Name: 쌍된 구슬 및 Microwells 가변 오목한 형상의 성형에 대 한 자석 배열 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-01-28T13:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 42 s
Description: 배우세요 자기력과 강철 구슬을 이용하여 오목한 마이크로웰을 제조하는 비용 효율적인 방법을. PDMS 기판에 수백 개의 마이크로웰을 형성하여 3차원 세포 배양 연구에 활용할 수 있습니다.

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이 연구는 기본 과학 연구 프로그램을 통해 국가 연구 재단의 한국 (NRF) 사역의 과학, ICT와 미래 계획 (NRF 2014R1A1A2057527 및 NRF-2016R1D1A1B03934418)에 의해 지원 되었다.

1. 구멍을 통해 배열 알루미늄 판과 자석 배열 준비
<ol><li>준비 하는 2 개의 50 m m x 50 m m (또는 더 큰) 알루미늄 플레이트. 각 플레이트의 두께 구슬 직경의 절반은 300 µ m 이었다.입니다.</li>
	<li>Φ550 µ m 마이크로 드릴 조금 30 m m/s 하락 속도와 스핀 들 속도 8000RPM CNC 로타리 조각 사를 사용 하 여 알루미늄 접시 중 하나에서 30 x 30을 통해 구멍 배열을 형성 한다. 각 구멍 (센터에 센터) 사이의 거리는 1 m m (그림 1a 및 그림 2a, 나) 이었다.</li>
	<li>다른 알루미늄 접시에, 1.2 (그림 1a 및 그림 2a, ii)에 설명 된 것과 동일한 절차를 사용 하 여 구멍을 통해 Φ750 µ m의 30 x 30 배열을 형성 합니다.</li>
	<li>스티커 테이프를 사용 하 여 서로 두 접시를 연결 하 고 Φ3 mm 맞춤 구멍 두 알루미늄 판의 네 모서리의 각을 형성.</li>
	<li>12 h 그들의 표면 청소를 위해 15% 황산 알루미늄 플레이트를 담근 다. 때문에 알루미늄의 표면에 알루미늄 산화물의 얇은 층에 게 저항 하는 부식, 구멍 직경 및 판의 두께이 산 성 처리에 의해 변경 되지 않습니다.</li>
	<li>30 × 30 배열 1 x 1 x 1 m m 네오디뮴 자석 (0.363 N의 자석 힘)을 형성 한다. 각 자석 이웃에 반대 극성 인지 확인 합니다. 속보 또는 자석 배열의 산란을 방지 하기 위해, 자석 배열 더블 양면 테이프 (그림 2a, iii와에 삽입 된 그림 2)를 사용 하 여 아래쪽으로 30 x 30 m m 알루미늄 플레이트를 연결 합니다.</li>
</ol>2. 구슬 트랩 프로세스
<ol><li>정렬 하 고 스택 두 알루미늄 접시 (접시 탑: 750 µ m 구멍 판, 바닥판: 550 µ m 홀 플레이트) 준비 맞춤 구멍을 사용 하 여 각 접시 (그림 1b)의 네 모퉁이에서.</li>
	<li>정렬 구멍에 M3 볼트를 삽입 하 여 두 접시를 함께 고정 하 고 고정 볼트와 너트 (그림 1b).</li>
	<li>알루미늄 플레이트 어셈블리 (그림 1b, 2b, 2 c) 준비 자석 배열에 스택. 쌓기 과정에서 자석의 배열 및 알루미늄 플레이트에 구멍의 배열을 맞춥니다. 다음 끈 적 테이프를 사용 하 여 자석 배열 위치를 해결 하기.</li>
	<li>충분 한 수 Φ600 SUJ2 철강의 플레이트 어셈블리에 비즈 고 아크릴 (또는 비-금속)를 사용 하 여 구슬을 조작 같은 구슬 동안 각 구멍 (그림 1c, 1d, 1e)에 동시에 갇혀 된다 접시 제거 하지 구멍에 박 혀 있는 초과 구슬.</li>
	<li>조심 스럽게 제거 원치 않는 산란과 갇혀 구슬 (그림 1 층)의 탈을 피하기 위해 상단 플레이트.</li>
</ol>3. 오목 microwell 제조
<ol><li>오목 microwell 형, 페 트리 접시 위에, 단계 2.1 ~ 2.5에서에서 생산을 이동 합니다.</li>
	<li>PDMS 단위체입니다 (PDMS) 단위체와 제조 업체의 지침19 에 따라 경화제 혼합: 경화 에이전트의 비율은 10:1.</li>
	<li>PDMS 혼합물에 갇혀 모든 거품을 제거 하는 desiccator 및 진공 펌프를 사용 하 여 탈 가스 PDMS 혼합물.</li>
	<li>오목 microwell 형으로 PDMS 혼합물을 부 어와 드 가스 3.3 (그림 1 층)에 설명 된 것과 동일한 절차를 사용 하 여 다시.</li>
	<li>구슬 포함 된 PDMS 기판 (그림 1 g)를 2 시간에 80 ° C에서 열판에 PDMS 혼합물을 구워.</li>
	<li>치료 PDMS 기판 형 (그림 1 g)에서 제거 합니다. 제거 과정에서 메탄올 세척 병을 사용 하 여 금형에서 PDMS 기판 분리 하 스프레이.</li>
	<li>M m x 2mm 자석 Φ15를 사용 하 여, PDMS 기판 (그림 1 h)에서 갇혀 강철 구슬을 제거 합니다. 이 프로세스에 대 한 PDMS 기판에서 구슬 추출 하 충분히 강하다 어떤 자석 사용할 수 있습니다.</li>
</ol>4. 회전 타원 체 문화
<ol><li>이 연구에서 24-잘 접시에 장착 Φ14 m m 생 검 펀치를 사용 하 여 오목 microwell 꽃무늬 PDMS 기판 절단.</li>
	<li>결과 Φ14 m m PDMS 기판 121 ° C와 15 psi에서 고압 소독 기에 소독.</li>
	<li>멸 균된 PDMS 기판을 24 잘 접시에 놓습니다.</li>
	<li>Microwell 표면에 세포 부착을 방지 하기 위해 하룻밤 사이 4% (w/v) pluronic F-127 솔루션 전체 PDMS 기판 코트. 코팅 과정 pipetting 하거나 초음파 세탁 기술자를 사용 하 여 오목 microwells에 갇힌 모든 기포를 제거 합니다.</li>
	<li>인산 염 버퍼 식 염 수 (PBS)를 사용 하 여 F-127 솔루션 세 번을 플러시.</li>
	<li>PDMS 기판에 셀-매체 (Dulbecco의 수정이 글 중간) 솔루션 (2 x 106 셀 포함) 하의 1 mL 씨앗 Note 시드 밀도 대상 회전 타원 체 크기 및 대상 셀 형식에 따라 변경 될 수 있습니다. 여기, 지방 유래 줄기 세포 (ASC) 사용 되었다.</li>
	<li>Microwells (그림 3)에 갇혀 있던 어떤 과잉 세포를 제거 하는 1000 µ L 피 펫을 사용 하 여 매체의 1 mL 발음</li>
	<li>36.5 ° c, 습도의 세포를 품 어 > 95%와 5% CO2 상태. 우리의 연구에 사용 된 ASCs 경우 셀 48 h에서 회전 타원 체를 집계.</li>
</ol>

