNA(단일 가닥 DNA를 증폭하기 위한 마이크로스피어 중합효소 연쇄 반응)

Microsphere-PCR은 표면의 올리고뉴클레오티드에 결합된 마이크로 크기의 구를 사용하여 단일 가닥 DNA의 우선적 증폭을 가능하게 합니다.

마이크로스피어-PCR을 시작하려면 템플릿 단일 가닥 DNA 가닥, 추가 뉴클레오티드 태그가 있는 전방 프라이머, 내열성 DNA 중합효소, dNTP 및 단일 가닥 올리고뉴클레오티드 프로브를 표시하는 마이크로스피어를 포함하는 반응 혼합물을 취합니다.

튜브를 열순환기에 넣고 정의된 조건에서 실행합니다.

첫 번째 사이클에서 어닐링 온도에서 템플릿 DNA는 템플릿 DNA가 감지 가닥으로 기능하도록 마이크로스피어 표면의 프로브에 결합합니다. 확장하는 동안 중합효소는 DNA를 확장하고 듀플렉스는 미세구에 부착된 상태로 유지됩니다.

다음 주기에서 변성 중에 템플릿 DNA는 미세구에서 분리되어 프로브 가닥이 표면에 결합된 상태로 남아 새로운 가닥의 주형 역할을 합니다.

어닐링하는 동안, 태그가 지정된 프라이머는 안티센스 가닥에 결합합니다. 나중에, 중합효소는 이를 확장하여 뉴클레오티드 태그와 함께 감지 가닥을 합성합니다.

이 사이클을 여러 번 반복하여 이중 가닥 오염 물질이 부착된 상태로 유지되는 동안 용액으로 들어가는 감지 단일 가닥 DNA의 여러 사본을 생성합니다.

PCR 산물을 loading buffer가 들어 있는 tube로 옮깁니다. 생성물 및 감적을 젤의 다른 well로 적재하고, agarose 젤 전기 이동법을 사용하여 분리하십시오.

주형 DNA는 희미한 저분자량 밴드를 형성하는 반면, 강렬한 고분자량 밴드는 단일 가닥 DNA 증폭을 확인합니다.