Methodenartikel

Split-Ubiquitine membraanfilters op Yeast Two-Hybrid (mythe) Systeem: een krachtig hulpmiddel voor het identificeren van eiwit-eiwit interacties

DOI:

10.3791/1698

⸱

1 februari 2010

 ,  ,  , 
1Department of Biochemistry, University of Toronto, 2Department of Molecular Genetics, University of Toronto, 3Terrence Donnelly Centre for Cellular and Biomolecular Research (CCBR), University of Toronto

In dit artikel

Samenvatting

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

MYTHE kan de gevoelige detectie van voorbijgaande aard en stabiele interacties tussen eiwitten die worden uitgedrukt in het model organisme Saccharomyces cerevisiae. Het is met succes toegepast op exogene en gist integrale membraaneiwitten bestuderen om hun interagerende partners in een high throughput manier te identificeren.

Samenvatting

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

De fundamentele biologische en klinische belang van integrale membraaneiwitten geleid tot de ontwikkeling van een gist-gebaseerd systeem voor de high-throughput identificatie van eiwit-eiwit interacties (PPI) voor de volledige lengte transmembraan eiwitten. Daartoe ons lab ontwikkelde de split-ubiquitine op basis van Membraan Yeast Two-Hybrid (mythe) systeem. Deze technologie maakt het mogelijk voor de gevoelige detectie van voorbijgaande aard en stabiele eiwit interacties met behulp van

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. Achtergrond informatie

Eiwit-eiwit interacties (PPI) zijn de fundamentele bouwstenen die betrokken zijn in het bestuur van alle cellulaire processen. Bijgevolg is het essentieel dat alle interacties goed zijn gereguleerd om cellulaire homeostase te behouden, zoals een verschuiving in deze biologische evenwicht vaak een rol speelt bij de ziekte en kanker cel transformatie. Membraan geassocieerde eiwitten behoren tot de meest biologisch belangrijke klasse van eiwitten als zij kunnen starten complex signaleringscascades, en bemiddelen zowel de import en export van diverse moleculen, waaronder drugs, die van recente betekenis op het gebied v....

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Discussie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

MYTHE is de eerste hoge doorvoer systeem dat de identificatie van interacties tussen full-length membraaneiwitten en cytosolische of membraan-gebonden partners mogelijk maakt. Het is gebruikt om membraan eiwit studeren uit een reeks van organismen [3-7]. Er zijn echter specifieke details die mogelijk moeten worden onderzocht om ervoor te zorgen het eiwit-of-interest vatbaar is om te studeren met een mythe.

Veel membraan-gebonden eiwitten worden gericht aan het plasmamembraan via een signaals.......

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Openbaarmakingen

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
Igor Stagljar is een mede-oprichter van DualSystems Biotech, Zwitserland.

Dankbetuigingen

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

We willen graag Dawn Edmonds bedanken voor een kritische lezing van dit manuscript. De Stagljar lab wordt ondersteund door middelen van de Canadese Stichting voor Innovatie (CFI), het Canadese Instituut voor Gezondheid Onderzoek (CIHR), het Hart en Stroke Foundation, de Canadese Cancer Society, en Novartis.

....

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel
NaamBedrijfCatalogusnummerOpmerkingen
Polyethyleenglycol (PEG3350)BioShop CanadaPEG335
LithiumacetaatdihydraatBioShop CanadaLIA001
X-Gal (5-broom-4-chloor-3-indolyl-β-D-galactopyranoside)BioShop CanadaXGA001
N,N-dimethylformamideBioShop CanadaDMF 451
3-amino-1,2,4-triazool (3-AT)BioShop CanadaATT124
DinatriumfosfaatBioShop CanadaSPD307
NatriumfosfaatmonobasischFisher ScientificBP329-500
Zalm-sperm DNAVWR internationalCA80601-120
D-GlucoseBioShop CanadaGLU501
LB-bouillon LENOXBioShop CanadaLBL405
Yeast Nitrogen BaseBioShop CanadaYNB406
GistextractBioShop CanadaYEX401
PeptoneBD Biosciences211677
Bio-TryptoneBioShop CanadaTRP402
AdeninesulfaatBioShop CanadaADS201
L-UracilBioShop CanadaURA241
L-ThreonineBioShop CanadaTHR002
L-HistidineBioShop CanadaHIS200
L-MethionineBioShop CanadaMET222
L-ValineBioShop CanadaVAL201
L-FenylalanineBioShop CanadaPHA302
L-IsoleucineBioShop CanadaISO910
L-TyrosineBioShop CanadaTYR333
L-LeucineBioShop CanadaLEU222
L-ArginineBioShop CanadaARG006
L-TryptofaanFisher ScientificBP395-100
L-LysineBioShop CanadaLYS101
L-AlanineFisher ScientificBP369-100
AgarBioShop CanadaAGR001
Soda-lime glaskralenBiospec Products11079105
NatriumchlorideBioShop CanadaSLD002

Referenties

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Stagljar, I., Fields, S. Analysis of membrane protein interactions using yeast-based technologies. Trends Biochem Sci. 27 (11), 559-563 (2002).
  2. Iyer, K. Utilizing the split-ubiquitin membrane yeast two-hybrid s....

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Herprints en machtigingen

Toestemming aanvragen om de tekst of afbeeldingen van dit JoVE-artikel te hergebruiken

Toestemming aanvragen

Trefwoorden

Split ubiquitinesysteemintegrale membraaneiwittenSaccharomyces cerevisiaefluorescentiemicroscopiegisttransformatiereportergenexpressiedeubiquitinerende enzymenbait prey interactie

Gerelateerde artikelen