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</ol>

저자는 공개 관심의 없습니다 충돌 있다.

이 제조 방법은 직면 주요 도전 알루미늄 플레이트의 구멍을 통해 배열에 구슬의 보안 수정 했다. 이 문제를 해결 하기 위해 30 x 30 자석 배열 형식에서 자력 구슬을 안전 하 게, 그림 6 과 7에서 같이 해결 하기 위해 사용 되었다. 자 속 밀도 반대 극성, 자석 배열의 각 자석 표면의 중심에 강한입니다. 자기 힘의 강도 자 속 밀도에 따라 달라 집니다, 때문에 그들은 위치에 열렸다 각 자석의 위쪽 표면에의 중심에 구슬 유도 했다. 하나의 대형 자석 (5 ㎝ × 5 cm × 1 cm)를 사용 하는 경우는 구슬, 구멍, 외부 극단에 있는 것 들 특히 높은 강도 자기장 자석 가장자리에 만든에 매료 될 경향이 있다. 큰 자석 사용 하 여 또 다른 문제는 구슬 뭉쳐 저절로 작은 구슬 체인 (그림 8a)를 만들려고.
상단 플레이트 (750 µ m 구멍)의 역할 구슬 함정 구 덩이 형상 봉사 했...

회전 타원 체 모양으로 성장 하는 세포는 2 차원 평면 문화1보다 본문에 실제 조직에 더 비슷합니다. 이 이점을 감안할 때, spheroids 사용 하 여 셀에 셀 상호 작용2,3, 면역 활성화4,5및 차별화6심사 약 연구를 개선 하기 위해 채택 되었습니다. 또한, 여러 셀 유형을 통합 하는 spheroids는 최근 organoids (근처 생리 3 차원 (3D) 조직), 인간 개발 및 질병7공부에 대 한 매우 유용한에 적용 되었습니다. 여러 가지 방법 spheroids을 생산 하기 위해 사용 되었습니다. 간단한 방법은 서로와 양식 spheroids 셀 집계 되도록 비 접착 표면에의 활용을 포함 한다. 페 트리 접시 소 혈 청 알 부 민, pluronic F-127, 또는 그것의 표면 비 접착제89을소수 성 고분자 (예: 폴 리 2 hydroxyethl 메타 크리 레이트) 치료 될 수 있습니다. 회전자-플라스 크 방법은 spheroids10,11의 다량 생산의 또 다른 잘 알려진 수단입니다. 이 방법에서는, 세포는 기판에 부착 되 고에서 그들을 방지 하기 위해 교 반에 의해 서 스 펜 션에서 개최 됩니다. 대신, 부동 집계 양식 spheroids 세포. 비 접착 표면 방법 및 회전자 플라스 크 방법 spheroids의 큰 금액을 생성할 수 있습니다. 그러나, 그들은 회전 타원 체 크기 뿐만 아니라 추적 제어와 각 회전 타원 체의 모니터링을 포함 하 여 제한 될 수 있습니다. 같은 문제, 다른 회전 타원 체 생산 방법에 대 한 구제 수단으로 서 즉, 교수형 드롭 방법 고용된12될 수 있습니다. 문화 접시의 뚜껑의 밑바닥에 세포 현 탁 액 방울을 입금 해야 합니다. 이러한 방울 일반적으로 크기에서 15 ~ 30 µ L 이며, 약 300 ~ 3000 셀13를 포함. 뚜껑을 거꾸로 때 물방울 표면 장력에 의해 장소에서 개최 됩니다. 각 드롭에 microgravity 환경 다음 무료 액체 공기 인터페이스에서 단일 spheroids 형성 세포에 집중 한다. 교수형의 혜택 드롭 메서드는 추적 하 고 모니터링 각 회전 타원 체 비 접착 표면 및 회전자 플라스 크 방법에 상대적으로 쉬운 반면 잘 제어 된 크기 분포, 제공. 그러나이 메서드 spheroids 및 생산 과정 자체의 대규모 생산은 지나치게 노동 1 개의 불리를 초래 하는, 집중.
Microwell 배열은 아파트 많은 마이크로 크기 웰 스, 직경 100에서 1000 µ m에 이르는 데 각 접시. Microwells를 사용 하는 경우 회전 타원 체 생산 원리는 비 접착 표면 메서드의 비슷합니다. 장점은 microwells 셀 또는 spheroids, 그것은 또한 쉽게 각 단일 회전 타원 체를 모니터링 하는 동안 회전 타원 체 크기를 제어 하기 쉬운 그런 분리를 위한 microwells 사이 공간을 제공 하는 사실. Microwells의 다 수, 높은 처리량 회전 타원 체 생산도 가능 하다. Microwells의 또 다른 장점은 다양 한 도형 형태 웰 스 옵션입니다 (육각, 원통형, 로그인 프리즘) 사용자의 독특한 실험 목적에 따라. 그러나 일반적으로,, 3 차원 (3D) 오목한 (또는 반구형) 모양 제복 크기의 단일 spheroids 생산을 위한 가장 적합 한 것으로 간주 됩니다. 따라서, 오목 microwells의 유용성 보고 되었습니다 검토 하는14, 배아 줄기 세포 cardiomyocyte 차별화 등 많은 세포 생물학 연구에 대 한 작은 섬 세포의 인슐린 분 비15, 클러스터는 hepatocytes16, 그리고 종양 spheroids17의 약물 내성의 효소 활동.
불행히도, 종종 microwells의 제조 필요 전문된 micropatterning 시설; 기존의 포토 리소 그래피 기반 방법 플라즈마와 이온 빔 장비를 필요 하는 반응성 이온 에칭-기반 방법 노출 및 개발 시설 필요 합니다. 이러한 장비는, 복잡 한 제조 공정에 함께 선물 항목에 높은 장벽이 microtechnology에 대 한 액세스 권한이 없는 생물학에 대 한 비용이 많이 드는. 이러한 문제를 해결 하려면 다른 비용 효율적인 방법을 같은 얼음 리소 그래피18 (냉동된 물 방울을 사용 하 여) 하 고 (막, 스루홀 기판 및 진공을 사용 하 여) 유연한 막 방법14 제안 되었습니다. 그러나, 이러한 방법 또한 패턴 크기, 높은 종횡비의 달성 및 더 큰 지역 microwells의 생산을 통제 하기 어려운 되 고 같은 심각한 단점이 발생 합니다.
위의 문제를 해결 하려면 우리 소설 오목 microwell 제조 방법은 스루홀 기판, 강철 구슬, 자석 배열 활용 제안 됩니다. 이 메서드를 사용 하 여, 오목 구면 microwells의 수백 포스를 이용한 자석 자동 폐쇄 금속 구슬 (그림 1)의 메커니즘을 활용 하 여 날조 될 수 있다. 제조 공정 거의 복잡 하 고 비싼 시설의 사용을 포함 하 고 많은 고급 능력을 요구 하지 않습니다. 따라서, 심지어 미숙한 사람이 제조 방법을 수행 쉽게 수 있습니다. 설명 하기 위해 제안된 된 방법, 인간 지방 유래 줄기 세포 생산 spheroids 오목 microwells에서 경작 되었다.

