Name: 반자동 경도 Microcomputed Tomography 기반 정량적 구조 분석 누드 쥐 척추 골절 골다공증 관련 모델의 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-09-28T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 12 s
Description: 배우세요 반자동 마이크로컴퓨티드 단층촬영법을 이용하여 누드 쥐 척추 골절 모델에서 골다공증 관련 골 재생을 정량적으로 분석하는 방법을. 이 기술은 면역 거부 없이 치료 효과를 평가할 수 있어 골 재생 의학 연구에 활용됩니다.

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연구에 대 한 재생 의학 (CIRM) (TR2 01780) 캘리포니아 연구소에서 교부 금에 의해 지원 되었다.

모든 동물 실험 승인 기관 동물 관리 및 사용 위원회 (IACUC) 삼목 시 나이 의료 센터 (프로토콜 # 3609)의 프로토콜에서 수행 했다. 마 취는 모든 이미징 및 수술 절차에 대 한 관리 되었다. 모든 동물 승인된 IACUC 프로토콜에 따라 보관 되어 있었다.
 참고:이 프로토콜의 실험 설계는 그림 1에 표시 됩니다. 그들의 난소를 수술로 제거 하 고 그들을 먹 여 0.01% 칼슘과 0.77% 인산으로 구성 된 LCD와 6 주 된 쥐를 구입. LCD의 4 개월의 기간 후에 네 번째 및 다섯 번째 요 추 척추 기관 (L4-L5) 중요 한 크기 척추 결함 드릴. 수술, 다음 주 1와 주 2, 4, 8, 및 12 결함 설립 후에 쥐를 이미지. 하루 1 스캔에 결함 여백, 표준 위치로 방향을 찾아서 관심 (목소리 야)의 원통형 볼륨을 정의 합니다. 자동으로 해당 주 1 스캔에 대해 정의 된 표준 위치에 각 쥐의 후속 µCT 검사 (즉, 2, 4, 8, 및 12 주)을 등록 합니다. 하루에 1 미리 목소리 야 등록된 검사에 적용. 볼륨 골밀도 및 명백한 조밀도 내가의 평가.
 1. 골다공증의 유도 <ol><li>0.01% 칼슘과 0.77% 인산으로 구성 된 LCD의 4 개월 6 주 오래 된 athymic ovariectomized 쥐 입었다.</li>
	<li>스위치 다시 정상적인 다이어트. 
	참고: 이러한 쥐 것 이다 라고도 &#34; 골다공증성 쥐 &#34;이.</li>
</ol> 2. 척추 결함 모델 참고: 타이밍은 동물 마다 40-50 분.
<ol><li>압력솥 모두 수술 전에 수술 도구.</li>
	<li>여러 수술의 경우 모든 수술 도구를 소독.
	<ol><li>도구를 세척 하 고 배치할 sonicator 욕조에 5 분 넣어 뜨거운 비드 소독 기 세트 20 미 허용에 대 한 250 ° c에서 5 분에 대 한 진정 도구에 대 한</li>
	</ol></li> <li>뽑기 마 취.
	<ol><li>장소 유도 실에서 골다공증성 쥐를 마 취 기계 중앙 청소 시스템에 첨부. 100% 산소에 5 %isoflurane 사용 하 여 마 취를 유발 하 고 2-3 %isoflurane 원뿔을 통해 유지. 눈에 마 취에서 건조를 방지 하기 위해 수 의사 연 고를 사용.</li>
		<li>는 발가락 꼬집어 자극 마 취의 적절 한 평면을 보장 하기 위해 적용 됩니다. 응답을 언급 하는 경우 프로시저 시작.</li>
	</ol></li> <li>마 취 쥐 지 recumbency 난방 패드 (37 ° C)에 놓고 자기 fixator 철회 시스템 ( 그림 2A)를 사용 하 여 팔 다리를 스트레칭. 
	참고:가 열 패드의 온도 저체온증, 예방에 대 한 중요 한 마 취 쥐의 체온을 조절할 수 없기 때문.</li>
	<li>쉐이브 전기 면도기를 사용 하 여 복 부 지역. 70% 에탄올 뒤 0.5% 요오드 기반 살 균과 액체 gluconate와 면봉.</li>
	<li>수술 절차를 시작 하기 전에 carprofen (5 mg/kg 체중 (BW), 피하 (SQ))와 쥐를 주입.</li>
	<li>살 균 메스를 사용 하 여 피부를 잘라. 칼 프로세스 아래 1 ㎝ 절 개를 시작 하 고 중간 선 (~ 5-8 cm) ( 그림 2B) 극복.</li>
	<li>수술가 위는 교육을 통해 aponeurosis의 절 개를 사용 하 여 복 부 구멍 ( 그림 2C)에 액세스 하는 알바.</li>
	<li>브래킷으로 ( 그림 2D)를 사용 하 여 복 부 구멍 노출.</li>
	<li>편향 복 부 대동맥과 왼쪽된 신장 ( 그림 2E) 노출 하는 쥐의 오른쪽에 내장. 그것을 폭로 하기 전에 허리 척추를 만져 탈수를 피하기 위해를 사용 하 여 메 마른 젖된 gauzes 멸 균 생리 식 염 수와 내부 장기를 포장.</li>
	<li>층에서 요 추 척추 기관 L4-5의 앞쪽 측면을 노출 하 고 주변 결합 조직 및 근육에서 그들을 격리 사용 thermocautery ( 그림 2F -G). 
	참고: Thermocautery는 해 부 동안 출혈 제어 하에 사용 해야 합니다.</li>
	<li>L4 척추에서 혈액과 잔여 조직을 제거 하는 멸 균 면봉 멸 균 식 염 수로 포화를 사용 합니다. 살 균 판형 드릴 가시 (지름 ~ 2 mm)를 사용 하 여 척추 체의 노출된 앞쪽 측면의 중앙에 5 m m-깊은 뼈 결함 드릴 (그림 2 H-나). 
