Name: 외상성 출혈 타박상 및 신경염증에 대한 전임상 제어 피질 영향 모델 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-06-10T14:30:00.000+00:00
Duration: 6 min 50 s
Description: 학습하세요 생쥐 제어 피질 영향 모델을 통해 외상성 뇌손상 후 출혈 타박상과 신경염증을 연구하는 방법을. 이 기법은 뇌손상 중증도 조절 및 면역 반응 분석에 활용됩니다.

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<li>Su, W. S., Wu, C. H., Chen, S. F., Yang, F. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Low-intensity+pulsed+ultrasound+improves+behavioral+and+histological+outcomes+after+experimental+traumatic+brain+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Low-intensity pulsed ultrasound improves behavioral and histological outcomes after experimental traumatic brain injury.</a> Scientific Reports. 7 (1), 15524(2017).</li>
<li>Chen, S. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Salidroside+improves+behavioral+and+histological+outcomes+and+reduces+apoptosis+via+PI3K%2FAkt+signaling+after+experimental+traumatic+brain+injury%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Salidroside improves behavioral and histological outcomes and reduces apoptosis via PI3K/Akt signaling after experimental traumatic brain injury.</a> PLoS One. 7 (9), 45763(2012).</li>
<li>Chen, C. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Berberine+protects+against+neuronal+damage+via+suppression+of+glia-mediated+inflammation+in+traumatic+brain+injury%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Berberine protects against neuronal damage via suppression of glia-mediated inflammation in traumatic brain injury.</a> PLoS One. 9 (12), 115694(2014).</li>
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<li>Saatman, K. E., Feeko, K. J., Pape, R. L., Raghupathi, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+behavioral+and+histopathological+responses+to+graded+cortical+impact+injury+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neurotrauma%22%5BJournal%5D)">Differential behavioral and histopathological responses to graded cortical impact injury in mice.</a> Journal of Neurotrauma. 23 (8), 1241-1253 (2006).</li>
<li>Robertson, C. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cerebral+glucose+metabolism+in+an+immature+rat+model+of+pediatric+traumatic+brain+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neurotrauma%22%5BJournal%5D)">Cerebral glucose metabolism in an immature rat model of pediatric traumatic brain injury.</a> Journal of Neurotrauma. 30 (24), 2066-2072 (2013).</li>
<li>Adelson, P. D., Fellows-Mayle, W., Kochanek, P. M., Dixon, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Morris+water+maze+function+and+histologic+characterization+of+two+age-at-injury+experimental+models+of+controlled+cortical+impact+in+the+immature+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Child%27s+Nervous+System%22%5BJournal%5D)">Morris water maze function and histologic characterization of two age-at-injury experimental models of controlled cortical impact in the immature rat.</a> Child's Nervous System. 29 (1), 43-53 (2013).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>4mm 짧은 트레핀 드릴</td><td>Salvin Dental Specialties, Inc.</td><td>TREPH-SHORT-4</td><td></td></tr><tr><td>항 Iba1 항체</td><td>Wako 화학 물질</td> <td># 019-19741</td><td></td></tr><tr><td>항 Ly76 항체</td><td>abcam</td><td>ab91113</td><td></td></tr><tr><td>카르 복실 레이트 시멘트</td><td>3M</td><td>70201136010</td><td></td></tr><tr><td>피질 타박상 부상 임팩터</td><td>사용자 정의 디자인 및 ; 제작, Inc.</td><td>S/N 49-2004-C, eCCI 모델 6.3</td><td>CCI 장치(S/N 49-2004-C, eCCI 모델 6.3)</td></tr><tr><td>크레실 바이올렛 아세테이</td>트 <td>Sigma-Aldrich</td><td>C5042</td><td></td></tr><tr><td>DAB 염색 키트</td><td>벡터</td><td>SK-4105</td><td></td></tr><tr><td>염소 항토끼 IgG 2차 항체, Alexa Fluor 488</td><td>Invitrogen</td><td>A11034</td><td></td></tr><tr><td>염소 항쥐 IgG 2차 항체, Alexa Fluor 594</td><td>Invitrogen</td><td>A11007</td><td></td></tr><tr><td>Mayer's Hematoxylin</td><td>ScyTek</td><td>HMM500</td><td></td></tr><tr><td>핀셋</td><td>미세 과학 도구</td><td>11252-20 NO. 5</td><td></td></tr><tr><td>이소플루란</td><td>Panion & BF 생명 공학 Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>부피바카인 0.25%</td><td>호스피라</td><td></td><td></td></tr><tr><td>탄산리튬</td><td>시그마-알드리치</td><td>62470</td><td></td></tr><tr><td>스테리오텍식 프레임</td><td>스톨팅</td><td></td><td></td></tr><tr><td>가위</td><td>정밀 과학 도구</td><td>14068-12</td><td></td></tr><tr><td>솔벤트 블루 38</td><td>시그마-알드리치</td><td>S3382</td><td></td></tr></tbody></table>