<table><tbody><tr><td>CNC 로터리 조각사</td><td>Roland DGA</td><td>EGX-350</td><td></td></tr><tr><td>마이크로 드릴 비트</td><td>HAM Pr&auml; zision</td><td>30-1301 TA</td> <td>&Phi; 0.55 및 0.75 mm</td></tr><tr><td>황산 98 %</td> <td>Daejung</td><td>7683-4100</td><td>알루미늄 판 청소를 위해. 15 % 용액</td></tr><tr><td>네오디뮴 자석</td>으로 증류수로 희석 <td>초자석 W-01-N</td><td></td><td>1 x 1 x 1 mm</td></tr><tr><td>베어링 볼</td><td>Agami 모델링</td><td>SUJ2</td><td>&Phi; 600 &mu; m 스틸 비드</td></tr><tr><td>폴리디메틸실록산(PDMS)</td><td>Dowcorning</td><td>Sylgard 184</td><td></td></tr><tr><td>Pluronic F-127</td><td>Sigma Aldrich</td><td>p2443</td><td>인산염 완충 식염수를 4%(w/v) 용액으로 희석</td></tr>, <tr><td>Dulbecco's modified eagle's medium(DMEM)</td><td>ATCC</td><td>30-2002</td><td></td></tr>, <tr><td>Dulbecco's phosphate buffered saline(D-PBS)</td><td>ATCC</td><td>30-2200</td><td></td></tr><tr><td>소 태아 혈청</td><td>ATCC</td><td>30-2020</td><td></td></tr><tr><td>지방 유래 중간엽 줄기세포</td><td>ATCC</td><td>ATCC PCS-500-011</td><td></td></tr></tbody></table>

쌍된 구슬 및 microwells 가변 오목한 형상의 성형에 대 한 자석 배열

A Paired Bead and Magnet Array for Molding Microwells with Variable Concave Geometries