	참고:만 복 부 피 질과 기본 배수 뼈; 드릴스루 최소한의 압력 등 피 질을 드릴을 하지 마십시오. 참고 골다공증 쥐의 척추는 매우 허약 하다. 면봉을 사용 하 여 결함을 청소 하 고 있는 경우, 출혈을 멈추게 하는 압력을 적용 하.</li>
	<li>쥐 ( 그림 2J) 당 2 결함의 총 만들 L5 척추 골에 반복 단계 2.11.</li>
	<li>복 강 내장 돌아갑니다.</li>
	<li>Vicryl 합성 흡수 성 수술 용 봉합을 사용 하 여 (3-0 vicryl 미색 27 &#34; SH 테이퍼) aponeurosis ( 그림 2 K) 봉합에 연속 패턴.</li>
	<li>간단한 중단된 패턴 ( 그림 2 L)에 4-0 monofilament 나일론 비 흡수 봉합 사를 사용 하 여 피부를 닫습니다.</li>
	<li>피부 봉합의 위에 그리고 피부의 완전 한 폐쇄 되도록 그들 사이 국 소 피부 접착제의 적용 100 µ L.</li>
	<li>따뜻한 (37 ℃) lactated 벨 쥐 주입 &#39; 저체온증과 탈수를 방지 하기 위해 s 솔루션 (1CC/100 g BW, SQ).</li>
	<li>필요에 따라 수술 및 수술 후 통증에 대 한 모든 8-12 h 이전 buprenorphine (0.5 mg/kg BW, SQ)와 쥐를 주입.</li>
	<li>두지 마십시오 동물 무인 sternal recumbency를 유지 하기 위해 충분 한 의식 회복 될 때까지. 또한, 그것은 완전히 복구 될 때까지 다른 동물의 회사를 수술 겪은 동물을 반환 하지 않습니다.</li>
	<li>동물 난방 패드에 회복 후 돌아가기 그것의 감 금. 
	참고: 집 쥐 개별적으로 (즉, 별도 새 장에)는 봉합의 쥐 쥐 절단을 방지 하 여 상처.</li>
	<li>차 우 쥐 음식에 도달 수 있도록 몇 일 수술에 대 한 새 장 바닥에 페 트리 접시에 물에 담가 놓습니다.</li>
	<li>Carprofen (5 mg/kg BW, SQ) 통증 모든 24 h에 대 한 수술 24 시간 후 필요에 따라 관리.</li>
	<li>동물 2% 미만 동안 피부 봉합을 제거 isoflurane 마 취 10-14 일 후 작업.</li>
</ol> 3. MicroCT 스캔 참고: 타이밍은 동물 마다 30 ~ 40 분.
<ol><li>수술 다음 날에는 마 취 기계 중앙 청소 시스템에 연결 된 유도 실에서 골다공증성 쥐 장소. 100% 산소에 5 %isoflurane 사용 하 여 마 취를 유도 하 고 2-3 %isoflurane 원뿔을 통해 유지.</li>
	<li>쥐 vivo에서 µCT 스캐너를 사용 하 여 검색 합니다. 뼈 재생의 경도 분석에 대 한 검사를 반복. 
	참고: 모든 동물 (즉, x-선 에너지, 매체, 강도, 복 셀 크기와 이미지 해상도 스캔)에 동일한 설정을 사용 하 여 검색을 확인 한 simila에r 방향입니다. 예: x 선 에너지, 55 kVP; 전류, 145 µ A; 복 셀 크기, 35 µ m; 증가, 115 µ m; 그리고 통합 시간, 200 ms; 와 함께 PBS에서 샘플. Bouxtein 외. 참조 추가 설명 및 설치류 µCT 뼈 미세의 평가 대 한 검색에 관련 된 고려 사항에 대 한 34. 이상적으로, 가능한 높은 스캔 해상도 사용 모든 검사; 그러나, 높은 해상도 스캔 긴 수집 시간을 요구, 큰 데이터 세트를 생성 고 동물 더 이온화 방사선을 노출. 후자는 원치 않는 효과 줄된 골절 치유를 포함 하 여 발생할 수 있습니다. 따라서, 추가적인 데이터 및 검색 시간 사이의 거래와 신중 하 게 고려해 야.</li>
</ol> 4. 척추 분리 참고: 타이밍은 샘플 당 20-30 분.
<ol><li> 그림 3A에서 같이 관심의 척추를 등고선-I. 인접 척추에 속하는 부분을 제외 하는 동안 척추의 모든 부분을 포함 하도록 확인 하십시오.
	<ol><li>클릭 &#34; µCT 평가 프로그램 &#34; 하 고 메뉴에서 샘플을 선택 합니다.</li>
		<li>마우스를 사용 하 여 각 슬라이스에 컨투어.</li>
		<li>사용 된 &#34; Z &#34; 다음 슬라이스로 이동 바.</li>
	</ol></li> <li>Contoured 척추를 별도 파일로 저장 ( 그림 3J -K)를 클릭 하 여 &#34; 파일 &#34; &#8594; &#34; 저장 GOBJ &#34; 조각 2.</li></ol>
 5. 경도 양적 평가 대 한 정의 목소리 야의 참고: 다음 단계 (참조 척추) 수술 후 1 일에서 또는 후속 시간 포인트 (스캔 인지에 따라 달라 집니다 척추를 대상).
<ol><li>참조 척추. 
	참고: 타이밍 샘플 당 20-30 분입니다.
	<ol><li>Z-회전, 결함의 센터에서 XY 슬라이스를 사용 하 여 여백의 각도 측정 ( 그림 4A -B).
		<ol><li>Z 평면에는 척추 결함이 대부분 명확 하 고 화면 캡처는 척추 골의 영역으로 이동.</li>
			<li>프레 젠 테이 션 소프트웨어에서 결함에 맞는 사각형 모양의 개체를 준비.</li>
			<li>그런 결함 얼굴 위쪽 척추의 이미지를 회전 및 결함 여백은 사각형의 양쪽에 병렬.</li>
			<li>회전의 각도 측정 (이미지를 마우스 오른쪽 단추로 클릭 &#8594; &#34; 형식 그림 &#34; &#8594; &#34; 크기 &#34;).</li>
