폐동맥 고혈압의 실험 모델에서 우심실 기능 평가

우리는 실험적 폐동맥 고혈압에서 혈관 리모델링을 역전시키고 심폐 기능을 개선하기 위해 재생 요법, 특히 중간엽 줄기 세포와 미토콘드리아를 탐구합니다. 우심실 천자 및 심장 박리와 같은 침습적 절차는 모두 말기 단계이므로 종단 연구가 제한됩니다. 또한 심초음파 측정의 가변성은 다양한 작업자와 시점에 걸쳐 재현성에 영향을 미칠 수 있습니다. 우리의 프로토콜은 비침습적 심초음파와 침습적 혈역학 측정 및 사후 분석을 결합하여 쥐의 폐고혈압 진행 및 우심실 리모델링에 대한 포괄적인 평가를 제공합니다. 이러한 통합 접근 방식은 데이터 신뢰성을 향상시키고 필요한 동물의 양을 줄입니다. 앞으로 우리는 폐동맥고혈압 환자의 뇌-심장-폐 상호 작용 및 인지 장애를 더 잘 이해하여 임상적 관련성과 잠재적인 기본 메커니즘을 이해하는 것을 목표로 합니다.

[강사] 시작하려면 세제와 물에 적신 거즈 드레싱을 사용하여 마취된 동물의 가슴에 있는 털을 적십니다. Kelly 집게에 면도날을 부착하여 동물의 가슴에서 털을 면도합니다. 동물의 가슴에 전도성 젤을 넉넉하게 바르십시오. 제어판에서 2D 버튼을 누릅니다. 세 번째와 다섯 번째 늑간 공간 사이에 변환기를 배치하여 짧은 축 보기를 얻습니다. 그런 다음 변환기를 흉골에 대해 90도 각도로 동물의 왼쪽 어깨 쪽으로 향하게 하여 우심실, 대동맥 판막, 폐동맥 판막 및 좌심방을 보여주는 심장 기저부의 단면 이미지를 캡처합니다. 제어판의 고정 버튼을 눌러 이미지를 고정한 다음 제어판의 저장 버튼을 눌러 이미지를 저장합니다. 올바른 각도를 찾으면 해당 위치를 유지하고 PW 맥파 버튼을 눌러 맥파 스펙트럼 도플러 모드를 활성화합니다. 제어판의 트랙볼을 사용하여 노란색 커서를 화면의 어느 방향으로든 이동하고 폐동맥 판막 위에 놓습니다. 제어판의 5개 버튼을 눌러 폐동맥 판막을 가로지르는 혈류 곡선을 얻습니다. 이제 변환기를 세 번째와 다섯 번째 늑간 공간 사이에 배치하여 장축 보기를 얻습니다. 변환기를 흉골에 대해 45-60도 각도로 동물의 오른쪽 어깨 쪽으로 향하게 하여 좌심실, 우심실, 좌심방, 승모판 및 대동맥 판막을 보여주는 세로 단면을 캡처합니다. 제어판의 고정 버튼을 눌러 이미지를 고정한 다음 제어판의 저장 버튼을 눌러 이미지를 저장합니다. 제어판의 검사 종료 버튼을 눌러 이미징 세션을 종료하고 이미지를 환자 데이터베이스에 저장합니다. 심초음파의 경우 화면에서 검색을 선택하고 데이터베이스에서 적절한 동물 ID를 선택하여 분석을 시작합니다. SonoView를 누르세요 제어판의 버튼. 화면의 이미지 영역 내부를 한 번 클릭하여 분석을 시작합니다. 트랙볼을 사용하여 펄스파 스펙트럼 도플러 모드에서 단축 이미지를 선택합니다. 이제 계산기 버튼을 누르고 화면에서 심박수 HR을 선택합니다. 트랙볼을 사용하여 커서 선이 두 곡선의 피크에서 피크까지 그립니다. 평균을 얻으려면 이것을 세 번 반복합니다. 계산기 버튼을 다시 누르고 화면에서 폐동맥 판막, PV, PV 가속 시간/배출 시간을 선택한 다음 선택합니다. 트랙볼을 사용하여 커서를 시작에서 정상까지, 그리고 동일한 곡선의 시작에서 끝까지 커서를 배치합니다. 평균을 얻으려면 세 번 반복합니다. 제어판의 저장 버튼을 눌러 결과를 저장합니다. 트랙볼을 사용하여 화면 오른쪽 상단에서 장축 이미지를 선택합니다. 제어판의 계산기 버튼을 누르고 추적된 우심실 유출, RVOT, 매개변수를 선택한 다음 화면에서 RVOT 직경을 선택합니다. 