회전 타원 체 문화는 vivo에서제공 한다는 세포 행동을 이해 하기 위한 유용한 도구입니다-3 차원 환경 처럼. 다양 한 회전 타원 체 생산 방법 비 접착 표면, 스피너 플라스 크, 매달린 방울 및 microwells 셀 상호 작용, 면역 활성화, 심사, 마약의 연구에 사용 된 줄기 세포 분화 및 organoid 세대. 이러한 방법 중에서 3 차원 오목 형상 가진 microwells 과학자와 엔지니어, 균일 크기의 회전 타원 체 생성 및 개별 spheroids의 응답 될 수 있는 용이성의 그들의 이점을 주어진의 관심을 얻고 있다 모니터링. 유연한 막 및 얼음 리소 그래피의 사용과 같은 비용 효율적인 방법을 제안 되었습니다, 비록 이러한 기술을 높은 종횡비의 공적 및 생산의 패턴 크기 조절에 어려움 등 심각한 단점이 발생 microwells의 더 큰 지역입니다. 이러한 문제를 해결 하려면 복잡 한 높은 비용 시설에 대 한 필요 없이 오목 microwells 조작 하는 강력한 방법을 제안 한다. 이 방법을 활용 하 여 30 x 30를 통해 구멍 배열, 몇 백 마이크로미터-주문 강철 구슬, 및 3 c m x 3 c m입니다 (PDMS) 기판에 900 microwells 조작 하 자기 힘. 세포 생물학 응용 프로그램을 우리의 방법의 적용을 보여 우리는 3 일에 대 한 지방 줄기 세포를 배양 하 고 성공적으로 우리의 microwell 플랫폼을 사용 하 여 spheroids를 생산. 또한, 우리는 그것에 의하여 자기 힘을 통해-구멍에 강철 구슬 트랩 사용 메커니즘을 조사 하는 magnetostatic 시뮬레이션 수행. 우리는 제안 된 microwell 제조 방법 약물 검사, 조직 재생, 줄기 세포 분화, 암 전이 등 많은 회전 타원 체 기반 세포 연구에 적용할 수 있습니다 믿습니다.

볼록 형 및 microwell 패턴 성공적으로 다음 단계 2.1 3.7에 의해 조작 했다. (그림 4)입니다. 상업 강철 구슬 30 x 30을 통해 구멍 배열에 갇혀 있었다. 구슬 구슬 및 해당 통해-구멍 (그림 4a) 사이 간격 없이 밀접 하 게 개최 했다. 조작된 오목 microwell의 모양 강철 구슬 (그림 4b)의 동일은 600 µ m의 직경을 가진 반구형 오목한입니다. 오목 microwell (그림 4c)의 횡단면 이웃 microwell에서 거리 1 mm (센터에 센터)를 통해 구멍의 그것과 동일 했다 이었다 보여준다. 24 잘 접시에 배치 되었다, Φ14 mm 오목 microwell 기판 포함 120 microwells (<strong class=...

이 원고는 복잡 한 높은 비용 시설에 대 한 필요 없이 오목 microwells 조작 하는 강력한 방법을 소개 합니다. 자기 힘, 강철 구슬, 및 구멍을 통해 배열을 사용 하 여, 몇 백 microwells 3 c m x 3 c m입니다 (PDMS) 기판에 형성 되었다.

쌍된 구슬 및 Microwells 가변 오목한 형상의 성형에 대 한 자석 배열

A spheroid culture is a useful tool for understanding cellular behavior in that it provides an in vivo-like three-dimensional environment. Various ...

