진동 압 관류 장치에서 쥐 간을의 탈세 포화 절차

다음 실험의 전반적인 목표는 쥐 간 관류 탈세포화의 균질성을 최적화하는 데 있어 관류 뿌리의 역할을 평가하는 것입니다. 이것은 먼저 캐뉼러화, 갓 분리된 쥐 간의 문맥 및 간 동맥에 의해 달성됩니다. 두 번째 단계로, 간은 문맥 또는 간 동맥의 선택적 관류를 위해 관류 장치에 연결됩니다.

다음으로, 진동 압력 변화를 관류 챔버에 적용하여 호흡 중에 발생하는 복강 내 압력 변화를 모방합니다. 간 미세 관류를 최적화하면 궁극적으로 진동하는 압력 조건에서 간 동맥을 통해 관류된 간은 거시적 관찰과 조직학 및 생화학적 분석에 의해 평가된 바와 같이 더 균일하고 빠른 탈세포화를 나타냅니다. 문맥 관류 탈세포화와 같은 기존 방법에 비해 이 기술의 주요 장점은 진동압 조건을 사용한 동맥 관류가 보다 균일한 탈세포화 결과로 이어진다는 것입니다.

그러나 더 짧은 시간에이 방법은 감속 기술에 대한 통찰력을 제공 할 수 있습니다. 또한 res solarization 실험, 구강 외 관류 설정 및 장기 모델과 같은 다른 시스템에도 적용할 수 있습니다. 일반적으로 이 방법을 처음 접하는 개인은 적색 간의 적출 및 동맥 삽관이 복잡할 수 있기 때문에 어려움을 겪을 것입니다.

간을 적출하기 전에 말초 G 20 정맥 카테터의 1.5cm 조각 끝을 비스듬히 자릅니다. 카테터를 3방향 스톱 콕에 연결하고 링거 용액으로 채워진 10ml 주사기를 사용하여 시스템을 환기시킵니다. 다음으로, 나비 캐뉼라의 바늘을 5mm 길이로 자르고 슈퍼 접착제를 사용하여 5cm 튜브를 바늘에 고정합니다.

2cm 길이의 튜브를 더 큰 튜브에 삽입하고 이 튜브도 슈퍼 접착제로 고정합니다. 이 구조물 위에 다른 튜브를 밀어 넣고 제자리에 붙여서 접합부를 만듭니다. 그런 다음 링거 용액으로 채워진 5 밀리리터 주사기를 사용하여 새로 건설 된 동맥 캐뉼라를 사용하여 수확을 위해 간을 복구합니다.

습식 붕대를 사용하여 마취된 성인 쥐 크랜의 내측 및 왼쪽 간엽을 횡격막의 돔 아래에 고정하는 것으로 시작합니다. 이때 간십이지장 인대와 상부 간엽도 노출시킨다. 다음으로, 두 개의 마이크로 집게와 용수철 가위를 사용하여 상부 난소 엽에 붙어있는 인대를 엽이 움직일 때까지 조심스럽게 절개합니다.

그런 다음 내측엽과 좌엽을 제자리에 고정합니다. 젖은 면봉을 사용하여 GRE 압박 아래의 엽을 이동하고 동물의 왼쪽으로 위를 이동합니다. 클램프로 위를 고정하고 작은 운동량을 해부합니다.

그런 다음 하부 또는 정신 간엽이 움직일 수 있을 때까지 절개하고, 백하우스 클램프를 사용하여 간엽을 다시 구멍으로 이동시켜 십이지장을 유지하고 십이지장을 왼쪽으로 이동하여 헤르파 십이지장 인대를 노출시킵니다. 총담관을 둘러쌉니다. 그런 다음 지방과 췌장 조직에서 담관을 절개하여 담관 분기점에서 1.5cm 떨어진 곳에서 담관을 절단합니다.

주변 지방 조직에서 염 정맥을 절개하여 위십이지장 정맥을 노출시킵니다. 그런 다음 6개의 제로 봉합사로 위십이지장 정맥을 두 번 접합하고 두 매듭 사이의 정맥을 나눕니다. 동맥 라미아가 모두 드러날 때까지 주변 조직에서 체강 줄기와 총동맥을 절개합니다.