			<li>측정된 각도 사용 하 여 ( 그림 4C) 척추를 회전.
			<ol><li>새로운 DECterm 창을 열고 (&#34; 세션 관리자 &#34; &#8594; &#34; 응용 프로그램 &#34; &#8594; &#34; DECterm &#34;).</li>
				<li>실행 &#34; ipl &#34;:</li>
				<li>Ipl &#62; turn3d</li>
				<li>-입력 [in] &#62;</li>
				<li>-출력 [out] &#62;</li>
				<li>-turnaxis_angles [0.000 90.000 90.000] &#62; 90 90 0</li>
				<li>-turnangle [0.000] &#62; 측정된 각도</li>
				<li>-img_interpol_option [1] &#62;</li></ol>
			</li></ol></li> <li>X-회전, 결함의 센터에서 YZ-슬라이스를 사용 하 여 여백의 각도 측정 ( 그림 4D -E). 측정된 각도 사용 하 여 ( 그림 4 층) 척추를 회전.
		<ol><li>클릭 &#34; YZ &#34;에 &#34; uCT 평가 프로그램 &#34; 및 반복 단계 5.1.1.1-5.1.1.5.2.</li>
			<li>Ipl &#62; isq</li>
			<li>-[에] aim_name &#62;</li>
			<li>-isq_filename [default_file_name] &#62; 삽입 ISQ 파일 디렉터리 (예: &#34; DK0: [MICROCT. 데이터입니다. GAZIT입니다. MAXIM.80.DAY1]Z2102970입니다. ISQ &#34;)</li> <li>-pos [0 0 0] &#62;</li> <li>-희미 한 [-1-1-1] &#62;</li></ol></li> <li>ZX 평면 XY-평면을 변경 하 여 회전 된 척추를 플립.
		<ol><li>새로운 DECterm 창을 열고 (&#34; 세션 관리자 &#34; &#8594; &#34; 응용 프로그램 &#34; &#8594; &#34; DECterm &#34;).</li>
			<li>실행 &#34; ipl &#34;:</li>
			<li>Ipl &#62; 플립</li>
			<li>-입력 [in] &#62; 밖으로</li>
			<li>-입력 [out] &#62; out2</li>
			<li>-new_xydir [yz] &#62; zx</li></ol>
		</li> <li>정의 목소리 야.
		<ol><li>무승부는 원형에서 원형 윤곽 아이콘을 선택 하 여 결함의 센터에서 분할 영역을 사용 하 여 결함의 컨투어 &#34; uCT 평가 프로그램 &#34; ( 그림 6A). 등고선을 결함 ( 그림 6B)에서 모든 조각에 그것을 붙여 복사. 
			참고: 모든 결함은 동일한 절차를 사용 하 여 생성 된, 이후 분석 조각 하 고, 그 후, 모든 샘플에 대 한 전체 볼륨 (TV)의 동일한 수.</li>
		</ol></li></ol></li> <li>대상 척추. 
	참고: 타이밍 샘플 당 10-20 분입니다.
	대상 및 이미지 분석 소프트웨어의 메인 윈도우를 참조 척추의 <ol><li>부하는 DICOM 파일. 
		참고: 회색 음영 값 변화를 피하기 위해, 같은 정의 출력 데이터 형식 로드 메뉴에 원래 DICOM 파일로.</li>
		<li>레지스터 참조에 척추입니다.
		<ol><li>발사는 &#34; 3 차원 복 등록 &#34; 모듈 입력으로 참조 척추는 &#34; 베이스 볼륨 &#34; 고로 대상 척추는 &#34; 일치 볼륨. &#34; 클릭 &#34; 등록 &#34; 척추 등록 ( 그림 5).</li>
		</ol></li> <li>는 등록 된 파일을 사용 하 여 동일한 데이터 형식 및 µCT 환경에 가져올 저장.</li>
		<li>는 목소리 야 적용 됩니다.
		클릭 하 여 등록된 대상 척추를 참조 척추에 대해 정의 된 <ol><li>적용은 목소리 야 &#34; uCT 평가 프로그램 &#34; &#8594; &#34; 파일 &#34; &#8594; &#34; 부하 GOBJ &#34; 이전에 만든 GOBJ를 선택 하 고. 목소리 야와 결함 동심 되는지 확인 하십시오.</li>
		</ol></li></ol></li></ol> 6. MicroCT 분석 참고: 타이밍은 샘플 당 10-20 분.
<ol><li>보내기 µCT 평가 프로그램 ( 그림 6)를 사용 하 여 평가 대 한 목소리 야. 
	참고: 모든 내가 분석할 때 동일한 매개 변수를 사용 하 여 있는지 확인 합니다. 임계값 생략 하는 최소한의 손실 뼈의 배경 잡음을 충분히 높게 설정 되어 있는지 확인 합니다. 방사선 불 투과성 소재를 사용 하는 경우 다양 한 전략 뼈 형성 분석에 사용 될 수 있습니다. 소재 및 뼈 조직 밀도 차이 경우는 소재 35 , 36 개 세그먼트 수 있습니다. 그렇지 않으면, 조사 실험 그룹 사이 뼈 형성에 차이 평가 질적 수.</li>
</ol> 7. 안락사 <ol><li>PPlace 골다공증성 쥐 유도 실에서 마 취 기계에 연결. 100% 산소를 사용 하 여 5 %isoflurane 마 취 유도.</li>
	<li>코 콘을 통해 마 취를 유지 하 고 안락사를 수행 incising 양자 매 37 생산 하 흉으로.</li>
</ol>

