외상성 출혈 타박상 및 신경염증에 대한 전임상 제어 피질 영향 모델

뇌타박상을 동반한 뇌골 출혈 및 신경 염증은 심각한 2차 뇌 손상을 유발할 수 있습니다. 이 프로토콜은 쥐 제어 피질 영향(CCI) 모델을 자세히 설명하여 연구원들이 출혈, 타박상 및 외상 후 면역 반응을 연구하고 잠재적인 치료법을 탐색할 수 있도록 합니다.

이 모델은 두개내 출혈, 철 독성, 뉴런 사멸, 축삭 손상, 신경학적 결손 및 신경 염증을 포함하여 뇌 타박상과 관련된 병리학을 연구하는 데 사용할 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 CCI 장치에 가해지는 속도 및 충격의 죽음과 같은 생화학적 매개변수를 조작하여 뇌 손상의 심각성을 쉽게 제어할 수 있다는 것입니다. CCI에 의한 국소 피질 산산 손상은 재현 가능성이 높습니다.

적절한 정위 기법과 개두술 절차는 안정적이고 재현 가능한 CCI 유발 뇌 손상을 생성하는 데 중요한 결정 요인입니다. 일반적으로 이 절차를 처음 접하는 연구자는 마우스를 흉골 절제술 프레임에 안정화하고 적절한 개두술을 하는 데 어려움을 겪을 것입니다. 절차를 시연하는 것은 제 연구실의 실험실 기술자인 Ms.Jhih Shuan Lin이 맡을 것입니다.

동물이 적절하게 마취되었는지 확인하기 위해 동물의 발가락 꼬집음 반사가 부족한지 확인하는 것으로 시작하십시오. 전기 가위기로 쥐의 머리를 꼬리에서 꼬리 방향으로 면도합니다. 그러나 수염을 자르지 마십시오.

마우스를 입체 프레임에 놓고 이어바를 외이도에 조심스럽게 삽입하여 마우스 헤드가 양쪽 이어바에 의해 동일하게 고정되었는지 확인합니다. 수술 기간 동안 1-2%의 이소플루란으로 마취를 유지합니다. 수술 중 건조를 방지하기 위해 양쪽 눈에 바셀린을 바르십시오.

그런 다음 멸균 면봉을 사용하여 면도한 머리를 베타딘과 70% 에탄올로 소독합니다. 100 게이지 인슐린 바늘로 0.25% 부피바카인 31마이크로리터를 피하주사하고 더 나은 흡수를 위해 주사 부위를 부드럽게 마사지합니다. 메스나 가위로 두피의 정중선을 따라 세로로 절개합니다.

그런 다음 지혈제를 사용하여 피부를 오른쪽으로 당겨냅니다. 노출된 두개골을 1분 동안 건조시킵니다. 그런 다음 멸균 면봉으로 두개골에 남아 있는 혈액과 조직을 청소합니다.

동물의 머리가 수평면에서 수평인지 확인하고 해부학적 랜드마크인 Bregma 및 Lambda를 식별하고 두 위치를 모두 연필로 표시합니다. 동물의 머리가 브레그마(Bregma)와 람다(Lambda)의 Z 좌표를 측정하여 꼬리 방향으로 수평을 이루는지 확인합니다. 동일한 절차를 사용하여 머리를 수평으로 배치합니다.

31게이지 인슐린 바늘을 사용하여 두개골 절제술 부위를 확인합니다. XY 원점을 Bregma로 설정하고 바늘을 오른쪽으로 3mm 옆으로 이동합니다. 이 위치를 두개골 절제술 부위로 표시하고 연필로 두개골에 직경 4mm의 원을 그립니다.

트레핀이 있는 고속 마이크로 드릴로 연필 윤곽선이 그려진 원을 따라 잘라 직경 4mm의 열린 구멍을 만듭니다. 핀셋으로 뼈 피판을 제거하고 얼음처럼 차가운 일반 식염수에 보관하십시오. 뇌 표면에 압력을 가하기 전에 식염수로 구멍을 부드럽게 헹구어 출혈을 멈춥니다.

CCI 장치에서 직경 2.5mm의 둥근 임팩터 팁을 22.5도 각도로 설정합니다. 경막 표면에 대한 충격 팁을 영점화하고 컨트롤 박스의 충격 매개변수를 초당 4미터의 속도와 2mm의 변형 깊이로 설정합니다. 금속 팁을 집어넣습니다.

피스톤을 방전하여 뇌에 매복을 생성합니다. 그런 다음 멸균 면봉을 부상 부위에 대고 출혈을 멈춥니다. 뼈 피판을 교체하고 치과 시멘트로 고정합니다.

티슈 접착제로 두피를 닫습니다. 마우스를 열 아래에 놓습니다.amp 완전히 회복될 때까지 침구가 있는 깨끗한 회수 케이지에 넣습니다. 적절한 정위 기법과 두개골 절제술은 안정적이고 재현 가능한 CCI 유도 뇌 손상을 일으키는 데 중요한 결정 요인입니다.

이상적인 두개골 절제술 절차는 가짜로 작동된 뇌에서 최소한의 조직학적 손상을 유발할 것입니다. 뇌 손상 및 말뭉치 손실의 변화는 CCI 후 1일, 3일, 7일 및 28일에서 관찰되었습니다. 또한, 타박상 측의 편측성 뇌 위축은 CCI 후 28일째에 관찰되었다.

신경염증은 타박상 부위 경계 주변의 Iba1 양성 활성화 미세아교세포와 대식세포 축적에 의해 밝혀졌습니다. 실질내 출혈은 CCI 후 1일차부터 7일차까지 Ly76 양성 염색에 의해서도 검출될 수 있었습니다. CCI 후 7일째에 파열된 세포 형태와 온전한 세포 형태를 가진 적혈구의 혼합이 관찰되었는데, 이는 적혈구가 이 단계에서 용해되었음을 시사합니다.

이 현상은 CCI 후 7일째부터 28일까지 타박상 부위에서 철 침착이 검출될 수 있었다는 관찰과 일치했습니다. CCI 후 3일째부터 28일까지 타박상 부위에서 멀리 떨어진 선조체에서 활성화된 미세아교세포와 대식세포가 관찰되었으며, 이는 말뭉치 및 선조체 손상을 나타냅니다. 이 기술은 연구자가 출혈 타박상 후 미세아교세포와 같은 면역 세포의 반응을 이해함으로써 뇌출혈로 인한 신경염증 상호 작용을 더 자세히 탐구할 수 있는 길을 열어줍니다.