De volledige en actuele "Rotifer polycultuur Method" voor het opfokken van First Feeding zebravis

Samenvatting

Larven van zebravissen zijn aangepast om zich te voeden met zoöplankton. Het is mogelijk om in het laboratorium gebruik te maken van deze natuurlijke eigenschap door de vissen in de eerste voedingsfase samen in hetzelfde systeem te kweken met levende zoutwaterrotifers. Deze 'polycultuur'-strategie bevordert een hoge groei en overleving met minimale arbeid en verstoring voor de larven.

Samenvatting

De zebravis (Danio rerio) is een modelorganisme van toenemende belang in vele wetenschapsgebieden. Een van de meest veeleisende technische aspecten van het kweken van deze soort in het laboratorium is het grootbrengen van pas gevoerde larven tot het juveniele stadium met hoge groei- en overlevingspercentages. De centrale beheersuitdaging van deze ontwikkelingsperiode draait om het bijna continu aanbieden van hoogwaardige voeders aan de vissen zonder de waterkwaliteit te compromitteren. Omdat zebravislarven goed aangepast zijn om kleine zoöplankton in de waterkolom te eten, worden levende prooidieren zoals brachionide rotiferen, Artemia en Paramecium algemeen erkend als de favoriete voeders, in ieder geval totdat de vissen het juveniele stadium bereiken en efficiënt kunnen voeden met verwerkte diëten. Dit protocol beschrijft een methode waarbij pas uitgekomen zebravislarven samen met levende zoetwaterrotiferen (Brachionus plicatilis) in hetzelfde systeem worden gekweekt. Deze polycultuuraanpak biedt vissen een 'op aanvraag' voedselbron van hoogwaardige levende voeding zonder chemische afvalstoffen te produceren op niveaus die anders de prestaties zouden beperken. Belangrijk is dat, omdat het systeem zowel de natuurlijke hoge productiviteit van de rotiferen als de gedragsvoorkeuren van de vissen benut, het onderhoudswerk laag is. Het volgende protocol beschrijft een bijgewerkte, stap-voor-stap procedure die de productie van rotiferen (schaalbaar naar elk gewenst niveau) omvat voor gebruik in een polycultuur van zebravislarven en rotiferen die maximale prestaties bevordert tijdens de eerste 5 dagen van exogene voeding.

Inleiding

De zebravis (Danio rerio) is een vooraanstaande proefdier gebruikt in een groeiend aantal wetenschappelijke disciplines, waaronder maar niet beperkt tot ontwikkelingsstoornissen genetica, toxicologie, gedrag, aquacultuur, regeneratieve biologie, en het modelleren van vele menselijke aandoeningen ^1-5. Hoewel de species relatief gemakkelijk in het laboratorium te handhaven, zijn er een aantal managementuitdagingen verband met hun cultuur ^6. De meest prominente van deze is opkweek van larven, vooral wanneer de vissen eerst beginnen te voeden na gas blaas inflatie ^7. Onder normale gecontroleerde omstandighed....

Protocol

1. Rotifer Cultuur

1. Basiscomponenten van een Cultuurstelsel met een 100 L kweekvat
   1. Verzamel alle onderdelen voor de raderdiertje cultuur setup. De raderdiertje cultuur opstelling bestaat uit een kweekvat (CV) aan de raderdiertjes groeien; een gelijkaardig schip feedout raderdiertjes (feedout kweekvat, FCV) te behouden; een ronde bodem uitkomen jar (voerreservoir, FR) voor opslag van de algen toevoermengsel (AFM); een luchttoevoer (AS) te beluchten de CV, FCV en de FR; een peristaltische pomp met een lichtmeettijd (PMT) om de levering van algen voeding in de CV en FCV controleren; floss en een roetfilter (FPF), dat zit in de CV.

Resultaten

De continue rotifer kweeksysteem beschreven is dynamisch en het is normaal dat rotifer aantallen fluctueren geringe mate in de tijd wanneer er variaties in de dagelijkse voeding en exploitatiehoeveelheden. De bevolking van de raderdiertjes in een van de actieve culturen in de aquacultuur faciliteiten Boston Children's Hospital, gehandhaafd op de hierboven beschreven werd gedurende 30 dagen (figuur 3). De gemiddelde kweekdichtheid deze periode was 932 raderdiertjes / .......