모든 동맥을 절개한 후 오른쪽 신장과 오른쪽 외측 간엽 사이의 하강 정맥을 둘러싸고 후복막 공간에서 정맥을 절개합니다. 체강 줄기를 따라 대동맥을 노출시킵니다. 그런 다음 후복막 지방 조직을 절개하고 체강 줄기 위의 대동맥을 둘러쌉니다.

이제 식염수 1밀리리터에 헤파린 1000단위를 하대정맥 동굴에 주입합니다. 절개 부위를 화장솜으로 덮고 헤파린이 효과를 발휘할 때까지 1-2분 정도 기다립니다. 그런 다음 겸자로 대동맥을 둘러싸고 대동맥과 신장 원위부의 하대정맥을 절개합니다.

문맥 캐뉼라를 배치하려면 원위 문맥을 물고기 입으로 절개하고 집게로 절개 부위를 엽니다. 그런 다음 문맥을 캐뉼러하고 간이 비인간화될 때까지 20ml의 링거 용액으로 간을 씻어냅니다.실크 6개의 제로 합자를 사용하여 캐뉼라를 제자리에 고정합니다. 동맥 캐뉼라를 배치하려면 대동맥 분절이 후복막 공간에서 해방될 수 있을 때까지 체강 몸통 위의 대동맥을 절개합니다.

대동맥 분절을 세로로 절단하여 대동맥 패치를 생성하고 자체 제작한 캐뉼라를 정적 홀더에 삽입합니다. 그런 다음 두 개의 집게를 사용하여 대동맥 패치를 캐뉼라 위로 밀어 넣고 캐뉼라 위에 실크 6 제로 봉합사로 간 동맥을 결찰합니다. 탈세포화를 수행하기 위해 교대에 패치를 고정하고, 문맥 캐뉼라의 3방향 스톱콕을 관련 반응기 접근에 연결하고 동맥 캐뉼라를 동맥 접근에 연결하며, 공기가 시스템으로 유입되지 않도록 주의합니다.

다음으로, 호흡기를 압력 분배 챔버에 연결하고 챔버를 반응기에 연결합니다. 압력 응용 프로그램을 시작합니다. 그런 다음 탈세포화를 시작합니다.

분당 5 밀리리터의 속도로 1 % tritton X 100으로 간을 융합하십시오. 관류 장치의 유출을 통한 폐기물 유출을 허용하여 관류 챔버 내부의 유체 수위를 일정하게 유지하고 관류된 간 이상으로 유지합니다. 90 분 후에, 간 동맥을 통해 관류된 간은 보다 적게 눈에 보이는 잔여 세포와 더불어 더 균질한 decellularization 과정을 설명하는 그러나, 과정 도중 그리고 후에 거시적으로 보이는 잔여 세포를 가진 decellularization를 나타내는 균질한 정맥 전시회를 통해 관류된 1%SDS 간으로 세제를 바꾸십시오.

진동하는 압력 조건을 적용하여 간을 관류하면 남아 있는 세포가 보이지 않았습니다. 관류에 관계없이. 탈세포화된 간 매트릭스의 치근 조직학적 평가는 실제로 간 동맥을 통해 관류된 간에서 거시적 발견을 뒷받침합니다.

발진압 조건 하에서 관류되었는지 여부에 관계없이 남아 있는 세포는 문맥을 통해 관류되는 간이 관찰되지 않지만, 진동 압력 조건에서 관류되더라도 나머지 세포의 영역을 나타내지만, 이러한 조건은 이러한 간의 잔여 세포 질량을 감소시키지만, 탈세포화 조건에 관계없이 간의 세포 외 기질의 보존에 유의합니다. 간 기질의 건조 중량당 DNA 함량도 천연 간과 비교하여 모든 실험 그룹에서 감소했습니다. 그 차이는 진동 압력 조건 하에서 그룹의 관류에서만 통계적으로 유의미했습니다.

또한, 탈세포화된 간 매트릭스의 부식 주조는 관류 과정에서 간의 미세해부학적 구조가 보존되었음을 확인했습니다. 이 비디오를 시청한 후에는 재현 가능한 균일한 감속을 위해 캐뉼레이트를 수확하고 적간을 관류하는 방법을 잘 이해하게 될 것입니다. Triton X 100 및 SDS로 작업하는 것은 매우 위험할 수 있으므로 이 절차를 수행하여 장갑 착용과 같은 예방 조치도 취해야 한다는 것을 잊지 마십시오.