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<li>Phillips, F. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+BMP-7+%28OP-1%29+enhancement+of+osteoporotic+vertebral+bodies+in+an+ovine+model%5BTitle%5D)+AND+%22Spine+J%22%5BJournal%5D)">In vivo BMP-7 (OP-1) enhancement of osteoporotic vertebral bodies in an ovine model.</a> Spine J. 6 (5), 500-506 (2006).</li>
<li>Kobayashi, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+evaluation+of+a+calcium+phosphate+bone+cement+with+carboxymethyl+cellulose+in+a+vertebral+defect+model%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biomed+Mater+Res+A%22%5BJournal%5D)">Long-term evaluation of a calcium phosphate bone cement with carboxymethyl cellulose in a vertebral defect model.</a> J Biomed Mater Res A. 88 (4), 880-888 (2009).</li>
<li>Turner, T. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vertebroplasty+comparing+injectable+calcium+phosphate+cement+compared+with+polymethylmethacrylate+in+a+unique+canine+vertebral+body+large+defect+model%5BTitle%5D)+AND+%22Spine+J%22%5BJournal%5D)">Vertebroplasty comparing injectable calcium phosphate cement compared with polymethylmethacrylate in a unique canine vertebral body large defect model.</a> Spine J. 8 (3), 482-487 (2008).</li>
<li>Zhu, X. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+sheep+vertebral+bone+defect+model+for+injectable+bioactive+vertebral+augmentation+materials%5BTitle%5D)+AND+%22J+Mater+Sci+Mater+Med%22%5BJournal%5D)">A novel sheep vertebral bone defect model for injectable bioactive vertebral augmentation materials.</a> J Mater Sci Mater Med. 22 (1), 159-164 (2011).</li>
<li>Vanecek, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+combination+of+mesenchymal+stem+cells+and+a+bone+scaffold+in+the+treatment+of+vertebral+body+defects%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+Spine+J%22%5BJournal%5D)">The combination of mesenchymal stem cells and a bone scaffold in the treatment of vertebral body defects.</a> Eur Spine J. 22 (12), 2777-2786 (2013).</li>
<li>Geusens, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-resolution+in+vivo+imaging+of+bone+and+joints%3A+a+window+to+microarchitecture%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Rheumatol%22%5BJournal%5D)">High-resolution in vivo imaging of bone and joints: a window to microarchitecture.</a> Nat Rev Rheumatol. 10 (5), 304-313 (2014).</li>
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<li>de Bakker, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((muCT-based%2C+in+vivo+dynamic+bone+histomorphometry+allows+3D+evaluation+of+the+early+responses+of+bone+resorption+and+formation+to+PTH+and+alendronate+combination+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Bone%22%5BJournal%5D)">muCT-based, in vivo dynamic bone histomorphometry allows 3D evaluation of the early responses of bone resorption and formation to PTH and alendronate combination therapy.</a> Bone. 73, 198-207 (2015).</li>
<li>Lan, S. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((3D+image+registration+is+critical+to+ensure+accurate+detection+of+longitudinal+changes+in+trabecular+bone+density%2C+microstructure%2C+and+stiffness+measurements+in+rat+tibiae+by+in+vivo+microcomputed+tomography+%28%CE%BCCT%29%5BTitle%5D)+AND+%22Bone%22%5BJournal%5D)">3D image registration is critical to ensure accurate detection of longitudinal changes in trabecular bone density, microstructure, and stiffness measurements in rat tibiae by in vivo microcomputed tomography (μCT).</a> Bone. 56 (1), 83-90 (2013).</li>
<li>Nishiyama, K. K., Campbell, G. M., Klinck, R. J., Boyd, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reproducibility+of+bone+micro-architecture+measurements+in+rodents+by+in+vivo+micro-computed+tomography+is+maximized+with+three-dimensional+image+registration%5BTitle%5D)+AND+%22Bone%22%5BJournal%5D)">Reproducibility of bone micro-architecture measurements in rodents by in vivo micro-computed tomography is maximized with three-dimensional image registration.</a> Bone. 46 (1), 155-161 (2010).</li>
<li>Sheyn, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PTH+Induces+Systemically+Administered+Mesenchymal+Stem+Cells+to+Migrate+to+and+Regenerate+Spine+Injuries%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Ther%22%5BJournal%5D)">PTH Induces Systemically Administered Mesenchymal Stem Cells to Migrate to and Regenerate Spine Injuries.</a> Mol Ther. 24 (2), 318-330 (2016).</li>
<li>Lelovas, P. P., Xanthos, T. T., Thoma, S. E., Lyritis, G. P., Dontas, I. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+laboratory+rat+as+an+animal+model+for+osteoporosis+research%5BTitle%5D)+AND+%22Comp+Med%22%5BJournal%5D)">The laboratory rat as an animal model for osteoporosis research.</a> Comp Med. 58 (5), 424-430 (2008).</li>
<li>Bouxsein, M. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Guidelines+for+assessment+of+bone+microstructure+in+rodents+using+micro-computed+tomography%5BTitle%5D)+AND+%22J+Bone+Miner+Res%22%5BJournal%5D)">Guidelines for assessment of bone microstructure in rodents using micro-computed tomography.</a> J Bone Miner Res. 25 (7), 1468-1486 (2010).</li>
<li>de Lange, G. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+histomorphometric+and+micro-computed+tomography+study+of+bone+regeneration+in+the+maxillary+sinus+comparing+biphasic+calcium+phosphate+and+deproteinized+cancellous+bovine+bone+in+a+human+split-mouth+model%5BTitle%5D)+AND+%22Oral+Surg+Oral+Med+Oral+Pathol+Oral+Radiol%22%5BJournal%5D)">A histomorphometric and micro-computed tomography study of bone regeneration in the maxillary sinus comparing biphasic calcium phosphate and deproteinized cancellous bovine bone in a human split-mouth model.</a> Oral Surg Oral Med Oral Pathol Oral Radiol. 117 (1), 8-22 (2014).</li>
<li>Ramalingam, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Guided+bone+regeneration+in+standardized+calvarial+defects+using+beta-tricalcium+phosphate+and+collagen+membrane%3A+a+real-time+in+vivo+micro-computed+tomographic+experiment+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Odontology%22%5BJournal%5D)">Guided bone regeneration in standardized calvarial defects using beta-tricalcium phosphate and collagen membrane: a real-time in vivo micro-computed tomographic experiment in rats.</a> Odontology. 104 (2), 199-210 (2016).</li>
<li>Leary, S., et al. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aLeary%2C+S+%22AVMA+guidelines+for+the+euthanasia+of+animals%3A+2013+edition%22">AVMA guidelines for the euthanasia of animals: 2013 edition</a>. , (2013).</li>
<li>Wang, M. L., Massie, J., Allen, R. T., Lee, Y. P., Kim, C. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Altered+bioreactivity+and+limited+osteoconductivity+of+calcium+sulfate-based+bone+cements+in+the+osteoporotic+rat+spine%5BTitle%5D)+AND+%22Spine+J%22%5BJournal%5D)">Altered bioreactivity and limited osteoconductivity of calcium sulfate-based bone cements in the osteoporotic rat spine.</a> Spine J. 8 (2), 340-350 (2008).</li>
<li>Liang, H., Li, X., Shimer, A. L., Balian, G., Shen, F. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+strategy+of+spine+defect+repair+with+a+degradable+bioactive+scaffold+preloaded+with+adipose-derived+stromal+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Spine+J%22%5BJournal%5D)">A novel strategy of spine defect repair with a degradable bioactive scaffold preloaded with adipose-derived stromal cells.</a> Spine J. 14 (3), 445-454 (2013).</li>
<li>Sheyn, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PTH+induces+systemically+administered+mesenchymal+stem+cells+to+migrate+to+and+regenerate+spine+injuries%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Ther%22%5BJournal%5D)">PTH induces systemically administered mesenchymal stem cells to migrate to and regenerate spine injuries.</a> Mol Ther. 24 (2), 318-330 (2015).</li>
<li>Matthieu, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+rat+model+for+translational+research+in+bone+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Eng+Part+C+Methods%22%5BJournal%5D)">A new rat model for translational research in bone regeneration.</a> Tissue Eng Part C Methods. , (2015).</li>
<li>Turner, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+osteoporosis--necessity+and+limitations%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+Cell+Mater%22%5BJournal%5D)">Animal models of osteoporosis--necessity and limitations.</a> Eur Cell Mater. 1, 66-81 (2001).</li>
</ol>