본 방법의 전반적인 목표는 자기력 보조 및 자가 잠금 금속 비즈를 활용하여 오목한 구형 마이크로 웰을 제작하는 것입니다. 안녕하세요, 저는 중앙대학교의 교육 조교 이기훈입니다. 저희 연구실에서는 바이오 기기 개발, 세포 배양 및 새로운 미세 구조에 관한 연구를 강화하기 위해 다양한 마이크로 규모의 장치와 플랫폼을 제작하는 것에 관심을 두고 있습니다.저희의 주요 연구 관심 분야 중 하나는 3차원 환경에서 이를 수축시키기 위한 새로운 마이크로 장치 및 방법론을 개발하는 것입니다. 저희는 이를 배양이라고 부릅니다. 배양은 기존의 2차원 평면 배양보다 실제 조직과 더 유사하기 때문에 3차원 반응을 이해하는 데 매우 유용합니다.플라스크나 튜브, 드럼 넷 및 마이크로파를 이용한 방법 등 다수의 분산체 제조 방법이 시도되어 왔습니다. 이러한 방법들 중 오목 마이크로 방법은 3D 생성물을 제조하는 매우 강력한 도구입니다. 마이크로파의 모든 피치는 각각 모니터링되며 구형의 크기와 분포를 제어할 수 있는 능력을 갖추고 있습니다.본 연구에서는 비드와 소형 자석 배열을 이용한 오목 마이크로 웨어(concave micro wares) 제작 방법을 제안합니다. 이 기술을 사용하여, 정지된 비드를 보조하는 자기력 메커니즘을 통해 100개의 오목 마이크로 웨어를 제작할 수 있습니다. 각 오목 구조의 공정은 서로 다르며, 반복적인 제안 규모는 없습니다.먼저, CNC 로터리 인그레이버를 사용하여 230 x 30 관통홀 어레이 알루미늄 플레이트를 제작하였습니다. 이 플레이트는 다음 섹션에서 설명할 비드의 가이드 롤 역할을 합니다. 플레이트는 서로 다른 직경의 드릴 비트로 천공되었으며, 구멍 크기가 더 작은 플레이트를 바닥에 배치하였습니다.플레이트를 정렬하기 위해 바깥쪽 모서리에도 구멍을 뚫습니다. 그 다음 두 플레이트를 정렬하여 겹친 후, 제한 구멍에 N개의 볼트 3개를 삽입하여 함께 고정하고 너트로 조입니다. 앞서 언급했듯이, 비드가 가이드 웰 내부에 고정될 수 있도록 제조사는 구멍이 더 작은 플레이트를 바닥에 배치하는 것이 중요합니다.다음 단계는 30 by 30 배열의 네오디뮴 자석을 준비하는 것입니다. 먼저 자석을 수동으로 분리하여 2 by 2 배열로 배치합니다. 그런 다음 핀셋을 사용하여 더 큰 배열로 정렬합니다.적절한 자석 배열을 만들기 위해서는 각 자석이 인접한 자석과 서로 반대 극성을 가져야 합니다. 또한, 배열이 파손되거나 흩어지는 것을 방지하기 위해 양면테이프를 사용하여 자석 배열 바닥에 알루미늄 판을 부착합니다. 이제 제작한 각 부품을 마이크로 웰 몰드에 조립할 준비가 되었습니다.자석 배열을 일반 테이프를 사용하여 바닥판에 조심스럽게 부착합니다. 이때 자석 배열의 자석 면이 아래를 향하도록 부착하는 것이 중요합니다. 알루미늄 판과 자석 배열이 적절하게 배치되면, 판 조립체 위에 강철 구슬을 놓습니다.본 논문에서 사용된 비드는 직경 600 µm의 SUJ 2 스틸 비드입니다. 정렬 과정은 매우 간단합니다. 조립체 위에 충분한 수의 비드를 붓고 아크릴 판을 사용하여 긁어냅니다.바닥에 있는 자석이 비즈를 포집하여 알루미늄 플레이트의 구멍 속으로 들어가게 하며, 구멍에 안착되지 않은 과잉 비즈는 긁어내는 과정에서 제거됩니다. 과잉 비즈는 다른 자석을 사용하여 제거합니다. 비즈가 가이드 웰 내부에 적절히 안착되면 상단 플레이트를 제거하는 단계로 진행합니다.이 과정 중에 비즈가 빠져나와 위치가 이탈하는 경우가 발생할 수 있습니다. 이 경우, 핀셋을 사용하여 비즈를 구멍에 다시 수동으로 삽입하십시오. 이제 오목한 마이크로웰 몰드가 준비되었습니다.