외상성 출혈 타박상 및 신경염증에 대한 전임상 제어 피질 영향 모델

A Preclinical Controlled Cortical Impact Model for Traumatic Hemorrhage Contusion and Neuroinflammation

정위 배치 및 개두술 절차의 그림.
CCI 모델은 경증에서 중증에 이르는 부상을 발생시키는 데 안정성과 재현성으로 알려져 있습니다18. 적절한 정위 기법과 개두술 절차는 안정적이고 재현 가능한 CCI 유발 뇌 손상을 생성하는 데 중요한 결정 요인입니다(그림 1A, B). 이상적인 개두술 절차는 그림과 같이 가짜 수술 뇌27,28에서 최소한의 조직학적 손상을 유발할 것입니다(그림 1C).
CCI는 장기적인 뇌 손상, 혈액 관련 독성 및 신경 염증을 유발합니다.
<p class="jov...

Cerebral contusion is a severe medical problem affecting millions of people worldwide each year. There is an urgent need to understand the ...

이 모델은 두개내 출혈, 철 독성, 뉴런 사멸, 축삭 손상, 신경학적 결손 및 신경 염증을 포함하여 뇌 타박상과 관련된 병리학을 연구하는 데 사용할 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 CCI 장치에 가해지는 속도 및 충격의 죽음과 같은 생화학적 매개변수를 조작하여 뇌 손상의 심각성을 쉽게 제어할 수 있다는 것입니다. CCI에 의한 국소 피질 산산 손상은 재현 가능성이 높습니다.적절한 정위 기법과 개두술 절차는 안정적이고 재현 가능한 CCI 유발 뇌 손상을 생성하는 데 중요한 결정 요인입니다. 일반적으로 이 절차를 처음 접하는 연구자는 마우스를 흉골 절제술 프레임에 안정화하고 적절한 개두술을 하는 데 어려움을 겪을 것입니다. 절차를 시연하는 것은 제 연구실의 실험실 기술자인 Ms.Jhih Shuan Lin이 맡을 것입니다.동물이 적절하게 마취되었는지 확인하기 위해 동물의 발가락 꼬집음 반사가 부족한지 확인하는 것으로 시작하십시오. 전기 가위기로 쥐의 머리를 꼬리에서 꼬리 방향으로 면도합니다. 그러나 수염을 자르지 마십시오.마우스를 입체 프레임에 놓고 이어바를 외이도에 조심스럽게 삽입하여 마우스 헤드가 양쪽 이어바에 의해 동일하게 고정되었는지 확인합니다. 수술 기간 동안 1-2%의 이소플루란으로 마취를 유지합니다. 수술 중 건조를 방지하기 위해 양쪽 눈에 바셀린을 바르십시오.그런 다음 멸균 면봉을 사용하여 면도한 머리를 베타딘과 70% 에탄올로 소독합니다. 100 게이지 인슐린 바늘로 0.25% 부피바카인 31마이크로리터를 피하주사하고 더 나은 흡수를 위해 주사 부위를 부드럽게 마사지합니다. 메스나 가위로 두피의 정중선을 따라 세로로 절개합니다.그런 다음 지혈제를 사용하여 피부를 오른쪽으로 당겨냅니다. 노출된 두개골을 1분 동안 건조시킵니다. 그런 다음 멸균 면봉으로 두개골에 남아 있는 혈액과 조직을 청소합니다.동물의 머리가 수평면에서 수평인지 확인하고 해부학적 랜드마크인 Bregma 및 Lambda를 식별하고 두 위치를 모두 연필로 표시합니다. 동물의 머리가 브레그마(Bregma)와 람다(Lambda)의 Z 좌표를 측정하여 꼬리 방향으로 수평을 이루는지 확인합니다. 