이 연구에 대 한 재생 의학 (CIRM) (TR2 01780) 캘리포니아 연구소에서 교부 금에 의해 지원 되었다.

골다공증은 척추 압축 골절은 척추와 척추 체의 붕괴에서 그 결과에 로드가 증가 의해 발생의 가장 널리 퍼진 원인. 그러나, 그것은 실질적으로 진정한 비슷한 척추 붕괴를 복제 하는 설치류에서 상해를 생성할 수입니다. 대신, 연구원은 OVCFs16,17,18,19,20,,2124 를 모방 하기 위해 척추 신체 중앙에 원통형 무효 만들 , 38 , 39. 결함 크기 측면에서 문학에 아니 일관성이 있기...

200 백만 이상의 사람들이 전세계 골다공증1에서 고통. 기본 병 적인 감소 뼈 미네랄 밀도 (BMD)에 하 고 변경 된 뼈 마이크로아키텍처 뼈 취약성 및, 따라서, 골절2의 상대 위험 증가. 골다공증은 너무 유행 하 고는 WHO가 정의 그것은 중요 한 공중 위생 관심사는 건강에 해로운. 또한, 세계의 인구는 예상 대로 나이에, 골다공증 되 더 일반적으로 예상 된다.
골다공증성 척추 압축 골절은 가장 일반적인 취약성 골절, 미국에서 1 년 이상 750000 추정. 그들은 많은 중요 한 병 적 상태와 관련 된 9 배 높은 사망률 평가3입니다. 임상 시험에서 현재 사용할 수 외과 개입, vertebroplasty, kyphoplasty, 등 가짜 치료4,5,이 환자에 게 통증 관리만 사용할 수를 떠나 보다 더 더 효과적인 것을 발견 했다. 현재 OVCF 치료 제한 때문에, 장애6,,78을 복제할 수는 동물 모델을 개발 하는 것이 필수적입니다. 현재 치료 방법의 조사와 임상 연습으로 번역할 것 이다 새로운 치료법의 개발에 수 같은 동물 모델을 용이 하 게. 골다공증 유발 되 고 ovariectomy1,,910,11, 와 함께에서 낮은 칼슘 식단 (LCD)의 관리를 통해 모델 동물에서 입은 12 , 13 , 14 , 15. 추가 모델 OVCFs와 관련 된 뼈 손실, 척추 뼈 결함 골다공증성 immunocompetent 쥐 16,17,,1819에 설치 되었다 20,,2122,,2324. 이 작품에서 모델 골다공증 immunocompromised 쥐의 척추 결함 모델 제공 됩니다. 이 새로운 모델은 다양 한 소스와 OVCFs 같은 어려운 골절의 복구에 대 한 종에서 파생 된 줄기 세포 관련 세포 기반 요법 평가 하 사용할 수 있습니다.
뼈 이미징 골절 및 뼈 질병의 평가의 중요 한 부분 이다. 고급 이미징 방법 뼈 구조 변경 및 재생 전략25의 정확한 평가 위해 개발 되었다. 그 중 µCT 이미징 고해상도 3D 이미지를 제공 하는 비-침략 적, 쉬운--사용, 그리고 저렴 한 방법으로 떠오르고 있다. 고해상도 3D 마이크로아키텍처26 다음 양적 분석 수 있는 뼈 제공 µCT 이미징 골다공증 환자 평가에 다른 modalities에 몇몇 이점이 있다. 후자는 다음 사용할 수 있습니다 제안 된 치료의 치료 효과 비교. 실제로, µCT 이미징 vivo에서 척추 결함 재생1,,1627모니터링에 대 한 황금 표준입니다. 그러나, 몇 가지 간행물28,29,,3031 고용 사용자 종속성, 보간 편견, 및 µCT의 정밀도 오류를 최소화 하기 위해 자동화 등록 도구 이미징 기반 분석입니다. 최근에, 우리는이 프로토콜32 에 설명 된 대로, 표준화 된 뼈에서 뼈 재생의 분석을 개선 하기 위해 등록 절차를 사용 하는 첫번째 했다.
여기 설명 하는 방법을 OVCFs에 대 한 새로운 세포 치료의 효과 연구 하는 데 사용 될 수, 방해 받지 않는 호스트에 의해 T 세포 응답을 xenogeneic 또는 수용자 세포를 거부할 수 있습니다. 골다공증은 젊은 쥐 ovariectomy (OVX) 통해과 LCD의 4 개월에에서 유도 된다. OVX 쥐, LCD와 결합의 젊은 나이 있었습니다, 돌이킬 수 없는 뼈 손실을 선도 하 여 폐 경 후 골다공증을 흉내 낸 낮은 피크 뼈 질량에 도달. 이 사실은, LCD 중 리 모델링을 모델링 하는 뼈에서 쥐 전환 나이의 3 달 주변에 상 추33, 위에 골다공증을 유지의 가능성을 증가에 의해 분할 설명 될 수 있다 시간입니다. 젊은 동물을 사용 하 여 게이 모델 보다 비용 효과적인, 그들은 적은 비용으로. 그럼에도 불구 하 고, 그것은 본질적으로 하지 노화 동물의 생물 학적 변화에 대 한 회계에 의해 제한 됩니다.