플랫폼을 다른 페트리 접시로 옮기고 다음 단계를 준비합니다. PDMS 단량체와 경화제를 10:1 비율로 혼합하여 제조사의 지침에 따라 PDMS를 준비합니다. PDMS 혼합물 내에 갇힌 기포를 제거하기 위해, 혼합물을 데시케이터에 넣고 약 1시간 동안 탈기시킵니다.이 과정이 완료되면, 탈기된 PDMS 혼합물을 오목한 마이크로 웰 몰드에 붓고 다시 한번 탈기합니다. 그런 다음, 80 °C의 핫플레이트에서 2시간 동안 PDMS 혼합물을 가열하여 내장형 PDMS 서브 트레이를 형성합니다. 다음 공정은 매우 주의 깊게 수행해야 합니다.제거 과정을 용이하게 하기 위해 서브 트레이에 메탄올을 붓고 주변부의 PDMS 서브 트레이를 순서대로 제거합니다. 이때 제조업체는 깨끗한 제거를 보장하기 위해 메탄올이 틈새까지 충분히 스며들도록 해야 합니다. 그다음 PDMS 서브 트레이를 알루미늄 플레이트에서 떼어내는데, 서브 트레이를 벗겨내기 전에 가장자리를 먼저 절단하면 더 쉽게 제거할 수 있습니다.마지막으로, PDMS 보조 트레이에서 비즈를 제거합니다. 제거하기 전에 보조 트레이를 일정 시간 동안 늘리고 굽혀 비즈와 PDMS 보조 트레이 사이의 결합을 느슨하게 합니다. 비즈의 실제 제거는 매우 간단하며 대형 자석을 사용하여 수행할 수 있습니다.오목한 마이크로 웰의 제작이 완료되었으며, 이제 마이크로 웰에서 세포 배양을 수행할 준비가 되었습니다. 당사의 PDMS 플랫폼이 세포 배양에 적합한지 테스트하기 위해 다음과 같은 절차를 진행하였습니다. 먼저, 14 millimeter 직경의 생검 펀치를 사용하여 오목한 마이크로 웰 패턴의 PDMS 서브 트레이를 절단하였습니다.PDMS 서브 트레이를 멸균한 후, 이를 24 웰 플레이트에 넣습니다. 그 다음, 세포가 마이크로 웰 표면에 부착되는 것을 방지하기 위해 4% pluronic F-127 용액으로 PDMS 서브 트레이 전체를 하룻밤 동안 코팅합니다. 코팅 과정 동안 마이크로 웰 내부에 갇힌 기포는 피펫팅이나 초음파 세척기를 사용하여 제거해야 합니다.기포가 남아있지 않은지 확인한 후, 약 200만 개의 세포가 포함된 세포 배양액 1 mL를 PDMS 서브 트레이에 접종합니다. 다음으로, 1000 µL 피펫을 사용하여 배양액을 흡입함으로써 마이크로 웰에 포획되지 않은 과잉 세포들을 제거하며, 이제 세포를 인큐베이터에 넣을 준비가 완료되었습니다. 마이크로 웰 패턴의 볼록한 몰드가 성공적으로 제작되었으며, 상용 스틸 비드들이 30 x 30 관통 홀 어레이에 포획되었습니다.비드와 해당 관통 구멍 사이에 가스가 전혀 없이 비드들이 단단히 고정되었습니다. 제작된 오목한 마이크로 웰의 형상은 직경 600 microns의 오목한 반구형으로, 이는 스틸 비드의 직경과 동일합니다. 오목한 마이크로 웰의 단면을 보면 인접한 마이크로 웰 사이의 거리가 1 millimeter이며, 이는 관통 구멍 사이의 거리와 동일함을 알 수 있습니다.지방 유래 줄기세포를 오목한 마이크로웰에서 배양하였습니다. 직경 14 millimeter의 오목한 마이크로웰 어레이에 200만 개의 세포를 접종하였습니다. 24시간 후, 세포들은 구상체 형태로 응집되었습니다.마이크로 웰 어레이에서 형성된 스페로이드의 평균 직경은 185.68 microns였습니다. 3일 차에 세포들이 더 많이 응집되었으며, 스페로이드의 평균 직경은 147 microns로 감소했습니다. 이 절차를 통해 비용 효율적이고 비교적 간단한 방법으로 100개의 오목한 구형 마이크로 웰을 제작할 수 있습니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Bioengineering

