뇌졸중 전임상 평가 네트워크 혈전색전성 뇌졸중 및 혈전용해 다중 실험실 모델: TE-MCAo

우리 연구의 범위는 엄격한 다실험실 전임상 치료 검사에 활용할 수 있는 혈전색전성 뇌졸중 모델을 개발하는 것입니다. 저희 프로토콜은 임상 혈전용해를 모방하고 다기관 전임상 시험을 지원하는 간단하고 재현 가능한 혈전색전성 뇌졸중 모델의 부재를 해결합니다. PE-50 튜빙을 끝부분을 경사진 각도로 자르면서 무딘 형태로 만드는 것부터 시작하세요.

미세 가위로 베벨 포인트의 끝부분을 잘라내세요. 마취된 쥐를 수술 준비를 마친 후, 다리와 서혜부 교차부의 자연스러운 주름을 따라 약 1.5에서 2센티미터 길이의 허벅지 안쪽에 수직 절개를 합니다. 절개는 대퇴동맥의 예상 해부학적 경로와 직교해야 합니다.

둔한 해리를 사용해 대퇴동맥까지 조심스럽게 해부하세요. 그 다음 대퇴동맥을 같은 다발을 따라 흐르는 정맥과 신경에서 분리합니다. 대퇴동맥을 가능한 한 근위까지 골격화하여 동맥의 후복막 기원을 추적합니다.

대퇴동맥 주위에 5-0 실크 고리를 느슨하게 감고, 꼬리를 이용해 동맥 근위 쪽에 부드러운 장력을 가합니다. 그 다음 5-0 실크 결찰로 대퇴동맥을 원위로 막고, 봉합선 꼬리를 이용해 지혈 클램프로 원위부에 약간의 장력을 가하세요. 근위 봉합선에서 약 3분의 2 지점에 실크 봉합사를 동맥 아래에 놓고 미세가위로 느슨한 봉합선 말위부에 작은 동맥 절개를 합니다.

날카로운 겸자를 사용해 동맥 절개술의 윗부분을 들어 올리고 둔한 경사 PE-50 카테터를 입구에 삽입합니다. 카테터를 가능한 한 근위로 전진시키고, 조일 때 느슨한 루프가 카테터를 감싸도록 합니다. 봉합선을 부드럽게 조여 카테터를 막거나 베벨 위에 걸리지 않도록 하세요.

고무 슈드 클램프를 풀어주세요. 카테터는 즉시 혈액으로 채워질 것입니다. 1.5밀리리터 원심분리기 튜브 세 개를 채우고 4도 섭씨에서 보관하세요.

튜브가 채워지면 대퇴동맥에서 PE-50 카테터를 제거하고, 근위부를 결찰한 뒤, 절개를 중단된 5-0 Prolene 봉합사로 봉합합니다. 혈전을 준비하기 위해 신선하거나 저장된 기증자 혈액 500마이크로리터를 1.5밀리리터 마이크로 원심분리관에 옮기고, 항응고 역전을 위해 염화칼슘 1밀리리터를 추가하세요. 그 후 즉시 마이크로 원심분리기 튜브에서 혈액을 100cm PE-50 튜브로 부드럽게 흡입한 뒤, 미리 예열된 PBS 튜브에 37도 온도에서 테이블탑 오븐에서 2시간 동안 배양합니다.

혈전을 PBS가 들어 있는 페트리 접시에 배출한 후, 면도날로 약 6센티미터 단위로 절단합니다. 각 혈전을 PE-50 카테터에 부드럽게 넣고 다섯 번 완전히 배출하여 세척하세요. 혈전을 PE-10 카테터에 부드럽게 넣고 15번 완전히 배출하여 다시 세척하세요.

4% 에반스 블루 200마이크로리터를 10밀리리터 PBS가 들어간 페트리 접시에 넣어 희석 1번을 만듭니다. 그 후 희석 1번 400마이크로리터를 별도의 페트리 접시에 20밀리리터 PBS를 넣어 희석 2번을 만듭니다. 혈전을 더 농축된 에반스 블루 페트리 접시 용액에 1초간 넣은 후, 희석한 에반스 블루 페트리 접시로 옮깁니다.

세척된 혈전 하나를 공기 색전 없이 습식 투습 방식으로 미리 제작된 마이크로카테터에 넣습니다. 혈전이 완전히 적재되면, 미세카테터 내에 정확히 5센티미터가 남도록 충분히 혈전을 돌출합니다. 면도날로 남은 부분을 다듬으세요.

미세카테터를 끝에서 16밀리미터 떨어진 곳에 표시하여 카테터의 범위를 내광 내에서 전진해야 함을 구분하세요. 6개 연구실에서 135명의 피험자의 내경동맥에 미리 투여된 혈전색전을 주입하여 혈전색전성 중뇌동맥 폐색 모델의 타당성을 검증하였습니다. 자기공명영상은 3일 후 102마리의 동물을 대상으로 시행되었으며, 스캔 완료율은 75%를 기록했습니다.

영상 촬영 전 동물 손실은 6개 실험실 모두에서 일관되게 나타났습니다. 모든 부위의 평균 병변 부피는 동측 반구의 13%였으며, 6개 실험실 간에는 약간의 변동이 있었습니다. 저희 프로토콜은 인간 혈전과 혈전용해를 모방하고, 동물 사용을 줄이며, 수술을 표준화하고 신뢰할 수 있는 다센터 재현성을 달성합니다.

연구의 중요한 성과로, 우리는 여러 실험실에서 일관된 결과와 구조화된 품질 관리를 통해 사용할 수 있는 확장 가능한 재현 가능한 TE-MCAo 모델을 만들었습니다. 이 모델은 단일 및 다실험실 뇌졸중 연구 모두에서 일관되게 사용될 수 있으며, 치료 선별 검사를 개선하고 후보적 뇌 보호 치료의 번역을 가속화합니다.