<table><tbody><tr><td>Isoflurane</td><td>MWI Animal Health, Pasadena, CA</td><td>501017</td><td></td></tr><tr><td>BetadineSolution</td><td>MWI Animal Health, Pasadena, CA</td><td>4677</td><td></td></tr><tr><td>클로르헥시딘 글루코네이트 2% 스크럽</td><td>MWI Animal Health, Pasadena, CA</td><td>510083</td><td></td></tr><tr><td>이소프로필 알코올 70%-quart</td><td>MWI Animal Health, Pasadena, CA</td><td>501044</td><td></td></tr><tr><td>Carprofen</td><td>MWI Animal Health, Pasadena, CA</td><td>26357</td><td></td></tr><tr><td>부프레노르핀 0.3 mg/mL</td><td>MWI Animal Health, Pasadena, CA</td><td>56163</td><td></td></tr><tr><td>Ovariectomized Athymic nude rats</td><td>Harlan Laboratories, Indianapolis, IN</td><td>Hsd:RH-Foxn1 rnu</td><td></td></tr><tr><td>저칼슘 식품</td><td>Newco Distributors, Inc., CA</td><td>1814948 (5AV8 AIN-93M w/저칼슘)</td><td></td></tr><tr><td>인산염 완충 식염수</td><td>Life Technologies Corporation</td><td></td><td></td>14190250</tr><tr><td>Dermabond</td><td>J AND J ETHICON</td><td>DHVM12</td><td></td></tr><tr><td>마취기</td><td>Patterson Scientific</td><td>TEC 3EX</td><td></td></tr><tr><td>슬라이드 탑 인덕션 챔버</td><td>Patterson Scientific</td><td>78917833</td><td></td></tr><tr><td>ProStation 가열식 워크스테이션</td><td>Patterson Scientific</td><td>78914731</td><td></td></tr><tr><td>외과용 드레이프</td><td>HALYARD HEALTH INC</td><td>89101</td><td></td></tr><tr><td>자기 고정 장치 수축 시스템</td><td>Fine Science Tools, Inc., CA</td><td>18200-50</td><td></td></tr><tr><td>해부 가위, 10cm, 곡선, SS</td><td>World Precision Instruments, FL</td><td>14394</td><td></td></tr><tr><td>홍채 가위, 11.5cm, 45 &deg; 앵글, 톱니모양, 샤프/샤프</td><td>World Precision Instruments, FL</td><td>503225</td><td></td></tr><tr><td>집게, no. 5</td><td>World Precision Instruments, FL</td><td>555048FT</td><td></td></tr><tr><td>마이크로 모기 지혈 집게</td><td>World Precision Instruments, FL</td><td>503360</td><td></td></tr><tr><td>멸균 면 거즈</td><td>Medtronic, MINNEAPOLIS, MN</td><td>9024</td><td></td></tr><tr><td>흡수 창 - 장착/멸균</td><td>파인 사이언스 도구, CA</td><td>18105-01</td><td></td></tr><tr><td>주사기, 1 mL</td><td>TERUMO TERUMO MED</td><td>SS-01T</td><td></td></tr><tr><td>바늘, 25 게이지</td><td>BD MED SYS 주입 시스템 305127</td><td></td><td></td></tr><tr><td>층류 후드</td><td>Baker</td><td>SterilGARD e3-Class II Type II Biosafety Cabinet</td><td></td></tr><tr><td>Thermal Cautery Unit</td><td>World Precision Instruments, FL</td><td>501292</td><td></td></tr><tr><td>Micro-Drill OmniDrill115/230V</td><td>World Precision Instruments, FL</td><td>503598</td><td></td></tr><tr><td>마이크로 드릴용 트레핀, 직경 2mm</td><td>정밀 과학 도구, CA</td><td>18004-20</td><td></td></tr><tr><td>3-0 Vicryl 염색되지 않은 27" SH 테이퍼</td><td>J AND J ETHICON</td><td>1663G</td><td></td></tr><tr><td>4-0 에틸론 블랙 18" PC3 기존 절단</td><td>J AND J ETHICON</td><td>1954G</td><td></td></tr><tr><td>Conebeam in vivo microCT (vivaCT 40)</td><td>Scanco Medical</td><td>vivaCT 40</td><td></td></tr><tr><td>SCANCO Medical microCT 시스템 소프트웨어 제품군</td><td>Scanco Medical</td><td>vivaCT 40</td><td></td></tr><tr><td>Analyze software</td><td>Biomedical Imaging, Mayo Clinic, Rochester, MN</td><td>Analyze 12</td><td>이미지 분석 소프트웨어</td></tr><tr><td>Veterenery Eye 연고</td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

반자동 경도 microcomputed tomography 기반 정량적 구조 분석 누드 쥐 척추 골절 골다공증 관련 모델의

Semiautomated Longitudinal Microcomputed Tomography-based Quantitative Structural Analysis of a Nude Rat Osteoporosis-related Vertebral Fracture Model

골다공증 관련 척추 압축 골절 (OVCFs)는 세계 인구 나가로 보급 증가 함께 일반적이 고 임상 unmet 필요. 동물 OVCF 모델 변환 조직 엔지니어링 전략의 전 임상 개발에 필수적입니다. 다양 한 모델은 현재 존재 하는 동안 단일 누드 쥐에서 여러 높은 재현성 척추 결함을 유도 하는 최적화 된 방법을이 프로토콜에 설명 합니다. 소설 경도 반자동된 microcomputed 단층 촬영 (µCT)-척추 결함의 정량적 구조 분석을 기반으로 또한 선발. 간단히, 쥐 여러 시간 포인트 수술에 몇 군데 있었다. 1 일 검사 표준 위치로 방향도 고 관심의 표준 볼륨 정의 되었다. 각 쥐의 후속 µCT 스캔 했다 동일한 볼륨의 다음 새로운 뼈 형성에 대 한 평가 분석 그래서 하루 1 스캔을 자동으로 등록 됩니다. 이 다재 다능 한 접근 어디 경도 영상 기반 분석 정확한 3 차원 반자동된 정렬에서 혜택을 수 있는 다른 모델의 다양 한 적응 될 수 있다. 함께 찍은,이 프로토콜에서는 골다공증 및 뼈 연구를 위한 쉽게 정량 하 고 쉽게 재현 가능한 시스템을 설명 합니다. 제안 된 프로토콜은 4 개월 누드 ovariectomized 쥐 및 생성, 이미지, 조직 크기와 장비에 따라 두 개의 척추 결함 분석을 2.7 그리고 4 h 사이 골다공증을 유발 합니다.

이 프로토콜을 사용 하 여, 하나 이미지 수와 n의 재생성을 계량 다른 시간 지점에서 8 모델된 골다공증성 척추 결함을 =. 등록 절차에 의해 얻은 해부학 경기 모든 시간 지점에서 동일한 목소리 야의 분석에 대 한 수 있습니다. 이 원래 결함의 여백은 더 이상 인식할 수 있는 경우에 정확한 경도 3D histomorphometric 분석 결과. 우리는 뼈 재생 (그림 7)의 경도 평가 대 한 예를 들어 5 시간 포인트 (1 일, 2 주, 4 주, 주 8, 및 12 주)을 사용. 재생 ( 그림 7A에서 그림)로 3D 영상과 2D 횡단면의 질적 평가 뼈 수량 (BVD) 및 품질 (광고) (그림 7B)의 양적 비교 하 여 평가할 수 있습니다. 새로 형성된 된 뼈에 대 한 다음과 같은 형태학 인덱스를 확인할 수 있습니다...