생명공학

micropunching 리소그래피 방식이 생성하는 마이크로와 submicron 패턴 위, 측벽 및 폴리머 기판의 바닥 표면을 개발하고 있습니다. 그것은 patterning이 폴리머를 실시하고 측벽 패턴을 생성하는 장애물을 극복. 이 방법은 여러 기능의 신속한 제조가 가능하며 적극적인 화학 무료입니다.

마이크로 및 Submicron 패턴 폴리머 기판을 생성하기위한 리소그래피를 Micropunching

지원되는 지질 이중층과 천연 막 입자는 세포막의 특성을 근사 할 수 있고 분석 다양한 전략에 통합 될 편리한 시스템이다. 여기에서 우리는 지원 지질 이중층 코팅 된 SiO2로 비즈, 인지질 막 소포 또는 천연 입자로 구성된 마이크로 어레이를 제조하는 방법을 보여준다.

스퀴지 기반의 조립 방법과 생체막 마이크로 어레이의 형성

이 연구에서는 3D 뉴런 배양이 평면 MEA(Micro-Electrode Arrays)에 결합되는 새로운 실험 모델을 presented. 3D 뉴런이 유리 마이크로비즈로 구성된 골격에 뉴런을 파종하여 네트워크를 구축하고, 그 위에서 뉴런이 자라나 상호 연결된 3D 구조를 형성합니다.

