높은 지방 다이어트를 먹이 쥐 경구 포도 당 내성 검사 (OGTT)과 인슐린 내성 검사 (ITT)를 사용 하 여 포도 당 대사 Vivo에서 의 연구

이러한 절차의 전반적인 목표는 마우스의 일반적인 대사 표현형을 특성화하고 생체 내에서 포도당 대사의 변화를 구체적으로 평가하는 것입니다. 이러한 방법은 신진대사 분야의 주요 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이는 in vivo에서 포도당 대사에 대한 유전적, 약리학적 또는 식이 요인의 영향을 조사하는 대표적이고 강력한 도구입니다.

이러한 기술의 주요 장점은 비교적 수행하기 쉽다는 것입니다. 구강 내당능 검사 전날, 쥐를 새 침구와 식수가 있는 케이지로 옮기되 음식 없이 밤새 단식한 후 테스트하기 전에 테스트합니다. 다음날, 증류수에 45% D-포도당을 희석하여 10ml의 20% 포도당 용액을 준비합니다.

그런 다음 각 마우스의 시점당 5마이크로리터의 나트륨 EDTA를 96웰 플레이트의 웰에 추가하여 혈장 수집을 위한 플레이트를 준비합니다. 실험하는 동안 이 접시를 얼음 위에 보관하십시오. 다음으로, 모든 마우스의 체중을 측정하고 마우스가 쉽게 구별될 수 있도록 영구 마커로 꼬리를 표시합니다.

기준선 샘플링을 위해 혈액을 수집하려면 날카로운 가위를 사용하여 꼬리 끝을 1-2mm 조심스럽게 잘라냅니다. 혈당 측정을 위해 새 혈액 샘플을 채취하기 전에 용혈이나 조직액 오염을 방지하기 위해 첫 번째 혈액 한 방울을 닦아내십시오. 혈당계로 기초 혈당 수치를 측정하기 위해 작은 혈액 샘플을 그립니다.

그런 다음 새 모세관 튜브를 사용하여 더 큰 혈액 샘플을 수집합니다. 피펫 팁을 모세관 끝 부분에 놓고 기포를 피하면서 수집된 혈액을 96웰 플레이트의 웰에 조심스럽게 밀어 넣어 피펫을 사용하여 모세관 튜브를 비웁니다. 증류수에 용해된 20%D-포도당을 준비합니다.

포도당 용액을 투여하려면 먼저 마우스의 목덜미를 단단히 잡아 쥐십시오. 마우스가 뒤틀리지 않도록 목 주위 피부에 충분한 탄력을 가하고 머리를 뒤로 기울이지 않도록 합니다. 마우스가 제대로 숨을 쉴 수 있는지 확인하십시오.

그런 다음 조심스럽게 입안을 통해 영양 공급 바늘을 식도로 향하게 합니다. 마우스가 바늘을 삼키도록 합니다. 바늘이 마우스의 하부 식도로 가라앉은 후 포도당 용액을 주입합니다.

첫 번째 배젼 직후 타이머를 시작하고 1분 간격으로 다른 모든 마우스에 포도당을 투여합니다. 포도당 투여가 시작되면 시간을 잘 관리하는 것이 매우 중요합니다. 15분 후 이전과 같이 혈당계로 혈당 수치를 측정합니다.

그런 다음 각 마우스에서 주사한 것과 동일한 순서로 30마이크로리터의 혈액 샘플을 추가로 채취합니다. 포도당 투여 후 30분, 45분, 60분, 90분, 120분, 150분, 180분 후에 채혈을 반복해야 합니다. 이 시간 동안 생쥐가 식수에 접근할 수 있는지 확인하십시오.

측정이 완료되면 쥐를 음식과 물이 있는 집 우리로 되돌립니다. 그런 다음 섭씨 4도에서 30분 동안 2, 500배 G에서 혈액 샘플을 원심분리합니다. 플라즈마 상층액을 96웰 플레이트의 빈 웰로 옮깁니다.

그런 다음 분석 할 때까지 플레이트를 섭씨 영하 20도에서 보관하십시오. 포도당 내성 검사 후 최소 1주일 후, 인슐린 주사 전에 최소 2시간 동안 생쥐를 금식시켜 생쥐가 식수를 이용할 수 있도록 합니다. 인슐린 원액을 0.9% 염화나트륨으로 1-1,000 회 희석하고, 생쥐가 저혈당증이 될 경우 투여 할 증류수에 용해 된 20 % D- 포도당을 준비합니다.

생쥐의 체중을 측정하고 꼬리를 표시한 후 체중 1kg당 0.75단위의 인슐린을 투여하는 데 필요한 인슐린의 양을 계산합니다. 그런 다음 날카로운 가위로 꼬리 끝을 자르고 이전과 같이 기초 혈당 수치를 측정합니다. 복강내로 인슐린을 주입하려면 목덜미 방법으로 마우스를 제지하고 마우스 머리를 약간 아래로 기울여 동물의 복부 쪽을 노출시킵니다.

채워진 주사기를 동물 복부의 오른쪽 하단 사분면에 30도 각도로 놓고 멸균 30 게이지 바늘의 베벨을 위로 향하게 하여 볼륨을 주입합니다. 첫 번째 마우스를 삽입한 직후 타이머를 시작합니다. 선택한 시점에서 혈당 수치를 측정합니다.

마지막 시점이 끝나면 쥐를 충분한 음식과 물로 준비된 집 우리에 다시 넣습니다. 경구 포도당 내성 검사는 12주 동안 고지방 식단을 먹인 마우스와 저지방 식단을 먹인 마우스의 대사 표현형을 비교하기 위해 사용되었습니다. 포도당 내성 LFD 마우스에서 포도당 투여 후 약 15분 후에 데시리터당 약 240mg의 최대 혈당 수치에 도달했으며 그 직후 적절한 포도당 제거를 나타내는 기준선 수준으로 감소했습니다.

대조적으로, HFD 마우스는 데시리터 포도당당 약 320mg으로 최고치를 기록했으며 포도당 처리가 거의 없는 것으로 나타났습니다. 두 그룹 간의 혈당 수치는 공복 상태에서 차이가 있기 때문에 기준선 포도당 위의 곡선 아래 면적을 계산하여 이전 결과를 검증했습니다. 또한, 혈중 인슐린 수치는 인슐린 ELISA를 사용하여 측정하였다.

HFD를 투여한 마우스는 대조군에 비해 공복 인슐린 수치가 높았을 뿐만 아니라 인슐린 반응이 증가하여 HFD가 유발한 보상성 고인슐린혈증을 나타냈습니다. HFD를 투여한 마우스의 인슐린 감수성을 측정하기 위해, 경구 포도당 내성 검사 1주일 후에 인슐린 내성 검사를 실시했습니다. LFD를 투여한 대조군과 비교했을 때, HFD를 투여한 마우스는 인슐린 투여 후 혈당 수치가 저하된 것으로 나타나 인슐린 저항성을 시사했습니다.

이 절차를 시도하는 동안 강력하고 재현 가능한 결과를 생성하기 위해 마우스의 스트레스 수준을 최소한으로 줄이는 것뿐만 아니라 적절한 시간 관리를 유지하는 것이 특히 중요합니다. 포도당 내성, 인슐린 수치 및 인슐린 민감성의 차이는 모두 방법의 백분율로 얻어지며 다음 복잡한 단계를 혼합하는 데 도움이 될 수 있습니다. 여기에는 예를 들어, 고혈당 또는 고인슐린혈증 주장 또는 고립된 췌장섬에 대한 실험이 포함될 수 있습니다.