동일한 절차를 사용하여 머리를 수평으로 배치합니다.31게이지 인슐린 바늘을 사용하여 두개골 절제술 부위를 확인합니다. XY 원점을 Bregma로 설정하고 바늘을 오른쪽으로 3mm 옆으로 이동합니다. 이 위치를 두개골 절제술 부위로 표시하고 연필로 두개골에 직경 4mm의 원을 그립니다.트레핀이 있는 고속 마이크로 드릴로 연필 윤곽선이 그려진 원을 따라 잘라 직경 4mm의 열린 구멍을 만듭니다. 핀셋으로 뼈 피판을 제거하고 얼음처럼 차가운 일반 식염수에 보관하십시오. 뇌 표면에 압력을 가하기 전에 식염수로 구멍을 부드럽게 헹구어 출혈을 멈춥니다.CCI 장치에서 직경 2.5mm의 둥근 임팩터 팁을 22.5도 각도로 설정합니다. 경막 표면에 대한 충격 팁을 영점화하고 컨트롤 박스의 충격 매개변수를 초당 4미터의 속도와 2mm의 변형 깊이로 설정합니다. 금속 팁을 집어넣습니다.피스톤을 방전하여 뇌에 매복을 생성합니다. 그런 다음 멸균 면봉을 부상 부위에 대고 출혈을 멈춥니다. 뼈 피판을 교체하고 치과 시멘트로 고정합니다.티슈 접착제로 두피를 닫습니다. 마우스를 열 아래에 놓습니다.amp 완전히 회복될 때까지 침구가 있는 깨끗한 회수 케이지에 넣습니다. 적절한 정위 기법과 두개골 절제술은 안정적이고 재현 가능한 CCI 유도 뇌 손상을 일으키는 데 중요한 결정 요인입니다.이상적인 두개골 절제술 절차는 가짜로 작동된 뇌에서 최소한의 조직학적 손상을 유발할 것입니다. 뇌 손상 및 말뭉치 손실의 변화는 CCI 후 1일, 3일, 7일 및 28일에서 관찰되었습니다. 또한, 타박상 측의 편측성 뇌 위축은 CCI 후 28일째에 관찰되었다.신경염증은 타박상 부위 경계 주변의 Iba1 양성 활성화 미세아교세포와 대식세포 축적에 의해 밝혀졌습니다. 실질내 출혈은 CCI 후 1일차부터 7일차까지 Ly76 양성 염색에 의해서도 검출될 수 있었습니다. CCI 후 7일째에 파열된 세포 형태와 온전한 세포 형태를 가진 적혈구의 혼합이 관찰되었는데, 이는 적혈구가 이 단계에서 용해되었음을 시사합니다.이 현상은 CCI 후 7일째부터 28일까지 타박상 부위에서 철 침착이 검출될 수 있었다는 관찰과 일치했습니다. CCI 후 3일째부터 28일까지 타박상 부위에서 멀리 떨어진 선조체에서 활성화된 미세아교세포와 대식세포가 관찰되었으며, 이는 말뭉치 및 선조체 손상을 나타냅니다. 이 기술은 연구자가 출혈 타박상 후 미세아교세포와 같은 면역 세포의 반응을 이해함으로써 뇌출혈로 인한 신경염증 상호 작용을 더 자세히 탐구할 수 있는 길을 열어줍니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

래터럴 유체 타진 (LFP), 생쥐의 외상성 뇌 손상의 설립 모델이 증명됩니다. LFP 동물 모델에 대한 세 가지 주요 기준을 충족 : 타당성, 안정성 및 임상 관련. 수술 craniotomy 구성 절차, 허브의 고정은 초점과 확산 부상의 결과로, 상해의 유도 뒤에 설명되어 있습니다.

측면 유체 타악기 : 마우스의 외상성 뇌 손상 모델

외상성 뇌 손상(TBI)은 여전히 심각한 건강 문제로 남아 있습니다. 통제된 피질 충격 수술 모델을 사용하여 TBI의 영향과 가능한 치료 방법에 대한 연구를 수행할 수 있습니다.