이 프로토콜의 목표 경도 평가 vivo에 는 반자동된 microcomputed 단층 기반 정량적 구조 분석을 사용 하 여 될 수 있는 누드 쥐 척추 압축 골다공증 관련 골절 모델을 생성 하는 것입니다.

반자동 경도 Microcomputed Tomography 기반 정량적 구조 분석 누드 쥐 척추 골절 골다공증 관련 모델의

Osteoporosis-related vertebral compression fractures (OVCFs) are a common and clinically unmet need with increasing prevalence as the world population ...

본 수술 모델 및 이미지 분석 방법의 전반적인 목표는 전임상 골다공증 관련 척추 압박 골절 모델에서 처치법의 영향을 관찰하는 것입니다. 이 방법은 골다공증 관련 척추 압박 골절에 효과적인 치료법은 무엇인지, 그리고 그러한 치료가 골 재생에 어떻게 도움을 줄 수 있는지와 같은 글리아 재생 의학 분야의 핵심 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점는 누드 랫(nude rats)을 사용하므로 면역 거부 반응에 대한 우려 없이 새로운 치료법을 체내(in vivo)에서 테스트할 수 있다는 점입니다.또한, 여기서 제시하는 골 재생 방법은 반자동화되어 있어 이전에 발표된 방법보다 더 정확하며 사용자 의존성이 낮습니다. 이 절차는 저희 연구실의 연구원인 Wafa Tawackoli 박사가 시연하겠습니다. 먼저 100% oxygen 내 5% isoflurane을 사용하여 골다공증 쥐에게 마취를 유도한 다음, 유지를 위해 2~3% isoflurane의 노즈콘으로 옮깁니다.전기 면도기를 사용하여 복부 부위를 면도합니다. 0.5% chlorhexidine gluconate가 포함된 요오드계 소독제로 닦아낸 후 70% ethanol로 소독합니다. 마취 중 안구 건조를 방지하기 위해 눈에 동물용 안연고를 도포합니다.적절한 마취 수준이 유지되고 있는지 확인하기 위해 발가락 꼬집기 자극을 줍니다. 반응이 없으면 절차를 시작하십시오. 마취된 쥐를 37 °C로 설정된 가열 패드 위에 배측 와위로 놓고, 자기 고정 견인 시스템을 사용하여 사지를 펴줍니다.수술 절차를 시작하기 전, 쥐의 피하에 carprofen을 주사합니다. 검상돌기 1cm 아래에서 시작하여 정중선을 따라 피부를 5~8cm 절개한 후, 수술용 가위를 사용하여 linea alba를 통해 건막을 절개하여 복강에 접근합니다. 리트랙터를 사용하여 복강을 노출시킵니다.쥐의 장을 오른쪽으로 밀어 복부 대동맥과 왼쪽 신장을 노출시킵니다. 탈수를 방지하기 위해 멸균된 젖은 거즈로 내부 장기를 감쌉니다. 대동맥을 노출시키기 위해 필요한 경우 추가 리트랙터를 사용하십시오.요추를 촉진한 다음 노출시킵니다. 전기소작기를 사용하여 요추 4번에서 5번 척추체의 전면을 노출시키고 주변 결합 조직 및 근육으로부터 분리합니다. 면봉을 사용하여 4번 요추에서 혈액과 잔류 조직을 제거합니다.다음으로 멸균된 2 cm 직경의 드릴 비트를 사용하여 노출된 척추체 전면 중앙에 5 mm 깊이의 골 결손 부위를 뚫습니다. 복측 피질과 그 아래의 해면골만 뚫을 수 있도록 최소한의 압력을 가합니다. 배측 피질까지 뚫지 않도록 주의하십시오.그런 다음 동일한 방식으로 L5 척추뼈를 천공하여 쥐 한 마리당 두 개의 결손 부위를 만듭니다. 천공이 완료되면 장을 복강으로 다시 넣고 견인기를 제거합니다. 다음으로 vicryl 합성 흡수성 외과용 봉합사를 사용하여 근막을 연속 봉합법으로 봉합합니다.4-0 단사 나일론 비흡수성 봉합사를 사용하여 단순 단속 봉합법으로 피부를 봉합합니다. 그런 다음 피부 봉합사 위와 사이에 국소 피부 접착제 100 µL를 도포하여 피부가 완전히 폐쇄되었는지 확인합니다. 저체온증과 탈수를 방지하기 위해 37 °C의 젖산 링거액을, 수술 후 통증 완화를 위해 부프레노르핀을 쥐에게 주입한 후, 가열 패드 위에서 동물이 마취로부터 회복되도록 합니다.수술 다음 날, 이전과 동일하게 isoflurane으로 마취를 유도합니다. in vivo micro-CT 스캐너를 사용하여 쥐를 스캔합니다. 스캔 및 마취 회복 후, 쥐를 홈 케이지로 돌려보냅니다.분석을 위해 척추뼈 데이터를 분리하려면 micro-CT 평가 프로그램을 클릭하고 메뉴에서 샘플을 선택하십시오. 그런 다음 마우스를 사용하여 슬라이스 상의 개별 척추뼈의 윤곽을 그리십시오. Z바를 사용하여 다음 슬라이스로 이동하고 동일한 방식으로 개별 척추뼈의 윤곽을 그리십시오.파일, save GOBJ를 클릭하여 몇 개의 슬라이스마다 윤곽이 그려진 척추뼈를 별도의 파일로 저장하십시오. 그 다음 기준 척추뼈를 설정한 후, 이를 micro-CT 환경으로 가져오십시오. micro-CT 평가 프로그램, 파일, load GOBJ를 클릭하고 이전에 생성한 GOBJ를 선택하여 기준 척추뼈에 정의된 VOI를 등록된 대상 척추뼈에 적용하십시오.마지막으로 micro-CT 평가 프로그램을 사용하여 평가를 위해 VOI를 전송합니다. 이 정면 3D 이미지는 결손 생성 하루 후의 대표적인 척추 결손 이미지를 보여줍니다. 공극 내의 골 형성은 빨간색으로 표시되어 있습니다.이것은 동일 부위의 시상면 2D 이미지이며, 마지막으로 축상면 2D 이미지입니다. 여기서 보는 바와 같이 골 형성은 시간이 경과함에 따라 일어나며, 종단적 영상 촬영을 통해 검출됩니다. 골 부피 밀도와 겉보기 밀도를 계산하였으며, 다중 비교를 위한 Bonferroni 교정을 적용한 반복 측정 이원 분산 분석(repeated measures two-way ANOVA)을 사용하여 비교 분석하였습니다.여기서 볼 수 있듯이, 척추 결손 생성 2주 후부터 골 부피 밀도와 겉보기 밀도가 유의하게 증가합니다. 이 절차 이후에는 어떤 세포가 존재하는지, 결손 부위에서 어떤 단백질이 발현되는지와 같은 추가적인 질문에 답하기 위해 조직학 및 면역조직화학 같은 다른 방법들을 수행할 수 있습니다. 이 영상을 시청하고 나면, 누드 랫(nude rats)에서 다중 척추 결손을 생성하는 방법과 이러한 결손 부위에서 시간에 따른 골 재생을 분석하는 방법에 대해 충분히 이해하게 될 것입니다.