마이크로 전극 배열에 3D 엔지니어링의 연결을 문화의 인터페이스 : 혁신을<em&gt; 체외</em&gt; 실험 모델

Described는 부착 세포와 미세 구조 기질 사이의 기계적 상호 작용을 정량화하기 위한 프로토콜입니다. 이러한 상호 작용은 이동, 증식, 분화 및 세포사멸을 포함한 필수 세포 행동과 밀접하게 연결되어 있습니다. 이 프로토콜은 MechProfiler라는 오픈 소스 이미지 분석 소프트웨어를 제공하며, 이를 통해 각 마이크로포스트에 관련된 힘을 결정할 수 있습니다.

Micropost 배열에 쉽고 정확한 - 기계 프로파일

미세 구조의 오목한 다공성 폴리디메틸실록산 비드를 생성하는 데 사용되는 절차가 제시됩니다. 수성 단계 내에서의 전해질 농도 및 동일성의 영향이 특히 강조됩니다.

오목 다공성 PDMS 비즈의 마이크로 버블 제작

우리는 폴리디메틸실록산(PDMS)에서 두 마이크로채널 사이에 나노유체 접합을 생성하기 위해 실리카 콜로이드 나노입자의 간단한 자기 조립 기술을 제안합니다. 이 기술을 사용하여 기공 크기가 ~45nm인 나노다공성 비드 멤브레인을 마이크로채널 내부에 구축하고 DNA 샘플의 동전기 사전 농축에 적용했습니다.

콜로이드 입자의 자기 조립 과정을 통해 PDMS 미세 유체 칩의 하위 50 Nm의 나노 유체 접합 만들기

미세 유체 공학은 진단 테스트 개발을위한 강력한 도구입니다. 그러나 값비싼 장비와 재료, 힘든 제조 및 취급 기술이 필요한 경우가 많습니다. 여기에서는 저비용 및 사용이 간편한 환경에서 자성 마이크로 및 나노 입자 기반 면역 분석을위한 아크릴 미세 유체 장치의 제조 프로토콜에 대해 자세히 설명합니다.

컴퓨터 수치 제어 자기 나노 입자 기반 면역 분석에 대한 엇갈린 제한이있는 미세 유체 아크릴 장치의 마이크로 밀링

이 프로토콜은 자기 아르키메데스 효과(Magnetic Archimedes effect)를 기반으로 하는 잉크가 없고, 라벨이 없고, 기판에 독립적이며, 처리량이 많은 세포 패터닝 방법을 설명합니다.

마그네틱-아르키메데스 전략을 사용한 세포 패터닝

우리는 철 입자가 내장된 초연질 실리콘 엘라스토머(폴리디메틸실록산, PDMS)를 사용하여 제작된 역동적이고 가역적인 강성 분석 플랫폼을 제시합니다. 이 새로운 분석법은 접촉 유도를 포함하여 세포 표현형의 응급 시간 의존적 물리적 변화를 연구하는 데 적합합니다. 여기에서는 자기학을 사용하여 매트릭스 보강에 대한 신생아 쥐의 심근세포 정렬을 측정합니다.

심근세포 정렬의 변화를 주도하기 위한 마이크로 패턴화된 자기 유변학적 엘라스토머

이 글에서는 점성 폴리머 주조 중 공기 고립을 방지하는 공기 통풍구가 있는 마스터 몰드를 제작하는 독특한 방법을 소개하며, 날카로운 팁을 가진 젤라틴 마이크로니들 제작을 가능하게 합니다. 고점도 젤라틴의 주조량을 줄이면 얇은 벽의 속이 빈 피라미드 마이크로니들도 제작할 수 있었습니다.

마이크로니들용 마스터 몰드 제작, 마이크론 크기의 공기 통풍구 구멍

배우세요 자기력과 강철 구슬을 이용하여 오목한 마이크로웰을 제조하는 비용 효율적인 방법을. PDMS 기판에 수백 개의 마이크로웰을 형성하여 3차원 세포 배양 연구에 활용할 수 있습니다.

쌍된 구슬 및 Microwells 가변 오목한 형상의 성형에 대 한 자석 배열

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