외상성 뇌 손상에 대한 제어 피질 충격 모델

이 프로토콜은 두개골 외상성 뇌 손상의 마우스 모델과 배양된 인간 유도 만능 줄기 세포 유래 세포의 이식에 대한 방법론을 상해 부위내로 시연한다. 이 절차에서 결과의 행동 그리고 조직학 시험은 또한 간략하게 기술됩니다.

인간 유도 만능 줄기 세포 유래 신경 세포의 치료 이식으로 마우스 뇌 손상의 제어 피질 영향 모델

신경 전달 물질 변경은 뇌진탕 후 발생 하 고 때로는 치명적인 장기 결과에 기여 하는 신경 기능 장애의 메커니즘. 이 쥐 모델은 미세 투액을 결합하여 생체 내 신경 전달 물질 정량화를 허용하며, 인간 두개 내 뇌 외상의 중요한 요소인 머리와 몸통의 빠른 가속 및 감속을 발휘하는 체중 투하 기술을 사용합니다.

생체 뇌 미세 투석과 힘과 회전을 결합 하는 뇌진탕의 소설 및 번역 쥐 모델

여기에서 우리는 열린 머리 통제된 피질 충격을 통해 뮤린 외상성 뇌 손상의 유도를 위한 프로토콜을 기술합니다.

외상성 뇌 손상의 유도에 대한 제어 피질 영향의 뮤린 모델

이 프로토콜은 경미한 외상성 뇌 손상에 대한 신경 염증 및 혈역학 반응을 특성화하고 부분 최소 제곱 회귀를 사용하는 다변량 시스템 분석의 일부로 이러한 데이터를 통합하는 방법을 제시합니다.

외상성 뇌 손상에 대한 신경 염증 및 혈역학 반응의 시스템 분석

이 프로토콜은 마우스 모델에서 경미한 외상성 뇌 손상을 설명합니다. 특히, 경미한 정중선 폐쇄 두부 손상을 유도하기 위한 단계별 프로토콜 및 동물 모델의 특성화가 충분히 설명된다.

생쥐의 경미한 외상성 뇌 손상에 대한 전자기 제어 폐쇄 머리 모델

여기에서는 해마의 시냅스 가소성에 대한 반복적인 경미한 외상성 뇌 손상(r-mTBI)의 영향을 조사하기 위해 깨어 있는 폐쇄두부 손상 모델을 사용할 수 있는 방법을 보여줍니다. 이 모델은 환자에서 r-mTBI의 중요한 특징을 복제하고 시험관 내 전기생리학과 함께 사용됩니다.

경미한 외상성 뇌 손상의 깨어 있는 폐쇄 두부 손상 모델을 사용하여 시냅스 가소성의 변화 평가

이 프로토콜은 폐쇄성 두부 손상(CHI) 방법을 통해 유도된 반복적인 경미한 외상성 뇌 손상(rmTBI)의 수정된 마우스 모델을 제시합니다. 이 접근법은 두개골 창과 유체 타악기를 사용하여 수막 노출로 인해 일반적으로 발생하는 염증을 줄이고 설치류의 rmTBI 모델링에서 재현성 및 정확도를 향상시킵니다.

얇아진 두개골 창과 유체 타악기를 통합한 반복적인 경미한 외상성 뇌 손상의 수정된 마우스 모델

단순화된 외상성 뇌 손상(TBI) 모델은 치료적 접근의 개발을 촉진했습니다. 이 프로토콜은 바늘을 사용하여 찔린 상처 마우스 피질을 생성하는 방법을 간략하게 설명하여 출혈 및 염증을 분석할 수 있습니다. 칼에 찔린 TBI 마우스 모델은 특수 장비 없이도 수행할 수 있는 이점을 제공합니다.

외상성 뇌 손상의 출혈 및 염증을 연구하기 위한 Stab-Wound Mouse 모델

학습하세요 생쥐 제어 피질 영향 모델을 통해 외상성 뇌손상 후 출혈 타박상과 신경염증을 연구하는 방법을. 이 기법은 뇌손상 중증도 조절 및 면역 반응 분석에 활용됩니다.

외상성 출혈 타박상 및 신경염증에 대한 전임상 제어 피질 영향 모델

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