트랙볼을 사용하여 우심실의 한쪽 벽에서 반대쪽 벽으로 커서를 배치합니다. 평균을 얻으려면 이 작업을 세 번 수행합니다. 우심실 천자의 경우 먼저 마취된 동물을 기관절개합니다. 컴퓨터의 전원이 켜져 있고, LabVIEW 소프트웨어가 열려 있으며, 베이스라인이 신호 수집을 위해 구성되어 있는지 확인합니다. 소프트웨어에서 우심실을 찾은 후 신호 수집이 시작되었는지 확인합니다. 화면의 저장 버튼을 클릭하고 동물의 ID를 입력합니다. 해부학적 기준점 약간 위에 구멍을 뚫도록 설정된 헤파린화된 식염수로 채워진 19게이지 두피 정맥을 사용하여 바늘을 너무 깊게 삽입하지 않도록 주의하십시오. 압력 값을 관찰하여 펑크의 정확성을 확인하십시오. 데이터 신뢰성을 보장하기 위해 최소 10개의 안정적인 압력파 피크를 기록합니다. 신호 획득이 끝나면 좌심실 또는 복부 대정맥 천자를 통한 채혈을 위해 헤파린 주사기를 사용하여 헤파린을 투여합니다. 데이터 분석을 위해 MATLAB 프로그램을 열고 붙여넣기 찾아보기 버튼을 클릭한 다음 컴퓨터 내장 하드 드라이브에서 올바른 코드가 포함된 파일을 선택합니다. MATLAB 화면의 왼쪽에서 변환기가 인식하는 각 채널에 대한 코드가 포함된 파일 목록을 확인합니다. 실험의 앞부분에서 사용된 선택한 채널 구성에 해당하는 코드를 선택합니다. 실행 버튼을 누르고 분석을 위해 외장 하드 드라이브에서 .bin 파일을 선택합니다. 처음과 끝을 한 번 클릭하여 곡선의 가장 균일한 부분을 선택하고 시각적으로 동일한 봉우리와 최저점이 있는 부분을 식별합니다. 그런 다음 0초에 한 번, 10초에 한 번 클릭하여 곡선의 10초 세그먼트를 선택합니다. 명령 창에서 가장 낮은 최저 값을 빼고 키보드에서 Enter 키를 눌러 기준선을 조정합니다. 소프트웨어는 모든 관련 데이터를 자동으로 생성합니다. 피크 시간과 압력 값인 두 열의 데이터를 관찰합니다. 수축기 혈압 값을 복사하여 .txt 파일에 붙여넣고 시간 값을 제거합니다. 평균을 계산할 수 있도록 파일의 모든 마침표를 쉼표로 바꿉니다. 10개의 피크 압력 값을 선택하고 평균을 계산합니다. 우심실 비대 지수의 경우 실험 시작 시 동물의 체중을 측정하고 기록합니다. 우심실 수축기 혈압을 측정한 다음 안락사시키고 흉부 장기를 제거합니다. 심장 기저부에서 대동맥, 폐동맥, 대정맥, 폐정맥을 절개한 후 거즈를 이용해 심장 전체를 건조시키고 정밀 저울을 이용해 건조중량을 기록한다. 심방을 해부하고 제거한 후 중격과 함께 좌심실에서 우심실을 분리합니다. 정밀 저울을 사용하여 건조된 우심실과 좌심실과 중격의 무게를 별도로 기록합니다. PAT 대 PET 비율은 대조군에 비해 폐동맥 고혈압 동물에서 유의하게 감소했으며, 이는 폐혈관 저항이 증가하고 폐동맥의 혈류 패턴이 변경되었음을 나타냅니다. 우심실 유출 직경은 대조군에 비해 폐동맥 고혈압 동물에서 증가했으며, 이는 우심실의 적응 반응으로 심실 비대의 정도를 반영하여 질병의 발병을 대용했습니다. 대표적인 심초음파 영상은 대조군에 비해 폐동맥 고혈압 동물에서 눈에 띄게 확대된 우심실 유출 직경과 변경된 흐름 패턴을 보여주었습니다. 우심실 수축기 혈압은 대조군에 비해 폐동맥 고혈압 동물에서 유의하게 상승했으며, 이는 폐혈관 저항 증가를 반영합니다. 압력 파형 기록은 상승된 RVSP와 일치하는 폐동맥 고혈압 동물에서 더 높은 피크를 보여주었습니다. 우심실 비대 지수는 대조군에 비해 폐동맥 고혈압 동물에서 유의하게 증가했습니다.