Discussie

Succesvolle implementatie van de rotifer polyculture methode voor het voeden van de vroege larvale zebravis vereist een effectieve protocollen voor twee taken: het opzetten en onderhouden van een continu rotifer kweeksysteem te voeden de vis, en het kweken van de eerste voeden zebravis larven samen met raderdiertjes in dezelfde tank.

De opstelling voor continue zoutwater rotifer productiesysteem voor zebravis laboratoria eerst beschreven door Lawrence en co-auteurs ¹⁴ is gewijzigd.......

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel

Naam	Bedrijf	Catalogusnummer	Opmerkingen
Rotifer Cultuur Infrastructuur
100 L Cultuurvat	Aquaneering	Aangepast	Polycarbonaat cultuurvat, kegelvormige bodem, met afvoerklep
5 Gallon Cultuuremmer Kit	Reed Mariculture	CCS Starter Kit	Klein volume cultuurvat voor kleine faciliteiten
Stijve Heldere Buizen 1/2" O.D., 36”	Pentair Aquatic Ecosystems	16025	Stijve heldere buizen voor luchttoevoer
Gaasbuis	Pentair Aquatic Ecosystems	RT444X	Gaasbuisondersteuning voor flossfilter
Rotifer Floss	Reed Mariculture	Rotifer floss 12” x 42”	Partikelafvalval
Peristaltiek Doseringstimerpomp, 5 GPD	Grainger	38M003	Doseringspomp met timer voor het doseren van voer aan rotifers
Peristaltiek Doseringstimerpomp, 1-100 mL/hr (voor kleinere schaal cultuur)	Coral Vue	SKU: IC-LQD-DSR	Doseringspomp met timer voor het doseren van voer aan rotifers
Siliconen Buizen	Cole Parmer		Buizen voor algentoevoer naar rotifervat
Stijve Heldere Buizen " O.D.,36”	Pentair Aquatic Ecosystems	16025	Stijve heldere buizen voor luchttoevoer naar algenpasta
Stijve Heldere Buizen O.D., 36”	Pentair Aquatic Ecosystems	16025	Stijve heldere buizen voor algentoevoer
Rotifers
Levende Rotifers Brachionus plicatilis Type L	Reed Mariculture	Type L 5 miljoen	Rotifer stockcultuur voor systeemstart
Rotifervoer
Natriumhydroxymethylsulfonaat	Reed Mariculture	ClorAm-X® 1lb buis	Ammoniakreducer voor algenvoermix
Natriumbicarbonaat	Fisher Scientific	S25533B	pH-buffer voor algenvoermix
Microalgenconcentraat	Reed Mariculture	Rotigrow Plus® 1 liter zak	Nutritioneel geoptimaliseerd rotifervoer
RG Complete	Reed Mariculture	RG Complete 6 oz fles	Alles-in-één microalgen gebaseerd voer voor kleine schaal culturen
Watervoorbereiding
Reef Crystals Reef Salt	That Fish Place	198210	Zout voor het maken van cultuurwater (OPMERKING: dit item is slechts een voorbeeld; elke contaminantvrije zoutformuleringen kunnen worden gebruikt).
Refractometer	Pentair Aquatic Ecosystems	SR6	meten van zoutgehalte
Rotifer Cultuurapparatuur
Planktoncollectoren 12" Dia, 53 microns	Pentair Aquatic Ecosystems	BBPC20	Gaasscherm voor het verzamelen van rotifers
Schuurpads	Pentair Aquatic Ecosystems	SCR-58	Schuurpad voor het schoonmaken van de binnenkant van cultuurvaten
Schuurborstel
Emmer	Grainger Supply	43Y530	Gegradueerde emmer voor het mengen van cultuurwater
Uitbroedpot	Pentair Aquatic Ecosystems	J30	Opslag van algenvoermix
Lugol’s Oplossing, Verdund	Fisher Scientific	S99481	Agent gebruikt om levende rotifers te immobiliseren voor het tellen
Sedgewick-Rafter plankton telplaat met raster	Pentair Aquatic Eco-Systems	M415	Tellen van rotifers
Diverse
Theezeef	Kitchenworks	971972	Gebruikt voor het verzamelen van zebravisembryo's na het spawnen