semiautomated-longitudinal-microcomputed-tomography-based

Research

연구

JoVE Journal

Bioengineering

생명공학

성인 마우스의 대퇴골과 tibiae의 뼈 손실의 길이 시험은 순차적 낮은 선량 X - 선 검사를 사용하여 척수 상해 다음을 수행했다. 대퇴골의 골 손실은 40 일 이후 부상까지 발견되지 동안 경골 뼈 손실은 연구를 통해 발견되었다.

소설을 사용하여 척수 상해 후에 마우스 뒷다리 뼈 손실의 세로 평가, 생체내에 방법론

이 종이 마이크로 단층 (µCT) 스캐너 vivo에서 의 사용자 anesthetize, 올바르게 위치 하 고 경골의 고해상도 이미징 동안 최소한의 운동에 대 한 쥐의 뒷 다리를 제 지 하는 방법을 지시 합니다. 결과 뼈 마이크로-아키텍처를 정확 하 게 계량을 처리할 수 있는 높은 품질의 이미지.

적절 한 위치와 뼈 마이크로 아키텍처를 사용 하 여 생체 내에서 마이크로-단층의 집중된 고해상도 이미징 쥐 뒷 다리의 구속

우리는 세그먼트와 배수 뼈 ImageJ 플러그인을 사용 하 여 뼈의 바깥 경계에 따라 2D 및 3D 이미지에 대 한 측정에 대 한 워크플로 제시. 이 방법은 보다 효율적이 고 정확한 현재 수동 손 윤곽을 그리는 접근 보다 이며 레이어, 레이어 quantifications, 현재 상용 소프트웨어에서 사용할 수 있습니다 제공 합니다.

외부-경계 지원 세분화 및 정량화 Imagej 플러그인에 의해 배수 뼈의

미세 컴퓨터 단층 촬영(μCT)은 전임상 연구에서 뼈 구조를 평가하는 데 중요한 비파괴 이미징 도구이지만 뼈 치유 캘러스를 분석하기 위한 μCT 절차에 대한 합의가 부족합니다. 이 연구는 골절 치유를 모니터링할 수 있는 단계별 μCT 프로토콜을 제공합니다.

미세 컴퓨터 단층 촬영을 이용한 골절 치유 평가

이 프로토콜은 Hematoxylin-Eosin(HE) 염색과 마이크로 컴퓨터 단층 촬영(Micro-CT) 기술을 결합하여 골다공증 마우스 모델에서 뼈 미세구조의 정량적 평가를 위한 경제적이고 효율적인 방법을 제시합니다.

골다공증 마우스 모델에서의 섬유주 뼈 미세구조 평가

이 프로토콜은 탄성 치료 테이프를 사용하여 대퇴골두의 스테로이드 유발 골괴사증에 대한 간단하고 비용 효율적인 쥐 체중 부하 훈련 모델을 구축하는 것을 보여줍니다.

쥐에서 대퇴골두의 스테로이드 유발 골괴사증의 장력 없는 체중 지지 모델

이 프로토콜은 마이크로 컴퓨터 단층촬영을 사용하여 작은 동물의 골격근 및 내장 조직, 지방 조직 및 골격 조직을 포함한 제지방량을 비용 효율적으로 정량화할 수 있습니다. 이는 제지방 조직과 지방 조직을 구분하며, 이는 생물 의학 연구, 특히 작은 동물을 대상으로 한 중개 연구에 상당한 이점을 제공합니다.

Micro-Computed Tomography를 사용한 소형 동물의 비침습적 골격근 정량화

종방향 in vivo rat radial defect model에서 사용자 정의 관심 영역(ROI)을 분석하는 방법을 제시합니다. 이 방법을 사용하면 이전에는 μCT(microcomputed tomography) 스캔 시야, 표본 방향 및 골격의 기준선 존재 여부의 변화에 의해 제한되었던 서로 다른 골격 간의 비교 분석을 수행할 수 있습니다.

Critical-sized bone defects에서 사용자 정의 관심 영역에 대한 종방향 마이크로 컴퓨터 단층 촬영 이미지 분석

우리는 다양한 계층적 수준에서 뼈 재생을 평가하는 프로토콜을 제안합니다. 이 다중 모달 접근법은 다양한 길이 척도에서 구조 분석을 가능하게 하여 시료 준비의 문제를 효과적으로 해결합니다. 또한 생체 재료가 뼈 재생을 촉진하는 효과를 평가하는 신뢰할 수 있는 워크플로우를 제공합니다.

골 재생 및 스캐폴드 성능 평가를 위한 다중 모드 접근법

세포 구조를 정상화 접착제 micropatterns는 약물 효과의 검출에 감도를 증가 재현성을 개선하고 자동화된 이미지 수집 및 분석을 단순화하는 데 사용할 수 있습니다. 이러한 기술은 기존의 세포 배양 지원을 수행하고 결과적으로 과도한 휴대 전화의 변화로 고통 받고 약물 / siRNA 심사 assays를 도움이 될 것입니다.

Micropatterned 세포를 사용하여 약물의 영향 향상된 시각화 및 정량 분석

배우세요 반자동 마이크로컴퓨티드 단층촬영법을 이용하여 누드 쥐 척추 골절 모델에서 골다공증 관련 골 재생을 정량적으로 분석하는 방법을. 이 기술은 면역 거부 없이 치료 효과를 평가할 수 있어 골 재생 의학 연구에 활용됩니다.

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